研究生動物免疫學考點

1、免疫的傳統(tǒng)概念：防御疫病（傳染?。┟庖叩默F(xiàn)代概念機體識別和清除非自身的大分子物質(zhì),從而保持機體內(nèi)外環(huán)境平衡的生理反應。免疫學:是一門新興的學科，它是研究機體免疫系統(tǒng)的組織結(jié)構(gòu)和生理功能的科學。二、免疫的基本特點1.識別自身和非自身: 抵御.監(jiān)視：腫瘤（自身變化）、病原（外源）2 特異性和多樣性：氨基酸、核酸序列3 記憶：免疫接種的理論基礎(chǔ)4 自我調(diào)控：基本生理特點三、免疫的基本功能 1.免疫防御:1.抗感染2.免疫耐受: 自身穩(wěn)定3.免疫監(jiān)視: 抗腫瘤四、免疫學的發(fā)展簡史1. 免疫學經(jīng)驗時期(17世紀前) 特點：純經(jīng)驗性 2. 經(jīng)典免疫學時期(18-20世紀) 3.近代免疫學時期(至上世紀50

2、年代) 超敏反應，免疫耐受，抗體生成克隆學說，免疫學技術(shù)( 血凝等）4.現(xiàn)代免疫學時期(上世紀60年代以來) 免疫應答細胞分類，免疫調(diào)控，分子水平， 免疫學技術(shù)五、現(xiàn)代免疫學的進展和熱點1. 理論: 分子和細胞免疫遺傳學和免疫調(diào)控機理(MHC) ， 腫瘤免疫學(腫瘤發(fā)生、發(fā)展)，免疫病理學(自身免疫?。鹤儜B(tài)反應(過敏反應)，免疫缺陷) 2. 應用: 免疫學方法實驗免疫學(單克隆抗體，基因疫苗，標記技術(shù)，腫瘤治療) 六、免疫學的應用 診斷：血清學治療：抗血清 預防：疫苗 超微量測量 一、免疫器官中樞免疫器官：骨髓、胸腺、法氏囊 外周免疫器官：脾臟、淋巴結(jié)等二、免疫細胞淋巴細胞、單核吞噬細胞、粒細

3、胞等三、免疫分子 抗體、補體和細胞因子第二節(jié) 免疫應答的基本特點 一、種類 非特異性免疫；特異性免疫二、組成 組織器官: 皮膚粘膜；血腦屏障、血胎屏障等。 脾臟、淋巴結(jié)等。細胞：吞噬細胞、粒細胞；淋巴細胞 分子：補體、細胞因子；抗體。三、特點 先天(不感染）性；識別自身和非自身；無再次反應；作用快范圍廣。特異性；記憶性；獲得性 第三節(jié) 特異性與非特異性免疫應答 一、非特異性免疫應答 1炎癥反應2. 吞噬：清除異物3補體激活4干擾素等二、特異性免疫應答 1.一般過程：激活、反應、效應2. 反應類型： 細胞免疫 ；體液免疫3.在特異性免疫應答中初次反應和再次反應三、影響免疫應答的因素1. 抗原2.

4、 機體3. 免疫方法第四節(jié) 免疫調(diào)節(jié) 一、 特異性與非特異性免疫應答的關(guān)系非特異性免疫是特異性免疫的基礎(chǔ)特異性免疫是非特異性免疫的補充非特異性免疫與特異性免疫互相作用二、 免疫應答的調(diào)節(jié)機制 1. 神經(jīng)內(nèi)分泌調(diào)節(jié) 2. 免疫細胞間調(diào)節(jié): T細胞 Th Ts B，NK，CD, 紅細胞(CR1) 3. 細胞因子的調(diào)節(jié): IL，IFN，TF,MF4. 抗原抗體的調(diào)節(jié): 反饋 5. 基因調(diào)節(jié): 對不同抗原的反應性(MHC識別抗原)，個體差異，品種間差異，種間差異，免疫缺陷等第二章 免疫學技術(shù)概論概念免疫學技術(shù)與血清學技術(shù)免疫學技術(shù)免疫細胞實驗技術(shù)(源于細胞免疫) 抗體抗原實驗技術(shù)(源于體液免疫)一、血

