第一章中藥化學(xué)—提取分離方法

1、 1-3 1-3 第三節(jié)第三節(jié) 提提 取取 分分 離離 方方 法法 本節(jié)主要內(nèi)容本節(jié)主要內(nèi)容一一.中藥有效成分的提取中藥有效成分的提取二、中藥有效成分的分離與精制二、中藥有效成分的分離與精制（一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離（一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離（二）根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配系數(shù)不（二）根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的分配系數(shù)不 同進(jìn)行分離同進(jìn)行分離（三）色譜分離法（三）色譜分離法 一、中藥有效成分的提取一、中藥有效成分的提取提取前的準(zhǔn)備提取前的準(zhǔn)備 1、考查藥材的學(xué)名、產(chǎn)地、藥用部位、采、考查藥材的學(xué)名、產(chǎn)地、藥用部位、采集時(shí)間和方法集時(shí)間和方法2、查閱文獻(xiàn)、查閱文獻(xiàn) 利用前人的提取分離經(jīng)驗(yàn)

2、利用前人的提取分離經(jīng)驗(yàn)3、未知成分、未知成分 化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試驗(yàn)中藥有效成分的提取方法中藥有效成分的提取方法 提取法提取法 溶劑法溶劑法 相似相溶原理相似相溶原理 （重點(diǎn)）（重點(diǎn)）水蒸氣蒸餾法水蒸氣蒸餾法 適于揮發(fā)性適于揮發(fā)性成分成分超臨界流體萃取法超臨界流體萃取法 適于多適于多種物質(zhì)，尤其是低級(jí)性、揮種物質(zhì)，尤其是低級(jí)性、揮發(fā)性成分。發(fā)性成分。（一）（一） 溶劑法溶劑法 1、溶劑類型、溶劑類型 水水親水性溶劑親水性溶劑meoh etoh me2co中等極性溶劑中等極性溶劑 n-buoh etoac親脂性溶劑親脂性溶劑 et2o pet chcl3 c6h62 2 提取范圍提

3、取范圍pet 油脂、蠟、葉綠素、游離甾體及三萜類油脂、蠟、葉綠素、游離甾體及三萜類chcl3 etoac 游離生物堿、有機(jī)酸、黃酮游離生物堿、有機(jī)酸、黃酮 和和 香豆素苷元香豆素苷元meoh etoh me2co 苷類、生物堿鹽、苷類、生物堿鹽、 及鞣質(zhì)類及鞣質(zhì)類 水水 氨基酸、糖類（黏液質(zhì)、果膠）無機(jī)鹽等氨基酸、糖類（黏液質(zhì)、果膠）無機(jī)鹽等3 3 常用提取方法常用提取方法（1）浸漬法）浸漬法 適于對(duì)熱不穩(wěn)定成分適于對(duì)熱不穩(wěn)定成分 （提取率不高）（提取率不高）（2）滲濾法）滲濾法 優(yōu)于（優(yōu)于（1）法，但溶劑用量大）法，但溶劑用量大（3）煎煮法）煎煮法 水提水提 ，不適于對(duì)熱不穩(wěn)定的成分，不適于

4、對(duì)熱不穩(wěn)定的成分l及揮發(fā)油成分及揮發(fā)油成分（4）回流提取法）回流提取法 適于用有機(jī)溶劑提適于用有機(jī)溶劑提（5）連續(xù)回流提取法）連續(xù)回流提取法 用索氏提取器提，溶劑用索氏提取器提，溶劑 用量少，提取率高用量少，提取率高（二）水蒸汽蒸餾法（二）水蒸汽蒸餾法 此法適于揮發(fā)性成分的提取。此法適于揮發(fā)性成分的提取。（三）超臨界流體萃取法（三）超臨界流體萃取法（sfe） 是一種集提取與分離于一體，又基本上不是一種集提取與分離于一體，又基本上不用有機(jī)溶劑的新技術(shù)。用有機(jī)溶劑的新技術(shù)。超臨界流體是一種處于臨界溫度和臨界壓力以超臨界流體是一種處于臨界溫度和臨界壓力以上，介于氣體和液體之間的流體，具有很強(qiáng)的上，介

