HCG絨毛膜促性腺激素臨床意義

1、專家論著HCG分子結(jié)構(gòu)與免疫定量分析上海第二醫(yī)科大學(xué)瑞金醫(yī)院盧灣分院南洋放免中心 許叔祥教授HCG是婦女妊娠和滋養(yǎng)葉細(xì)胞疾?。肌盒云咸烟?，絨毛膜上皮癌）等診斷、療效隨訪，必不可少的檢測(cè)指標(biāo)，也是婦女生殖激素中測(cè)定最多的項(xiàng)目。HCG以往都使用放射免疫法（RIA）測(cè)定，自從九十年代開(kāi)始，由于各種非放免標(biāo)記免疫技術(shù)的發(fā)展和相應(yīng)自動(dòng)化儀器的誕生，逐漸替代了RIA方法。在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)兩大問(wèn)題：（1）RIA測(cè)定的結(jié)果與現(xiàn)用非放免標(biāo)記免疫（熒光、發(fā)光、時(shí)間分辨熒光等）不相符；（2）診斷妊娠的標(biāo)準(zhǔn)不一致，引起不少實(shí)驗(yàn)室人員和臨床醫(yī)生的費(fèi)解和不適應(yīng)。實(shí)際上這是一次HCG免疫分析技術(shù)的質(zhì)的飛躍，必須深刻的理

2、解和接受。本文擬以從HCG的分子結(jié)構(gòu)和免疫定量分析技術(shù)的發(fā)展來(lái)討論這一重要問(wèn)題。1、 HCG的分子結(jié)構(gòu)和代謝絨毛膜促性腺激素（human chorinic gonadotrophin, HCG）是胎盤合體滋養(yǎng)層細(xì)胞所分泌的一種糖蛋白激素，它的主要功能是維持黃體及降低母體淋巴細(xì)胞的活動(dòng)，防止對(duì)胎兒的排斥反應(yīng)。其分子量為39,000D，由237個(gè)氨基酸組成，其分子包括 ,兩個(gè)鏈（亞單位），鏈分子量為16000D，由92個(gè)氨基酸組成；鏈分子量為23000D，由145個(gè)氨基酸組成。其中鏈的組成與垂體激素、LH、FSH、TSH基本相同；而鏈其羧酸端的最末28-30個(gè)氨基酸與垂體激素不同，為其所獨(dú)有。從上

3、可見(jiàn)在免疫分析中，倘若所用抗體與鏈的位點(diǎn)有結(jié)合，便可能與如上垂體激素，特別是LH發(fā)生交叉結(jié)合而影響檢測(cè)的正確性。反之如能選用專與鏈特異末端位點(diǎn)結(jié)合的抗體，則可避免與垂體激素的交叉反應(yīng)。HCG可因滋養(yǎng)層中巨噬細(xì)胞分泌的酶降解，使鏈中第47、48位氨基酸間裂開(kāi)，成為裂口HCG分子（nicked HCG，nHCG）,此酶也可使,鏈解離，成為游離片段（f-HCG和f-HCG或f-nHCG),而HCG的最終代謝產(chǎn)物是鏈的一個(gè)分子量?jī)H為10KD的雙鏈多肽核心片段(HCG cf)?？梢?jiàn)HCG在血和尿液中存在著不同形式的六種分子，但真正有生物活性的僅只一種，即無(wú)裂口的整分子HCG（Intact HCG），nH

4、CG只有50%的活性，而其余分子完全沒(méi)有活性。圖1：HCG的分子及代謝正常妊娠時(shí)f-HCG不足1.0%,所以測(cè)定沒(méi)有價(jià)值，而在滋養(yǎng)細(xì)胞疾病及唐氏癥發(fā)生時(shí)，由于裂解酶的異常升高，使血液中nHCG、f-HCG、HCG cf異常升高。從上可見(jiàn)，要觀察婦女正常的生理妊娠必須測(cè)定有生理活性的HCG即整分子HCG，而測(cè)定代謝片段是沒(méi)有意義的。f-HCG是沒(méi)有生活理性的，其增高是病理的反應(yīng)，甚至可看作是婦科腫瘤的一種標(biāo)志物。2、 HCG不同測(cè)定方法的比較免疫分析與生化分析的差異主要是因?yàn)橛每贵w來(lái)代替試劑與待測(cè)物質(zhì)來(lái)進(jìn)行反應(yīng)，由于各自的方法不同，或雖用同一種方法，但選用的抗體不同，由于每個(gè)抗體對(duì)同一待測(cè)物分子

5、的結(jié)合位點(diǎn)不同，故所測(cè)定的值不同，甚至差異很大。但若所結(jié)合的是同一分子，雖相互間絕對(duì)值不同，但相互間關(guān)系應(yīng)該一致。為了比較同一方法不同藥盒和同一廠商不同方法間的測(cè)定值，收集了HCG濃度不等的100份標(biāo)本進(jìn)行平行比對(duì)。、不同廠商不同藥盒的測(cè)定結(jié)果選用如下四種產(chǎn)品：、DADE公司RXL-HX磁性非均相酶放大法、DPC公司Immuliee酶放大化學(xué)發(fā)光法、Bayer公司ACS-100直接化學(xué)發(fā)光法、Beckman公司ACCESS酶放大化學(xué)發(fā)光法以RXL-HX為基礎(chǔ)比較各方的測(cè)定值。表一、不同方法HCG測(cè)定結(jié)果的關(guān)系ImmulieeACS-100ACCESS斜率-0.952-0.9620.948截距-

6、3.2303.7042.675相關(guān)系數(shù)0.9990.9960.998可見(jiàn)四個(gè)廠商,四種方法所測(cè)結(jié)果十分相近.、同一廠商不同藥盒的測(cè)定結(jié)果選用不同廠商的不同方法產(chǎn)品來(lái)比較方法學(xué)間的差異是毫無(wú)意義的，很難作出孰是孰非的結(jié)論。為了證明RIA、IRMA、和LIA（發(fā)光免疫分析）的差異，我們選購(gòu)了同一DPC公司生產(chǎn)的RIA法HCG、IRMA法HCG、發(fā)光法（Immulite）HCG和發(fā)光法f-HCG,對(duì)如上標(biāo)本同時(shí)測(cè)定。、以Immulite HCG為基準(zhǔn)，觀察與各方法的關(guān)系表二、DPC不同產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果的比較IRMARIAIRMAF-HCG斜率0.3870.409無(wú)相關(guān)截距105.5122.34相關(guān)系數(shù)0

