人教版教學課件基因工程基本操作程序

1、1.2 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1 1、目的基因的獲取、目的基因的獲取2 2、基因表達載體的構(gòu)建、基因表達載體的構(gòu)建3 3、將目的基因?qū)胧荏w細胞、將目的基因?qū)胧荏w細胞4 4、目的基因的檢測與鑒定、目的基因的檢測與鑒定基因工程基本操作的四個步驟基因工程基本操作的四個步驟一、目的基因的獲取一、目的基因的獲取( (一一) )目的基因主要是目的基因主要是_,_,也可是一些具有調(diào)控作用的因子。目的基因的獲也可是一些具有調(diào)控作用的因子。目的基因的獲取方法主要有取方法主要有_和和_兩大兩大類類編碼蛋白質(zhì)的基因編碼蛋白質(zhì)的基因（二）獲取目的基因的常用方法有哪些（二）獲取目的基因的常用方

2、法有哪些? ?1 1、從基因文庫中獲取、從基因文庫中獲取2 2、利用、利用pcrpcr技術(shù)擴增技術(shù)擴增3 3、人工合成法（反轉(zhuǎn)錄法和化學合成法）、人工合成法（反轉(zhuǎn)錄法和化學合成法）如：與生物抗性相關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因、如：與生物抗性相關(guān)的基因、與優(yōu)良品質(zhì)相關(guān)的基因、與生物藥物和保健品相關(guān)的基因、與毒物降解相關(guān)的與生物藥物和保健品相關(guān)的基因、與毒物降解相關(guān)的基因、與工業(yè)用酶相關(guān)的基因等?；?、與工業(yè)用酶相關(guān)的基因等。直接分離法直接分離法人工合成法人工合成法1 1、從基因文庫中獲取目的基因、從基因文庫中獲取目的基因（1 1）基因文庫）基因文庫 將含有某種生物不同基因的許多將含有某種生物不

3、同基因的許多dnadna片斷，導入到片斷，導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫。同基因，稱為基因文庫。種種類類基因組文庫：基因組文庫：含有一種生物的含有一種生物的全部全部基因基因部分基因文庫：部分基因文庫：只包含了一種生物的只包含了一種生物的部分部分基因，基因， 如：如：cdnacdna文庫文庫1、原核細胞基因結(jié)構(gòu)：、原核細胞基因結(jié)構(gòu)：基因基因非編碼區(qū)：非編碼區(qū)：非編碼區(qū)：非編碼區(qū)：調(diào)控序列調(diào)控序列編碼區(qū)：編碼區(qū)：編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì)終止子：終止子：終止轉(zhuǎn)錄終止轉(zhuǎn)錄啟動子：啟動轉(zhuǎn)錄啟動子：啟動轉(zhuǎn)錄，rnarna聚

4、合酶結(jié)合識別位點聚合酶結(jié)合識別位點mrnamrna翻譯翻譯特定功能的蛋白質(zhì)特定功能的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)錄特點：特點： 編碼區(qū)是連續(xù)的，非編碼區(qū)起調(diào)控作用編碼區(qū)是連續(xù)的，非編碼區(qū)起調(diào)控作用dnadna分子分子2：真核細胞基因結(jié)構(gòu)：真核細胞基因結(jié)構(gòu)：基因基因非編碼區(qū)：非編碼區(qū)：非編碼區(qū)：非編碼區(qū)：編碼區(qū)：編碼區(qū)：編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì)終止子終止子啟動子啟動子前體前體mmrnarna外顯子和內(nèi)含子都轉(zhuǎn)錄外顯子和內(nèi)含子都轉(zhuǎn)錄特點：特點：編碼區(qū)間隔不連續(xù)！分為編碼區(qū)間隔不連續(xù)！分為內(nèi)含子內(nèi)含子和和外顯子外顯子。編碼蛋白質(zhì)編碼蛋白質(zhì)不編碼蛋白質(zhì)不編碼蛋白質(zhì)剪切掉內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的部分剪切掉內(nèi)含子轉(zhuǎn)錄的部分mrnamrn