5、于氣體和液體之間的流體，具有很強(qiáng)的溶解能力，適于對(duì)很多物質(zhì)的提取。溶解能力，適于對(duì)很多物質(zhì)的提取。二、中藥有效成分的分離與精制二、中藥有效成分的分離與精制 （一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離（一）根據(jù)物質(zhì)溶解度差別進(jìn)行分離1、 結(jié)晶、重結(jié)晶法結(jié)晶、重結(jié)晶法原理原理 利用溫度不同引起溶解度利用溫度不同引起溶解度 的改的改變進(jìn)行分離變進(jìn)行分離 （1）溶劑選擇溶劑選擇 對(duì)純化成分對(duì)純化成分 熱溶，冷不溶熱溶，冷不溶 對(duì)雜質(zhì)對(duì)雜質(zhì) 冷熱都不溶或冷熱都溶冷熱都不溶或冷熱都溶 沸點(diǎn)不可太高，易于回收（沸點(diǎn)不可太高，易于回收（n-buoh不適合不適合b.p太高）太高） 對(duì)純化成分不反應(yīng)對(duì)純化成分不反應(yīng) （2

6、2）結(jié)晶純度的檢查）結(jié)晶純度的檢查 1、外觀：顏色、晶型、外觀：顏色、晶型 2、mp 檢查溶點(diǎn)、溶距檢查溶點(diǎn)、溶距 3、tlc 三種不同溶劑系統(tǒng)均為一個(gè)斑點(diǎn)三種不同溶劑系統(tǒng)均為一個(gè)斑點(diǎn) 4、hplc 基線穩(wěn)定的單峰基線穩(wěn)定的單峰 （3 3）結(jié)晶制備）結(jié)晶制備 去雜去雜 制備過飽和溶液制備過飽和溶液 析晶析晶 操作關(guān)鍵：溶解操作關(guān)鍵：溶解 趁熱抽濾趁熱抽濾 沉淀沉淀 （熱不溶型雜質(zhì)）（熱不溶型雜質(zhì)） 濾液濾液 放冷析晶放冷析晶 （冷熱都不溶雜質(zhì)）母液（冷熱都不溶雜質(zhì)）母液 結(jié)晶結(jié)晶 2 2、沉淀法（、沉淀法（ 溶劑沉淀）溶劑沉淀）原理原理 改變混合溶劑極性使一部分成改變混合溶劑極性使一部分成分沉

7、淀分沉淀 分類分類 : 1.水提醇沉法水提醇沉法 去除多糖、蛋白質(zhì)等去除多糖、蛋白質(zhì)等 水溶性雜質(zhì)水溶性雜質(zhì) 2.醇提水沉法醇提水沉法 除去樹脂、葉綠素等除去樹脂、葉綠素等 親脂性雜質(zhì)親脂性雜質(zhì) 3.醇提醚（丙酮）沉淀法醇提醚（丙酮）沉淀法 可沉淀皂苷可沉淀皂苷 3 3 、酸溶堿沉法、酸溶堿沉法 堿溶酸沉法堿溶酸沉法 酸溶堿沉法酸溶堿沉法 提取生物堿提取生物堿堿溶酸沉法堿溶酸沉法 提取酚酸性成分：提取酚酸性成分： 黃酮、蒽醌等黃酮、蒽醌等原理原理 離子態(tài)溶解，分子態(tài)難溶離子態(tài)溶解，分子態(tài)難溶 而沉淀析出而沉淀析出4 4、 金屬鹽沉淀法金屬鹽沉淀法酸性物酸性物 可用可用 ca+ ba+ pb+等

8、沉淀等沉淀堿性物堿性物 苦味酸鹽沉淀苦味酸鹽沉淀 雷氏銨鹽沉淀雷氏銨鹽沉淀 中性中性 pb(ac)2 可沉淀可沉淀cooh， 鄰二酚羥基鄰二酚羥基pb+ 堿性堿性 pb(oh)ac ( 除以上可沉淀除以上可沉淀 外外) 再加使單酚羥基或多元醇沉淀再加使單酚羥基或多元醇沉淀 （二）根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的（二）根據(jù)物質(zhì)在兩相溶劑中的 分配系數(shù)不同進(jìn)行分離分配系數(shù)不同進(jìn)行分離 1）、液）、液液萃取與分配系數(shù)液萃取與分配系數(shù) kd值值 原理原理 利用混合物中各成分在兩種互利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達(dá)到分離的方法離的方法 cu （有機(jī)溶劑

