北科大微生物實(shí)驗(yàn)1、細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察和染色

1、 實(shí)實(shí) 驗(yàn)驗(yàn) 一一細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察和染色細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察和染色目的要求目的要求觀察細(xì)菌菌落的特征。觀察細(xì)菌菌落的特征。掌握簡單染色法和革蘭氏染色法的原理掌握簡單染色法和革蘭氏染色法的原理及操作步驟。及操作步驟。在油鏡下觀察細(xì)菌個(gè)體的形態(tài)在油鏡下觀察細(xì)菌個(gè)體的形態(tài)。了解幾種細(xì)菌的特殊染色方法，包括芽了解幾種細(xì)菌的特殊染色方法，包括芽孢、莢膜及鞭毛染色。孢、莢膜及鞭毛染色。 了解環(huán)境微生物的檢查。了解環(huán)境微生物的檢查。安全事項(xiàng)安全事項(xiàng)微生物微生物酒精燈酒精燈滅菌鍋滅菌鍋玻璃器皿玻璃器皿超凈臺(tái)（超凈臺(tái)（紫外線紫外線）電器（電器（電爐、微波爐電爐、微波爐） 奧林帕斯奧林帕斯(OLYMPUS)雙筒生

2、物顯微鏡雙筒生物顯微鏡鏡筒鏡筒物鏡轉(zhuǎn)換器物鏡轉(zhuǎn)換器載物臺(tái)載物臺(tái)載物臺(tái)調(diào)節(jié)鈕載物臺(tái)調(diào)節(jié)鈕粗調(diào)節(jié)器粗調(diào)節(jié)器細(xì)調(diào)節(jié)器細(xì)調(diào)節(jié)器電源電源光強(qiáng)調(diào)節(jié)鈕光強(qiáng)調(diào)節(jié)鈕孔徑光闌孔徑光闌視場光闌視場光闌雙筒目鏡雙筒目鏡攝像頭攝像頭物鏡物鏡鏡座鏡座鏡臂鏡臂熒光發(fā)射裝置熒光發(fā)射裝置奧林帕斯生物顯微鏡的使用方法奧林帕斯生物顯微鏡的使用方法1. 接通電源。接通電源。2. 打開主開關(guān)。打開主開關(guān)。3. 轉(zhuǎn)動(dòng)光強(qiáng)調(diào)節(jié)鈕，轉(zhuǎn)動(dòng)光強(qiáng)調(diào)節(jié)鈕，使亮度適中使亮度適中。4. 把標(biāo)本固定在載物臺(tái)上。把標(biāo)本固定在載物臺(tái)上。5. 用低倍物鏡，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)和微調(diào)用低倍物鏡，旋轉(zhuǎn)粗調(diào)和微調(diào)來進(jìn)行對焦。來進(jìn)行對焦。6. 調(diào)節(jié)雙目鏡筒間距和視度差。調(diào)節(jié)雙目鏡

3、筒間距和視度差。7. 再適當(dāng)調(diào)節(jié)照明度。再適當(dāng)調(diào)節(jié)照明度。8. 使焦點(diǎn)正確地對準(zhǔn)標(biāo)本。使焦點(diǎn)正確地對準(zhǔn)標(biāo)本。8. 調(diào)節(jié)孔徑光闌。調(diào)節(jié)孔徑光闌。9. 依次用低、中、高倍鏡觀察依次用低、中、高倍鏡觀察。10. 油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，油鏡觀察：高倍鏡下找到清晰的物象后，下降載物臺(tái)，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，下降載物臺(tái)，在標(biāo)本中央滴一滴香柏油，使油鏡鏡頭浸入香柏油中，再細(xì)調(diào)至看使油鏡鏡頭浸入香柏油中，再細(xì)調(diào)至看清物象為止。清物象為止。11. 換片：另換新片，必須從第換片：另換新片，必須從第9條開始操條開始操作。作。 12. 觀察完畢，下降載物臺(tái)，取下載物臺(tái)上觀察完畢，下降載物臺(tái)，取下載物臺(tái)

