10類食品污染阪崎腸桿菌狀況調(diào)查探究

1、10類食品污染阪崎腸桿菌狀況調(diào)查探究【摘要】目的了解10類食品中阪崎腸桿菌的污染狀況 及污染數(shù)量，評(píng)估其風(fēng)險(xiǎn)性，為預(yù)防和控制阪崎腸桿菌的感 染、傳播、流行提供科學(xué)依據(jù)。方法按照gb4789. 1-2010 采抽樣技術(shù)、gb4789. 40-2010食品微生物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿 菌檢驗(yàn)、實(shí)時(shí)熒光pcr法操作規(guī)程，對(duì)10類850份食品進(jìn) 行阪崎腸桿菌檢驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)菌株作對(duì)照。結(jié)果檢出阪崎腸桿 菌54株，總檢出率為6. 4%o該10類食品阪崎腸桿菌的檢出 率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，由高至低排序?yàn)椋罕苛芮煽肆?jiān) 果熟肉糖餅類面包糕點(diǎn)方便面奶類飲用水、生 肉、調(diào)味品。染菌量30 mpn/100g(m 1)以上的有1

2、5份，占 27. 7%(15/54) o結(jié)論10類食品檢出阪崎腸桿菌的有7類， 應(yīng)予以重視?！娟P(guān)鍵詞】阪崎腸桿菌；定性；定量investigation of 10 kinds of food be poluted by enterobacter sakazakii lu xing-er, zheng yuekang, wu can-quan. zhongshan center for disease control and prevention in guangdong province, zhongshan 528403, china【 abstract objective to under

3、stand thecontamination of enterobacter sakazakii and the amount of pollution from 10 kinds of food, assess their risk, to provide the scientific basis for control and prevent infection , communication and prevalence of enterobacter sakazakii. methods the samples were tested in accordance with the na

4、tional standard and real一time fluorescence pcr method. the samples were tested from 850 samples of 10 kinds of food. st andard st rain was used as control. resuits the 54 strains of enterobacter sakazakii were detected,the detection rate was 6. 4%. there was statistically significant difference in t

5、erms of 10 kinds of food the order from high to low was : ice cream>chocolate nut>cooked meat>candy cake>bread , pastry>instant noodles>milk>water , condiment, raw meat. 15 samples were contaminated volume over>30 mpn/100g(ml) concentration range, accounting for 27.7% (15/54)

6、conclusion enterobacter sakazakii were detected from 7 of 10 kinds of food. we should be targeted to strengthen supervision and managementkey words】 enterobacter sakazakii； qualitative； quantitative據(jù)who最新報(bào)告顯示，乳粉中的阪崎腸桿菌是導(dǎo)致嬰幼 兒感染和死亡的主要原因之一。早在2002年國際食品微生 物標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)就將阪崎腸桿菌列為對(duì)特定人群產(chǎn)生嚴(yán)重的 生命危害、或產(chǎn)生慢性后遺癥的微生物，可見其危

7、害lo 然而，一項(xiàng)近期的研究結(jié)果表明，阪崎腸桿菌是一種廣泛存 在的微生物，不僅能夠存在于污染的食品和食品工廠當(dāng)中， 而且在家居環(huán)境和幾乎所有的環(huán)境中均能夠分離得到2o 為主動(dòng)掌握阪崎腸桿菌的污染狀況及分布趨勢(shì)，本研究展開 了對(duì)10類食品的摸底調(diào)查。該10類食品基本包括市面上銷 售的主要食品，有國產(chǎn)的也有進(jìn)口的，有本地的也有外地的, 有生的也有熟的，有國家級(jí)省級(jí)名牌，也有本地區(qū)名優(yōu)食品 等。對(duì)公共衛(wèi)生領(lǐng)域中的監(jiān)管和預(yù)警，對(duì)推進(jìn)社會(huì)的科學(xué)發(fā) 展，弘揚(yáng)本土的飲食文化，起著積極的作用。1材料與方法 1.1樣品采集 兼顧到城區(qū)和鄉(xiāng)鎮(zhèn)、東南西北各方位，2010年7月2010年12月樣品采抽于大型商場(chǎng)、超市

8、、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、酒店、餐館、小吃店、快餐店、餅鋪、士多店等共20個(gè)區(qū)鎮(zhèn)328家銷售的10類食品，分別有奶類、糖餅類、面包蛋糕、熟肉制品、飲用水、調(diào)味品、方便面、生肉、冰 淇淋、巧克力堅(jiān)果等共850份。原則上要求同類食品品牌不重復(fù)，優(yōu)先抽取本地產(chǎn)品、具地方特色產(chǎn)品和消費(fèi)量較大的產(chǎn)品，包裝完整、保質(zhì)期內(nèi)。每份樣品抽雙份，一份為送檢 樣，一份為留樣。1.2主要培養(yǎng)基與試劑bpw、mlst-vm、dfi、tsa購于 北京陸橋；阪崎腸桿菌實(shí)時(shí)熒光pcr檢測(cè)試劑盒購于深圳太 太基因工程有限公司；氧化酶試劑購于廣州千江有限公司； g陰性板、id肉湯購于美國bd,均在有效期內(nèi)使用。1.3標(biāo)準(zhǔn)菌株阪崎腸桿菌atcc