9、）上相（有機(jī)溶劑）上相 kd = cl (水層水層) 下相下相例如例如 ： a b 兩物質(zhì)兩物質(zhì) ka=10 kb=0.1chcl3 / h2o 上層（上層（h2o） 下層下層 （chcl3 ） 體積比：體積比：1：1萃取平衡后萃取平衡后 ka= 10 10 1 kb= 1 0.1 10此萃取率說明如下：此萃取率說明如下： a 大部分在上層大部分在上層 （90） 僅僅10在下層在下層氯仿層氯仿層 b大部分在下層（大部分在下層（90在氯仿層）僅在氯仿層）僅10在上在上層層水層水層因此一次萃取可基本分離開因此一次萃取可基本分離開2 2）、分離難易與分離因子、分離難易與分離因子 分離因子分離因子 表

10、示分離的難易程度表示分離的難易程度定義定義 被分離兩物質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中分配被分離兩物質(zhì)在同一溶劑系統(tǒng)中分配系數(shù)的比值系數(shù)的比值 ka / kb ( ka kb) 10：0.1 100 （一次萃取可完成）（一次萃取可完成） 10：1 10 （1012次萃取可完成）次萃取可完成）= 10:5 2 （100次以上萃取可完成）次以上萃取可完成） 10：9.5 1 （無法分離）（無法分離）3 3）、分配比與）、分配比與phph對(duì)酸堿兩性化合物的影響對(duì)酸堿兩性化合物的影響 （1）酸性物質(zhì)）酸性物質(zhì)（分子態(tài)）分子態(tài)） ha + h2o a- h3o+ （離子態(tài)）（離子態(tài)） 完全解離時(shí)完全解離時(shí) ph pk

11、a + 2 完全游離時(shí)完全游離時(shí) ph = pka 2 所以所以 酸性物酸性物 ph pka-2 (加堿加堿) （分子態(tài)；（分子態(tài)； 離子態(tài)（鹽）離子態(tài)（鹽） 游離態(tài)）游離態(tài)） ph pka+2( 加酸加酸) 同理同理：堿性物堿性物 ph pka-2( 加堿加堿) 酸性物為酸性物為 ha一般情況一般情況 ph 12 時(shí)時(shí) 堿性物為堿性物為 b（ph = pka + pkb ） 酸性物質(zhì)酸性物質(zhì) pka 小小 酸性強(qiáng)酸性強(qiáng) pka 大大 酸性弱酸性弱堿性物質(zhì)堿性物質(zhì) pka小小 堿性弱堿性弱 pka大大 堿性強(qiáng)堿性強(qiáng)4 4）、）、 萃取操作注意問題萃取操作注意問題 必須是互不相容的兩相溶劑必須是

12、互不相容的兩相溶劑 注意溫度濃度對(duì)注意溫度濃度對(duì)kd值的影響值的影響注意事項(xiàng)注意事項(xiàng) 防止乳化防止乳化 破乳方法破乳方法 抽濾，加熱，冷凍抽濾，加熱，冷凍 長(zhǎng)時(shí)間放置長(zhǎng)時(shí)間放置 加入破乳劑加入破乳劑5 5）可進(jìn)行兩相溶劑萃取的組合）可進(jìn)行兩相溶劑萃取的組合水水石油醚石油醚 水水苯苯水水乙醚乙醚 水水己烷己烷水水氯仿氯仿 水水乙酸乙酯乙酸乙酯水水正丁醇正丁醇不可進(jìn)行萃取的溶劑組合不可進(jìn)行萃取的溶劑組合水水乙醇乙醇 水水甲醇甲醇 水水丙酮丙酮乙醇乙醇氯仿氯仿 甲醇甲醇乙酸乙酯乙酸乙酯6 6）液滴逆流色譜）液滴逆流色譜(dccc)(dccc)及及高速逆流色譜高速逆流色譜(hsccc)(hsccc)