4、上的載玻片，將的載玻片，將4的目鏡對準(zhǔn)載物臺(tái)，的目鏡對準(zhǔn)載物臺(tái)，再用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后用擦再用擦鏡紙擦去鏡頭上的油，然后用擦鏡紙沾取少量乙醇鏡紙沾取少量乙醇/水擦去殘留的油，水擦去殘留的油，最后用擦鏡紙擦去殘留的乙醇最后用擦鏡紙擦去殘留的乙醇/水。水。13. 用畢復(fù)原：先將電壓調(diào)節(jié)旋鈕復(fù)原，用畢復(fù)原：先將電壓調(diào)節(jié)旋鈕復(fù)原，關(guān)關(guān)閉主開關(guān)，切斷電源閉主開關(guān)，切斷電源。顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項(xiàng)顯微鏡保養(yǎng)和使用中的注意事項(xiàng)1.1.不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件不準(zhǔn)擅自拆卸顯微鏡的任何部件, ,以免損壞。以免損壞。2.2.鏡面只能用擦鏡紙擦，不能用手指或粗布，以保證光潔度。鏡面只能用擦鏡紙擦，

5、不能用手指或粗布，以保證光潔度。3.3.觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)觀察標(biāo)本時(shí)，必須依次用低、中、高倍鏡，最后用油鏡。當(dāng)目視目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以目視目鏡時(shí)，特別在使用油鏡時(shí)，切不可使用粗調(diào)節(jié)器，以免壓碎玻片或損傷鏡面。免壓碎玻片或損傷鏡面。4.4.光強(qiáng)要適中，太亮不僅損傷燈泡壽命，也對眼睛有一定的傷光強(qiáng)要適中，太亮不僅損傷燈泡壽命，也對眼睛有一定的傷害，并且無法進(jìn)行圖像采集。害，并且無法進(jìn)行圖像采集。5.5.觀察時(shí)，兩眼睜開，養(yǎng)成能夠用兩眼觀察的習(xí)慣，使兩眼同觀察時(shí)，兩眼睜開，養(yǎng)成能夠用兩眼觀察的習(xí)慣，使兩眼同時(shí)聚焦。時(shí)聚焦。6.6.觀察臨時(shí)

6、制片時(shí)，不要讓玻片中的水分流到載物臺(tái)上，更不觀察臨時(shí)制片時(shí)，不要讓玻片中的水分流到載物臺(tái)上，更不能使酸、堿及其它化學(xué)藥品與顯微鏡接觸。能使酸、堿及其它化學(xué)藥品與顯微鏡接觸。油鏡使用的原理油鏡使用的原理 油鏡，即油浸接物鏡。油鏡，即油浸接物鏡。 當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與當(dāng)光線由反光鏡通過玻片與鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空鏡頭之間的空氣時(shí)，由于空氣與玻片的密度不同，使光氣與玻片的密度不同，使光線受到曲折，發(fā)生散射，降線受到曲折，發(fā)生散射，降低了視野的照明度。低了視野的照明度。 若中間的介質(zhì)是一層油（若中間的介質(zhì)是一層油（其其折射率與玻片的相近折射率與玻片的相近），則），則幾乎不發(fā)生折射，增加了視幾乎不

7、發(fā)生折射，增加了視野的進(jìn)光量，從而使物像更野的進(jìn)光量，從而使物像更加清晰。加清晰?；驹砘驹?(一一) 簡單染色法原理簡單染色法原理(二二) 革蘭氏染色法原理革蘭氏染色法原理(三三) 抗酸染色原理抗酸染色原理(四四) 芽孢染色原理芽孢染色原理(五五) 莢膜染色原理莢膜染色原理(六六) 鞭毛染色原理鞭毛染色原理 染色劑和染色原理染色劑和染色原理微生物染色常用染料如下表：微生物染色常用染料如下表：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（簡單染色的方法和步驟）（簡單染色的方法和步驟）涂片涂片自然自然干燥干燥微火固定微火固定染色染色l min沖洗沖洗吸干吸干鏡檢鏡檢實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（革蘭氏染色的方法（革蘭氏染色的方法

