食品安全快速檢測(cè)技術(shù)4PPT課件

1、抗原抗體反應(yīng)抗原抗體反應(yīng) 可對(duì)抗原或抗體進(jìn)行定性、定量、定位的檢測(cè) 抗體抗原以非共價(jià)鍵結(jié)合 不可見(jiàn)反應(yīng)：幾秒-幾分鐘 可見(jiàn)反應(yīng)：數(shù)分鐘（小時(shí)、日） 影響因素 電解質(zhì) 溫度 酸堿度第三章第1頁(yè)/共22頁(yè) 酶聯(lián)免疫法 放射免疫法 將同位素分析的靈敏性和抗體抗原反應(yīng)的特異性這兩大特點(diǎn)結(jié)合起來(lái)的免疫標(biāo)記測(cè)定技術(shù) 缺點(diǎn)：需特殊儀器設(shè)備; 一定的防護(hù)條件; 半衰期短及試驗(yàn)廢物難以處理 熒光免疫法 以熒光素和羅丹明作為標(biāo)記物，可在熒光顯微鏡下檢查顯示熒光的復(fù)合物和所在部位 主要用于醫(yī)學(xué)實(shí)踐中各類病原微生物的快速診斷以及組織切片中特異抗體的檢測(cè) 其他 膠體金標(biāo)記第三章第2頁(yè)/共22頁(yè)酶聯(lián)免疫法（酶聯(lián)免疫法（e

2、nzyme immunoassay) 以酶標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗體抗原反應(yīng) 酶結(jié)合物應(yīng)具有雙功能： 高度特異的免疫反應(yīng)、生物催化放大作用 基本方法 間接法 雙抗體夾心法 競(jìng)爭(zhēng)法 生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidin system，BAS） 某些新進(jìn)展第3頁(yè)/共22頁(yè)酶聯(lián)免疫吸附（酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assayenzyme linked immunosorbent assay） 間接法1、將已知可溶性抗原吸附于載體2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗體的待檢液4、溫育后清洗5、加入酶標(biāo)記的二抗6、溫育后清洗7、加入酶作用底物8、測(cè)定反應(yīng)

3、顏色深淺第4頁(yè)/共22頁(yè) 雙抗體夾心法1、將已知抗體吸附于載體上2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗原的待檢液4、溫育后清洗5、加入酶標(biāo)記特異性抗體6、溫育后清洗7、加入酶作用底物8、測(cè)定顏色反應(yīng)深淺酶聯(lián)免疫吸附（酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent enzyme linked immunosorbent assayassay）第5頁(yè)/共22頁(yè) 競(jìng)爭(zhēng)法1、將已知抗體吸附于載體上2、溫育后清洗3、加入可能含特異性抗原的待檢液和酶標(biāo)記的已知抗原液4、溫育后清洗5、加入酶作用底物6、測(cè)定顏色反應(yīng)深淺酶聯(lián)免疫吸附（酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunos

4、orbent enzyme linked immunosorbent assayassay）第6頁(yè)/共22頁(yè) 生物素-親和素系統(tǒng)（biotin-avidin system） 基本概念 生物素：是一種維生素H，經(jīng)活化后，可與抗體、抗原、酶以多 配一的方式共價(jià)結(jié)合，且不影響它們的活性 親和素：從卵蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，可與酶偶合，以1配多的方式對(duì)生物素有很強(qiáng)的親和力 BAS用于檢測(cè)的基本方法： BAB法或BRAB法 BA法 ABC法酶聯(lián)免疫吸附（酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assayenzyme linked immunosorbent assay）

5、第7頁(yè)/共22頁(yè)酶聯(lián)免疫吸附（酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent enzyme linked immunosorbent assayassay）第8頁(yè)/共22頁(yè) 均相酶免疫測(cè)定法 無(wú)需“固定在載體上”；無(wú)需“溫育后清洗” 斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn) 以微孔薄膜為載體，酶免疫反應(yīng)陽(yáng)性結(jié)果在膜上出現(xiàn)色斑點(diǎn) 膠體金標(biāo)記較酶標(biāo)記更為簡(jiǎn)便酶聯(lián)免疫吸附（酶聯(lián)免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assayenzyme linked immunosorbent assay）第9頁(yè)/共22頁(yè)豬肉和尿液鹽酸克倫特羅的豬肉和尿液鹽酸克倫特羅的免疫膠體金法快速檢測(cè)