13、1分離度大大提高（無載體）分離度大大提高（無載體）特點(diǎn)特點(diǎn) 2可克服固體載體的吸附消耗可克服固體載體的吸附消耗 3不會(huì)使樣品形變污染和色譜峰不會(huì)使樣品形變污染和色譜峰 畸形拖尾畸形拖尾 分離對(duì)象分離對(duì)象 皂苷，生物堿，蛋白質(zhì)，皂苷，生物堿，蛋白質(zhì)，糖類，酸性化合物等難分離的成分糖類，酸性化合物等難分離的成分 液滴逆流分配法液滴逆流分配法4 4 、其他方法、其他方法（1）分餾法）分餾法利用被分離物各成分沸點(diǎn)的不同利用被分離物各成分沸點(diǎn)的不同進(jìn)行分離。進(jìn)行分離。（2）膜分離法）膜分離法小分子可通過生物膜，大分子小分子可通過生物膜，大分子通不過，適于多糖、肽及蛋白質(zhì)大分子的精制。通不過，適于多糖、肽

14、及蛋白質(zhì)大分子的精制。（3）升華法）升華法適于有升華性的成分的分離。適于有升華性的成分的分離。（三）色譜分離法（三）色譜分離法1、定義、定義利用混合物中各成分對(duì)固定利用混合物中各成分對(duì)固定相和移動(dòng)相的親和力的差異使之相互分相和移動(dòng)相的親和力的差異使之相互分離的方法，又稱層析法或色層法。這是離的方法，又稱層析法或色層法。這是一種物理化學(xué)分離、分析技術(shù)。一種物理化學(xué)分離、分析技術(shù)。2、作用、作用可用于混合物的分離，又可可用于混合物的分離，又可用于化合物的定性檢識(shí)和定量分析。用于化合物的定性檢識(shí)和定量分析。一一色譜法分類色譜法分類【1】按分離原理分：按分離原理分： 1、 極性吸附色譜法極性吸附色譜法

15、 2、 分配色譜法分配色譜法 3、 聚酰胺色譜法聚酰胺色譜法 4、 大孔樹脂色譜法大孔樹脂色譜法 5、 凝膠色譜法凝膠色譜法 6、 離子交換樹脂色譜法離子交換樹脂色譜法 【2】按操作方法分按操作方法分1、柱層析、柱層析用于樣品分離、精制用于樣品分離、精制2、薄層層析（、薄層層析（tlc）定性、定量定性、定量3、紙色譜（、紙色譜（ pc） 定性、定量定性、定量【3】按兩相狀態(tài)分按兩相狀態(tài)分1、液固色譜、液固色譜2、液液色譜、液液色譜3、氣固色譜、氣固色譜4、氣液色譜、氣液色譜【一一】吸附色譜吸附色譜 極性吸附劑極性吸附劑硅膠，氧化鋁硅膠，氧化鋁1、 分類分類 非極性吸附劑非極性吸附劑活性炭活性炭

16、 2、吸附規(guī)律吸附規(guī)律總原則為相似者易于吸附總原則為相似者易于吸附 極性吸附層析極性吸附層析極性強(qiáng)者易吸附極性強(qiáng)者易吸附 非極性吸附層析非極性吸附層析對(duì)非極性物質(zhì)吸附牢對(duì)非極性物質(zhì)吸附牢 極性層析法分離規(guī)律極性層析法分離規(guī)律1）吸附規(guī)律）吸附規(guī)律被分離物極性越強(qiáng)，吸附越牢，被分離物極性越強(qiáng)，吸附越牢，極性越弱，吸附越弱。極性越弱，吸附越弱。2）分離規(guī)律）分離規(guī)律: tlc: 極性強(qiáng)的吸附牢，展開距離短，極性強(qiáng)的吸附牢，展開距離短，rf值小值小 極性弱的吸附弱，展開距離長(zhǎng)，極性弱的吸附弱，展開距離長(zhǎng)，rf值大值大柱層析柱層析 : 極性強(qiáng)的吸附牢，洗脫速度慢，后洗下極性強(qiáng)的吸附牢，洗脫速度慢，后洗

17、下 極性弱的吸附弱，洗脫速度快，先洗下極性弱的吸附弱，洗脫速度快，先洗下3 3、極性強(qiáng)弱的判斷、極性強(qiáng)弱的判斷（1）極性的概念）極性的概念表示分子中電荷不對(duì)稱程度表示分子中電荷不對(duì)稱程度 分子偶極矩分子偶極矩越大者，極性越強(qiáng)越大者，極性越強(qiáng) 相關(guān)因素相關(guān)因素 分子極化度分子極化度越強(qiáng)者，極性越強(qiáng)越強(qiáng)者，極性越強(qiáng) 介電常數(shù)介電常數(shù)越大，極性越強(qiáng)越大，極性越強(qiáng) （2）常見有機(jī)官能團(tuán)極性順序）常見有機(jī)官能團(tuán)極性順序: -ch2- ch2- (r-) -ch2=ch2 och3 -coor c=o (cho) -nh2 -oh - cooh(3)常見有機(jī)溶劑極性順序與常見有機(jī)溶劑極性順序與pet c6