5、adnadna分子分子提取某種生物的提取某種生物的全部全部dnadna適當?shù)南拗泼高m當?shù)南拗泼敢欢ù笮〉囊欢ù笮〉膁nadna片段片段將將dnadna片段與載體連接片段與載體連接重組重組dnadna分子分子基因組文庫基因組文庫導入受體菌導入受體菌（2 2）基因文庫的構(gòu)建方法）基因文庫的構(gòu)建方法基因組文庫的構(gòu)建基因組文庫的構(gòu)建有啟動子和內(nèi)含子有啟動子和內(nèi)含子提取某生物提取某生物特定發(fā)育時期特定發(fā)育時期的的mrnamrna單鏈單鏈dnadna雙鏈雙鏈cdnacdna片段片段重組載體重組載體與載體連接與載體連接cdnacdna文庫文庫逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶dnadna聚合酶聚合酶導入受體菌導入受體菌 cd

6、na文庫的構(gòu)建文庫的構(gòu)建-逆逆轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄法：錄法： 部分基因：基因部分基因：基因的選擇性表達的選擇性表達無啟動子和內(nèi)含子無啟動子和內(nèi)含子 真核生物的基因用逆轉(zhuǎn)錄法得到真核生物的基因用逆轉(zhuǎn)錄法得到的的cdna與原基因相同嗎？有哪些差異？與原基因相同嗎？有哪些差異？原核生物基因呢？原核生物基因呢？思考？思考？真核生物：無非編碼區(qū)和內(nèi)含子真核生物：無非編碼區(qū)和內(nèi)含子原核生物：無非編碼區(qū)原核生物：無非編碼區(qū)（3 3）構(gòu)建基因文庫的目的）構(gòu)建基因文庫的目的 怎樣從基因文庫中得到我們所怎樣從基因文庫中得到我們所需的目的基因呢需的目的基因呢? ? 便于在便于在不知道目的基不知道目的基因核苷酸序因核苷酸序列列的情

7、況下，獲得所需的目的基因。的情況下，獲得所需的目的基因。依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。依據(jù)：目的基因的有關(guān)信息。如：根據(jù)基因的核苷酸序列如：根據(jù)基因的核苷酸序列 基因的功能基因的功能 基因在染色體上的位置基因在染色體上的位置 基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mrnamrna 基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性基因翻譯產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性（4）從基因文庫中得到目的基因的方法）從基因文庫中得到目的基因的方法2 2、利用、利用pcrpcr技術(shù)擴增目的基因技術(shù)擴增目的基因 概念：概念：pcrpcr全稱為全稱為_，是一項，是一項 在生物在生物_復制復制_的核酸合成技術(shù)。的核酸合成技術(shù)。 原理：原理：_多聚酶鏈式反應(yīng)多聚酶鏈式

8、反應(yīng)體外體外特定特定dnadna片段片段dnadna復制復制前提前提_一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列過程：過程：a a、dnadna變性變性（90-9590-95）：）：雙鏈雙鏈dnadna模板在熱作用下，模板在熱作用下，_斷裂，形成斷裂，形成_b b、退火、退火（復性復性55-6555-65）：）：系統(tǒng)溫度降低，系統(tǒng)溫度降低，引物引物與與dnadna模板結(jié)合，形成局部模板結(jié)合，形成局部_。 c c、延伸、延伸（70-7570-75）：在）：在taqtaq酶酶的作用下，合成與模的作用下，合成與模板互補的板互補的_。 氫鍵氫鍵單鏈單鏈dnadna雙鏈雙鏈dnadna鏈鏈