8、和步驟）和步驟）涂片，干燥、固定涂片，干燥、固定草酸銨結(jié)晶紫染液染色草酸銨結(jié)晶紫染液染色lmin，用，用水沖洗水沖洗用革氏碘液媒染用革氏碘液媒染lmin，用水沖去，用水沖去碘液碘液用用95乙醇脫色乙醇脫色10-30s，至乙醇，至乙醇液不呈現(xiàn)紫色液不呈現(xiàn)紫色蕃紅染液復(fù)染蕃紅染液復(fù)染lmin，用水沖洗，用水沖洗吸干并鏡檢吸干并鏡檢一、基本原理革蘭氏染色反應(yīng)是細(xì)菌分類和鑒定的重要性狀。它是1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立的。革蘭氏染色法（Gramstain）不僅能觀察到細(xì)菌的形態(tài)而且還可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類：染色反應(yīng)呈藍(lán)紫色的稱為革蘭氏陽性細(xì)菌，用G+表示；染色反應(yīng)呈紅色（復(fù)染顏色）的稱為革蘭氏陰

9、性細(xì)菌，用G-表示。細(xì)菌對于革蘭氏染色的不同反應(yīng)，是由于它們細(xì)胞壁的成分和結(jié)構(gòu)不同而造成的。革蘭氏陽性細(xì)菌的細(xì)胞壁主要是由肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成的，在染色過程中，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，通透性降低，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被保留在細(xì)胞內(nèi)而不易脫色，因此，呈現(xiàn)藍(lán)紫色；革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)胞壁中肽聚糖含量低，而脂類物質(zhì)含量高，當(dāng)用乙醇處理時(shí)，脂類物質(zhì)溶解，細(xì)胞壁的通透性增加，使結(jié)晶紫-碘復(fù)合物易被乙醇抽出而脫色，然后又被染上了復(fù)染液（番紅）的顏色，因此呈現(xiàn)紅色。革蘭氏染色需用四種不同的溶液：堿性染料（basicdye）初染液；媒染劑（mordant）；脫色劑（decolori

10、singagent）和復(fù)染液（counterstain）。堿性染料初染液的作用象在細(xì)菌的單染色法基本原理中所述的那樣，而用于革蘭氏染色的初染液一般是結(jié)晶紫（crystalviolet）。媒染劑的作用是增加染料和細(xì)胞之間的親和性或附著力，即以某種方式幫助染料固定在細(xì)胞上，使不易脫落，碘（iodine）是常用的媒染劑。脫色劑是將被染色的細(xì)胞進(jìn)行脫色，不同類型的細(xì)胞脫色反應(yīng)不同，有的能被脫色，有的則不能，脫色劑常用95的酒精（ethanol）。復(fù)染液也是一種堿性染料，其顏色不同于初染液，復(fù)染的目的是使被脫色的細(xì)胞染上不同于初染液的顏色，而未被脫色的細(xì)胞仍然保持初染的顏色，從而將細(xì)胞區(qū)分成G+和G-兩