5、清學反應的類型 1.凝聚性反應:沉淀 凝集 沉淀: 可溶性抗原與抗體凝集: 顆粒性抗原與抗體 2.有補體參與的反應3.標記抗體技術(shù) 種類：酶標記，同位素標記，熒光標記，其他標記原理：化學方法連接特點：放大作用,敏感性，微量化4.中和反應抗體與毒素或病原體的結(jié)合方法：細胞、雞胚和動物實驗二、血清學反應的一般特點 1.特異性和交叉性(交叉:多價抗原抗體反應） 2.親和力和親合力 親和力:抗體對簡單的單價半抗原或抗原決定簇的結(jié)合力、 結(jié)合簇的大小,吻合的嚴密性和分子間力的性質(zhì)和強度結(jié)合力:氫鍵. 靜電力.Van-der Waals-力 疏水鍵(50%)親合力:抗原抗體復合物的穩(wěn)定性 (取決于親合力和

6、抗體抗原所飽和的價數(shù)3.抗原抗體反應的二階段性和可逆性 結(jié)合階段:快、不可見可見階段:凝集,沉淀等.較慢4.抗原抗體的結(jié)合比例: 帶現(xiàn)象前帶: 抗體過多 在沉淀反應中稀釋抗原；后帶: 抗原過多 在凝集反應中稀釋抗體.5.血清學反應的影響因素電解質(zhì)；溫度:37-56C；pH: 6-8 低于3 解離三、應用1.抗原、抗體檢測2.生物活性物質(zhì)檢測 3.抗原在細胞和亞細胞的定位4.微生物鑒定和分型5.血型鑒定四、血清學試驗的發(fā)展趨勢樣品微量化 方法標準化 試劑商品化 檢測手段自動化第三章 標記技術(shù)一、原理 酶（生物催化劑，催化活性）+ 抗體（免疫學活性） 抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過

7、酶與底物產(chǎn)生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。標記技術(shù)的基本特點：間接、放大；敏感，快速，微量二、常用標記酶 高效催化活性，穩(wěn)定，易于得到，有可見反應HRP（辣根過氧化物酶）等四、免疫酶技術(shù)種類 免疫酶沉淀技術(shù)，免疫酶定位技術(shù)，免疫酶定量測定技術(shù)五、抗體酶標記法 戊二醛法，過碘酸鈉法，SPA系統(tǒng)，親和素生物素系統(tǒng)六、酶結(jié)合物的鑒定 抗體活性測定七、酶結(jié)合物的保存第四章 單克隆抗體技術(shù)比較多克隆抗體反應：產(chǎn)生針對多種抗原決定簇的隆抗體，保存期短，質(zhì)量難以控制。單克隆抗體反應：產(chǎn)生針對單一抗原決定簇抗體，永久保存，質(zhì)量穩(wěn)定。短命的漿細胞與雜交瘤細胞融合，則能長期存活；而且，

8、還能源源不斷地產(chǎn)生特異性抗體。三、單克隆抗體技術(shù)實例1免疫小鼠（Balb/c，NZB品系)。高純度抗原。免疫4次后取脾臟，分離淋巴細胞。2細胞融合：免疫鼠的脾細胞和鼠源B細胞株（Sp/O2），融合劑PEG3選擇培養(yǎng)： Sp/O2細胞株為營養(yǎng)缺陷型，便于篩選。4篩選陽性細胞株：抗體檢測（酶標，同位素標記，熒光標記）5克隆和亞克隆 單克隆抗體的篩選6單克隆抗體生產(chǎn)：方法（體內(nèi)法，培養(yǎng)法）及其要點7細胞保存（超低溫冷凍）和防止變異。四、單克隆抗體技術(shù)的進展五、應用 特異性檢測:蛋白分子（病原抗原、其他分子）表位結(jié)構(gòu)分析：噬菌體展示技術(shù)基于單抗的抗體工程其他：抗體芯片、生物導彈一、疫苗發(fā)展史為了預防、