7、.8700.689可見(jiàn)化學(xué)發(fā)光法結(jié)果與IRMA相關(guān)尚可，但與RIA相關(guān)很差，而與F-HCG完全無(wú)相關(guān)。、IRMA與RIA進(jìn)行對(duì)比（以IRMA的基準(zhǔn)）斜率為0.611，截距為101.3，相關(guān)系數(shù)為0.786，可見(jiàn)IRMA與RIA之間相關(guān)也很差。3、 結(jié)果分析整分子HCG是具有生物活性的分子，而且非常穩(wěn)定；而裂口HCG是不穩(wěn)定的低活性分子。而游離的片段或及尿中排出的核子是完全沒(méi)有活性的。游離的增高見(jiàn)于滋養(yǎng)葉細(xì)胞癌、唐氏癥、睪丸癌。尿核子的增高見(jiàn)于唐氏癥、先兆子癇、卵巢癌、膀胱癌、宮頸癌及睪丸癌。所以測(cè)定不同物質(zhì)有不同的用途和不同的意義。以往對(duì)HCG的測(cè)定都用RIA方法，采用的是多克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)法，實(shí)

8、際其與HCG結(jié)合的位子并不詳細(xì)。后來(lái)為了避免與LH的交叉，選用了與鏈結(jié)合的多克隆抗體競(jìng)爭(zhēng)法，見(jiàn)圖二，其所用標(biāo)記抗原、標(biāo)準(zhǔn)品都是單鏈，所以測(cè)定的并不是整分子HCG，包括了nHCG、f-nHCG、HCG cf等，又由于片段分子小于整分子，與抗體結(jié)合得可能更快、更多，所以測(cè)定的實(shí)際上是混合物，而事實(shí)上個(gè)體間、孕周間是不同的，一旦有滋養(yǎng)葉細(xì)胞病時(shí)影響更大。現(xiàn)在時(shí)代不同了，應(yīng)用發(fā)光、熒光等自動(dòng)化設(shè)備的檢測(cè)已用二株單克隆抗體的夾心法來(lái)捕捉真正具有生物活性的整分子HCG（包括少量低活性的nHCG）而決不會(huì)測(cè)那些游離的無(wú)活性片段，見(jiàn)圖二。這是免疫分析技術(shù)的一大突破，可見(jiàn)四種不同儀器所測(cè)結(jié)果十分一致。由于RIA

9、與現(xiàn)行雙抗夾心法所測(cè)的物質(zhì)不同，所以正常值、臨床診斷閾值也發(fā)生相應(yīng)改變。孕期血和尿HCG的參考范圍見(jiàn)表三、四。表三、孕期尿液HCG濃度的變化（WHO 1ST IRP/537）孕期（受孕后）激素濃度（IU/L）第三周50第四周400第七周5，000-90，000第十周40，000-230，000第十三周40，000-140，000第六個(gè)月8，000-100，000第九個(gè)月5，000-65，000表四、血清中HCG濃度參考范圍男性和未懷孕婦女：5滋養(yǎng)層相關(guān)疾?。?0，000孕期（受孕后）激素濃度（IU/L）第一周550第二周50-500第三周100-10，000第四周1，000-30，000第五周

10、3,500-115，000第六-八周12，000-270，000第十二周15，000-220，000摘自Clinical Laboratory Reference Test目前市場(chǎng)上銷售的HCG命名十分紊亂如HCG，總HCG、HCG、HCG、游離HCG等等，其實(shí)際含義是不明確的，如HCG是指Intact HCG還是nHCG、F-HCG、F-nHCG、HCG cf片段，它們都有免疫活性，而實(shí)際在正常妊娠中測(cè)這些片段是沒(méi)有臨床意義的。要測(cè)整分子具有活性的HCG分子必須使用雙抗體夾心法，不能用多抗競(jìng)爭(zhēng)法。并在標(biāo)簽上必須明確指出是測(cè)整分子HCG。若測(cè)游離片段，也必須用二株特異性的對(duì)鏈單抗，采用夾心法才

11、能真正測(cè)得f-HCG,用于滋養(yǎng)葉細(xì)胞腫瘤的檢測(cè)。POCT（即時(shí)檢驗(yàn)）是近年來(lái)臨床檢驗(yàn)中發(fā)展起來(lái)的一個(gè)分支，包含著很多新的技術(shù)，雖然目前應(yīng)用還不太多，但這將是檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)一次戰(zhàn)略性的變革，國(guó)內(nèi)著名學(xué)者揚(yáng)振華、叢玉隆教授都預(yù)測(cè)在不久的將來(lái)POCT將占整個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目70-80%，它將在有效的提高臨床診斷效率和降低總的醫(yī)療支出中發(fā)揮積極作用，它的重要性也將會(huì)被人們進(jìn)一步的認(rèn)識(shí)和接受。在這同時(shí)也要求POCT的自身質(zhì)量、穩(wěn)定性及與大型設(shè)備檢測(cè)結(jié)果的一致性有進(jìn)一步的提高。HCG檢測(cè)是POCT在臨床上應(yīng)用最早、最廣的一個(gè)項(xiàng)目。我們不能滿足于最初的快速與陰/陽(yáng)定性，因?yàn)镠CG不僅是檢測(cè)早孕，還可用于早期胚胎發(fā)育的監(jiān)測(cè)