18、h6 et2o chcl3 etoac n-buoh （=17.5 ) me2co (= 20.7） etoh meoh c a b d cooh 黃莢苷黃莢苷(a、b)多多2個(gè)個(gè)glc，極性，極性 次苷（次苷（a，b，c，d）單乙酰黃莢苷單乙酰黃莢苷b同次苷，但糖上同次苷，但糖上oh ac化，而極性下降。化，而極性下降。所以所以 黃莢次苷黃莢次苷單乙酰黃莢苷單乙酰黃莢苷b 氧化鋁，硅膠氧化鋁，硅膠分離極性小的親分離極性小的親3分離對(duì)象分離對(duì)象 脂性成分。（應(yīng)用廣）脂性成分。（應(yīng)用廣） 活性炭活性炭分離極性大的親水性分離極性大的親水性 成分成分 吸附柱層析法吸附柱層析法【二二】液液分配柱色譜法

19、液液分配柱色譜法 (1 ) 正相分配色譜正相分配色譜固定相極性固定相極性 流動(dòng)相流動(dòng)相分類分類 反相分配色譜反相分配色譜固定相極性固定相極性 10）（3）分離對(duì)象親水性，或水溶性成分，）分離對(duì)象親水性，或水溶性成分， 如：苷類，糖類，生物堿類如：苷類，糖類，生物堿類 反相分配層析分離親脂性成分反相分配層析分離親脂性成分硅膠表面親油性表面（不同長(zhǎng)度硅膠表面親油性表面（不同長(zhǎng)度r 取代）取代） 分離規(guī)律分離規(guī)律正相分配色譜：正相分配色譜：親脂性成分易溶于流動(dòng)相，吸附弱，親脂性成分易溶于流動(dòng)相，吸附弱，rf值大（柱層析值大（柱層析先洗下）；先洗下）；親水性成分易溶于固定相，吸附牢，親水性成分易溶于固

20、定相，吸附牢，rf值?。ㄖ鶎游鲋敌。ㄖ鶎游龊笙聪拢┖笙聪拢┓聪喾峙渖V：反相分配色譜：與以上結(jié)果相反與以上結(jié)果相反【三三】聚酰胺吸附色譜法聚酰胺吸附色譜法 （1）吸附原理）吸附原理形成分子間氫鍵形成分子間氫鍵 n 聚酰胺聚酰胺分離對(duì)象：分離對(duì)象：（2）可形成氫鍵的官能團(tuán)：）可形成氫鍵的官能團(tuán)： ar-oh， nh2， cooh， c=o ，cho, no2 ohnho.（3 3）吸附規(guī)律：）吸附規(guī)律： 1 形成氫鍵基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng)形成氫鍵基團(tuán)數(shù)目越多，則吸附能力越強(qiáng). 2 已形成分子內(nèi)氫鍵者吸附力減弱已形成分子內(nèi)氫鍵者吸附力減弱. 3 分子芳香化程度越高者，吸附越牢分子芳香化程度越

21、高者，吸附越牢 4 糖一般不參與吸附糖一般不參與吸附 5與溶劑介質(zhì)有關(guān)與溶劑介質(zhì)有關(guān).形成氫鍵能力形成氫鍵能力 水中最強(qiáng)水中最強(qiáng) 堿中最弱堿中最弱ohohoho ho ho hohoh 水水 meoh me2co naoh/h2o 甲酰胺甲酰胺 二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺 尿素尿素/h2o溶劑洗脫順序：溶劑洗脫順序：【四】大孔樹脂大孔樹脂 色譜法色譜法吸附原理吸附原理范德華引力分子篩范德華引力分子篩分離規(guī)律分離規(guī)律被分離物的極性越大，其被分離物的極性越大，其rf值越大值越大 被分離物的極性越小，其被分離物的極性越小，其rf值越小值越小 分離對(duì)象分離對(duì)象苷、糖類苷、糖類(多糖多糖)、黃酮、三萜等分

