nm23基因在人肺癌組織中的表達及其臨床意義

1、nm23基因在人肺癌組織中的表達及其臨床意義(作者:單位:郵編:)【摘要】目的：觀察nm23基因在人肺癌中的表達，探討其與肺癌臨床生物學行為的關系。方法：采用免疫組織化學ultrasensitivetms p三步法，檢測49例肺癌及40例癌旁正常組 織肺切片中nm23蛋白表達的情況，結合臨床資料，應用統(tǒng)計學方法 對其與肺癌臨床生物學行為的關系進行分析。結果：在49例肺癌組織中，nm23蛋白的陽性表達率為55.1% ,顯著低于正常肺組織的 87.5%(p0.01);在病理分級高 中分化、低分化和未分化癌組織中 nm23蛋白的陽性表達率分別為82.6%、41.2%和11.1% ,差異具有 統(tǒng)計學意

2、義(p0.01);在不同年齡、性別、吸煙指數、淋巴結轉移及tnm 分期中,nm23蛋白表達情況的差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。結論： nm23蛋白的表達水平隨肺癌組織分化程度升高而增加，而與肺癌轉 移抑制作用可能無關【關鍵詞】免疫組織化學；肺癌;nm23基因；組織分化程度肺癌已成為人類癌癥死亡的主要原因之一。在我國，肺癌發(fā)病率及死亡率增長迅速。癌癥的預后與診斷時的臨床分期密切相關。肺癌的 發(fā)生發(fā)展是一個多基因參與、多階段發(fā)生、長時間形成的極其復雜的 病變過程。nm23基因是近年來研究較多的腫瘤轉移抑制基因之一， 但是目前，nm23基因的蛋白直接或間接調節(jié)轉移過程的機制仍未明 確，nm23蛋

3、白的表達與非小細胞肺癌轉移及預后關系的結論也不明 確。本研究通過檢測肺癌患者癌組織中nm23蛋白的表達與肺癌臨床 生物學行為間的關系，為進一步探討肺癌的發(fā)病機制提供理論依據， 推測其可能的作用機制。1材料與方法1.1標本來源選取西安交通大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院1998年3月2004年12月經手術切除或氣管鏡活檢的63例肺癌，去除資料不全病例，取術前未進行放療和(或)化療、無其他疾病或并發(fā)癥及臨床資料齊全的病例49例用于本研究。其中33例，女16例;年齡34-72歲，平均(59.2±11.3)歲。按1981年who肺癌病理類型分類標準：鱗癌19 例，腺癌20例，小細胞癌10例;分化程度：

4、高 中分化23例，低分 化仃例，未分化9例。按美國聯(lián)合癌癥分類委員會(ajcc)和國際抗 癌聯(lián)盟(uicc)2002年制定的tnm分期標準進行分期，其中|期15 例,ii期13例,iii+iv期21例;有區(qū)域淋巴結轉移者28例。對原h(huán)e切片進行復習，調取存檔石蠟包埋組織標本，每例標本均經病理科有經驗的醫(yī)師選擇1-2塊，制成4 pm厚連續(xù)切片4張，3張切片供 免疫組化染色，1張供he染色復核診斷。取40例癌旁正常肺組織作為對照。1.2方法病例標本為病灶中央常規(guī)取材，10%福爾馬林定，石蠟包埋，連續(xù)切片厚約4 pm。采用免疫組化ultrasensitivetms p三步法檢 測nm23蛋白的表達。

5、1.3質量控制每次染色均設計對照，以作為染色質量控制標準，陽性對照采 用已知的陽性對照片(購于福州邁新生物技術開發(fā)有限公司)，空白對 照采用磷酸鹽緩沖液(pbs)代替一抗，所有對照均與實驗標本在相同 條件下嚴格按照實際和推薦方法進行染色。1.4判定標準免疫組化陽性反應為細胞漿或細胞核中有黃色顆粒。蛋白累積 的評分方法：參照fromwitz綜合計分法并略加修改行半定量分析， 在高倍鏡(10x40)下，隨機選擇5-10個不同的視野各計數10-20 個癌細胞，約100個癌細胞，記錄陽性細胞的百分數和染色特征。 陽性細胞的百分數計算公式：陽性細胞百分數=(陽性細胞數/總癌細 胞數)x100%。陽性百分

6、率5%-25%為1分，26%50%為2分， 51 %-75%為3分，75%為4分。著色強度以多數陽性細胞呈現的染 色計分，淺棕色為1分，棕色為2分，深棕色為3分。行綜合評分， 0-1分為陰性(-),2-3分為弱陽性(+) ,45分為中度陽性(+) ,6 7分為強陽性(+)。讀片在2位有經驗的病理科醫(yī)師指導下進行， 有爭議的結果由3位醫(yī)師共同討論決定。1.5統(tǒng)計學處理應用spss 11.5 for windows統(tǒng)計軟件包行卡方檢驗和fisher 確切概率法，結果均以雙側p0.05為差異有統(tǒng)計學意義。2結果2.1 nm23蛋白在正常肺組織及肺癌中的表達nm23在正常肺組織及肺癌組織中陽性率分別為