12、，宮外孕診斷、及異常妊娠（良、惡性葡萄胎，絨毛癌）的診斷及療效隨訪，均需具體測(cè)值，所以我們迫切希望實(shí)現(xiàn)定量。要定量不僅是分析技術(shù)和相應(yīng)儀器的改進(jìn)，使其呈色具有穩(wěn)定的、寬量程的線性，其中更重要的是要國(guó)際接納，回答“檢測(cè)的到底是什么分子？”。我們高興地看到上海奧普生物醫(yī)藥有限公司研發(fā)出檢測(cè)整分子HCG的定量POCT系統(tǒng)（免疫滲濾反應(yīng)卡和專用定量測(cè)定儀），這是一次理論的提高和技術(shù)的更新?lián)Q代。（本文錄自：中國(guó)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志2004第二期28-31）人絨毛膜促性腺激素（HCG）金標(biāo)法快速定量檢測(cè)的臨床意義女性受精的卵子移動(dòng)到子宮腔內(nèi)著床后，形成胚胎，在發(fā)育成為胎兒的過(guò)程中，孕婦胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層合體細(xì)胞合成

13、，產(chǎn)生大量的人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin HCG）進(jìn)入母體。這種激素（HCG）可通過(guò)孕婦的血液循環(huán)而排泄到尿中。當(dāng)妊娠1-2周時(shí)血液和尿中的HCG水平即可迅速升高，第8-12周可達(dá)到高峰。直至孕期4個(gè)月降至中等水平，并一直維持到妊娠末期。HCG包括有和兩個(gè)亞基，亞基和促黃體激素（LH）、促濾泡激素（FSH）、促甲狀腺生長(zhǎng)激素（TSH）的亞基相同，僅用多抗的免疫學(xué)方法測(cè)定時(shí)互相干擾，有較大的交叉反應(yīng)。亞基的羧端28-30氨基酸為HCG獨(dú)有，故采用亞基制備的特異性單克隆抗體測(cè)定血中HCG可提高特異性，降低交叉免疫反應(yīng)。1、 HCG定性與定量檢測(cè)臨床價(jià)

14、值的分析比較提示人們:應(yīng)改變觀念，充分認(rèn)識(shí)HCG定量檢測(cè)的重要性妊娠的檢測(cè)從雄蟾蜍等動(dòng)物試驗(yàn)開(kāi)始，到妊娠膠乳試驗(yàn)及金標(biāo)早早孕試條的應(yīng)用，均是定性試驗(yàn)。受當(dāng)時(shí)技術(shù)條件的限制，以往需要放射免疫（RIA）法或其他復(fù)雜的方法才能定量檢測(cè)HCG，于是形成了一般人的傳統(tǒng)觀念，即懷孕與否做個(gè)定性的妊娠試驗(yàn)即可。但是隨著HCG檢測(cè)技術(shù)的進(jìn)步，可以在數(shù)分鐘內(nèi)簡(jiǎn)便地定量檢測(cè)HCG，優(yōu)生優(yōu)育也需要了解胎兒發(fā)育的狀況。自發(fā)性流產(chǎn)、宮外孕、滋養(yǎng)層細(xì)胞腫瘤發(fā)病的增高，也使臨床上迫切需要HCG的定量檢測(cè)，僅僅是妊娠試驗(yàn)陽(yáng)性，對(duì)上述疾病無(wú)診斷意義。這是因?yàn)椋? 、定性的妊娠試驗(yàn)HCG含量25mIU/ml，即可顯示陽(yáng)性，而15

15、000mIU/ml也報(bào)告陽(yáng)性，同樣是陽(yáng)性，其HCG含量差600多倍，這么大的差異結(jié)合其妊娠期，臨床上用于早期胚胎發(fā)育監(jiān)測(cè)及許多婦產(chǎn)科疾病的鑒別診斷。2 、各種病理狀況如：宮外孕的診斷、先兆流產(chǎn)保胎的成功與否，滋養(yǎng)細(xì)胞源性腫瘤的診斷和療效觀察，妊娠殘留物的檢測(cè)以及作為腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用，單純?nèi)焉镌囼?yàn)的陽(yáng)性不能反映HCG絕對(duì)值不正常的過(guò)高或過(guò)低，對(duì)上述疾病的診斷不起作用。3 、妊娠的不同時(shí)期，HCG的含量是不一樣的。妊娠第二周HCG含量范圍約在50-500mIU/ml，第三周100-10000mIU/ml，第四周1000-30000mIU/mlHCG含量以此速度不斷快速增長(zhǎng)，直至12周后HCG不再增

16、加，維持在一個(gè)較為平坦的高水平，直至分娩。妊娠不同的周數(shù)與其對(duì)應(yīng)的HCG水平不正常的過(guò)低或過(guò)高，特別是HCG增長(zhǎng)的速率過(guò)慢或過(guò)快均可反應(yīng)可能存在的異常情況。這些HCG含量的變化，定性試驗(yàn)始終是陽(yáng)性，只有定量檢測(cè)才可反映這種含量的變化。因此，改變檢測(cè)觀念從單純的定性妊娠試驗(yàn)，變?yōu)镠CG的定量檢測(cè)是何等的重要！而HCG的定量檢測(cè)可有助于對(duì)上述疾病的動(dòng)態(tài)觀察和輔助診斷，便于明確診斷和有效治療。4 、在妊娠12周內(nèi)的HCG水平的增長(zhǎng)變化，不像人體其他激素那樣的變化幅度很小，正常妊娠時(shí)HCG的增長(zhǎng)速率是極快的。HCG 的濃度每時(shí)每刻都在增加。胚胎發(fā)育正常時(shí)，在妊娠初期，HCG二次相隔48小時(shí)的定量檢測(cè)，

17、第二次增高幅度應(yīng)約為第一次值的66。也就是說(shuō)第一次檢測(cè)是1000mIU/ml的話，48小時(shí)后應(yīng)為1660mIU/ml左右。也有作者提出HCG如果第一次檢測(cè)后約過(guò)2.3-2.5天，HCG濃度較第一次翻一倍。妊娠時(shí)HCG濃度極快的增長(zhǎng)速率特性，可通過(guò)定量檢測(cè)來(lái)輔助區(qū)分正常妊娠和許多異常的病理情況。這些定性妊娠試驗(yàn)時(shí)做不到的。、HCG定量檢測(cè)的重要性可應(yīng)用于正常妊娠時(shí)胚胎發(fā)育狀況的監(jiān)測(cè)，可作為是否會(huì)發(fā)生自發(fā)性流產(chǎn)及保胎成功與否的指標(biāo)，以及流產(chǎn)后是否有妊娠殘留物存在的輔助診斷依據(jù)。HCG定量檢測(cè)的應(yīng)用絕不只是對(duì)宮外孕、滋養(yǎng)層細(xì)胞源性腫瘤等少見(jiàn)疾病的輔助診斷有意義，由于長(zhǎng)期以來(lái)HCG定量只能去某些有良好