6、免疫膠體金法快速檢測(cè)第10頁(yè)/共22頁(yè)l “瘦肉精瘦肉精”學(xué)名為鹽酸克倫特羅，醫(yī)學(xué)上又稱克喘素，常用于治療哮喘。學(xué)名為鹽酸克倫特羅，醫(yī)學(xué)上又稱克喘素，常用于治療哮喘。l 由于鹽酸克倫特羅添加于飼料飼喂動(dòng)物后可明顯促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)由于鹽酸克倫特羅添加于飼料飼喂動(dòng)物后可明顯促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng), ,提高提高 瘦肉率瘦肉率, , 所以養(yǎng)殖戶稱其為所以養(yǎng)殖戶稱其為“瘦肉精瘦肉精”，曾在國(guó)內(nèi)外廣泛用于動(dòng)物飼，曾在國(guó)內(nèi)外廣泛用于動(dòng)物飼養(yǎng)養(yǎng)l 生豬食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，個(gè)別會(huì)出現(xiàn)腿抽搐，站不生豬食用瘦肉精后皮毛光亮，呼吸急促，個(gè)別會(huì)出現(xiàn)腿抽搐，站不 穩(wěn)，爬坡困難；宰后豬的肌肉特別鮮紅，后臀肌肉飽滿，肥肉非常薄

7、穩(wěn)，爬坡困難；宰后豬的肌肉特別鮮紅，后臀肌肉飽滿，肥肉非常薄瘦肉精介紹瘦肉精介紹第11頁(yè)/共22頁(yè)瘦肉精介紹瘦肉精介紹l “瘦肉精瘦肉精”化學(xué)性質(zhì)特別穩(wěn)定，加熱到化學(xué)性質(zhì)特別穩(wěn)定，加熱到170時(shí)才能被分解，故一時(shí)才能被分解，故一般家庭廚房加熱不能將其分解破壞般家庭廚房加熱不能將其分解破壞l 食用后在胃腸道吸收快，作用維持時(shí)間持久。中毒后主要癥狀表食用后在胃腸道吸收快，作用維持時(shí)間持久。中毒后主要癥狀表現(xiàn)為頭疼、頭暈、心悸、心慌、面色潮紅、四肢發(fā)抖等癥狀現(xiàn)為頭疼、頭暈、心悸、心慌、面色潮紅、四肢發(fā)抖等癥狀l 違法者使用該物質(zhì)以提高豬的瘦肉率和顏色鮮艷程度，不知情的違法者使用該物質(zhì)以提高豬的瘦肉率

8、和顏色鮮艷程度，不知情的市民市民 錯(cuò)誤地認(rèn)為這樣的肉才是錯(cuò)誤地認(rèn)為這樣的肉才是“好肉好肉”而特別喜歡選購(gòu)而特別喜歡選購(gòu)第12頁(yè)/共22頁(yè)l 食品衛(wèi)生法食品衛(wèi)生法l食品添加劑衛(wèi)生管理辦法食品添加劑衛(wèi)生管理辦法（GB2760）l動(dòng)物性食品中獸藥殘留最高限量動(dòng)物性食品中獸藥殘留最高限量（農(nóng)業(yè)部公告第（農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)，號(hào)， 2002年年12月月24日）規(guī)定：禁用藥物，動(dòng)物性食品中不得檢出：日）規(guī)定：禁用藥物，動(dòng)物性食品中不得檢出： 瘦肉精、沙丁胺醇、西馬特羅等瘦肉精、沙丁胺醇、西馬特羅等31種種l 違法者的法律責(zé)任：民事賠償、行政處罰、刑事處罰違法者的法律責(zé)任：民事賠償、行政處罰、刑事處罰法律規(guī)