9、d.重復重復a.b.ca.b.c步驟步驟：每：每重復重復一次，目的基因增加一次，目的基因增加_倍倍一一：以：以_方式擴增，方式擴增， 指數(shù)指數(shù)方式：方式：條件：條件：模板模板dnadna（含目的基因）（含目的基因）四種脫氧核苷酸四種脫氧核苷酸1 1對引物對引物熱穩(wěn)定的熱穩(wěn)定的dnadna聚合酶聚合酶( (taqtaq酶酶) )一段已知目的基因的核苷酸序列一段已知目的基因的核苷酸序列過程：過程：蛋白質(zhì)的氨基酸序列蛋白質(zhì)的氨基酸序列mrnamrna的核苷酸序列的核苷酸序列基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列目的基因目的基因化學合成化學合成推測推測推測推測3 3、人工合成法、人工合成法基因較小，核苷酸序

10、列已知（化學合成法）基因較小，核苷酸序列已知（化學合成法） 化學法合成的目化學法合成的目的基因含的基因含內(nèi)含子、啟內(nèi)含子、啟動子和終止子動子和終止子嗎？嗎？需要模板嗎？需要模板嗎？逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄酶dnadna聚合酶聚合酶（1 1）用一定的）用一定的_切切割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切口，割質(zhì)粒，使其出現(xiàn)一個切口，露出露出_。（2 2）用）用_切斷目切斷目 的基因，使其產(chǎn)生的基因，使其產(chǎn)生_ _ _。（3 3）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的）將切下的目的基因片段插入質(zhì)粒的_處，再加入適量處，再加入適量_，形成了一個重組，形成了一個重組 dnadna分子（重組質(zhì)粒）分子（重組質(zhì)粒）限制酶限制酶黏性末端黏性

11、末端同一種限制酶同一種限制酶的黏性末端的黏性末端切口切口dnadna連接酶連接酶相同相同1.1.過程過程: :3 3、基因表達載體的組成？、基因表達載體的組成？使目的基因在受體細胞中使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在穩(wěn)定存在，并且可以，并且可以遺傳遺傳給下一代給下一代使目的基因能夠使目的基因能夠表達和發(fā)揮作用表達和發(fā)揮作用2 2、基因表達載體基因表達載體構(gòu)建的目的構(gòu)建的目的？（？（p162p162）目的基因必須在啟動子與終止子之間目的基因必須在啟動子與終止子之間目的基因目的基因啟動子：啟動子： 基因的首端，基因的首端，rnarna聚合酶識別聚合酶識別和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)和結(jié)合的部位，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)

12、錄出錄出mrnamrna終止子：終止子： 基因的尾端，基因的尾端， 終止轉(zhuǎn)錄終止轉(zhuǎn)錄標記基因：標記基因：鑒別受體細胞中是否含有鑒別受體細胞中是否含有目的基因目的基因思考：思考：作為基因工程表達載體，只需含有目的基作為基因工程表達載體，只需含有目的基因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？因就可以完成任務(wù)嗎？為什么？不可以。因為目的基因在表達載體中得到表達并發(fā)揮作用，不可以。因為目的基因在表達載體中得到表達并發(fā)揮作用，還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標記基因等。還需要有其他控制元件，如啟動子、終止子和標記基因等。必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：必須構(gòu)建上述元件的主要理由是：（1） 生物之間進行基因交流

13、，只有使用受體生物自身基因生物之間進行基因交流，只有使用受體生物自身基因的啟動子才能比較有利于基因的表達；的啟動子才能比較有利于基因的表達；（2） 通過通過cdna文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼文庫獲得的目的基因沒有啟動子，只將編碼序列導入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；序列導入受體生物中無法轉(zhuǎn)錄；（3） 目的基因是否導入受體生物中需要有篩選標記；目的基因是否導入受體生物中需要有篩選標記；（4） 為了增強目的基因的表達水平，往往還要增加一些其為了增強目的基因的表達水平，往往還要增加一些其他調(diào)控元件，如增強子等；他調(diào)控元件，如增強子等；（5） 有時需要確定目的基因表達的產(chǎn)物存在于細胞的什么有時需要確