18、設(shè)備的中心實(shí)驗(yàn)室才能測(cè)定，目前可能還有不少人沒(méi)有深刻地認(rèn)識(shí)到這一點(diǎn)。因此HCG定量的動(dòng)態(tài)檢測(cè)有很大的臨床需求和應(yīng)用前景，每個(gè)妊娠婦女去了解其是否妊娠時(shí)同時(shí)可了解其胚胎發(fā)育情況。2、U2/HCG-DOT快速定量檢測(cè)的特點(diǎn)、金標(biāo)儀定量檢測(cè)，操作簡(jiǎn)單方便，3分鐘可得檢測(cè)結(jié)果。既可快速定量檢測(cè)血清，又可檢測(cè)尿液中的HCG。凍干膠體金單抗體綴合物試劑穩(wěn)定期至少一年，復(fù)溶后也能穩(wěn)定30天。、超寬量程檢測(cè)范圍：HCG含量25-15000mIU/ml時(shí)標(biāo)本無(wú)需稀釋，高濃度檢測(cè)范圍大于常見(jiàn)進(jìn)口儀器。、樣品無(wú)需復(fù)雜處理，尿液用試劑配套小漏斗和濾紙過(guò)濾即可，新鮮血清可直接應(yīng)用。、內(nèi)存標(biāo)準(zhǔn)曲線，正確可靠；經(jīng)復(fù)旦大學(xué)中

19、山醫(yī)院評(píng)估，與雅培AXSYM、羅氏ELECSY、強(qiáng)生ECI三家儀器試劑同時(shí)對(duì)比測(cè)試，檢測(cè)相關(guān)系數(shù)r=0.940.97。、U2 HCG-DOT是POCT即時(shí)檢驗(yàn)型儀器。特別適用于門診快速檢驗(yàn)。儀器的定位：擁有同位素、化學(xué)發(fā)光或熒光標(biāo)記等大型儀器的二三級(jí)醫(yī)院，U2/ HCG快速定量檢測(cè)可作大型儀器檢測(cè)的補(bǔ)充，在門、急診需立時(shí)得知結(jié)果的場(chǎng)合下使用。U2/HCG定量檢測(cè)系統(tǒng)具有輕、快、價(jià)廉的特點(diǎn)，極好的性能價(jià)格比更適合于計(jì)劃生育系統(tǒng)和中、小醫(yī)院門急診的HCG快速定量監(jiān)測(cè)。6 、HCG快速多次定量檢測(cè)的動(dòng)態(tài)觀察可用于早期胚胎發(fā)育情況的觀察，它不同于其他檢查，不會(huì)對(duì)胎兒造成任何損害。對(duì)保胎及人流以及其他病

20、理情況提供極為有用的數(shù)據(jù)。因此快速HCG定量檢測(cè)既適合用于大醫(yī)院更適合用基層醫(yī)院。二、 最適用于常規(guī)妊娠診斷，在告知是否妊娠的同時(shí)還可以提供胚胎發(fā)育是否正常的信息。HCG定量檢測(cè)的臨床意義1、早孕的診斷及早期胚胎發(fā)育的監(jiān)測(cè)受精卵著床5-7天HCG開(kāi)始升高；胚泡植入10天后HCG快速增多，妊娠9-12周達(dá)到高峰。血清或尿液HCG定量測(cè)定的臨床重要性不只是妊娠的診斷，更有助于了解胚胎及胎兒發(fā)育的狀況，特別當(dāng)有流產(chǎn)癥狀出現(xiàn)后對(duì)于了解胎兒的存活極有幫助。妊娠期的婦女HCG絕對(duì)值不正常地過(guò)高過(guò)低均應(yīng)引起醫(yī)生的注意和病人的重視。HCG的多次定量的動(dòng)態(tài)檢測(cè)，為什么能反映胚胎及胎兒的發(fā)育狀況呢？這是因?yàn)椋?

21、、在妊娠12周內(nèi)的HCG水平的變化，不像人體中其他激素那樣的恒定，HCG的增長(zhǎng)速率是極快的。HCG的濃度每時(shí)每刻都在增加。胚胎發(fā)育正常時(shí)，HCG二次相隔48小時(shí)的定量檢測(cè)，在妊娠初始數(shù)周內(nèi)第二次增高幅度應(yīng)約為第一次值的66。也就是說(shuō)第一次檢測(cè)如果是1000 mIU/ml的話，48小時(shí)后應(yīng)為1660 mIU/ml左右。也有作者提出HCG第一次檢測(cè)后約過(guò)2.5天，HCG濃度較第一次翻一倍。妊娠時(shí)HCG濃度極快的增長(zhǎng)速率特性，胚胎如正常發(fā)育、HCG的增長(zhǎng)應(yīng)符合這種增長(zhǎng)速率，因此可通過(guò)定量檢測(cè)來(lái)輔助區(qū)分正常妊娠和許多異常的病理情況。這是單純性妊娠試驗(yàn)所辦不到的。2 、由于不同妊娠時(shí)間內(nèi)HCG的含量是不