11、大類群，常用的復(fù)染液是番紅。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（了解了解抗酸染色的方法和步驟）抗酸染色的方法和步驟）1制片制片 將少量草分枝桿菌制成菌懸液，將少量草分枝桿菌制成菌懸液，80恒溫水浴恒溫水浴3h殺死菌體。殺死菌體。取菌懸液涂片，自然干燥。取菌懸液涂片，自然干燥。2染色染色 滴加石炭酸復(fù)紅染液滴加石炭酸復(fù)紅染液2滴，覆蓋涂片，在微火上加熱至有蒸滴，覆蓋涂片，在微火上加熱至有蒸氣出現(xiàn)，不斷補(bǔ)充染液，加熱氣出現(xiàn)，不斷補(bǔ)充染液，加熱810min，棄染液。，棄染液。3脫色脫色 用用3鹽酸乙醇液脫色，至乙醇液呈淡紅色或無色。鹽酸乙醇液脫色，至乙醇液呈淡紅色或無色。4水洗水洗 滴加蒸餾水洗去鹽酸乙醇。滴加蒸餾水

12、洗去鹽酸乙醇。5復(fù)染復(fù)染 加美藍(lán)染液染加美藍(lán)染液染lmin。6水洗后自然干燥、鏡檢水洗后自然干燥、鏡檢 草分枝桿菌呈現(xiàn)紅色。若用非抗酸性菌作為對照，則菌體草分枝桿菌呈現(xiàn)紅色。若用非抗酸性菌作為對照，則菌體被染成藍(lán)色。被染成藍(lán)色?？顾崛旧砜顾崛旧?分枝桿菌細(xì)胞壁含脂質(zhì)較多分枝桿菌細(xì)胞壁含脂質(zhì)較多,其其中主要成分為分枝菌酸中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性此物具有抗酸性,染色時(shí)染色時(shí)與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色能抵抗酸性乙醇的脫色作用作用,因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色,達(dá)到染色目達(dá)到染色目的。的。步驟步驟:萋納石炭酸復(fù)紅染色萋納石

13、炭酸復(fù)紅染色,加溫促使菌體著加溫促使菌體著色色;3%鹽酸乙醇脫色鹽酸乙醇脫色;呂氏美藍(lán)復(fù)染呂氏美藍(lán)復(fù)染,未脫色細(xì)未脫色細(xì)菌呈紅色為抗酸性細(xì)菌菌呈紅色為抗酸性細(xì)菌,脫色經(jīng)復(fù)染呈藍(lán)色的細(xì)脫色經(jīng)復(fù)染呈藍(lán)色的細(xì)菌為非抗酸性細(xì)菌菌為非抗酸性細(xì)菌。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（了解了解芽孢染色的方法和步驟）芽孢染色的方法和步驟） 孔雀綠染色法：取一干凈載片，在載片中央加一小滴孔雀綠染色法：取一干凈載片，在載片中央加一小滴水，按無菌操作取巨大芽孢桿菌菌體少許混合均勻，水，按無菌操作取巨大芽孢桿菌菌體少許混合均勻，制成涂片，風(fēng)干固定后，在涂菌處滴加制成涂片，風(fēng)干固定后，在涂菌處滴加7.6的孔雀綠的孔雀綠飽和水溶液，間斷加

14、熱染色飽和水溶液，間斷加熱染色10min后后(注意添加染液勿注意添加染液勿使涂片干燥使涂片干燥)，用水沖洗。再用，用水沖洗。再用0.5蕃紅液染色蕃紅液染色lmin，水洗，自然干燥后鏡檢。芽孢被染上綠色，營養(yǎng)體呈水洗，自然干燥后鏡檢。芽孢被染上綠色，營養(yǎng)體呈現(xiàn)紅色。現(xiàn)紅色。原理是芽胞壁較厚，通透性低而不易著原理是芽胞壁較厚，通透性低而不易著色，但芽胞一旦著色就很難被脫色。因色，但芽胞一旦著色就很難被脫色。因此，先用著色能力強(qiáng)的染液（如孔雀綠此，先用著色能力強(qiáng)的染液（如孔雀綠或石炭酸復(fù)紅）在加熱條件下染色，使或石炭酸復(fù)紅）在加熱條件下染色，使染料既可進(jìn)入菌體也可進(jìn)入芽胞，水洗染料既可進(jìn)入菌體也可進(jìn)