22、、黃酮、三萜等分 離和收集離和收集 【五五】凝膠色譜法凝膠色譜法1.原理原理根據(jù)物質(zhì)分子大小差別進(jìn)行分離，根據(jù)物質(zhì)分子大小差別進(jìn)行分離， 利用利用分子篩原理進(jìn)行分離分子篩原理進(jìn)行分離 (又名又名:分子篩過濾、排阻色譜分子篩過濾、排阻色譜) 2、分離規(guī)律、分離規(guī)律 分子量大的先洗下、分子量大的先洗下、 分子量小的后洗下分子量小的后洗下 凝膠色譜示意圖【六六】離子交換色譜法離子交換色譜法 1、分離對(duì)象、分離對(duì)象酸性、堿性化合物分離酸性、堿性化合物分離 2.分類分類 陽(yáng)離子交換樹脂陽(yáng)離子交換樹脂so3h 陰離子交換樹脂陰離子交換樹脂 n(ch3)3 3、吸附規(guī)律、吸附規(guī)律離子化程度高者吸附牢離子化程

23、度高者吸附牢 陽(yáng)離子樹脂陽(yáng)離子樹脂堿性強(qiáng)者吸附牢堿性強(qiáng)者吸附牢 陰離子樹脂陰離子樹脂酸性強(qiáng)者吸附牢酸性強(qiáng)者吸附牢色譜分離法小結(jié)色譜分離法小結(jié)一、分類一、分類 吸附層析吸附層析吸附能力不同吸附能力不同1、按原理分、按原理分 分配層析分配層析分離系數(shù)不同分離系數(shù)不同 凝膠層析凝膠層析分子大小不同分子大小不同 離子交換層析離子交換層析分子解離分子解離 程度不同程度不同 柱層析柱層析lsc 2、按操作分、按操作分 薄層層析薄層層析tlc 紙層析紙層析pc二、吸附規(guī)律二、吸附規(guī)律 硅膠硅膠 al2o3極性大著吸附牢極性大著吸附牢 1、吸附層析、吸附層析 活性炭活性炭極性弱著吸附牢極性弱著吸附牢 聚酰胺聚

24、酰胺易形成分子間氫鍵易形成分子間氫鍵 的吸附牢的吸附牢 正相正相 親水性強(qiáng)著吸附牢親水性強(qiáng)著吸附牢rf小小2、分配層析、分配層析 層析層析 親脂性強(qiáng)者吸附弱親脂性強(qiáng)者吸附弱rf大大 反相層析反相層析 與上相反與上相反 陰離子交換樹脂陰離子交換樹脂酸性越強(qiáng)吸附酸性越強(qiáng)吸附 越強(qiáng)，反之吸附越弱越強(qiáng)，反之吸附越弱 4、離子交換、離子交換 陽(yáng)離子交換樹脂陽(yáng)離子交換樹脂堿性越強(qiáng)吸附堿性越強(qiáng)吸附 層析層析 越牢，越牢， 反之吸附越弱反之吸附越弱3、凝膠層析、凝膠層析 分子量小的吸附牢，分子量大分子量小的吸附牢，分子量大 的位阻的位阻 小，吸附弱，分子量大的先洗下，分子小，吸附弱，分子量大的先洗下，分子 量

25、小的后下量小的后下三、分離對(duì)象三、分離對(duì)象 吸附層析吸附層析分離親脂性成分如：游離生物堿、分離親脂性成分如：游離生物堿、 甾類和三萜等。甾類和三萜等。 分配層析分配層析分離極性大的成分如各類苷類分離極性大的成分如各類苷類 聚酰胺層析聚酰胺層析 分離香豆素、黃酮、蒽醌類含酚分離香豆素、黃酮、蒽醌類含酚 羥基的成分羥基的成分 離子交換樹脂離子交換樹脂 分離生物堿和酸性成分分離生物堿和酸性成分 凝膠層析凝膠層析 分離分子量差別大的成分分離分子量差別大的成分14 結(jié)構(gòu)研究法結(jié)構(gòu)研究法一、結(jié)構(gòu)研究的主要程序：一、結(jié)構(gòu)研究的主要程序： 1、確定化合物純度、確定化合物純度 mp tlc pc hplc法法