22、同的，我們可以用該時(shí)間段內(nèi)的正常幅度作對(duì)照，由于個(gè)體差異的影響，可觀察增長(zhǎng)速率是否符合胚胎正常生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律。3 、以此HCG的增長(zhǎng)規(guī)律，通過(guò)HCG濃度的變化，是停止不增、不增反降或不正常的過(guò)高過(guò)低，均可提示胎兒發(fā)育的狀況。胎兒正常發(fā)育時(shí)，HCG的增長(zhǎng)速率應(yīng)符合正常規(guī)律，提示胎兒發(fā)育狀況正常。優(yōu)生優(yōu)育關(guān)注胎兒的健康成長(zhǎng)是父母輩十分關(guān)注的問(wèn)題，而胚胎發(fā)育的頭三個(gè)月內(nèi)是最容易發(fā)生問(wèn)題的時(shí)期。而HCG定量動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，有助于辨別是否正常妊娠。尿液HCG定量檢測(cè)，比血清采集更容易。HCG動(dòng)態(tài)定量檢測(cè)另一優(yōu)點(diǎn)是不同于其他檢查，不會(huì)對(duì)胎兒造成任何損害。2、保胎和流產(chǎn)時(shí)HCG定量檢測(cè)的重要意義在妊娠胚胎發(fā)育的不同

23、時(shí)期，觀察HCG定量絕對(duì)值或其變化可了解胎兒發(fā)育的狀況，可預(yù)測(cè)是否會(huì)先兆流產(chǎn)。當(dāng)先兆流產(chǎn)癥狀出現(xiàn)并采取一系列保胎措施后，定期多次定量檢測(cè)HCG，觀察HCG的增長(zhǎng)速率，如果逐漸上升并已接近正常，結(jié)合臨床癥狀綜合分析說(shuō)明保胎成功。如果HCG不同時(shí)間數(shù)次檢測(cè)HCG水平停滯不增或不增反降，再參考臨床癥狀，是否有難免流產(chǎn)可能，應(yīng)盡早處理，以免造成過(guò)期流產(chǎn)。這些情況定性妊娠實(shí)驗(yàn)是不能做到的。人工流產(chǎn)或藥物流產(chǎn)后HCG的定量檢測(cè)對(duì)于監(jiān)測(cè)或證實(shí)滋養(yǎng)層組織是否已完全清除有重要意義。3、宮外孕的輔助診斷宮外孕是危及生命的急診，臨床上急需及時(shí)診斷并采取措施。以HCG增高速率為輔助診斷指標(biāo)結(jié)合其他檢查綜合分析，可以區(qū)

24、分正?；虿徽Ｈ焉?，二次相隔48小時(shí)測(cè)定HCG的增高明顯小于第一次的66%，可提示宮外孕或自發(fā)性流產(chǎn)。宮外孕時(shí)HCG定量值明顯低于正常妊娠同期水平，陰道超聲又未見(jiàn)妊娠囊，結(jié)合臨床癥狀可提示宮外孕；個(gè)別病例在正常妊娠與不正常妊娠間存在一定的重疊，如果HCG4000-6000 mIU/ml時(shí)，用HCG速率增高指標(biāo)不能區(qū)分正常與異常妊娠，可用陰道超聲診斷，不見(jiàn)妊娠囊提示宮外孕。受個(gè)體差異的影響，至今尚無(wú)排除的HCG絕對(duì)最低值，一般可以25 mIU/ml為參考最低值，因?yàn)楫吘箻O少存在有不分泌HCG的不正常滋養(yǎng)層，所以宮外孕的診斷或排除必須根據(jù)臨床癥狀和實(shí)驗(yàn)資料綜合慎重分析，并用同一方法測(cè)定。多篇文獻(xiàn)提

25、示：宮外孕的診斷必須結(jié)合臨床和多種實(shí)驗(yàn)診斷的客觀指標(biāo)綜合分析，不可能僅憑一項(xiàng)指標(biāo)作出診斷。4、HCG定量檢測(cè)對(duì)滋養(yǎng)層疾病的診斷與跟蹤的臨床意義臨床上引起HCG增加最明顯的情況見(jiàn)于絨毛膜組織腫瘤患者。此種滋養(yǎng)層細(xì)胞源性腫瘤分泌的HCG與妊娠時(shí)正常胎盤所合成的HCG相同。正常妊娠頭三個(gè)月后，HCG水平不再繼續(xù)增加，跌落到一個(gè)較平坦的水平。然而在滋養(yǎng)層細(xì)胞瘤患者中，HCG水平可隨瘤的發(fā)展而繼續(xù)升高。血清或尿HCG達(dá)80000mIU/mI而腹部超聲探測(cè)無(wú)胎心，則強(qiáng)烈提示胎塊妊娠，如卵巢腫瘤、絨毛膜上皮癌、葡萄胎等。HCG定量檢測(cè)可用于以上疾病的療效觀測(cè)及預(yù)后判斷：外科切除腫塊后，前三周每周測(cè)血清或尿H

26、CG，直至恢復(fù)到正常水平，以后一年內(nèi)逐月監(jiān)測(cè)，有助于判斷是否復(fù)發(fā)。術(shù)后3-6周HCG水平明顯下跌，如果HCG水平維持在一定的水平或有 所上升，應(yīng)該考慮是否有轉(zhuǎn)移性或持續(xù)性疾病。HCG定量可作為妊娠殘留物存在的輔助診斷指標(biāo)，在胎塊切除、自發(fā)性或誘導(dǎo)性流產(chǎn)、宮外孕手術(shù)治療后，HCG定量監(jiān)測(cè)有助于證實(shí)滋養(yǎng)層組織的完全清除。HCG消除速率個(gè)體差異很大，一般術(shù)后第一天可跌落約1/2，以后數(shù)天中跌落1/2，數(shù)周后可回復(fù)到正常水平。5、HCG定量檢測(cè)可作為腫瘤標(biāo)志物的應(yīng)用HCG定量有助于監(jiān)測(cè)卵巢胚細(xì)胞瘤的治療效果。由于個(gè)體差異的關(guān)系，應(yīng)注意測(cè)定治療前的HCG值作為基準(zhǔn)，與治療后的值相比較，是增加還是減低來(lái)判