9、定法律規(guī)定第13頁(yè)/共22頁(yè)鹽酸克倫特羅殘留檢測(cè)方法鹽酸克倫特羅殘留檢測(cè)方法 l 動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定 （GB5009.192-2003） 第一法：氣相色譜第一法：氣相色譜質(zhì)譜法，檢出限：質(zhì)譜法，檢出限：0.5ppb 第二法：高效液相色譜法，檢出限：第二法：高效液相色譜法，檢出限：0.5ppb 第三法：酶聯(lián)免疫法（第三法：酶聯(lián)免疫法（ELISA篩選法）篩選法） ，檢出限：，檢出限：0.5ppb l 動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅的測(cè)定動(dòng)物組織中鹽酸克倫特羅的測(cè)定氣相色譜氣相色譜/質(zhì)譜法質(zhì)譜法 （NY/T 4682006），檢出限：），檢出限：2.0ppbl

10、動(dòng)物尿液中鹽酸克倫特羅的測(cè)定動(dòng)物尿液中鹽酸克倫特羅的測(cè)定氣相色譜氣相色譜/質(zhì)譜法質(zhì)譜法 （NY/XQ 4212003），檢出限：），檢出限：1.0ppbl 尿液中鹽酸克侖特羅的測(cè)定膠體金免疫層析法尿液中鹽酸克侖特羅的測(cè)定膠體金免疫層析法 （NY/T933-2005），檢出限：），檢出限：3.0ppb 第14頁(yè)/共22頁(yè)豬肉全程監(jiān)控中瘦肉精檢測(cè)方法的選豬肉全程監(jiān)控中瘦肉精檢測(cè)方法的選擇擇生豬飼養(yǎng)生豬飼養(yǎng)屠宰場(chǎng)屠宰場(chǎng)大型批發(fā)市場(chǎng)大型批發(fā)市場(chǎng)零售市場(chǎng)零售市場(chǎng)飼料檢測(cè)飼料檢測(cè)豬尿檢測(cè)豬尿檢測(cè)豬尿檢測(cè)豬尿檢測(cè)豬肉檢測(cè)豬肉檢測(cè)豬肉豬肉檢測(cè)檢測(cè)豬肉豬肉檢測(cè)檢測(cè)酶聯(lián)免疫法酶聯(lián)免疫法免疫膠體金免疫膠體金免疫膠體

11、金免疫膠體金酶聯(lián)免疫法酶聯(lián)免疫法免疫膠體金免疫膠體金篩檢陽(yáng)性篩檢陽(yáng)性GC-MSGC-MS確認(rèn)確認(rèn)大型儀器確認(rèn)大型儀器確認(rèn)政府部門政府部門監(jiān)督抽檢監(jiān)督抽檢GC-MS餐飲業(yè)餐飲業(yè)豬肉豬肉檢測(cè)檢測(cè)免疫膠體金免疫膠體金銷毀和溯源銷毀和溯源陽(yáng)性陽(yáng)性GC-MSGC-MS確認(rèn)確認(rèn)大型儀器確認(rèn)大型儀器確認(rèn)陽(yáng)性陽(yáng)性第15頁(yè)/共22頁(yè)免疫膠體金快速檢測(cè)板的外觀圖免疫膠體金快速檢測(cè)板的外觀圖第16頁(yè)/共22頁(yè) 免疫膠體金快速檢測(cè)板免疫膠體金快速檢測(cè)板(試劑試劑)的結(jié)構(gòu)圖的結(jié)構(gòu)圖第17頁(yè)/共22頁(yè)檢測(cè)原理檢測(cè)原理l鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)試劑板的中央膜面上固定有兩條隱形線，鹽酸克倫特羅快速檢測(cè)試劑板的中央膜面上固定有兩條