9、控制傳染病的發(fā)生、流行，用于動物接種，使之產(chǎn)生特異性免疫力的一類生物制品。由于機體免疫系統(tǒng)對初次進入的抗原具有特異性和記憶性的功能，所以接種疫苗后，機體就能在再次接觸特定病原體時，產(chǎn)生快速、高效的免疫力亞單位疫苗依據(jù)病原體、腫瘤的蛋白質(zhì)抗原能夠誘導機體產(chǎn)生免疫應答的原理，應用工程菌表達、生產(chǎn)病毒、細菌或腫瘤抗原表位的抗原肽重組疫苗 應用生物技術(shù)將細菌或病毒的毒力因子基因去除，或者以非病原體如痘病毒作為載體，將保護性抗原基因插入載體基因組。什么是安全性減毒疫苗能保持穩(wěn)定，不因返祖而恢復毒力，從理論上講，遺傳與變異決定了，減毒苗的安全性是相對的什么是有效性滅活苗、亞單位苗能否有效地，刺激和誘導機體

10、產(chǎn)生免疫力（二）核酸疫苗的原理 核酸疫苗（又稱基因疫苗或DNA疫苗）是繼減毒、滅活苗和亞單位疫苗、重組疫苗后，自1993年發(fā)展起來的第三代新型疫苗?；驹恚和ㄟ^基因操作，把保護性抗原基因連接到真核細胞質(zhì)粒內(nèi)，再將其導入動物肌肉細胞，使其在動物體內(nèi)表達抗原，并誘導產(chǎn)生特異性免疫應答，達到預防疫病的目的。（四）核酸疫苗發(fā)展的新問題 1.重組質(zhì)粒能“主動”進入細胞嗎2.如何調(diào)節(jié)質(zhì)粒有效地表達抗原3.讓機體對特定抗原產(chǎn)生強反應1. 抗體的概念：由抗原誘導免疫細胞產(chǎn)生，并能與之結(jié)合的免疫球蛋白。能夠識別并結(jié)合特定氨基酸序列的蛋白分子。2. 抗體的結(jié)構(gòu) 3. 抗體的產(chǎn)生：一個抗原分子含有數(shù)個抗原決定簇每

11、個抗原決定簇 至少誘導一種特異性抗體；蛋白質(zhì)性抗原決定簇 由六個以上氨基酸組成4. 抗體的功能：攻擊病毒 凝集細菌5. 抗體與抗原的結(jié)合特征：抗體和抗原是特異性地結(jié)合6. 抗體的應用6.1 生物活性物質(zhì)檢測 6.2 抗原抗體在細胞和亞細胞的定位6.3 微生物鑒定和抗原分型6.4 血型鑒定二、細胞工程抗體 1. 單克隆抗體技術(shù)的原理三、基因工程抗體 1. 單克隆抗體應用的局限性：異源性蛋白可引起血清病,一些活性分子難以直接連接2. 抗原結(jié)合區(qū)的基因操作：抗體基因操作的基礎(chǔ)一、細胞因子的概念一類由活化的免疫細胞和相關(guān)細胞產(chǎn)生的高活性、多功能小分子蛋白質(zhì)。二、細胞因子的來源與種類 1.白細胞介素(I

12、L)：介導白細胞或其他細胞間相互作用的細胞因子（IL-1-IL-28）。2.干擾素(IFN)：可干擾病毒復制的細胞因子，根據(jù)其來源和理化性分為、三類。IFN-/（I型IFN）主要由白細胞、成纖維細胞和病毒感染細胞產(chǎn)生。IFN-（II型IFN）主要由活化T細胞、NK細胞產(chǎn)生。3.腫瘤壞死因子(TNF): 對腫瘤細胞具有胞毒活性的因子，分為TNF-和TNF-。白細胞介素(IL)：介導白細胞或其他細胞間相互作用的細胞因子（IL-1-IL-28）。4.集落刺激因子(CSF): 刺激不同造血干細胞增殖、分化，使之在半固體培養(yǎng)基中形成集落的因子。其成員有：GM-CSF、G-CSF、M-CSF、EPO、SC

13、F等。5.生長因子(GF):可刺激細胞生長的因子。包括EGF、VEGF、FGF、NGF、PDGF 、TGF-等。6.趨化因子(chemokine): 對血細胞具有趨化、激活作用的因子?？煞譃椋簛喖易澹–-X-C）和 亞家族（C-C）以及亞家族（C）。三、 細胞因子的生物學功能：1 抗感染和抗腫瘤,2 免疫調(diào)節(jié)作用,3 刺激造血細胞增殖分化4 參與和調(diào)節(jié)炎癥反應,5 其它四、細胞因子的基本特性 （一）結(jié)構(gòu)特點:*屬低分子量（6-60kD）的多肽或糖蛋白*分型：分泌型和跨膜型（TNF；TGF-；SCF）*存在形式：單體(IL-1,2等)；二聚體（IL-5，12）；三聚體（TNF)；（二）產(chǎn)生與分泌

