實(shí)驗(yàn)4 酶的特異性

1、實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 酶的特異性酶的特異性生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)之山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院山東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹俊緦?shí)驗(yàn)?zāi)康摹?學(xué)習(xí)酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的學(xué)習(xí)酵母蔗糖酶（粗提液）和唾液淀粉酶的制備，了解酶的特異性及檢測(cè)方法。制備，了解酶的特異性及檢測(cè)方法?！緦?shí)驗(yàn)原理】【實(shí)驗(yàn)原理】 酶是生物催化劑，酶對(duì)所作用的底物有嚴(yán)格酶是生物催化劑，酶對(duì)所作用的底物有嚴(yán)格的選擇性，即酶的特異性。的選擇性，即酶的特異性。 淀粉和蔗糖都是非還原性糖，分別為唾液淀淀粉和蔗糖都是非還原性糖，分別為唾液淀粉酶和蔗糖酶的專一底物。淀粉被唾液淀粉酶水粉酶和蔗糖酶的專一底物。淀粉被唾液淀粉酶水解生成具有還

2、原性的麥芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解解生成具有還原性的麥芽糖，蔗糖被蔗糖酶水解生成具有還原性的葡萄糖和果糖。生成具有還原性的葡萄糖和果糖。 Benedict試劑（含有試劑（含有Cu 2+）常用于檢驗(yàn)還原）常用于檢驗(yàn)還原糖的存在，其被還原后生成磚紅色的糖的存在，其被還原后生成磚紅色的Cu2O沉淀。沉淀?！酒鞑募霸噭俊酒鞑募霸噭浚ㄒ唬┢鞑模海ㄒ唬┢鞑模?1. 恒溫水浴鍋恒溫水浴鍋 2. 試管及試管架試管及試管架 3. 離心機(jī)離心機(jī) 4. 吸量管吸量管 5.燒杯、量筒燒杯、量筒 、漏斗等、漏斗等（二）試劑：（二）試劑： 1. 2%蔗糖蔗糖 2. 1%淀粉（內(nèi)含淀粉（內(nèi)含0.3%的的NaCl） 3. 唾

3、液淀粉酶溶液唾液淀粉酶溶液 4. 蔗糖酶溶液蔗糖酶溶液 5. Benedict試劑試劑【實(shí)驗(yàn)步驟】【實(shí)驗(yàn)步驟】（一）淀粉酶的特異性（一）淀粉酶的特異性1.唾液淀粉酶溶液的制備：唾液淀粉酶溶液的制備： 先用蒸餾水漱口，然后用潔凈試管先用蒸餾水漱口，然后用潔凈試管1支，支，取唾液（無(wú)泡沫）約取唾液（無(wú)泡沫）約2ml，蒸餾水，蒸餾水20倍稀釋，倍稀釋，備用。備用。2.取試管取試管5支，標(biāo)號(hào)，按下表所列的次序操作：支，標(biāo)號(hào)，按下表所列的次序操作：試劑試劑試管編號(hào)試管編號(hào)123451%淀粉溶液淀粉溶液（ml）1.01.02%蔗糖溶液蔗糖溶液（ml）1.01.0唾液淀粉酶唾液淀粉酶（ml）1.01.01.

4、0蒸餾水（蒸餾水（ml）1.01.01.0 3. 搖勻，置搖勻，置37恒溫水浴保溫恒溫水浴保溫10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict試劑試劑2ml，再放沸水浴，再放沸水浴5min。觀。觀察各管顏色變化，并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。察各管顏色變化，并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 (二二) 蔗糖酶的特異性蔗糖酶的特異性1. 蔗糖酶溶液的制備：蔗糖酶溶液的制備： 取活性干酵母取活性干酵母1.0g，置于研缽中，置于研缽中，加少量蒸餾水及石英砂研磨提取約加少量蒸餾水及石英砂研磨提取約10min，再加蒸餾水至總體積約為，再加蒸餾水至總體積約為20ml，過(guò)濾或離心，濾液或上清液，過(guò)濾或離心，濾液或上清液備用。備用。2