9、51329購于廣東環(huán)凱微 生物科技有限公司。1.4檢測(cè)儀器 美國bd phoenix 100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥 敏系統(tǒng)；美國0ptic0n2實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)儀；日本奧林巴 斯bx51t-32h01系統(tǒng)顯微鏡。1.5方法國標(biāo)法、實(shí)時(shí)熒光pcr法同步進(jìn)行，標(biāo)準(zhǔn)菌 株作對(duì)照。1. 5. 1國標(biāo)法 樣品處理按gb4789. 40-2010食品微生 物學(xué)檢驗(yàn)阪崎腸桿菌檢驗(yàn)進(jìn)行。mlst-vm肉湯培養(yǎng)液增菌 后，挑取1環(huán)劃線于dfi顯色平板，（36±1） °c培養(yǎng)（24±2） ho挑取15個(gè)呈圓形、藍(lán)綠色，直徑為12mm的可疑菌 落作革蘭氏染色、氧化酶試驗(yàn)、生化鑒定（選用美國b

10、d phoenix 100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏系統(tǒng)），接種tsa平板觀察 黃色色素，綜合菌落形態(tài)和生化特征報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。定性檢 出阪崎腸桿菌后作mpn值計(jì)數(shù)。1.5.2實(shí)時(shí)熒光pcr法樣品處理按國標(biāo)法進(jìn)行。接 mlst-vm肉湯培養(yǎng)液增菌后，取lml加到1.5ml無菌離心管 中，8000rpm離心5min,棄上清液。加入50卩1核酸溶解液, 混勻后沸水浴5min, 13000rpm離心5min,取上清液待檢。然后按試劑盒說明書操作，根據(jù)檢測(cè)樣品ct值報(bào)告陽性或 陰性結(jié)果。2結(jié)果2. 1 (1)奶類100份包括液態(tài)奶、奶飲品60份和奶粉、 嬰幼兒米粉40份，其中有1份奶飲品和1份嬰幼兒米粉檢 出阪

11、崎腸桿菌。(2)糖餅類175份包括餅干酥角等110份、 杏仁餅30份、糖果35份，依次檢出阪崎腸桿菌株數(shù)為1、 12、lo (3)巧克力堅(jiān)果80份包括巧克力50份、堅(jiān)果30份, 依次檢出阪崎腸桿菌株數(shù)為2、9o (4)方便面包括杯面、袋 裝面40份，檢出阪崎腸桿菌2株。(5)冰淇淋30份(因抽 檢時(shí)間安排在冬天，大部分商品已退出市場(chǎng)，抽檢件數(shù)稍小) 檢出阪崎腸桿菌6株。(6)飲用水83份包括500ml等小瓶 裝和18. 9 l大桶裝，實(shí)時(shí)熒光pcr法2份陽性。(7) 152份 熟肉制品分5類：叉燒排骨、鹵肉、燒肉、燒雞鴨鵝、油雞 切雞等檢出阪崎腸桿菌14株。(8)面包糕點(diǎn)類含速凍包子 饅頭和即

12、食糕點(diǎn)等80份，檢出阪崎腸桿菌5株。2.2生肉和調(diào)味品采用國標(biāo)法、實(shí)時(shí)熒光pcr法均未檢 出阪崎腸桿菌。3討論3. 1阪崎腸桿菌（enterobacter sakazakii）是人和動(dòng) 物腸道內(nèi)寄生的革蘭氏陰性無芽胞桿菌，屬腸桿菌科腸桿菌 屬，一直被稱為黃色陰溝桿菌（yellow pigmented enterobacter cloacae）o而陰溝桿菌則是食品衛(wèi)生質(zhì)量指 標(biāo)中大腸菌群的指示菌之一，阪崎腸桿菌的存在直接影響大 腸菌群mpn值，本研究曾在檢出的54株阪崎腸桿菌中隨機(jī) 抽取20株作大腸菌群測(cè)定，均顯示陽性結(jié)果。3.2阪崎腸桿菌對(duì)營養(yǎng)的要求不高，耐熱耐寒耐高溫， 對(duì)清潔劑殺菌劑有較強(qiáng)

13、的抵抗力，是一種普遍存在的微生物 3, 4。本研究數(shù)據(jù)顯示，10類食品當(dāng)中有7類檢出阪崎 腸桿菌，可見阪崎腸桿菌存在的廣泛性。其中冰淇淋、堅(jiān)果、 杏仁餅（地方特色食品）和熟肉檢出率較高，染菌量也較濃 （見表2,表3）,可能與加工制作過程或工藝流程有關(guān)，存 在一定的致病風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)引起警惕。未檢出阪崎腸桿菌的3類食品分別是飲用水、調(diào)味品、 生肉。（1）直接飲用水中存在該菌的數(shù)量甚少，83份水樣品 國標(biāo)法均未檢出，只有實(shí)時(shí)熒光pcr法2份陽性；（2） 50份 調(diào)味品包括醬油、醋、青芥辣、辣醬、復(fù)合調(diào)味料，具有酸、 甜、苦、辣、咸等各種味道的特點(diǎn)，還含有各式各樣添加劑、 防腐劑，酸堿度不同，不利于阪崎腸

