核酸檢測試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）

1、體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則核酸檢測試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（征求意見稿）核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)泛指以擴(kuò)增叫恥為手段，從而篩查 特定基因的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（tcr）、連接酶鏈反應(yīng) （lcr）、轉(zhuǎn)錄依賴的擴(kuò)增反應(yīng)（1w）等。核酸檢測試劑是基于 核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、 特定疾病的早期診斷和體內(nèi)物質(zhì)的型別鑒定等不同領(lǐng)域。為規(guī)范 核酸檢測試劑的生產(chǎn)及質(zhì)量控制，特制定本技術(shù)指導(dǎo)原則，并將 根據(jù)核酸檢測技術(shù)的發(fā)展?fàn)顩r適吋進(jìn)行修改。一、基本要求1、核酸類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)獲得醫(yī)療器械生產(chǎn)許可 證。z核酸類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)具有與其技術(shù)要求相適應(yīng) 的人員

2、、環(huán)境、設(shè)施和儀器設(shè)備等條件，建立專用實(shí)驗(yàn)室，配備 滿足核酸提取和擴(kuò)增檢測以及操作人員防護(hù)所需的設(shè)備。實(shí)驗(yàn)室 應(yīng)當(dāng)嚴(yán)格分區(qū)，人員和物品應(yīng)當(dāng)單向流動，以最大限度地防止實(shí) 驗(yàn)過程中樣品之間的污染和避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。3.核酸類檢測試劑的生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照體外診斷試劑生產(chǎn) 實(shí)施細(xì)則（試行）的要求，建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，并應(yīng)通 過體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行） 的考核。4核酸類檢測試劑的生產(chǎn)單位應(yīng)當(dāng)對試劑的使用范圍作出 明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品管理部門批準(zhǔn)。引物設(shè)計應(yīng)當(dāng)符合核酸 檢測設(shè)計的要求，擴(kuò)增體系應(yīng)設(shè)定合理的內(nèi)標(biāo)和外標(biāo)，試劑須設(shè) 置抗污染的特定措施，擴(kuò)增產(chǎn)物須進(jìn)行確證研究。5核

3、酸類檢測試劑的原材料應(yīng)制訂相關(guān)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)符合 現(xiàn)行中國藥典或中國生物制品主要原輔料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的要 求。使用未列入上述標(biāo)準(zhǔn)的化學(xué)試劑，應(yīng)不低于分析純。二、原材料應(yīng)提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標(biāo)準(zhǔn)品等的 選擇與來源、制備過程、質(zhì)量分析和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等的相關(guān)研究資料。 如果主要原材料來自市場（從其他單位購買），應(yīng)提供的資料包 括：對物料供應(yīng)商審核的相關(guān)資料、購買合同、供貨方提供的質(zhì) 量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應(yīng)無 zse和inase污 染。1、dnip脫氧三磷酸核昔，核酸的組成成分，包括：dair duib dgib dcip和 d

4、ttr 應(yīng)為 hplc純、fcr級，無 enase和 rnase污染。 辺ctc保存。a引物由一定數(shù)量的核昔酸構(gòu)成的特定序列，通常采用ns合成儀 人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。凍干粉，1800d以上。序列正確。純度應(yīng)達(dá)到電泳級（bw 或hplc級，不含雜帶。應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢 證明，如rage電泳結(jié)果或hplc分析圖譜。應(yīng)作hplc分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計測定 od260nn/od280rm的比值在1. & 2 0之間，可視為合格引物。 tctc保存。3探針是指特定的帶有示蹤物（標(biāo)記物）的已知核酸片段（寡聚核 昔酸片段），能與互補(bǔ)

5、核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的 探測。通常采用 z合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠 電泳或其他適宜方法純化，在3 -鬧標(biāo)記熒光素報告基團(tuán)或其他 發(fā)光標(biāo)記物，在3三揣標(biāo)記熒光素淬滅基團(tuán)，并經(jīng)hplc或其他 適宜方法純化。凍干粉，90d以上。純度應(yīng)達(dá)到iflc純，不含雜帶。應(yīng)提 供合成機(jī)構(gòu)出具的合成產(chǎn)物的質(zhì)檢證明，如hplc分析圖譜；應(yīng) 對探針的核酸序列及標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物進(jìn)行核實(shí)，并作 hplc分析。應(yīng)以可見一紫外分光光度計進(jìn)行204 800nn掃描， 在260nn處應(yīng)有吸收峰。另外，根據(jù)標(biāo)記的熒光素的不同，還應(yīng) 該在熒光素的激發(fā)波長處有吸收峰，如珈熒光素在494rm tet

6、熒光素在521g 碎磯熒光素在560im處有特異的吸收峰，雜 交探針在493im 625im 685rm處有特異的吸收峰，檢定合格后 入庫。避光、tctc保存。4 taq z聚合酶具有z聚合酶活性，無核酸外切酶活性及核酸內(nèi)切酶活 性；具熱穩(wěn)定性，94c保溫1小時后仍保持5玖舌性。一2（tc保 存。5 z （尿卩密噪糖基化酶）具有尿卩密噪糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活 性，iuln3在37c處理3分鐘后，拷貝以下含u模版應(yīng)完全 降解，不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。一2ctc保存。6. r1*r酶（反轉(zhuǎn)錄擴(kuò)增酶）具逆轉(zhuǎn)錄酶活性和z聚合酶活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi) 切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94c 1小時

7、后仍保持5畸性，一2（tc保 存。三、生產(chǎn)工藝核酸類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半 成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應(yīng)符 合要求，原材料應(yīng)混合均勻，配制過程應(yīng)對ph電導(dǎo)率等關(guān)鍵 參數(shù)進(jìn)行有效控制。工藝研究的資料應(yīng)能對反應(yīng)體系涉及到的基本內(nèi)容如樣本 類型、樣本用量、試劑用量、反應(yīng)條件、校準(zhǔn)方法、質(zhì)控方法、 臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。四、質(zhì)量控制（一）半成品質(zhì)量控制1、按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。a以參考品/對照品進(jìn)行半成品質(zhì)量控制。如果產(chǎn)品具有 國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)以其進(jìn)行檢定。如果產(chǎn)品不具有國家標(biāo) 準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)根據(jù)規(guī)定制備相應(yīng)的參考品，或以經(jīng)標(biāo)化的質(zhì) 粒進(jìn)行半成品檢定。3.半成品檢定內(nèi)容包括：對照品符合率、靈敏度、特異性、 精密度。結(jié)果應(yīng)符合要求。4半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時進(jìn)行分裝和包裝。（二）成品質(zhì)量控制1、產(chǎn)品完成包裝