26、2、測(cè)定分子量、測(cè)定分子量 ms法：法：m 3、確定分子式、確定分子式 元素分析法元素分析法定性、定量分析定性、定量分析 高分辨高分辨ms法（法（hrms）分子量可精確到小數(shù)分子量可精確到小數(shù) 點(diǎn)后點(diǎn)后3位數(shù)位數(shù) 4、計(jì)算分子不飽和度、計(jì)算分子不飽和度 i / 2 iii / 2 1 i 1價(jià)原子價(jià)原子 （h、d）的數(shù)目）的數(shù)目 3價(jià)原子（價(jià)原子（n、p 等）的數(shù)目等）的數(shù)目 4價(jià)原子（價(jià)原子（c、s）的數(shù)目）的數(shù)目（o、s為二價(jià)原子，與不飽和度無關(guān)，不考慮）為二價(jià)原子，與不飽和度無關(guān)，不考慮）二、光譜測(cè)定和解析光譜測(cè)定和解析（ms、ir、uv、nmr） （一）、（一）、ms（質(zhì)譜）（質(zhì)譜）

27、1、ms圖譜的表示方法圖譜的表示方法 m/z（碎片峰）（碎片峰） 推測(cè)分子結(jié)構(gòu)推測(cè)分子結(jié)構(gòu)2、作用、作用 m（分子離子峰）（分子離子峰） 確定分子量確定分子量3、分類、分類 eims（電子轟擊）（電子轟擊） 適于適于m穩(wěn)定的化合物穩(wěn)定的化合物 fdms（場(chǎng)解吸）（場(chǎng)解吸） 適于難揮發(fā)，對(duì)熱不穩(wěn)適于難揮發(fā)，對(duì)熱不穩(wěn) 定化合物，如肽、定化合物，如肽、糖、氨基酸等糖、氨基酸等 fabms（快速原子轟擊）（快速原子轟擊） 適于高分子、適于高分子、 對(duì)熱不穩(wěn)定、對(duì)熱不穩(wěn)定、和強(qiáng)極性化合物如：肽、糖、和強(qiáng)極性化合物如：肽、糖、 苷、苷、 抗生素、維生素等抗生素、維生素等 cims（化學(xué)電離）（化學(xué)電離）

28、可解析碎片峰少可解析碎片峰少 esi（電噴霧電離），激光質(zhì)譜（電噴霧電離），激光質(zhì)譜 （二）（二）irir（紅外光譜）（紅外光譜）鑒定分子鑒定分子各官能團(tuán)各官能團(tuán) 1、ir光譜圖示：光譜圖示： oh 分子價(jià)鍵分子價(jià)鍵 v （伸縮）（伸縮）在在4000625cm1 測(cè)得圖譜測(cè)得圖譜 1、特征頻率區(qū)（、特征頻率區(qū)（40001500cm1）1voh （32003700 cm1） 游離游離oh： 37003500 cm1 締合締合oh： 34503200 cm1 vnh （35003300 cm1）（弱）（弱） 2vch （30002700 cm1） vch3： 29602870 cm1v ch ch

29、 ：3300 cm13 vc c ： 24002100 cm14vco （19001650 cm1） 17051725 cm1 17401725 cm1rrorho2、指紋區(qū)特征、指紋區(qū)特征 1500650 cm1（因各分子指紋區(qū)不同，（因各分子指紋區(qū)不同，ir光譜可代表光譜可代表分子整體結(jié)構(gòu)）分子整體結(jié)構(gòu)） 1vcch rchch2 990 910 強(qiáng)強(qiáng) rchchr （順）（順） 690 中強(qiáng)中強(qiáng) rchchr （反）（反） 970 中強(qiáng)中強(qiáng) rcch2（末端）（末端） 870 中強(qiáng)中強(qiáng) 2v ph-h 單取代（單取代（5鄰氫）鄰氫） 700 770 強(qiáng)強(qiáng) 鄰位取代（鄰位取代（4鄰氫）鄰氫