5、. 取試管取試管5支，標(biāo)號(hào)，按下表所列的次序操作：支，標(biāo)號(hào)，按下表所列的次序操作：試劑試劑試管編號(hào)試管編號(hào)123451%淀粉溶液淀粉溶液（ml）1.01.02%蔗糖溶液蔗糖溶液（ml）1.01.0蔗糖酶（蔗糖酶（ml）1.01.01.0蒸餾水（蒸餾水（ml）1.01.01.03. 搖勻，搖勻， 置置37恒溫水浴保溫恒溫水浴保溫10min，然后每管加入，然后每管加入Benedict試劑試劑2ml，再放沸水，再放沸水浴浴5min。觀察各管顏色變化，。觀察各管顏色變化，并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果。并解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果?！咀⒁馐马?xiàng)】【注意事項(xiàng)】 唾液的稀釋倍數(shù)因人而異，有時(shí)差別很大，唾液的稀釋倍數(shù)因人而異，有時(shí)差別很大

6、，稀釋倍數(shù)可以是稀釋倍數(shù)可以是50300倍。倍。【思考題】【思考題】 1、 若將淀粉酶和蔗糖酶煮沸若將淀粉酶和蔗糖酶煮沸1min，實(shí)驗(yàn)結(jié)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果會(huì)發(fā)生什么樣的變化？果會(huì)發(fā)生什么樣的變化？ 2、 酶作用的專一性有哪幾種？酶作用的專一性有哪幾種？移液槍的使用移液槍的使用部分用具與試劑部分用具與試劑量程的調(diào)節(jié)量程的調(diào)節(jié)1.按照從大體積調(diào)為小體積的方法調(diào)節(jié)。按照從大體積調(diào)為小體積的方法調(diào)節(jié)。2.用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上的旋鈕，使用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上的旋鈕，使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字。數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字。注意：千萬(wàn)不要將旋鈕旋出最大量程，注意：千萬(wàn)不要將旋鈕旋出最大量程，否則會(huì)卡

7、住內(nèi)部機(jī)械裝置或者彈簧彈出否則會(huì)卡住內(nèi)部機(jī)械裝置或者彈簧彈出而損壞了移液槍。而損壞了移液槍。微量移液器的使用方法微量移液器的使用方法槍頭（吸液嘴）的裝配槍頭（吸液嘴）的裝配在將槍頭（在將槍頭（pipette tips）套上移）套上移液槍時(shí)，正確的方法是將移液槍液槍時(shí)，正確的方法是將移液槍（器）垂直插入槍頭中，稍微用力（器）垂直插入槍頭中，稍微用力左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)即可使其緊密結(jié)合。左右微微轉(zhuǎn)動(dòng)即可使其緊密結(jié)合。移液的方法移液的方法1.吸取液體時(shí)，用大拇指將按鈕按下至第一吸取液體時(shí)，用大拇指將按鈕按下至第一停點(diǎn)，移液器保持豎直狀態(tài)，將槍頭插入液停點(diǎn)，移液器保持豎直狀態(tài)，將槍頭插入液面下面下23毫米。毫米。2.然后慢慢松開按鈕回原點(diǎn)。然后慢慢松開按鈕回原點(diǎn)。3.接著將按鈕按至第一停點(diǎn)排出液體，稍停接著將按鈕按至第一停點(diǎn)排出液體，稍停片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點(diǎn)吹出殘余的液體。片刻繼續(xù)按按鈕至第二停點(diǎn)吹出殘余的液體。最后松開按鈕。最后松開按鈕。移液器的正確放置移液器的正確放置使用完畢，可以將其豎直掛在移液槍架上，使用完畢，可以將其豎直掛在移液槍架上，但要小心別掉下來(lái)。但要小心別掉下來(lái)。當(dāng)移液器槍頭里有液體時(shí)，切勿將移液器當(dāng)移液器槍頭里有液體時(shí)，切勿將移液器水平放置或倒置，以免液體倒