基于CE-LIF的唾液代謝側面圖譜研究

1、蔣婷婷蔣婷婷 10101570115鄭慧萍鄭慧萍 10101570112研究背景： 含有胺基官能團的有機化合物是一類非常重要的生物分子。這些有機物的定量分析，在食品分析、臨床診斷和生物化學等許多領域中起著重要作用特別是氨基酸和生物胺的分析已成為國際研究的一個焦點 。 唾液不僅是一種易得的生物樣品，并且能夠提高多種生命信息，非常適合大多數(shù)疾病的早期檢測，包括心血管、腎臟和自身免疫性疾病、病毒和細菌感染、甚至癌癥。 在本課題的研究中，我們將中空纖維膜液相微萃取（HF-LPME）技術與CE-LIF相結合，新發(fā)展了一種用于氨基化合物分析的HF-LPME/CE-LIF方法。 研究方法：所有唾液樣品均保存

2、在-20 。每個解凍的樣品通過0.22 mm的尼龍過濾器過濾 在裝有500 L唾液樣品的1.5 mL微管中加入500 L乙腈，充分混合，并離心15 min（10,000 rpm）。 取500 L樣品上清液，加入320 L FITC（1.0 mmol/L）和180 L硼酸鹽緩沖液（pH=9.23，225 mmol/ L），將反應混合物在室溫下避光儲存12 h。 考慮到被分析物的衍生效率和FITC響應峰的干擾，F(xiàn)ITC 與分析物的衍生比例定為3:1。萃取前，將反應物放于4 冰箱中避光保存。 中空纖維段長度為5 cm。將中空纖維段用丙酮超聲波處理1 min，去除纖維的污染物。待溶劑完全蒸發(fā)后，將中空

3、纖維用正辛醇浸漬30 s。 用10 L進樣針使空氣通過中空纖維的內部，以除去過量的有機溶劑。 注入10 L 300 mmol/ L的NaOH溶液（接受相），將上述中空纖維膜的一端密封。提取過程的優(yōu)化，使用統(tǒng)一的標準溶液進行（10.0 nmol/L）。 配8 mL的標準混合溶液（含HCl濃度為 5 mmol/L）在10 mL的燒杯中，將雙端密封的中空纖維放入其中，用鋁箔覆蓋，防止蒸發(fā)。然后，將磁力攪拌器接通，以500 rpm的轉速提取。 一定萃取時間后，關閉磁力攪拌器，取出中空纖維。將其一端用刀片切斷，中空纖維的受體溶液被吸入注射器，用于CE-LIF分析。 基于自組裝CE-LIF系統(tǒng)，使用12g

4、/ L PSS / 3 mmol/ L CTAB / 80 mmol/ L Na2B4O7 -NaOH緩沖液（pH12.35）進行電泳分離。 LIF檢測器的激發(fā)波長為483 nm，發(fā)射中心波長為520 nm。所有樣品采用電動進樣8 s（22 kV）。所有實驗均在室溫下進行。Aluminum coverBeaker (10 mL)Donor phase (8 mL)Magnetic stirrerPorous hollow fiber impregnated with organic solventAcceptor phase (10 L)動態(tài)三相HF-LPME的原理示意圖 研究結果：（一）方法

5、驗證 將一系列混合標準溶液（六種分析物，每種含有0.01-5.0 mol/L）進行測試，以確定線性關系。表表1. 六種分析物的回歸方程及檢測下限和定量限（六種分析物的回歸方程及檢測下限和定量限（n=3）AnalytesRegression equationbr2Linear range (M)EFsLOD (nM)LOQ (nM)Puty=32.8x+1736.00.99850.01-5.01120.0170.057Cady=41.5x+2456.50.99830.01-5.02180.00720.024Spey=10.2x+512.40.99800.02-5.0630.130.43Argy=

6、6.3x+32.50.99950.02-5.0380.230.75Lysy=13.4x+299.90.99830.02-5.0230.230.77Orny=13.4x+276.50.99950.02-5.0190.260.88結果表明，峰面積和遷移時間的RSD分別為腐胺0.26，4.64，尸胺0.28，4.75，精氨酸1.28，4.70，賴氨酸0.56，4.64，鳥氨酸0.63，4.64，亞精胺0.69，4.75。 （二）應用0.30.60.91.21.51.82.12.42.722242628303234363840424446 0.0遷移時間 / minRF U / mV1234567A標準混合溶液（A） 的電泳圖在優(yōu)化條件下，采用建立的HF-LPME/CE-LIF用于健康志愿者（n=10）和口腔疾病（包括口腔癌、口臭、牙齦炎、牙菌斑和牙周炎）患者（n=30）的唾液樣品分析，并對三種生物胺及其前體氨基酸進行定量。 00.20.40.60.81.01.21.41.61.82.022242628303234363840424446481234567遷移時間 / minRFU / mVB健康志愿者唾液樣品電泳圖（B） 分析結果表明： 口腔疾病患者特別是牙齦炎、牙齦癌和口臭患者的唾液中尸胺、腐胺和亞精胺的含