7、87.5%. 55.1%(p0.01)o nm23蛋白陽性表達為胞漿有棕黃色顆粒，以癌巢邊 緣和散在的癌細胞表達較多，染色較深(圖1)o nm23蛋白在鱗癌中 以弱 中度陽性為主，在腺癌中以中度陽性為主，小細胞癌則以弱陽 性為主(圖2)。結果顯示在肺癌中nm23蛋白表達水平明顯降低(表1)o2.2 nm23蛋白表達與肺癌臨床病理特征的關系由表2可以看出，在不同的年齡、性別、吸煙指數、組織學類 型及tnm分期中，nm23蛋白表達情況的差別均無統(tǒng)計學意義 (p0.05);在有淋巴結轉移的肺癌組與無淋巴結轉移的肺癌組中,nm23 蛋白表達的差異亦無統(tǒng)計學意義(p0.05);肺癌中nm23蛋白陽性表達

8、 率隨病理分級升高而增加，高 中分化與低分化肺癌間以及高 中分 化與未分化肺癌間比較差異均有統(tǒng)計學意義(p0.01)。表1 nm23蛋白 在正常肺組織及肺癌中的表達表2 nm23蛋白表達與肺癌臨床病理特 征的關系3討論nm23基因是一個多功能的基因，與細胞的生長、分裂、轉錄、 翻譯調控、分化抑制、信號傳導、微管組裝，癌的發(fā)生、發(fā)展、轉移 等有關。而研究最多的是nm23基因的抑制腫瘤轉移的功能口 2。 nm23基因是steeg等3應用差別克隆雜交技術于1998年發(fā)現并克 隆的第1個腫瘤轉移抑制基因。人類的nm23基因主要有nm23 h1和nm23 h2亞型onm23基因的編碼產物為一種二磷酸核昔

9、激酶ndpk ,其功能是將二磷酸核 昔轉變成除atp以外的三磷酸核昔。ndpk在細胞生長和腫瘤轉移 中至少具有3個主要作用：（1）通過催化gtp-gdp的轉化參與微管 蛋白的解聚與聚合，利用微管系統(tǒng)，包括有絲分裂紡錘體形成和細胞 移動，來調節(jié)細胞功能。（2）通過調節(jié)gtp合成，使腫瘤細胞的多種 生長因子與細胞膜結合后的信號傳導發(fā)生障礙，從而抑制腫瘤細胞的 生長、轉移。（3）直接與腫瘤細胞膜上g蛋白結合，參與調控跨膜信 息傳遞，從而對細胞分化及癌基因的轉化起作用。研究證明4 5,腫瘤細胞侵襲轉移的各個階段，都與腫瘤細胞的跨膜機制密切相關， 特別是通過影響g蛋白的信號傳遞發(fā)揮負性的調控作用?，F已證

10、實，nm23基因是一個腫瘤轉移抑制基因，不少動物腫瘤模型都顯示nm23基因在轉移腫瘤中表達下降，在多種人類腫瘤如 乳腺癌、腎癌、黑色素瘤、肺癌、結腸癌等的組織中，nm23 h2表達與患者預后或腫瘤的淋巴結轉移呈負相關6。國內外對于 nm23 h1基因及其表達產物和肺癌的研究報道很不一致。國內外很多研究顯示，nm23 h1基因表達水平與肺癌的分化程度密切相關7 8,說明nm23基因在肺癌的演進過程中可能起著重要調節(jié)作用，這提示nm23 h1基因表達水平可以作為判斷預后的指標。本研究中nm23蛋白在有淋巴結轉移組的陽性表達率高于無淋巴結轉移組，但兩者相比差異并無統(tǒng)計學意義(p0.05),因 此尚不

11、能證實nm23基因具有抑制肺癌轉移的轉移，相反提示可能為 肺癌的不良預后指標o okada等9研究發(fā)現,nm23 h1. nm23 h2 基因與轉錄因子結合位點不同，說明nm23 h1和nm23 h2是通 過不同方式被調節(jié)，具有相互獨立性，因而可能具有組織差異性。國內外亦有研究發(fā)現，nm23基因特別是nm23 h1基因與肺 癌轉移存在相關趨勢10o聶強等x研究發(fā)現，nm23 h1基因可 明顯抑制l9981肺癌細胞株的細胞增殖力和侵襲力。nm23 h1基 因對人高轉移大細胞肺癌細胞株l9981的生物學行為的影響可能與 其抑制蛋白激酶c(pkc)信號傳導有關。研究結果不一致的原因可能在于nm23基

12、因在腫瘤中的表達受許多因素的影響和作用，如其他腫瘤相關基因、蛋白分子、激素、受體等，并且這些因子調節(jié)形式也不同，這些都說明nm23基因對腫瘤 演進過程的調節(jié)是一個復雜的事件。總之，目前對nm23基因的作用 機制，特別是發(fā)揮作用的具體生化途徑尚未完全明了，尚需進行更深入 的研究?！緟⒖嘉墨I】1jmilin l,rousseau merck m f,munief a,et al.nm23h1 a new member of the family of human nm23/nucleos nediphoshate kinase gene located on chromosome 16pl13j.

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