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文檔簡介

1、編輯課件12.2動物細胞工程編輯課件2動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合動物細胞融合單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)核移植核移植動物動物細胞細胞工程工程常用常用技術(shù)技術(shù)胚胎移植技術(shù)胚胎移植技術(shù)編輯課件31.1.過程:過程:編輯課件4動物動物胚胎胚胎或或幼齡幼齡動動物的組織、器官物的組織、器官胰蛋白酶胰蛋白酶剪碎剪碎單個細胞單個細胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液制成制成細胞細胞懸液懸液細胞株細胞株細胞系細胞系細胞增值細胞增值無限傳代無限傳代去掉組織間去掉組織間蛋白蛋白動物細胞培養(yǎng)不能動物細胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成生物體最終培養(yǎng)成生物體細胞細胞貼壁貼壁原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)胰蛋白酶胰蛋白酶編輯課件5細胞細胞

2、懸浮懸浮液液1010代代細胞細胞5050代代細胞細胞無限傳無限傳代代原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細胞株細胞株細胞系細胞系如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)?如何界定原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)?多數(shù)組織細胞固定在表面多數(shù)組織細胞固定在表面生長和分裂。生長和分裂。隨細胞增多,細胞就會停止分裂增殖隨細胞增多,細胞就會停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變遺傳物質(zhì)改變編輯課件62、有關(guān)概念、有關(guān)概念 原代培養(yǎng):從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代培養(yǎng):從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。培養(yǎng)的第原代細胞。培養(yǎng)的第1代細胞與傳代細胞與傳10代以內(nèi)代以內(nèi)的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。 傳代培養(yǎng):將原代細胞從培養(yǎng)瓶中

3、取出,配傳代培養(yǎng):將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出,配制成細胞懸浮液,分裝到兩個或兩個以上的制成細胞懸浮液,分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),稱為傳代培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng),稱為傳代培養(yǎng)。編輯課件72、有關(guān)概念、有關(guān)概念細胞株:細胞株:原代細胞一般傳至原代細胞一般傳至10代左右細胞代左右細胞生長停滯,大部分細胞衰老死亡,少數(shù)細胞存生長停滯,大部分細胞衰老死亡,少數(shù)細胞存活到活到4050代,這種傳代細胞為細胞株。代,這種傳代細胞為細胞株。 細胞系:細胞系:細胞株傳代至細胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細胞代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài),只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的生長停滯狀態(tài),只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變,使

4、其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代,這改變,使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代,這種傳代細胞為細胞系。種傳代細胞為細胞系。 細胞株和細胞系的區(qū)別:細胞株和細胞系的區(qū)別: 細胞系的遺傳物細胞系的遺傳物質(zhì)改變,具有癌細胞的特點,失去接觸抑制,質(zhì)改變,具有癌細胞的特點,失去接觸抑制,容易傳代培養(yǎng)。容易傳代培養(yǎng)。編輯課件83、動物細胞培養(yǎng)條件、動物細胞培養(yǎng)條件1。無菌、無毒。無菌、無毒2。營養(yǎng):。營養(yǎng):葡萄糖葡萄糖、氨基酸、無機鹽、促、氨基酸、無機鹽、促生長因子、微量元素和生長因子、微量元素和動物動物血清血清等。等。3。溫度:。溫度:36.5+0.54。PH=7.27.45。氣體環(huán)境:。氣體環(huán)境:O2和和CO2

5、(95%空氣空氣+5%CO2)編輯課件9思考:思考:2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞、為什么選用動物胚胎或幼齡個體的器官或組織做動物細胞培養(yǎng)材料?培養(yǎng)材料?1、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么?較植物組培培養(yǎng)基有、動物細胞培養(yǎng)液的主要成分是什么?較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處?何獨特之處?3、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞?、為什么培養(yǎng)前要將組織細胞分散成單個細胞?4、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個、動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體?體?主要成分:葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等。主要成分:葡萄糖、氨基酸、無機鹽、