14、桿菌的生長；（3）60份 生肉包括禽肉、畜肉、魚蝦貝類3種，在分離培養(yǎng)過程中發(fā) 現(xiàn)有較多的干擾菌，分別檢出普通/彭氏變形桿菌16株、奇 異變形桿菌1株、大腸埃希氏菌1株，共17株。這些干擾 菌在分離平板上呈優(yōu)勢(shì)生長，是否抑制了阪崎腸桿菌，有待 進(jìn)一步探討。3.3阪崎腸桿菌雖然廣泛存在于自然界，但食品中的染菌量一般不高。本研究定量結(jié)果發(fā)現(xiàn)，染菌量在30 mpn/100g(m 1)濃度范圍以下的占72. 3% (39/54),其中有7 份樣品檢驗(yàn)結(jié)果為0.3 mpn/100g(ml)(曾作重復(fù)試驗(yàn))， 不同部位取材、分布不均，或污染量甚微所致。也就是說大 多數(shù)食品中阪崎腸桿菌的存在量較少，分布又非

15、常不均勻， 檢驗(yàn)時(shí)必須采用大量、均勻的樣品接種，才有可能覆蓋到該 菌的污染?？梢娳嫫槟c桿菌國標(biāo)法mpn/值計(jì)數(shù)所規(guī)定的樣品 用量333g(ml),較其他致病菌25g(ml)用量高的合理性。3.4兩種方法對(duì)比實(shí)時(shí)熒光pcr法檢測(cè)時(shí)間短，靈敏 度高，是初篩的好方法，而國標(biāo)法則是報(bào)告結(jié)果的依據(jù)。本 研究所采用實(shí)時(shí)熒光pcr法試劑盒的靈敏度為102-103copies/ml,國標(biāo)法定性檢出限是每100g (ml)樣品 檢出或未檢出阪崎腸桿菌。檢測(cè)結(jié)果是pcr法陽性率為7. 4%(63/850),國標(biāo)法檢出率為6.4 % (54/850)即850份樣品中有841份國標(biāo)法和實(shí)時(shí)熒光pcr法檢測(cè)結(jié)果一致，9

16、份 不同。日常工作中，也時(shí)而遇到實(shí)時(shí)熒光pcr法陽性而國標(biāo) 法未檢出的事例，如沙門氏菌、副溶血性弧菌、出血性大腸 埃希氏菌0157等的檢驗(yàn)都有所見。當(dāng)國標(biāo)法未檢出而pcr 法陽性時(shí)應(yīng)反復(fù)分離培養(yǎng)，以防漏檢?？傊畠煞N方法同步使 用可提高檢測(cè)結(jié)果的可靠性。3.5方法探討（1）阪崎腸桿菌檢驗(yàn)國標(biāo)法全過程需要 6d,增菌培養(yǎng)3d后如直接采用dfi平板上的純菌落（或再 分純id）作生化鑒定，可縮短廣2d檢測(cè)時(shí)間。也可同時(shí)接 種tsa平板觀察黃色色素，即生化鑒定和色素觀察同時(shí)進(jìn)行, 兩不誤。（2） 850份樣品按國標(biāo)法進(jìn)行分離培養(yǎng)，在操作過 程中發(fā)現(xiàn)：dfi顯色平板上的阪崎腸桿菌菌落與多種干擾菌 的菌落較

17、為相似，均呈圓形、藍(lán)綠色、大小13mm。分別是 普通/彭氏變形桿菌24株、肺炎克雷伯氏菌5株、非脫竣勒 克氏菌3株、成團(tuán)腸桿菌2株、奇異變形桿菌1株、大腸埃 希氏菌1株、傷口埃希氏菌1株、日溝維腸桿菌1株、塞氏 枸椽酸桿菌1株，共39株，詳細(xì)見表lo通過劃線于tsa平 板、生化鑒定、pcr法可以區(qū)分。（3）檢驗(yàn)全過程關(guān)鍵控制 點(diǎn)是培養(yǎng)溫度，分別有3種：36°c. 44°c. 25°c,須嚴(yán)格把 關(guān)，否則直接影響檢驗(yàn)結(jié)果。點(diǎn)滴體會(huì)僅供參考，希望能起 拋磚引玉的作用。本研究在檢出的54株阪崎腸桿菌菌株中隨機(jī)抽取16株 （約1/3量）上送省級(jí)主管部門確證，結(jié)果反饋準(zhǔn)確率達(dá)100%o參考文獻(xiàn)1 魯曦，師寶忠，王彬等.lamp法檢測(cè)乳粉中的阪崎 腸桿菌現(xiàn)代食品科技，2010, 26(5)： 540-543.2 leclercq a, wanegue c, bay lac p, et al. compariso n of fecal co