14、定目的基因表達的產(chǎn)物存在于細胞的什么部位，往往要加上可以標識存在部位的基因（或做成目的基部位，往往要加上可以標識存在部位的基因（或做成目的基因與標識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。因與標識基因的融合基因），如綠色熒光蛋白基因等。載體載體與與表達載體表達載體的區(qū)別：二者都有標記基因的區(qū)別：二者都有標記基因和復制原點兩部分和復制原點兩部分dnadna片段。表達載體在載體片段。表達載體在載體基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動子、終止子三部基礎(chǔ)上增加了目的基因、啟動子、終止子三部分結(jié)構(gòu)分結(jié)構(gòu)用到的工具酶：用到的工具酶：既用到限制酶切割載體，又既用到限制酶切割載體，又用到用到dnadna連接酶將目的基因

15、和載體拼接，兩種連接酶將目的基因和載體拼接，兩種酶作用的化學鍵都是磷酸二酯鍵酶作用的化學鍵都是磷酸二酯鍵啟動子、終止子啟動子、終止子對于目的基因表達必不可少對于目的基因表達必不可少目的基因不能單獨進入受體細胞，目的基因不能單獨進入受體細胞，必需以表必需以表達載體的方式攜帶進去。達載體的方式攜帶進去。注意注意第三步：第三步：將目的基因?qū)胧荏w細胞將目的基因?qū)胧荏w細胞轉(zhuǎn)化轉(zhuǎn)化 方法方法將目的基因?qū)⒛康幕驅(qū)胫参锛毎胫参锛毎麑⒛康幕驅(qū)⒛康幕驅(qū)雱游锛毎雱游锛毎麑⒛康幕驅(qū)⒛康幕驅(qū)胛⑸锛毎胛⑸锛毎r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法基因槍法基因槍法花粉管通道法花粉管通道法顯微注射法顯微

16、注射法目的基因進入目的基因進入_內(nèi)，并且在受體細內(nèi)，并且在受體細胞內(nèi)維持胞內(nèi)維持_和和_的過程的過程caca2+2+處理法處理法1、將目的基因?qū)胫参锛毎麑⒛康幕驅(qū)胫参锛毎? 1）農(nóng)桿菌）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化法特點特點: :能感染雙子葉植物和祼子植物能感染雙子葉植物和祼子植物, ,對對大多數(shù)單子葉植物無感染能力大多數(shù)單子葉植物無感染能力titi質(zhì)粒的質(zhì)粒的t tdnadna可轉(zhuǎn)移至受體可轉(zhuǎn)移至受體細胞并整合到其染色體上細胞并整合到其染色體上轉(zhuǎn)化過程轉(zhuǎn)化過程: :titi質(zhì)粒質(zhì)粒目的基目的基因因構(gòu)建構(gòu)建基基因因表表達達載載體體導入導入植植物物細細胞胞整合整合植物細胞植物細胞染色體染色體dnad

17、na上上表達表達新新性性狀狀轉(zhuǎn)入轉(zhuǎn)入農(nóng)農(nóng)桿桿菌菌（2 2）基因槍法基因槍法微彈轟擊法微彈轟擊法特點：成本高特點：成本高（3 3）花粉通道法）花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通胚囊?；ǚ酃芡ǖ婪ň褪窃谥参锸芊酆螅ǚ坌纬傻幕ǚ酃苓€未囊?；ǚ酃芡ǖ婪ň褪窃谥参锸芊酆?，花粉形成的花粉管還未愈合前，剪去柱頭，然后，滴加愈合前，剪去柱頭，然后，滴加dnadna（含目的基因），使目的（含目的基因），使目的基因借助花粉管通道進入受體細胞?；蚪柚ǚ酃芡ǖ肋M入受體細胞。2、將目的基因?qū)雱游锛毎麑⒛康幕驅(qū)雱游锛毎椒ǚ椒? :顯微注射技