6、維生素和動物血清等。獨特之處有:獨特之處有:1、液體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基 2、成分中有動物血清等、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛,分裂能力強因為這些組織或器官上的細胞生命力旺盛,分裂能力強成塊組織不利培養(yǎng),分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)成塊組織不利培養(yǎng),分散了做成細胞懸浮液利于培養(yǎng)不能,動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多,不能發(fā)育成新的不能,動物細胞培養(yǎng)只能使細胞數(shù)目增多,不能發(fā)育成新的動物個體動物個體編輯課件10獲得細胞獲得細胞細胞的全能性細胞的全能性細胞株、細胞系細胞株、細胞系植物體植物體培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)結(jié)果或細胞分泌蛋白或細胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病快速繁殖、培育無病毒植株

7、等毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、動物血清葡萄糖、動物血清促生長因子促生長因子蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細胞增殖細胞增殖原理原理動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目比較項目植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較植物細胞和動物細胞培養(yǎng)的比較編輯課件114. 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)的應(yīng)用的應(yīng)用()大規(guī)模生產(chǎn)有重要價值的蛋白質(zhì)生物制品。大規(guī)模生產(chǎn)有重要價值的蛋白質(zhì)生物制品。()解決為大面積燒傷病人移植皮膚問題。解決為大面積燒傷病人移植皮膚問題。(利用貼壁生長和接觸抑制原理)(利用貼壁生長和接

8、觸抑制原理)()檢測有關(guān)物質(zhì)毒性。檢測有關(guān)物質(zhì)毒性。()培養(yǎng)正?;虿∽兗毎糜诳蒲?。培養(yǎng)正常或病變細胞,用于科研。如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體編輯課件12(二)、動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物(二)、動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物1.動物核移植動物核移植(1)概念:將供體體細胞的概念:將供體體細胞的_與受體去與受體去核卵細胞的細胞質(zhì)進行核卵細胞的細胞質(zhì)進行_,借助于,借助于_的發(fā)育能力,經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成胚胎的發(fā)育能力,經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成胚胎進而形成進而形成_的技術(shù)。的技術(shù)。(2)關(guān)鍵技術(shù):關(guān)鍵技術(shù):_技術(shù)。技術(shù)。細胞核細胞核人工組合人工組合卵細胞卵細胞個體個體細胞核

9、移植細胞核移植編輯課件13動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物動物體細胞核移植技術(shù)和克隆動物(3)哺乳動物核移植可以分為)哺乳動物核移植可以分為_核移植核移植(比較容易)和(比較容易)和_核移植(比較難)。核移植(比較難)。(4)選用去核卵)選用去核卵(母母)細胞的原因:卵細胞的原因:卵(母母)細胞比較細胞比較_,容易操作;卵,容易操作;卵(母母)細胞細胞質(zhì)細胞細胞質(zhì)_,營養(yǎng)豐富。,營養(yǎng)豐富。胚胎細胞胚胎細胞體細胞體細胞大大多多編輯課件14編輯課件151、誰是“多莉”的母親?2、“多莉羊”是雄還是雌?3、是否符合孟德爾遺傳?問問題題卵細胞C母綿羊子宮母綿羊母綿羊乳腺細胞細胞質(zhì)細胞核細胞核移植胚胎移植

10、早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵細胞細胞拆合技術(shù)妊娠編輯課件16編輯課件17編輯課件182、體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用體細胞核移植技術(shù)的應(yīng)用加速家畜遺傳改良進程,促進良畜群繁育;加速家畜遺傳改良進程,促進良畜群繁育;保護瀕危物種,增大存活數(shù)量;保護瀕危物種,增大存活數(shù)量;生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白;生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白;作為異種移植的供體;作為異種移植的供體;用于組織器官的移植等。用于組織器官的移植等。3、體細胞核移植技術(shù)存在的問題體細胞核移植技術(shù)存在的問題克隆動物存在著健康問題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷克隆動物存在著健康問題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等。等。編輯課件19編輯課件20細胞細胞A細胞細胞B雜種細胞雜種

11、細胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學(xué)法化學(xué)法仙臺病毒仙臺病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病新城雞瘟病毒毒 (三)(三)動物細胞融合動物細胞融合2、過程:、過程:1、概念:、概念:“2個或多個動物細胞個或多個動物細胞”“1”、“雜交單核細胞雜交單核細胞”編輯課件21用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細胞融合過程用滅活的病毒誘導(dǎo)動物細胞融合過程細胞核細胞核病毒顆粒病毒顆粒細胞核細胞核病毒表面含有的糖蛋白病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用,上的糖蛋白發(fā)生作用,使細胞互相凝聚,細胞使細胞互相凝聚,細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布,細胞質(zhì)分子重新排

