病毒的分離與鑒定-實(shí)驗(yàn)課

1、實(shí) 驗(yàn) 九病毒的分離與鑒定（一）病毒的分離與鑒定（一）1、病毒的培養(yǎng)與鑒定、病毒的培養(yǎng)與鑒定2、病毒的、病毒的CPE過(guò)程過(guò)程3、病毒的電鏡照片觀察、病毒的電鏡照片觀察4、流感病毒的分離鑒定（一）、流感病毒的分離鑒定（一） （1）雞胚尿囊腔接種法）雞胚尿囊腔接種法 （2）病毒的動(dòng)物接種法小白鼠腦內(nèi)）病毒的動(dòng)物接種法小白鼠腦內(nèi) 接種接種流感病毒的分離鑒定（1）雞胚尿囊腔接種法）雞胚尿囊腔接種法（2）病毒的動(dòng)物接種法小白鼠腦內(nèi)接種）病毒的動(dòng)物接種法小白鼠腦內(nèi)接種目的：熟悉人工培養(yǎng)病毒的常用方法及其操目的：熟悉人工培養(yǎng)病毒的常用方法及其操作技術(shù)。作技術(shù)。實(shí)驗(yàn)材料：實(shí)驗(yàn)材料：(1)來(lái)亨雞受精卵、卵架、檢

2、卵燈。來(lái)亨雞受精卵、卵架、檢卵燈。(2)碘酒、酒精消毒棉球。碘酒、酒精消毒棉球。(3)滅菌的手術(shù)刀、鑷子、剪刀。滅菌的手術(shù)刀、鑷子、剪刀。(4)1ml注射器及針頭。注射器及針頭。(5)病毒液病毒液:流感病毒、新城雞瘟病毒。流感病毒、新城雞瘟病毒。(6)無(wú)菌膠布。無(wú)菌膠布。雞胚尿囊腔接種法 分離鑒定程序分離鑒定程序 病人急性期咽喉含漱液病人急性期咽喉含漱液 (經(jīng)雙抗處理經(jīng)雙抗處理) 雞胚培養(yǎng)雞胚培養(yǎng)(羊水囊或尿囊腔羊水囊或尿囊腔) 35 ，72h 收獲：取羊水或尿囊液作血凝試驗(yàn)收獲：取羊水或尿囊液作血凝試驗(yàn) (+) () 作血凝抑制試驗(yàn)作血凝抑制試驗(yàn) 盲傳雞胚兩代，仍為盲傳雞胚兩代，仍為 陰性時(shí)

3、報(bào)告陰性陰性時(shí)報(bào)告陰性(1)取孵育取孵育1012d雞胚雞胚,在檢卵燈下畫(huà)出氣室在檢卵燈下畫(huà)出氣室界線界線,于胚胎附近無(wú)大于胚胎附近無(wú)大血管處畫(huà)出標(biāo)記作為血管處畫(huà)出標(biāo)記作為注射入口注射入口.(2)將卵置于卵架上將卵置于卵架上,消消毒標(biāo)記處毒標(biāo)記處,用無(wú)菌剪刀用無(wú)菌剪刀尖在標(biāo)記處打一小孔尖在標(biāo)記處打一小孔.實(shí)驗(yàn)方法：(3)用滅菌注射器吸取流感病毒液用滅菌注射器吸取流感病毒液0.2ml,由小孔刺入由小孔刺入0.5cm后后,進(jìn)行注射進(jìn)行注射.(4)注射后注射后,用無(wú)菌膠布用無(wú)菌膠布封孔封孔,置置35度溫箱孵育度溫箱孵育.(5)每日在燈下檢視雞每日在燈下檢視雞胚情況胚情況(若雞胚在接種若雞胚在接種后后2

4、4h內(nèi)死亡為非特異內(nèi)死亡為非特異性死亡性死亡,應(yīng)棄之應(yīng)棄之). 實(shí)驗(yàn)方法：實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)材料 (1)腦炎病毒懸液腦炎病毒懸液. (2)小白鼠小白鼠(3W齡齡). (3)1ml的注射器、針頭的注射器、針頭. (4)碘酒、酒精棉球碘酒、酒精棉球.實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)方法: (1)以左手將小白鼠頭部和體部固定于臺(tái)面以左手將小白鼠頭部和體部固定于臺(tái)面. (2)用碘酒、酒精棉球消毒頭部右側(cè)眼、耳間部位用碘酒、酒精棉球消毒頭部右側(cè)眼、耳間部位 病毒的動(dòng)物接種法小白鼠腦內(nèi)接種 (3)以以1ml的注射器抽提病毒懸液的注射器抽提病毒懸液,以右手持注射器以右手持注射器,將針頭向眼外與耳根連線中點(diǎn)略偏向耳的方向刺將針頭向眼外與耳根連線中點(diǎn)略偏向耳的方向刺入顱腔入顱腔,約進(jìn)針約進(jìn)針23mm,注入量注入量0.020.03ml. (4)注射完畢注射完畢,將用過(guò)之物煮沸消毒將用過(guò)之物煮沸消毒.實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果: 接種后每日觀察動(dòng)物接種后每日觀察動(dòng)物2次次.動(dòng)物一般在接種后動(dòng)物一般在接種后3-4d后后開(kāi)始發(fā)病開(kāi)始發(fā)病,食欲減退食欲減退,活動(dòng)遲緩