27、斷療效。HCG定量在診斷或跟蹤絨毛癌上十分有用，HCG大于40000mIU/ml與不良預(yù)后相聯(lián)系。精原細(xì)胞瘤病人的血清或尿HCG水平如高于正常情況提示預(yù)后差，化療劑量應(yīng)提高。非精原細(xì)胞瘤占睪丸胚細(xì)胞腫瘤的60%，其HCG和AFP水平均增高。在膀胱癌患者，其HCG水平升高意味著疾病的進(jìn)展和放射治療的無(wú)效。6、Down氏綜合癥Down氏綜合癥（DS）死亡率很高，發(fā)生率1/800，隨生育年齡增加顯著升高，但實(shí)際上80%的DS發(fā)生在35歲以上的孕婦。唯一的確診實(shí)驗(yàn)是羊膜穿刺染色體檢查，但是對(duì)35歲以上孕婦穿刺引發(fā)健康胎兒流產(chǎn)的危險(xiǎn)性與DS發(fā)生率幾乎相當(dāng)。患DS的妊娠婦女血清AFP水平比正常平均低25，

28、而對(duì)HCG影響最大，血清HCG水平可比正常情況高兩倍，但與正常妊娠間有相當(dāng)大程度的重疊。DS妊娠婦女在胎齡15-18周（超生確診）時(shí)可定量其血清HCG水平，再按孕婦年齡等計(jì)算其危險(xiǎn)指數(shù)，超標(biāo)者再推薦做羊膜穿刺。HCG定量檢測(cè)中有關(guān)學(xué)術(shù)問(wèn)題的交流1、 HCG現(xiàn)行測(cè)定的方法學(xué)中，正常值和臨床診斷值有時(shí)不完全相同的原因分析由于各種HCG試劑盒所測(cè)的目標(biāo)HCG不同，所以正常值、臨床診斷值也發(fā)生相應(yīng)變化。正如前面所述的在血和尿液中存在著不同形式的六種分子，所以應(yīng)首先了解該試劑盒檢測(cè)的到底是什么分子？整分子HCG、HCG亞基、還是游離片段。例如游離的增高見(jiàn)于滋養(yǎng)葉細(xì)胞癌、唐氏癥、睪丸癌等輔助診斷，不同于妊

29、娠診斷。所以首先要選對(duì)試劑盒，同樣測(cè)定對(duì)象才有可比性，下面會(huì)較詳細(xì)介紹HCG、HCG+、總HCG試劑盒表達(dá)的意思和相互關(guān)系。2、HCG常用的名稱和它們之間的關(guān)系目前HCG試劑盒習(xí)慣稱為完整HCG（intact HCG）、總HCG或HCG-等，稱呼上還沒(méi)有達(dá)到NCCLS（美國(guó)國(guó)立臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)）標(biāo)準(zhǔn)稱呼的要求。HCG免疫化驗(yàn)較清楚的稱呼可以是：僅測(cè)無(wú)裂痕HCG僅僅具有激素功能的HCG（相當(dāng)于生物效價(jià)）無(wú)裂痕HCG+游離=有激素功能HCG+游離有裂痕和無(wú)裂痕HCG=總的HCG有裂痕和無(wú)裂痕HCG+游離=總的HCG+游離等等此外在妊娠血清HCG中，游離-HCG的量是極低的，所占百分比<

30、1%，所以在妊娠HCG定量中沒(méi)有任何理由專門檢測(cè)游離的-HCG，除非廠方使用二個(gè)針對(duì)-亞基的單抗去檢測(cè)總的HCG時(shí)，同時(shí)也將游離-亞基也測(cè)定在內(nèi)，但游離-亞基對(duì)總值沒(méi)有多大影響。以上摘譯于clinical chemistry 43(12):2233-2243HCG及它的游離亞基免疫化驗(yàn)和代謝U2/HCG-DOT即時(shí)檢驗(yàn)快速定量檢測(cè)的是總的HCG，它與總的-HCG， HCG+等試劑盒應(yīng)有可比性。3、HCG常用報(bào)告單位正常參考值及單位間的換算目前存在的幾種報(bào)告模式：（1） 、mIU/ml（毫國(guó)際單位/毫升）：毫國(guó)際單位/毫升的報(bào)告方式，目前比較常用的一種報(bào)告單位。正常參考值：絕大多數(shù)非妊娠婦女血液

31、或尿中的HCG小于5mIU/ml，大于等于25mIU/ml妊娠陽(yáng)性。孕期1周5-50 mIU/ml，2周50-500 mIU/ml，3周100-10000 mIU/ml，4周1000-30000 mIU/ml 在妊娠12周內(nèi)，妊娠的不同天數(shù)HCG以極快的速度增高。（2） 、IU/L（國(guó)際單位/升）：妊娠判斷值、正常參考范圍等與mIU/ml相同，只是表達(dá)數(shù)量級(jí)的不同而已。（3） 、ug/L（微克/升）以HCG重量單位作為結(jié)果表達(dá)目前已經(jīng)很少用，同樣重量的HCG因其純度不同，免疫活性也隨之不同。因此如用ug/L（或ng/ml）表達(dá)HCG水平，必須證明在你的實(shí)驗(yàn)測(cè)定中的HCG每mg含多少國(guó)際單位。用

32、ug/L表達(dá)結(jié)果的試劑盒必須在說(shuō)明書(shū)中注明，在該試劑盒中每mgHCG相當(dāng)于多少國(guó)際單位。4、血清和尿液HCG定量檢測(cè)的關(guān)系和特性同一個(gè)人在同一時(shí)刻的尿與血清的HCG檢測(cè)，雖然是二種截然不同的樣品，但其HCG定量結(jié)果之間有很好的一致性，相關(guān)系數(shù)=0.83，血清HCG濃度在大部分情況下比尿HCG濃度略高；尿液樣品比血清采集容易，深受孕婦歡迎。一般都能滿足臨床需要。由于尿液受飲水量多少等因素的影響，結(jié)果可能有波動(dòng)。因此血清HCG定量比尿液準(zhǔn)確性更好。5、U2/HCG-DOT定量測(cè)試系統(tǒng)和定性妊娠實(shí)驗(yàn)在試劑上的區(qū)別定性妊娠試驗(yàn)層析法紙條上的干燥膠體金單抗綴合物絕大部分不是由冷凍干燥技術(shù)制備，也不能在高