18、術(shù)顯微注射技術(shù)操作程序操作程序: :提純含目的基因表達載體提純含目的基因表達載體取受精卵取受精卵顯微注射顯微注射早期胚胎早期胚胎新性狀動物新性狀動物早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)早期胚胎培養(yǎng)技術(shù)輸卵管或子宮輸卵管或子宮胚胎移植技術(shù)胚胎移植技術(shù)受體細胞？原因？受體細胞？原因？受體細胞：受精卵受體細胞：受精卵 受精卵的全能性高受精卵的全能性高一定是體內(nèi)受精嗎？一定是體內(nèi)受精嗎？不，可以體內(nèi)受精不，可以體內(nèi)受精也可體外受精也可體外受精3、將目的基因?qū)胛⑸锛毎麑⒛康幕驅(qū)胛⑸锛毎Ｓ梅ǔＳ梅ǎ撼Ｓ镁Ｓ镁何⑸镒魇荏w細胞原因：微生物作受體細胞原因：過程：過程：caca2+2+處理處理大腸桿菌大腸桿菌感受態(tài)

19、感受態(tài)細胞細胞表達載體表達載體與感受態(tài)與感受態(tài)細胞混合細胞混合感受態(tài)細感受態(tài)細胞吸收胞吸收dnadnacaca2+2+處理法處理法大腸桿菌大腸桿菌繁殖快繁殖快、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對少、多為單細胞、遺傳物質(zhì)相對少caca2+2+ 改變細胞膜的通透性，使細胞處于一種能吸收改變細胞膜的通透性，使細胞處于一種能吸收周圍環(huán)境中周圍環(huán)境中dnadna分子的生理狀態(tài)分子的生理狀態(tài)植物基因植物基因工程工程動物基因動物基因工程工程微生物基微生物基因工程因工程常用方法常用方法受體細胞受體細胞比較目的基因?qū)氩煌毎姆椒ū容^目的基因?qū)氩煌毎姆椒ㄞr(nóng)桿菌轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法化法顯微注顯微注射法射法ca2+處處理法

20、理法體細胞體細胞受精卵受精卵原核細胞原核細胞1、基因工程中科學家常用細菌、酵母菌等微生物作、基因工程中科學家常用細菌、酵母菌等微生物作為受體細胞，原因是為受體細胞，原因是 a結(jié)構(gòu)簡單、操作方便結(jié)構(gòu)簡單、操作方便 b繁殖速度快繁殖速度快 c遺傳物質(zhì)含量少、簡單遺傳物質(zhì)含量少、簡單 d性狀穩(wěn)定、變異少性狀穩(wěn)定、變異少2、基因工程常用的受體細胞有、基因工程常用的受體細胞有 大腸桿菌大腸桿菌 枯草桿菌枯草桿菌 支原體支原體 動植物細胞動植物細胞a b c dbd3、基因工程是在、基因工程是在dna分子水平上進行設(shè)計施工的，在分子水平上進行設(shè)計施工的，在基因操作的基本步驟中，不進行堿基互補配對的步驟是基

21、因操作的基本步驟中，不進行堿基互補配對的步驟是a.人工合成基因人工合成基因 b.目的基因與運載體結(jié)合目的基因與運載體結(jié)合c.將目的基因?qū)胧荏w細胞將目的基因?qū)胧荏w細胞 d.目的基因的檢測和表達目的基因的檢測和表達c抗蟲鑒定抗蟲鑒定 抗病鑒定抗病鑒定活性鑒定等活性鑒定等（一）分子水平檢測（一）分子水平檢測1 1、檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的、檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的dnadna上是否插入了目的基因，上是否插入了目的基因，這是目的基因能否在真核生物中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵。這是目的基因能否在真核生物中穩(wěn)定遺傳的關(guān)鍵。dnadna分子分子雜交雜交技術(shù)技術(shù) 采用一定的技術(shù)手段，將兩種生物的采用一定的技術(shù)手段，將兩種

