微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化質(zhì)量控制時(shí)間.

1、微生物實(shí)驗(yàn)室規(guī)范化質(zhì)量控制時(shí)間:2010-06-04 13:49來源: 作者: 點(diǎn)擊:158次 字體大小: 大 中 小大 中 小大 中 小 分享到：檢驗(yàn)微博 新浪微博 網(wǎng)易微博 騰訊微博 搜狐微博 QQ空間 朋友社區(qū) 人人網(wǎng) -核心提示:質(zhì)量是臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的生命，正確的鑒定和藥敏報(bào)告對(duì)醫(yī)生的診斷和治療有重要的參考價(jià)值，反之會(huì)誤導(dǎo)醫(yī)生。所以實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的質(zhì)量控制制度以保證檢驗(yàn)質(zhì)量的正確和穩(wěn)定 質(zhì)量是臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的生命，正確的鑒定和藥敏報(bào)告對(duì)醫(yī)生的診斷和治療有重要的參考價(jià)值，反之會(huì)誤導(dǎo)醫(yī)生。所以實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的質(zhì)量控制制度以保證檢驗(yàn)質(zhì)量的正確和穩(wěn)定。一、臨床微生物實(shí)驗(yàn)室要建立質(zhì)量控制

2、的基本范圍和內(nèi)容 室內(nèi)質(zhì)控是室間質(zhì)控的基礎(chǔ)，而室間質(zhì)控是對(duì)室內(nèi)質(zhì)控的驗(yàn)證，質(zhì)量是臨床微生物實(shí)驗(yàn)室的生命。在新發(fā)感染性疾?。╡merging infectious disease）不斷發(fā)生的形勢(shì)下，臨床微生物室的檢驗(yàn)質(zhì)量保證尤其重要。（一）建立標(biāo)本接種前的質(zhì)量控制制度 沒有好質(zhì)量的標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)室采取任何先進(jìn)的分離、鑒定和藥敏技術(shù)都是無濟(jì)于事的。建議成立由醫(yī)生、護(hù)士和細(xì)菌室參與的監(jiān)督責(zé)任程序，對(duì)不同的標(biāo)本規(guī)定不同的接種時(shí)間范圍，如：痰標(biāo)本應(yīng)規(guī)定在留取標(biāo)本后1 小時(shí)內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室，細(xì)菌室應(yīng)在收到標(biāo)本后30分鐘內(nèi)接種完畢；糞便標(biāo)本應(yīng)采集后立即接種；血液標(biāo)本種入培養(yǎng)血瓶后立即送檢或于室溫下保存，切不能放冰箱

3、；尿標(biāo)本應(yīng)于2 小時(shí)內(nèi)送實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)本后應(yīng)于30分鐘內(nèi)接種完；拭子標(biāo)本采集后應(yīng)全部采用輸送培養(yǎng)基送到實(shí)驗(yàn)室檢查。 （二）建立細(xì)菌分離率質(zhì)控系統(tǒng) 呼吸道標(biāo)本或可能含嗜血桿菌的標(biāo)本一定要接種巧克力培養(yǎng)基；含5%脫纖維綿羊血瓊脂；采用5%-10%的CO2培養(yǎng)系統(tǒng)；培養(yǎng)周期2472 h。 考察指標(biāo)：嗜血桿菌屬在常規(guī)送檢標(biāo)本中的分離率應(yīng)不低于30%50%；肺炎鏈球菌的分離率不低于5%10%；卡他莫拉菌的分離率不低于2%5%。如果在1周中未分離出上述苛養(yǎng)菌應(yīng)認(rèn)真查找原因。（三）藥敏質(zhì)控系統(tǒng)的規(guī)范化 質(zhì)控的抗菌藥物種類應(yīng)包括全部常用抗菌藥物；正確選擇質(zhì)控菌株，如金黃色葡萄球菌ATCC25923 用于

4、紙片法藥敏的質(zhì)控，而金葡菌ATCC29213用于稀釋法藥敏質(zhì)控；建立3種系統(tǒng)藥敏質(zhì)控：30 d初始質(zhì)控，在30 d內(nèi)失控不超過3次時(shí)可進(jìn)入1周質(zhì)控。如失控超過3次應(yīng)進(jìn)入5 d的糾控系統(tǒng)，經(jīng)5 d糾控，合格后方可進(jìn)入1周質(zhì)控。1周質(zhì)控是維持日常質(zhì)控的形式，一旦失控應(yīng)進(jìn)入糾控系統(tǒng)，按糾控規(guī)則處理。（四）鑒定質(zhì)控系統(tǒng) 包括自動(dòng)化設(shè)備鑒定系統(tǒng)、商品鑒定系統(tǒng)如API、單一的生化反應(yīng)管及原材料，原則上應(yīng)進(jìn)行每換批號(hào)時(shí)都要有質(zhì)控這也稱為批批檢。特別容易被忽略的是羊血的質(zhì)量，如羊血中是否含抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的物質(zhì)；MH瓊脂中胸腺嘧啶含量?？赏ㄟ^平皿抑制試驗(yàn)檢測(cè)羊血是否含抗生素，在涂有細(xì)菌的平皿不同方位滴入羊血數(shù)滴，