33、度真空環(huán)境下包裝、運(yùn)輸、儲(chǔ)存。在儲(chǔ)存、運(yùn)送過(guò)程中難免活性跌落而影響敏感度。U2/HCG-DOT膠體金試劑采用先進(jìn)的凍干保存技術(shù)，能保證凍干膠體金單抗綴合物穩(wěn)定期長(zhǎng)達(dá)一年以上，復(fù)溶以后也能保證30天的穩(wěn)定。反應(yīng)板的膜選用最好的進(jìn)口硝酸纖維素膜，吸水材料的滲濾流速也有嚴(yán)格的篩選，有最好的顯色準(zhǔn)確性。6、U2/HCG-DOT測(cè)試時(shí)應(yīng)主意哪些主要問(wèn)題 空白板校準(zhǔn)及標(biāo)本板測(cè)試時(shí)，傳感器測(cè)量頭的部位必須與檢測(cè)板孔的位置對(duì)準(zhǔn)并緊貼板孔防止漏光。操作時(shí)按傳感器時(shí)應(yīng)用力一致，恰倒好處，初次操作者測(cè)定前可多做幾次對(duì)準(zhǔn)位置、緊貼板孔的練習(xí)，同一板數(shù)次測(cè)定，其結(jié)果應(yīng)基本相同，防止人為造成測(cè)定結(jié)果值的偏差。據(jù)觀察，發(fā)生

34、測(cè)定結(jié)果二次數(shù)據(jù)相差很大，超出技術(shù)指標(biāo)大都由于傳感器測(cè)量頭部未與檢測(cè)板孔未緊密對(duì)準(zhǔn)。造成部分漏光所致。這是引起二次結(jié)果誤差最常見(jiàn)的原因，應(yīng)特別引起注意。有時(shí)會(huì)出現(xiàn)層析法呈可疑或陰性，而U2/HCG-DOT結(jié)果25Miu/mL，此時(shí)只要HCG-DOT反應(yīng)膜正中有紅色斑點(diǎn)，其結(jié)果不會(huì)有誤。 試劑和標(biāo)本從冰箱取出后不能馬上測(cè)定，必須在室溫中平衡半小時(shí)后再行測(cè)定。參與反應(yīng)的試劑和樣品溫度過(guò)低必然會(huì)影響反應(yīng)結(jié)果，使結(jié)果偏低，影響結(jié)果正確性。 尿液標(biāo)本必須用試劑盒配套的濾紙過(guò)濾。 >15000 mIU/ml高值稀釋測(cè)定時(shí)，尿液可用生理鹽水稀釋，血清可用健康男性血清或小牛血清稀釋，也可用附在試劑盒中的

35、血清樣品稀釋液稀釋血清樣品。7、隨妊娠周數(shù)的增加HCG的濃度快速增高，妊娠周數(shù)應(yīng)如何計(jì)算卵子受精是妊娠的開(kāi)始。由于卵子受精的日期無(wú)法準(zhǔn)確確定，習(xí)慣上妊娠時(shí)間有幾種表達(dá)方法：以上次月經(jīng)的第一天作為妊娠的開(kāi)始；經(jīng)期過(guò)期日即按妊娠第二周計(jì)算。因排卵日不一定在二次月經(jīng)的正中，每個(gè)人月經(jīng)周期的天數(shù)也有很大的不同，有很大的個(gè)體差異，在此階段HCG的上升又是高度快速，所以與妊娠周數(shù)對(duì)應(yīng)的HCG濃度有較大的變化范圍，因此絕大部分情況下，對(duì)HCG定量測(cè)定的精度要求過(guò)高是完全不必要的。如低于對(duì)應(yīng)范圍的低值必須考慮有不正常妊娠的可能，如可能自發(fā)性流產(chǎn)等，此時(shí)測(cè)定二天后HCG濃度有無(wú)顯著上升尤為重要。8、曾發(fā)現(xiàn)病人月

36、經(jīng)過(guò)期數(shù)天，定性妊娠實(shí)驗(yàn)測(cè)HCG25mIu/ml為妊娠陽(yáng)性，過(guò)幾天有恢復(fù)月經(jīng)無(wú)任何臨床異常情況應(yīng)如何解釋 雖然一般HCG濃度25mIu/ml為妊娠陽(yáng)性。但有時(shí)發(fā)現(xiàn)育齡婦女的HCG水平稍許升高，這可能是由于近期的非常早期的自發(fā)性流產(chǎn)引起。約22%的妊娠者在不知曉的情況發(fā)生早期自發(fā)性流產(chǎn)。有許多人未檢查HCG，經(jīng)期過(guò)期一段時(shí)間又來(lái)經(jīng)了。而且月經(jīng)量也較多，這種情況臨床上很多。如果長(zhǎng)期維持在低值水平，應(yīng)作進(jìn)一步檢查了。9、U2/HCG-DOT低濃度曲線應(yīng)用時(shí)注意事項(xiàng)當(dāng)儀器讀數(shù)100mIu/ml時(shí)，如反應(yīng)板膜正中無(wú)肉眼可見(jiàn)的淡紅斑點(diǎn)，可直接報(bào)告25mIu HCG/ml，不必用低濃度小曲線復(fù)查。當(dāng)儀器讀數(shù)

37、100mIu/ml時(shí)，反應(yīng)膜正中有肉眼可見(jiàn)淡紅色斑點(diǎn)。原檢測(cè)板經(jīng)處理后（方法見(jiàn)詳見(jiàn)低濃度曲線應(yīng)用節(jié)）在低濃度曲線下重新檢測(cè)HCG濃度，可報(bào)告25-99mIu/ml之間的具體單位，供參考。由于HCG濃度增長(zhǎng)速率是極快的，病人體液中HCG數(shù)值每小時(shí)都在變化，在妊娠與妊娠疾病診斷中過(guò)分追求定量的精度是不必要的，我們只要知道其絕對(duì)值是否在一個(gè)很大的正常范圍，不同天數(shù)間二次測(cè)定的HCG是否在不斷上升，后一點(diǎn)更有臨床實(shí)用性。10、妊娠初期如何用HCG的定量動(dòng)態(tài)檢測(cè)來(lái)監(jiān)測(cè)胚胎發(fā)育的狀況妊娠初期，孕婦血清或尿液中的HCG濃度直線上升，如增長(zhǎng)速率二次相隔48h檢測(cè)，第二次值應(yīng)比第一次增高66左右。例如妊娠婦女，