15、入芽胞，水洗脫色時(shí)菌體中的染料被洗脫，而芽胞中脫色時(shí)菌體中的染料被洗脫，而芽胞中的染料仍保留。再用對比度大的復(fù)染劑的染料仍保留。再用對比度大的復(fù)染劑染色后，菌體染上復(fù)染劑顏色，而芽胞染色后，菌體染上復(fù)染劑顏色，而芽胞仍為原來的顏色，這樣兩者區(qū)別開來。仍為原來的顏色，這樣兩者區(qū)別開來。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（了解了解莢膜染色的方法和步驟）莢膜染色的方法和步驟）1 1制片制片 加一滴加一滴6 6葡萄糖水溶液于載片一端，挑取少量膠質(zhì)芽孢葡萄糖水溶液于載片一端，挑取少量膠質(zhì)芽孢桿菌與其混合，再加一滴黑色素充分混勻。用推片法制片，桿菌與其混合，再加一滴黑色素充分混勻。用推片法制片，將菌液鋪成薄層，自然干燥。將

16、菌液鋪成薄層，自然干燥。2 2固定固定 滴加滴加l l2 2滴無水乙醇覆蓋涂片，固定滴無水乙醇覆蓋涂片，固定lminlmin，自然干燥。，自然干燥。3 3染色，沖洗染色，沖洗 滴加結(jié)晶紫，染色滴加結(jié)晶紫，染色2min2min，用水輕輕沖洗，干燥后鏡檢。，用水輕輕沖洗，干燥后鏡檢。 有莢膜的菌、菌體呈紫色，背景灰黑色，莢膜不著色呈無有莢膜的菌、菌體呈紫色，背景灰黑色，莢膜不著色呈無色透明圈。無莢膜的菌，由于干燥菌體收縮，菌體四周也可色透明圈。無莢膜的菌，由于干燥菌體收縮，菌體四周也可能出現(xiàn)一圈狹窄的不著色環(huán)，但這不是莢膜，莢膜不著色的能出現(xiàn)一圈狹窄的不著色環(huán)，但這不是莢膜，莢膜不著色的部分寬。部

17、分寬。莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一層黏液狀或膠質(zhì)狀物質(zhì)，莢膜是包圍在細(xì)菌細(xì)胞外的一層黏液狀或膠質(zhì)狀物質(zhì)，其成分為多糖、糖蛋白或多肽其成分為多糖、糖蛋白或多肽。由于莢膜與染料的親和。由于莢膜與染料的親和力弱、不易著色；而且可溶于水、易在用水沖洗時(shí)被除力弱、不易著色；而且可溶于水、易在用水沖洗時(shí)被除去。所以通常用負(fù)染色法染色，使菌體和背景著色，而去。所以通常用負(fù)染色法染色，使菌體和背景著色，而莢膜不著色，在菌體周圍形成一透明圈。由于莢膜含水莢膜不著色，在菌體周圍形成一透明圈。由于莢膜含水量高，制片時(shí)通常不用熱固定，以免變形影響觀察。量高，制片時(shí)通常不用熱固定，以免變形影響觀察。1、實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)材料

18、莢膜染色液。莢膜染色液。菌種。有莢膜的細(xì)菌。菌種。有莢膜的細(xì)菌。其他。玻片、接種環(huán)、吸管等。其他。玻片、接種環(huán)、吸管等。2、注意事項(xiàng)、注意事項(xiàng)莢膜染色涂片不要用加熱固定，以免莢膜皺縮變形。莢膜染色涂片不要用加熱固定，以免莢膜皺縮變形。玻片必須潔凈無油跡，以免涂片時(shí)混合液不能均勻散玻片必須潔凈無油跡，以免涂片時(shí)混合液不能均勻散開。開。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（了解了解鞭毛染色的方法和步驟）鞭毛染色的方法和步驟）1 1載片的清洗載片的清洗：將載片洗凈浸泡在：將載片洗凈浸泡在95乙醇中備用。乙醇中備用。2 2實(shí)驗(yàn)菌種的準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)菌種的準(zhǔn)備：將枯草芽孢桿菌在新制備的肉膏蛋白胨斜：將枯草芽孢桿菌在新制備的肉膏蛋白