12、布,細胞膜打開,細胞發(fā)生融合。膜打開,細胞發(fā)生融合。滅活是指用物理或化學(xué)滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細菌失去手段使病毒或細菌失去感染能力,但并不破壞感染能力,但并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。編輯課件223、動物細胞融合的意義動物細胞融合的意義:克服了克服了_雜交雜交的 不 親 合 性 , 成 為 研 究 細 胞的 不 親 合 性 , 成 為 研 究 細 胞 _ _ _ _ _ 、_、腫瘤和生物、腫瘤和生物_培育的重要培育的重要手段。手段。4、動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較動物細胞融合與植物體細胞雜交的比較遠緣遠緣遺傳遺傳細胞免疫細胞免疫新品種新品種編輯課件23主要

13、用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株用途用途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法(同左)(同左)滅活的病毒滅活的病毒物理(離心、振蕩、物理(離心、振蕩、電刺激)電刺激)化學(xué)(聚乙二醇)化學(xué)(聚乙二醇)誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細胞分散后誘使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合導(dǎo)細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細胞融合的方法細胞融合的方法細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性、細胞膜的流動性、植物細胞全能性植物細胞全能性原理原理動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交植物體細胞雜交比較項目比較項目植物、動物細胞融合的比較植物、動物細胞融合的比較編輯課件24(四)(

14、四)單克隆抗體單克隆抗體1、什么是抗體?其本質(zhì)是什么?、什么是抗體?其本質(zhì)是什么? 2、傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么?、傳統(tǒng)的抗體生產(chǎn)方法及缺陷是什么?抗體是從何來的?抗體是從何來的? B淋巴細胞產(chǎn)生抗體。淋巴細胞產(chǎn)生抗體。3、B淋巴細胞有什么特點?淋巴細胞有什么特點? 抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、抗體是機體受抗原刺激后產(chǎn)生的、并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的并能與該抗原發(fā)生特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。編輯課件25B淋巴細胞與抗體淋巴細胞與抗體B淋巴細胞受抗原刺激后,可以淋巴細胞受抗原刺激后,可以產(chǎn)生抗體。產(chǎn)生抗體。動物體內(nèi)的動物體內(nèi)的B淋巴細胞可以產(chǎn)生淋巴細胞可以

15、產(chǎn)生百萬種以上的抗體,每種抗體對特定的抗百萬種以上的抗體,每種抗體對特定的抗原具有特異性免疫作用。原具有特異性免疫作用。每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗每一個淋巴細胞只能產(chǎn)生一種抗體。體。編輯課件26單克隆抗體單克隆抗體 由單個由單個B淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖淋巴細胞經(jīng)過無性繁殖(克隆),形成基因型相同的細胞群,(克隆),形成基因型相同的細胞群,這一細胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特這一細胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強的抗體稱為單克隆抗體。異性強的抗體稱為單克隆抗體。 特點:特點:特異性強、靈敏度高特異性強、靈敏度高 編輯課件27如何大量生產(chǎn)單克隆抗體?如何大量生產(chǎn)單克隆抗體? 利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的

16、功能利用淋巴細胞產(chǎn)生抗體的功能 利用腫瘤細胞無限增殖的特性利用腫瘤細胞無限增殖的特性 利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融利用細胞融合的技術(shù)將兩種細胞融合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特合獲得具有淋巴細胞和腫瘤細胞特性的雜交瘤細胞性的雜交瘤細胞 利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜利用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細胞交瘤細胞編輯課件28 單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程 注射抗原注射抗原B淋巴細胞淋巴細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選細胞融合、篩選雜交瘤細胞雜交瘤細胞細胞培養(yǎng)細胞培養(yǎng)篩選,繼續(xù)培養(yǎng)篩選,繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群特定抗體的細胞群體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到