22、生物的dnadna分子的單分子的單鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補的堿基序列，鏈放在一起，如果這兩個單鏈具有互補的堿基序列，那么，互補的堿基序列就會結(jié)合在一起，形成雜合雙那么，互補的堿基序列就會結(jié)合在一起，形成雜合雙鏈區(qū)；在沒有互補堿基序列的部位，仍然是兩條游離鏈區(qū)；在沒有互補堿基序列的部位，仍然是兩條游離的單鏈。的單鏈。 探針：用放射性同位素標記的含有目的基因的探針：用放射性同位素標記的含有目的基因的dnadna片段片段 （二）、鑒定（個體生物學水平）（二）、鑒定（個體生物學水平）2 2、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了、檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mrnamrna，這是檢測目的基，這是檢測目的基因是

23、否發(fā)揮功能作用的第一步。因是否發(fā)揮功能作用的第一步。3 3、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)、檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等方法方法: :分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)方法方法: :抗原抗體雜交抗原抗體雜交過程過程: :用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的mrnamrna雜交雜交, ,若出現(xiàn)雜交帶若出現(xiàn)雜交帶, ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了mrnamrna如抗蟲棉：讓棉鈴蟲啃食棉鈴，看其是否死亡如抗蟲棉：讓棉鈴蟲啃食棉鈴，看其是否死亡目的基因表達成功的標志目的基因表達成功的標志： 通過轉(zhuǎn)錄、翻譯產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)。通過轉(zhuǎn)錄

24、、翻譯產(chǎn)生相應(yīng)的蛋白質(zhì)?；蚬こ坛晒Φ臉酥净蚬こ坛晒Φ臉酥? : 生物個體表現(xiàn)出特定的性狀生物個體表現(xiàn)出特定的性狀練習練習1：(2008理綜山東卷理綜山東卷)為擴大可耕地面積，為擴大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國科學家應(yīng)用耐鹽基因培育出用備受關(guān)注。我國科學家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。了耐鹽水稻新品系。（1）獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組）獲得耐鹽基因后，構(gòu)建重組dna分子所分子所用的限制性內(nèi)切酶作用于圖中的用的限制性內(nèi)切酶作用于圖中的 處，處，dna連接酶作用于連接酶作用于 處。（填處。（填“a”或或“b”）練

25、習練習1：(2008理綜山東卷理綜山東卷)為擴大可耕地面積，增為擴大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。我國科學家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽受關(guān)注。我國科學家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。水稻新品系。（2）將重組）將重組dna分子導入水稻受體細胞的常用方分子導入水稻受體細胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和 法。法。（3）由導入目的基因的水稻細胞培養(yǎng)成植株需要）由導入目的基因的水稻細胞培養(yǎng)成植株需要利用利用 技術(shù)，該技術(shù)的核心是技術(shù)，該技術(shù)的核心是 和和 。（4）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既）為了確定

26、耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標記的要用放射性同位素標記的 作探針進行分子雜交作探針進行分子雜交檢測，又要用檢測，又要用 方法從個體水平鑒定水稻植株方法從個體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。的耐鹽性。（多選）人們利用基因工程的方法，用大腸桿菌生產(chǎn)人（多選）人們利用基因工程的方法，用大腸桿菌生產(chǎn)人類胰島素，這一過程涉及到類胰島素，這一過程涉及到a.用適當?shù)拿笇σ葝u素基因與運載體進行切割并連接用適當?shù)拿笇σ葝u素基因與運載體進行切割并連接b.把重組后的把重組后的dna分子導入受體細菌內(nèi)進行擴增分子導入受體細菌內(nèi)進行擴增c.檢測重組檢測重組dna分子是否導入受體細菌內(nèi)并表達出性分子是否導入受體細菌內(nèi)并表達出性狀狀d.篩選出能產(chǎn)生胰島