30、） 700735 強(qiáng)強(qiáng) 間位取代（間位取代（3鄰氫）鄰氫） 810750 強(qiáng)強(qiáng) 對(duì)位取代（對(duì)位取代（2鄰氫）鄰氫） 860800 強(qiáng)強(qiáng)三、三、uv可見吸收光譜可見吸收光譜（200700nm）1、鑒定分子中不飽和雙鍵和共軛雙鍵的結(jié)構(gòu)（不、鑒定分子中不飽和雙鍵和共軛雙鍵的結(jié)構(gòu)（不代表分子整體結(jié)構(gòu)）代表分子整體結(jié)構(gòu)）r（飽和烴）（飽和烴） * (無紫外吸收無紫外吸收)chch（不飽和烴）（不飽和烴）* (有紫外吸收有紫外吸收) phoh（含雜原子）（含雜原子） n * （有紫外可（有紫外可見光吸收）見光吸收） 芳香族化合物芳香族化合物香豆素、蒽醌、黃酮等可用香豆素、蒽醌、黃酮等可用uv光譜推測(cè)分子結(jié)

31、構(gòu)及取代基類型和數(shù)目。光譜推測(cè)分子結(jié)構(gòu)及取代基類型和數(shù)目。 2、uv光譜表示方法：光譜表示方法： ultraviolet spectra （四）（四）nmrnmr（核磁共振譜）（核磁共振譜）化學(xué)位移化學(xué)位移 化學(xué)位移為相對(duì)標(biāo)量，不隨測(cè)試儀器改變化學(xué)位移為相對(duì)標(biāo)量，不隨測(cè)試儀器改變有機(jī)化合物：多數(shù)在有機(jī)化合物：多數(shù)在 0 13 ppmtms (tetramethylsilane)作內(nèi)標(biāo)作內(nèi)標(biāo) 去屏蔽效應(yīng)去屏蔽效應(yīng) 屏蔽效應(yīng)屏蔽效應(yīng) 大大 向低磁場(chǎng)移向低磁場(chǎng)移 小小 向高磁場(chǎng)移向高磁場(chǎng)移 h 19 ppm 0 ppm c 200ppm 0 ppm1 1hnmrhnmr（氫譜）（氫譜）1、1hnmr

32、（氫譜）（氫譜）提供分子中提供分子中h的數(shù)的數(shù)目、類型及化學(xué)環(huán)境。目、類型及化學(xué)環(huán)境。 11hnmr光譜圖示：光譜圖示： ch3ch2oh a b c（ 乙乙 醇醇 的的 氫氫 譜譜 圖圖 不同氫核不同氫核的大致范圍的大致范圍 ch3 0.81.2 ch2 12.5ch 2.53.5 ch 58c ch 23 芳環(huán)及芳雜環(huán)芳環(huán)及芳雜環(huán) 69 cho 910 cooh 1011 活潑活潑h（oh、sh、nh） 不定，加不定，加d2o后消失后消失 不同氫核不同氫核的相對(duì)位置的相對(duì)位置0123456789101112131415化學(xué)位移hcchcohcoohh3co3.7h3cn3.0h3cc2.1

33、oh3cc1.8ch3cc0.9(ppm)影響因素不同影響因素不同 而而 不同不同 1、誘導(dǎo)、共軛、誘導(dǎo)、共軛 2、各相異性、各相異性 3、 氫鍵、原子快速交換氫鍵、原子快速交換 （1）誘導(dǎo)效應(yīng)）誘導(dǎo)效應(yīng) m （推電基）（推電基）使電子云密度加大，使電子云密度加大， 變小，向高場(chǎng)移變小，向高場(chǎng)移i（吸電基）（吸電基）使電子云面對(duì)減少，使電子云面對(duì)減少， 加大，向低場(chǎng)移加大，向低場(chǎng)移 推電基推電基r（烷烴基）（烷烴基） 吸電基吸電基不飽和雙鍵和含雜原子的基團(tuán)不飽和雙鍵和含雜原子的基團(tuán)如電負(fù)性如電負(fù)性 o n c 所以所以：och3 nch3 ch3（2）共軛效應(yīng)）共軛效應(yīng)使電子云密度加大者，使電子云密度加大者，變?。蛔冃?；使電子云密度減少者，使電子云密度減少者，加大加大 苯酚的苯酚的p共軛使鄰對(duì)位電子共軛使鄰對(duì)位電子 云密度加大，云密度加大，減小其間位的電減小其間位的電 子云密度減少，子云密度減少，加大加大oh（2）各向異性）各向異性由于電子云密度排由于電子云密度排布原因使相鄰質(zhì)子布原因使相鄰質(zhì)子某些位置處在