5、35培養(yǎng)過夜觀察結(jié)果。要求在滴有羊血的部位不出現(xiàn)抑菌環(huán)；用糞腸球菌ATCC29212 或ATCC33186質(zhì)控菌株測(cè)試MH瓊脂上氨芐西林的抑菌環(huán)，若產(chǎn)生20mm或更大的抑菌環(huán)，表示合格。 （五）質(zhì)控記錄 要真實(shí)，要有失控（超過質(zhì)控允許范圍的結(jié)果稱為失控）記錄，并認(rèn)真的尋找原因和解決問題。（六）質(zhì)量控制應(yīng)該是每個(gè)有發(fā)報(bào)告檢驗(yàn)人員的職責(zé)，不要把質(zhì)控工作讓一個(gè)人去做，在實(shí)驗(yàn)室要樹立質(zhì)量意識(shí)。 （七）室間質(zhì)量控制 二級(jí)或以下醫(yī)院應(yīng)參加本地區(qū)或本市的質(zhì)量控制活動(dòng)；三級(jí)醫(yī)院除參加本地區(qū)的質(zhì)控活動(dòng)外還應(yīng)該參加全國或全球的質(zhì)量控制活動(dòng)。二、細(xì)菌分離和鑒定質(zhì)量控制實(shí)施 細(xì)菌鑒定的質(zhì)量由多種因素組成，所以細(xì)菌鑒定

6、的質(zhì)量控制應(yīng)包括細(xì)菌分離的質(zhì)量控制、染色液的質(zhì)量控制、鑒定試劑的質(zhì)量控制、鑒定設(shè)備的質(zhì)量控制等。（一）分離培養(yǎng)質(zhì)量控制 用血瓊脂和巧克力培養(yǎng)基接種肺炎鏈球菌、B-溶血和草綠色溶血的鏈球菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)菌株或經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化試劑已證實(shí)結(jié)果正確的菌株進(jìn)行測(cè)試，判斷實(shí)驗(yàn)室的分離能力。（二）染色液質(zhì)量控制 每天在開始用染色液前應(yīng)檢查染色液的質(zhì)量和檢測(cè)有無污染。（三） 鑒定試劑質(zhì)量控制 購入新的試劑；試劑更換批號(hào)；更換生產(chǎn)廠家；結(jié)果發(fā)生異常等情況時(shí)均應(yīng)選擇相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行質(zhì)量控制。（四）自動(dòng)化設(shè)備 試劑質(zhì)控要求同鑒定試劑；設(shè)備軟件升級(jí)、修改版本、或大的維修時(shí)均應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制程序。三、藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量控

7、制實(shí)施 （一）建立合理的常規(guī)藥敏種類 不同抗生素的抗菌譜不同、抗菌強(qiáng)度不同、細(xì)菌耐藥譜不同、對(duì)不同的病原菌建立正確的常規(guī)藥敏種類是非常必要的，錯(cuò)誤的藥敏種類的報(bào)告會(huì)誤導(dǎo)醫(yī)生，按CLSI要求和根據(jù)本單位用藥習(xí)慣建立藥敏常規(guī)試驗(yàn)的種類。（二）M-H瓊脂平皿定量 在瓊脂擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)中，M-H瓊脂厚度是嚴(yán)重影響紙片藥敏試驗(yàn)結(jié)果的重要因素，瓊脂培養(yǎng)基越厚抑菌環(huán)直徑越小、反之則越大；克服的辦法是要在保持水平的平臺(tái)上（水平儀）定量?jī)A注培養(yǎng)基，這個(gè)問題至今未被充分的重視。10cm的平皿應(yīng)傾注23-25ml的培養(yǎng)基。 （三）抗菌藥紙片貯藏 紙片失效是造成藥敏結(jié)果錯(cuò)誤的最重要的原因，必須在-20或更低溫度的低溫

8、冰箱中保存紙片，近期使用的紙片只需放4冰箱，一周后棄取，更換新紙片。（四）特殊菌藥敏規(guī)范化（1）萬古霉素中介菌株的報(bào)告： 中介腸球菌藥敏試驗(yàn)應(yīng)用含6mg/l萬古霉素的瓊脂，點(diǎn)種0.5麥?zhǔn)蠁挝痪海?5培養(yǎng)1824h，點(diǎn)種菌生長(zhǎng)者示為耐藥，不生長(zhǎng)者示為敏感，;葡萄球菌對(duì)萬古霉素中介（中度敏感）時(shí)，應(yīng)再測(cè)定其最低抑菌濃度（MIC）確定。（2） 葡萄球菌苯唑西林中介株： 用含4%NaCL和每升含6 mg 笨唑西林的瓊脂，點(diǎn)種0.5麥?zhǔn)蠁挝坏木?，?5培養(yǎng)24h，生長(zhǎng)者為耐藥株。不生長(zhǎng)者為敏感株。（3）克林霉素報(bào)告：必須在“D”試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，“D“試驗(yàn)是在瓊脂或血瓊脂平皿上均勻涂被測(cè)菌，稍后，在 相