14、特點多細胞來源；主要由激活的細胞產(chǎn)生；瞬時性：分泌是短暫的自限過程；（三）生物學作用特點:* 通過與相應CK受體結(jié)合發(fā)揮效應，微量高效。* 作用方式：旁分泌、自分泌、內(nèi)分泌。* 生物學效應的復雜性：* 多效性： 一種CK多種靶細胞多種生物學作用* 重疊性： 不同CK同一靶細胞相同或相似效應* 拮抗性： 一種CK-抑制-另一種CK的某種生物學效應* 協(xié)同性： 一種CK-增強-另一種CK的某種生物學* 網(wǎng)絡性: 細胞因子間相互誘生,生物活性間相互影響。 細胞因子的作用方式自分泌 作用于分泌細胞自身旁分泌 paracrine 作用于比鄰細胞內(nèi)分泌 endocrine遠距離作用四）細胞因子來源和產(chǎn)生特

15、點n 1 細胞因子產(chǎn)生具有多源性n （1）活化的免疫細胞n （2）基質(zhì)細胞， 血管內(nèi)皮細胞，上皮細胞等n （3）某些腫瘤細胞，骨髓瘤細胞n 2 細胞因子產(chǎn)生具有多向性n （1）一種細胞可分泌多種細胞因子n （2）幾種不同的細胞可產(chǎn)生一種或幾種相同的細胞因子n （3）一種細胞因子可以作用于不同的細胞（五）細胞因子的作用特點n 1 發(fā)揮效應具有非特異性，無抗原特異性和MHC限制性n 2 通過與其受體結(jié)合而發(fā)揮效應，量微而作用強n 3 發(fā)揮效應的多效性n 4 發(fā)揮效應的重疊性n 5發(fā)揮效應的拮抗性、協(xié)同性、增強性和網(wǎng)絡性n 5具有雙重作用：n （1）有利：免疫調(diào)節(jié)、促進造血、抗感染，抗腫瘤n （2）

16、有害：炎癥、休克、發(fā)熱、自身免疫病、腫瘤五、主要細胞因子的受體 n 細胞因子受體都是跨膜蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞漿區(qū)組成。n 細胞因子受體的分類：免疫球蛋白基因超家族 受體的細胞膜外區(qū)有一個或多個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域。I型細胞因子受體家族 其胞膜外區(qū)有兩個不連續(xù)的半胱氨酸殘基和WSXWS基序。II型細胞因子受體家族 其胞膜外區(qū)有四個不連續(xù)的半胱氨酸殘基。n III型細胞因子受體家族 有富含半胱氨酸的基序。 趨化因子受體家族 G蛋白偶聯(lián)受體，由7個疏水性的跨膜區(qū)組成，和相應的配體結(jié)合后，經(jīng)偶聯(lián)GTP結(jié)合蛋白而發(fā)揮生物學效應。可溶性細胞因子受體(sCKR) 產(chǎn)生方式：n 大部分為膜受體脫落，如S

17、IL-1R、SIL -2R等。n 小部分為分泌型，如sIL-4R、sIL- 5R。 生物學活性：細胞因子“轉(zhuǎn)運蛋白”，膜受體相應配體“競爭抑制劑”六、主要細胞因子的介紹 n 白細胞介素n IL-1 發(fā)熱, 促進T、B細胞增殖分化 n IL-2 T細胞生長因子，增強NK細胞和LAK細胞的殺傷活性n IL-3 刺激骨髓多能干細胞的增殖分化n 1 產(chǎn)生細胞： 淋巴細胞、單核吞噬細胞等 2 作用n 介導白細胞間相互作用、調(diào)節(jié)細胞的生長分化、參與免疫應答和介導炎癥反應n 3 種類：IL-1-IL-30n IL-4：促進B細胞增殖分化，誘導B細胞發(fā)生Ig類別轉(zhuǎn)換，產(chǎn)生IgE或IgG類抗體抑制Th1細胞n