19、胨斜面培養(yǎng)基上面培養(yǎng)基上(斜面下部要有少量冷凝水斜面下部要有少量冷凝水)，連續(xù)移種，連續(xù)移種34次，每次，每次培養(yǎng)次培養(yǎng)1218h，最后一次培養(yǎng)，最后一次培養(yǎng)1216h。3 3制片制片：擦干載片，在載片一端加一滴蒸餾水，用接種環(huán)挑?。翰粮奢d片，在載片一端加一滴蒸餾水，用接種環(huán)挑取少許菌苔底部有水部分的菌體少許菌苔底部有水部分的菌體(注意不要挑出培養(yǎng)基注意不要挑出培養(yǎng)基)，將接種，將接種環(huán)懸放在水滴中片刻，將載片稍傾斜，使菌液隨水滴緩緩流環(huán)懸放在水滴中片刻，將載片稍傾斜，使菌液隨水滴緩緩流到另一端，可再返轉(zhuǎn)一次使菌液流經(jīng)面積擴(kuò)大，然后放平，到另一端，可再返轉(zhuǎn)一次使菌液流經(jīng)面積擴(kuò)大，然后放平，自然

20、干燥。自然干燥。4 4染色染色（利夫森氏染色法）利夫森氏染色法） ：用蠟筆將涂菌區(qū)圈起，滴加染液，用蠟筆將涂菌區(qū)圈起，滴加染液，過數(shù)分鐘后，當(dāng)染液的過數(shù)分鐘后，當(dāng)染液的1/2以上區(qū)域表面出現(xiàn)金屬光澤膜時(shí)，以上區(qū)域表面出現(xiàn)金屬光澤膜時(shí)，用水輕輕將金屬膜及染液沖洗干凈，自然干燥。用水輕輕將金屬膜及染液沖洗干凈，自然干燥。鏡檢鏡檢時(shí)應(yīng)在涂片上按順序進(jìn)行觀察，經(jīng)常是在部分涂片鏡檢鏡檢時(shí)應(yīng)在涂片上按順序進(jìn)行觀察，經(jīng)常是在部分涂片區(qū)的菌體染出鞭毛，菌體及鞭毛均為紅色。區(qū)的菌體染出鞭毛，菌體及鞭毛均為紅色。鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)“器官器官”，細(xì)菌是否具有鞭毛，以及鞭毛的數(shù)目和附著于細(xì)菌，細(xì)菌是否具

21、有鞭毛，以及鞭毛的數(shù)目和附著于細(xì)菌的位置是細(xì)菌的一項(xiàng)重要形態(tài)特征。細(xì)菌的鞭毛很纖細(xì)。除了很少數(shù)形成鞭毛束的位置是細(xì)菌的一項(xiàng)重要形態(tài)特征。細(xì)菌的鞭毛很纖細(xì)。除了很少數(shù)形成鞭毛束（由許多根鞭毛構(gòu)成）的細(xì)菌可以用相差顯微鏡直接觀察到鞭毛的存在外，多數(shù)（由許多根鞭毛構(gòu)成）的細(xì)菌可以用相差顯微鏡直接觀察到鞭毛的存在外，多數(shù)細(xì)菌的鞭毛均不能用光學(xué)顯微鏡直接觀察到。要用普通光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)菌的鞭細(xì)菌的鞭毛均不能用光學(xué)顯微鏡直接觀察到。要用普通光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)菌的鞭毛，必須用鞭毛染色法。毛，必須用鞭毛染色法。鞭毛染色的基本原理是在染色前先用媒染劑處理，使它沉積在鞭毛上，使鞭鞭毛染色的基本原理是在染色前先用媒染