12、隱形線，克倫特羅抗原固定在測(cè)試區(qū)作為檢測(cè)線（克倫特羅抗原固定在測(cè)試區(qū)作為檢測(cè)線（T T線），二抗固定在質(zhì)控線），二抗固定在質(zhì)控區(qū)作為對(duì)照線（區(qū)作為對(duì)照線（C C線）。線）。l當(dāng)待檢樣品溶液滴入試劑板加樣孔后，樣品溶液因?qū)游鲎饔猛袭?dāng)待檢樣品溶液滴入試劑板加樣孔后，樣品溶液因?qū)游鲎饔猛蠑U(kuò)散。如果樣品溶液含有相應(yīng)藥物的殘留，藥物將和膠體金顆粒擴(kuò)散。如果樣品溶液含有相應(yīng)藥物的殘留，藥物將和膠體金顆粒上的抗體先行反應(yīng)，因此當(dāng)膠體金顆粒隨樣品溶液擴(kuò)散至上的抗體先行反應(yīng)，因此當(dāng)膠體金顆粒隨樣品溶液擴(kuò)散至T T線時(shí)，線時(shí)，膠體金顆粒上抗體活性位點(diǎn)將因被樣品溶液中的藥物占據(jù)而無(wú)法膠體金顆粒上抗體活性位點(diǎn)將因

13、被樣品溶液中的藥物占據(jù)而無(wú)法與與T T線上藥物抗原結(jié)合；所以當(dāng)樣品中鹽酸克倫特羅含量線上藥物抗原結(jié)合；所以當(dāng)樣品中鹽酸克倫特羅含量1ppb(1ppb(檢檢測(cè)限測(cè)限) )以上時(shí)，試劑板上的以上時(shí)，試劑板上的T T線將較線將較C C線顯色淡或甚至無(wú)顯色，判定線顯色淡或甚至無(wú)顯色，判定為陽(yáng)性。反之，當(dāng)樣品中鹽酸克倫特羅含量在為陽(yáng)性。反之，當(dāng)樣品中鹽酸克倫特羅含量在1ppb1ppb以下或無(wú)殘留以下或無(wú)殘留時(shí)，試劑板上的時(shí)，試劑板上的T T線顯色與線顯色與C C線相近或偏深，判定為陰性線相近或偏深，判定為陰性第18頁(yè)/共22頁(yè)l靈敏度靈敏度 肉樣或組織樣：肉樣或組織樣：1ppb(1ppb(標(biāo)準(zhǔn)前處理標(biāo)準(zhǔn)

14、前處理) )或或5ppb5ppb（簡(jiǎn)單前（簡(jiǎn)單前處理）處理） 尿樣：尿樣： 1ppb(1ppb(標(biāo)準(zhǔn)前處理標(biāo)準(zhǔn)前處理) )l特異性：與沙丁胺醇等苯乙胺類藥物沒(méi)有交叉反應(yīng)；特異性：與沙丁胺醇等苯乙胺類藥物沒(méi)有交叉反應(yīng)；l準(zhǔn)確性：與瘦肉精準(zhǔn)確性：與瘦肉精ELISAELISA試劑盒的檢測(cè)結(jié)果符合率試劑盒的檢測(cè)結(jié)果符合率9090l有效期：半年（冷藏閉光保存）有效期：半年（冷藏閉光保存）膠體金免疫層析法檢測(cè)瘦肉精的技術(shù)指標(biāo)膠體金免疫層析法檢測(cè)瘦肉精的技術(shù)指標(biāo)第19頁(yè)/共22頁(yè)操作步驟操作步驟 于于5ml5ml離心管中加入離心管中加入5g5g左右剪碎或是高左右剪碎或是高速勻速勻漿過(guò)的豬肉組織樣，蓋緊管蓋漿過(guò)的豬肉組織樣，蓋緊管蓋 1 將將裝有樣品的離心管在裝有樣品的離心管在90以上水浴鍋中以上水浴鍋中加熱加熱10 分鐘分鐘 加熱完成后取出冷卻至室溫；可以明顯看加熱完成后取出冷卻至室溫；可以明顯看到底部有溶液滲出到底部有溶液滲出32 吸取吸取3滴（約滴（約100ul）煮出的樣品滲出液到）煮出的樣品滲出液到1.5ml的離心管中的離心管中4第20頁(yè)/共22頁(yè)操作步驟操作步驟