18、IL-5: 促進B細胞增殖分化，誘導B細胞發(fā)生Ig類別轉(zhuǎn)換，產(chǎn)生IgA類抗體刺激T細胞增殖分化n IL-6：促進T、B細胞增殖分化n IL-7： 誘導胸腺細胞分化、前T和前B增殖n IL-8： 趨化因子 n IL-10：抑制性細胞因子，抑制TH1細胞合成分泌細胞因子n IL-13: 抑制單核巨噬細胞合成分泌炎性細胞因子（IL-1、6、8和TNF-a）（二）干擾素n 抵抗病毒的感染,干擾病毒復制的細胞因子，包括 IFNa、b、gn I型干擾素： 干擾素、n 來源：白細胞、成纖維細胞、病毒感染的組織細胞等n 功能：抗病毒感染、抗腫瘤生長免疫調(diào)節(jié)(較弱）n 應用：病毒感染性疾病等，肝炎、 SARS

19、、干擾素（IFNg)n II型干擾素n 來源：活化的T細胞和NK細胞產(chǎn)生n 功能：免疫調(diào)節(jié)n 提高單核巨噬細胞、樹突狀細胞的抗原提呈能力n 增強Tc細胞和NK細胞的殺傷活性n 抑制TH2細胞形成，下調(diào)體液免疫應答n 趨化作用n 抗病毒和抗腫瘤作用（次要）n （三）腫瘤壞死因子(TNF)：n 可以直接誘導腫瘤細胞凋亡的細胞因子。n 分類：TNFa ：活化的單核巨噬細胞產(chǎn)生 亦稱惡液質(zhì)素n TNFb：活化的T細胞產(chǎn)生，亦稱淋巴毒素。n 兩種TNF的分子量為51kD，結(jié)構(gòu)為同源三聚體，具有相同的結(jié)合受體和生物學活性n TNF的生物學活性n 1 殺瘤、抑瘤作用n （1）直接殺傷或抑制腫瘤細胞（2）激活

20、NK細胞和巨噬細胞，間接發(fā)揮作用（3）損傷血管內(nèi)皮細胞，促進血栓的形成，阻斷腫瘤組織的血流供應，導致腫瘤出血壞死n 2 免疫調(diào)節(jié)作用n （1）刺激靶細胞合成分泌細胞因子，如IL-1、IL-6、IL-8等n （2）增強T、B細胞對抗原和有絲分裂原的增殖反應n （3）增強Tc細胞對靶細胞的殺傷活性n 3 促進炎癥反應n （1）誘導血管內(nèi)皮細胞表達細胞間粘附分子1（ICAM-1)n （2）分泌IL-1、 IL-8等炎癥分子和趨化因子n （3）增強中性粒細胞和單核吞噬細胞的吞噬功能n 4 抗病毒作用n （1）類似于IFN的作用，（2）直接殺傷病毒感染細胞n 5 致熱作用：內(nèi)熱性熱源質(zhì) (1)直接作用于

21、下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞，（2）刺激巨噬細胞釋放IL-1n 6 引發(fā)惡液質(zhì)n 由TNFa引起，能夠促進蛋白脂肪消耗、分解，引起代謝紊亂表現(xiàn)為厭食、惡心、消瘦、衰弱和貧血n （四）集落刺激因子CSF):n 分類：粒細胞集落刺激因子（granulocyte-CSF, G-CSF)n 巨噬細胞集落刺激因子（macrophage-CSF，MCSF)n 粒細胞巨噬細胞集落刺激因子（granulocyte-maceophage-CSF, GM-CSF)n 紅細胞生成素（erythropoietin, EPO)n 干細胞生成因子（stem cell factor,SCF)n 多能集落刺激因子（multi-CSF)

22、(五）生長因子n 具有促進不同類型細胞生長效應的細胞因子n 分類：轉(zhuǎn)化生長因子b（transforming growth factor-b,TGFb)n 表皮生長因子（epidermal growth factor, EGF)n 血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF)n 成纖維細胞生長因子（fibroblast growth factor, FGF)n 神經(jīng)生長因子(nerve growth factor, NGF)n 血小板衍生的生長因子（platelet derived growth factor, PDGF) n 肝細胞生長因子（hepatic growth factor, HGF)轉(zhuǎn)化生長因子b為同源二聚體，MW25kD，產(chǎn)生細胞：正常細胞和腫瘤細胞n 生物學活性：n （1）對