22、劑處理，使它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。毛直徑加粗，然后再進(jìn)行染色。1、實(shí)驗(yàn)材料、實(shí)驗(yàn)材料鞭毛染色液。鞭毛染色液。菌種。有鞭毛的細(xì)菌。菌種。有鞭毛的細(xì)菌。其他。玻片、接種環(huán)、吸管等。其他。玻片、接種環(huán)、吸管等。2、注意事項(xiàng)、注意事項(xiàng)良好的培養(yǎng)物是鞭毛染色成功的基本條件，不宜用陳舊培養(yǎng)物作鞭毛染色的菌良好的培養(yǎng)物是鞭毛染色成功的基本條件，不宜用陳舊培養(yǎng)物作鞭毛染色的菌種材料，因?yàn)槔淆g細(xì)菌鞭毛容易脫落。種材料，因?yàn)槔淆g細(xì)菌鞭毛容易脫落。玻片應(yīng)光滑、潔凈，不可帶油跡。不潔凈的載玻片可經(jīng)含適量洗衣粉的水中玻片應(yīng)光滑、潔凈，不可帶油跡。不潔凈的載玻片可經(jīng)含適量洗衣粉的水中煮沸約煮沸約2

23、0min，取出后用清水充分洗凈，瀝干水后置，取出后用清水充分洗凈，瀝干水后置95%酒精中處理，用時(shí)取酒精中處理，用時(shí)取出在火焰上燒去酒精及可能殘留的油跡。出在火焰上燒去酒精及可能殘留的油跡。挑取菌時(shí)，盡可能不帶培養(yǎng)基。挑取菌時(shí)，盡可能不帶培養(yǎng)基。配制合格的染色劑（尤其是配制合格的染色劑（尤其是B液液）、充分洗去）、充分洗去A液再加液再加B液、掌握好液、掌握好B液的染液的染色時(shí)間均是鞭毛染色成敗的關(guān)鍵。色時(shí)間均是鞭毛染色成敗的關(guān)鍵。實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 (一一)菌種菌種大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌。大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌。(二二)染液染液1. 簡單染色：草酸銨結(jié)晶紫染液。簡

24、單染色：草酸銨結(jié)晶紫染液。2. 革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染液、革氏碘液、革蘭氏染色：草酸銨結(jié)晶紫染液、革氏碘液、95乙醇、蕃紅染液。乙醇、蕃紅染液。實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 (三三)標(biāo)本標(biāo)本細(xì)菌三型、四聯(lián)球菌、莢膜、芽孢。細(xì)菌三型、四聯(lián)球菌、莢膜、芽孢。(四四)其他物品其他物品無菌水、顯微鏡、載片、蓋玻片、酒精燈、無菌水、顯微鏡、載片、蓋玻片、酒精燈、吸水紙、香柏油、擦鏡紙、接種環(huán)。吸水紙、香柏油、擦鏡紙、接種環(huán)。肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板。肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 (一一) 成片觀察成片觀察(1)觀察細(xì)菌三型涂片，比較球菌、桿菌和觀察細(xì)菌三型涂片，比較球菌、桿菌和螺旋菌的形態(tài)。螺旋菌的形態(tài)。(2)觀察四聯(lián)球菌的形態(tài)及觀察四聯(lián)球菌的形態(tài)及排列排列方式。方式。(3)觀察觀察蘇云金芽孢桿菌的芽孢，褐球固氮蘇云金芽孢桿菌的芽孢，褐球固氮菌的莢膜的形態(tài)。菌的莢膜的形態(tài)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 (二二)觀察平板上的細(xì)菌菌落，識(shí)別大腸桿觀察平板上的細(xì)菌菌落，識(shí)別大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌菌、枯草芽孢桿