9、距1526mm分別貼15g/片紅霉素紙片和2ug 克林霉素紙片，培養(yǎng)1824h后，在克林霉素側(cè)出現(xiàn)切痕為“D”試驗(yàn)陽性，應(yīng)報(bào)告克林霉素耐藥,無切痕可報(bào)告敏感。 （4）耐甲氧西林金葡菌（MRSA）：用頭孢西丁紙片代替苯唑西林紙片，試驗(yàn)結(jié)果仍應(yīng)報(bào)告為苯唑西林敏感或耐藥。（5）腸外標(biāo)本中分離的沙門菌屬：當(dāng)環(huán)丙沙星MIC=0121.0mg/L低耐時(shí)用奈啶酸測(cè)試MIC,當(dāng)MIC=2mg/l為中介度（I），MIC4 為耐藥（R）。 四、其他儀器設(shè)備質(zhì)量控制實(shí)施（一）培養(yǎng)箱的質(zhì)量控制 每天第一個(gè)開箱和最后離開實(shí)驗(yàn)室的人員均應(yīng)觀察培養(yǎng)箱的溫度并作質(zhì)量控制記錄 （二）CO2培養(yǎng)箱的質(zhì)量控制 每天應(yīng)記錄CO2的含

10、量并在質(zhì)量控制圖上作記錄。（三）冰箱溫度記錄按每一冰箱存放的物品不同設(shè)置不同溫度范圍,一般在5?2每天觀察并記錄。（四）低溫冰箱 每天觀察并記錄一次,要求溫度變化不超過設(shè)定范圍的上下2。五、真菌檢測(cè)的質(zhì)量保證的實(shí)施低免疫人群的增長(zhǎng)、超廣譜抗生素的廣泛應(yīng)用使真菌感染迅速增加，侵襲性念珠菌及曲霉感染使重癥監(jiān)護(hù)病房（ICU）的病死率明顯上升，50-75%的病例不能在生前獲得細(xì)菌學(xué)的陽性結(jié)果，因此加強(qiáng)真菌檢測(cè)的規(guī)范化操作，提高檢測(cè)陽性率及藥敏試驗(yàn)的正確率十分必要。 （一） 真菌涂片的規(guī)范化真菌涂片是真菌鑒定最重要的方法，真菌檢驗(yàn)人員應(yīng)熟悉真菌的形態(tài)特點(diǎn)；無菌體液標(biāo)本涂片應(yīng)離心濃縮以增加陽性率，并一定要

11、檢測(cè)菌絲；對(duì)痰及口腔標(biāo)本要進(jìn)行定量（菌落計(jì)數(shù)）或半定量（用加號(hào)表示，在分區(qū)劃線的3個(gè)區(qū)都豐富生長(zhǎng)報(bào)告為+、依次類推2個(gè)區(qū)生長(zhǎng)為+、1個(gè)區(qū)生長(zhǎng)為+）；組織標(biāo)本涂片要研磨后涂片但要保護(hù)菌絲體的形態(tài)；在標(biāo)本量許可的前題下涂片不應(yīng)少于3張。 （二） 真菌鑒定的規(guī)范化對(duì)酵母樣真菌如念珠菌或隱球菌在常規(guī)臨床細(xì)菌室已有較成熟的方法學(xué)，可用顯色培養(yǎng)基或自動(dòng)化系統(tǒng)鑒定真菌；常規(guī)鑒定絲狀真菌主要依賴于其生長(zhǎng)過程中形態(tài)變化和特點(diǎn)，所以要求從事絲狀真菌檢測(cè)的檢驗(yàn)人員應(yīng)作專業(yè)短期培訓(xùn)；任何實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)建立規(guī)范的涂片鑒定方法，要正確區(qū)分酵母樣真菌或絲狀真菌、毛霉菌和曲霉（有頂囊），對(duì)不常見的真菌不要輕易作為污染菌報(bào)告，（三） 真菌藥敏的質(zhì)量保證建立稀釋法藥敏試驗(yàn)，報(bào)告MIC值的報(bào)告對(duì)臨床更有參考價(jià)值；必須正確掌握終點(diǎn)判斷標(biāo)準(zhǔn)，氟康唑、伊曲康唑、氟胞嘧定等藥物終點(diǎn)允許有20%真菌生長(zhǎng)而兩性霉素B應(yīng)無真菌生長(zhǎng)作為終點(diǎn)；對(duì)無折點(diǎn)的抗真菌藥物藥敏試驗(yàn)報(bào)告可只報(bào)告MIC