38、如恰好在二次月經(jīng)日的中間受孕，月經(jīng)過(guò)期后第一天約50mIU/ml，第七天就可以上升到100-5000mIU/ml。按妊娠周數(shù)計(jì)算其HCG絕對(duì)值正常提示其胚胎生長(zhǎng)良好，醫(yī)生和孕婦都可放心。HCG絕對(duì)值過(guò)低或HCG濃度增高非常緩慢甚至減低應(yīng)引起醫(yī)生高度注意。11、U2/HCG-DOT低濃度重新檢測(cè)與大型儀器高濃度自動(dòng)稀釋再檢測(cè)，在試劑消耗上有什么區(qū)別U2/HCG-DOT低濃度重新檢測(cè)，是用原測(cè)試過(guò)的反應(yīng)板進(jìn)行處理后再檢測(cè)，不增加用戶成本。大型儀器設(shè)備設(shè)定高濃度自動(dòng)稀釋模式，每稀釋一次，試劑消耗相當(dāng)于重新做一次試驗(yàn)。12、U2/HCG-DOT測(cè)定中標(biāo)本影響因素應(yīng)注意那些問(wèn)題極個(gè)別病人由于標(biāo)本因素影響

39、HCG的檢測(cè)見(jiàn)于下列情況：（1）血清標(biāo)本由于血脂增高發(fā)生嚴(yán)重脂血（2）多種原因?qū)е氯苎臉?biāo)本（3）冰凍后的陳舊性血清未離心去除微小沉淀物（4）尿液標(biāo)本未作過(guò)濾處理由于以上原因，脂血、溶血、血清沉淀物、尿酸鹽類、粘絲等多種物質(zhì)影響試驗(yàn)中的滲濾速度，也就是較大地改變了反映時(shí)間，會(huì)影響結(jié)果。如這些物質(zhì)滯留在反應(yīng)板膜孔的表面，阻塞了硝基纖維膜上的微孔，應(yīng)該洗脫滲濾下去的膠體金無(wú)法滲透到膜下而去除，嚴(yán)重者整個(gè)反應(yīng)膜顯示一片紅色反應(yīng)，而不是中間單獨(dú)存在的紅色斑點(diǎn)。輕者使背景略微加深，但膜正中的紅色斑點(diǎn)在陽(yáng)性結(jié)果中還是會(huì)有的。這就會(huì)使儀器測(cè)定值升高。這種情況在陰性中間無(wú)斑點(diǎn)時(shí)，儀器也可能顯示大于100 mI

40、U/ml。遇有這種情況，一定首先用肉眼觀測(cè)反應(yīng)板正中有無(wú)紅色斑點(diǎn)，如無(wú)紅色斑點(diǎn)，而整個(gè)反應(yīng)膜呈現(xiàn)整體紅色，儀器顯示大于100 mIU/ml以上，必須將標(biāo)本重新處理后再測(cè)定。在任何情況下，無(wú)紅色斑點(diǎn)不能報(bào)陽(yáng)性結(jié)果!13、HCG正常參考值及懷孕不同時(shí)間的國(guó)內(nèi)參考值HCG不同孕期的正常參考值，國(guó)外資料詳見(jiàn)Clinical Laboratory Reference Test，本手冊(cè)，以下國(guó)內(nèi)資料摘自衛(wèi)生部醫(yī)政司，全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程2006年11月第3版，520。正常情況下血清HCG濃度：U/L孕婦 0.21孕周： 5 50 U/L12孕周： 50 500 U/L23孕周： 100 5 000 U/L

41、34孕周： 500 10 000 U/L45孕周： 1 000 500 000 U/L56孕周： 10 000 100 000 U/L68孕周： 15 000 200 000 U/L812孕周： 10 000 100 000 U/L該書(shū)強(qiáng)調(diào)“由于各廠商的產(chǎn)品不同以及各地區(qū)的實(shí)驗(yàn)室差異，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值”。HCG定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）1、產(chǎn)品名稱通用名：人絨毛膜促性腺激素（HCG）金標(biāo)法快速定量檢測(cè)試劑盒；商品名：HCGDOT。2、規(guī)格體外診斷試劑盒， 40人份/盒。3、反應(yīng)原理、配套儀器及產(chǎn)品性能本試劑反應(yīng)原理為固相的夾心法免疫試驗(yàn)。HCG由和二個(gè)亞基構(gòu)成。待測(cè)樣品血清或尿，

42、流經(jīng)本試劑盒的反應(yīng)板中的硝基纖維素膜時(shí)，其中所含的HCG能為膜上固定的抗HCG單抗特異性地捕獲，并專一性地與紅色膠體金HCG單抗綴合物結(jié)合呈紅色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)紅色強(qiáng)度可用儀器定量測(cè)試，它與樣品中HCG濃度呈正比。本試劑盒以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)HCG為參比，制備儀器內(nèi)存標(biāo)準(zhǔn)曲線，可快速定量尿和血清中的HCG。本試劑的配套儀器Uppergold U2金標(biāo)法定量讀數(shù)儀，定量值為100-15000 mIU /ml，小于100時(shí)無(wú)法讀出，顯示為“100 mIU HCG/ml”，此時(shí)可用肉眼判斷，凡反應(yīng)板無(wú)肉眼可見(jiàn)紅色斑點(diǎn)，測(cè)定值應(yīng)為25；凡有顯色斑點(diǎn)，25 mIU HCG /ml測(cè)定值100 mIU HCG / ml。4、產(chǎn)品組份組份及試驗(yàn)用具名稱主要活性成分濃度數(shù)量1. 反應(yīng)板-HCG單抗、致敏濃度1.5-2.0mg/ml      40塊2. 封閉液1%BSA PH7.4 PBS溶液       &#