17、小鼠腹腔注射到小鼠腹腔單克隆抗體單克隆抗體編輯課件29思考:思考:1、本過程利用了哪些原理?、本過程利用了哪些原理?免疫原理,細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理免疫原理,細胞融合原理和動物細胞培養(yǎng)原理2、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與、為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與B細胞融合?細胞融合?這樣融合成的雜交瘤細胞,繼承了雙親細胞的遺傳這樣融合成的雜交瘤細胞,繼承了雙親細胞的遺傳物質(zhì),不僅具有物質(zhì),不僅具有B細胞分泌抗體的能力,而且還有無細胞分泌抗體的能力,而且還有無限增殖的本領(lǐng),因而可以獲得大量單克隆抗體限增殖的本領(lǐng),因而可以獲得大量單克隆抗體編輯課件30(1 1)為什么選用小鼠骨髓瘤細胞與)為什么選用小鼠骨

18、髓瘤細胞與B B淋巴細淋巴細胞融合胞融合? ?(小鼠骨髓瘤細胞可以在體外培養(yǎng)條件下大量(小鼠骨髓瘤細胞可以在體外培養(yǎng)條件下大量增殖,增殖,B B淋巴細胞能夠產(chǎn)生抗體,細胞的同源性淋巴細胞能夠產(chǎn)生抗體,細胞的同源性越近,融合形成的雜種細胞越易成活。)越近,融合形成的雜種細胞越易成活。)(2 2)骨髓瘤細胞是癌細胞嗎)骨髓瘤細胞是癌細胞嗎? ?(有無限增殖能力(失去凋亡機制,失去接觸(有無限增殖能力(失去凋亡機制,失去接觸抑制等)的細胞是腫瘤細胞,而具有轉(zhuǎn)移能力抑制等)的細胞是腫瘤細胞,而具有轉(zhuǎn)移能力的腫瘤細胞,稱為癌細胞,所以說,瘤細胞不的腫瘤細胞,稱為癌細胞,所以說,瘤細胞不能等于癌細胞。)能

19、等于癌細胞。)編輯課件31(3 3)整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選)整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選? ?(第一次篩選得到雜交瘤細胞(多種),(第一次篩選得到雜交瘤細胞(多種),第二次需先在多孔培養(yǎng)板上,在每孔只有第二次需先在多孔培養(yǎng)板上,在每孔只有一個雜交瘤細胞的情況下開始培養(yǎng),然后一個雜交瘤細胞的情況下開始培養(yǎng),然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群。由再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群。由于該細胞群是單個雜交瘤細胞克隆得來的于該細胞群是單個雜交瘤細胞克隆得來的,所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的,所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的,特異性強的單克隆抗體。這里的,特異性強的單克隆抗體。這里的單克

20、隆單克隆確有確有單個細胞單個細胞克隆的含義,只不過克隆的克隆的含義,只不過克隆的不是不是B B淋巴細胞,而是淋巴細胞,而是雜交瘤細胞雜交瘤細胞。)。) 編輯課件32單克隆抗體的應(yīng)用單克隆抗體的應(yīng)用與常規(guī)抗體相比,單克隆抗體產(chǎn)量高,特異性強,靈敏度高,與常規(guī)抗體相比,單克隆抗體產(chǎn)量高,特異性強,靈敏度高,優(yōu)越性十分明顯優(yōu)越性十分明顯。應(yīng)用主要有:應(yīng)用主要有:1、臨床診斷、臨床診斷2、作為載體,運載抗癌藥物,形成、作為載體,運載抗癌藥物,形成“生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈”治療腫治療腫瘤瘤資料資料:目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病

21、、免疫性疾病、血液病、體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病,用單克隆抗體作為診斷手段,是一個內(nèi)分泌疾病和遺傳病,用單克隆抗體作為診斷手段,是一個必然趨勢。另外,用單克隆抗體做體內(nèi)診斷,借以鑒別和定必然趨勢。另外,用單克隆抗體做體內(nèi)診斷,借以鑒別和定位體內(nèi)位體內(nèi)“病灶病灶”也引起人們的注意,目前,主要用于腫瘤追也引起人們的注意,目前,主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。蹤及心肌梗塞的診斷。生物導(dǎo)彈生物導(dǎo)彈:單克隆抗體作為載體分子,同抗癌藥物相結(jié)合,將他們運載到腫瘤:單克隆抗體作為載體分子,同抗癌藥物相結(jié)合,將他們運載到腫瘤部位,殺死癌細胞,這種抗體部位,殺死癌細胞,這種抗體藥物結(jié)合物稱之為生物導(dǎo)彈。它能定向殺滅藥物結(jié)合物稱之為生物導(dǎo)彈。它能定向

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