正交試驗法優(yōu)選紅藥片提取工藝探究

1、正交試驗法優(yōu)選紅藥片提取工藝探究【摘要】目的優(yōu)選紅藥片的最佳提取工藝。方法以提取液中人參皂昔rgk人參皂昔rb1.三七皂昔r1的含量之和 以及總固體得率為指標，采用正交試驗法，優(yōu)選提取工藝。結(jié)果處方藥材的最佳提取工藝為70%乙6倍量，提取3次，1 h/次。結(jié)論優(yōu)選的提取工藝各活性部位提取率高?！娟P(guān)鍵詞】正交試驗法；紅藥片；提取工藝study on the extraction process of hongyao tablet by orthogonal designwu xing-mei (first hospital of foshan, foshan, guangdong, 528000

2、,china )abstract objectiveto optimize the extraction process of hongyao tablet. methodsorthogonal test was employed for selecting the optimum of extraction process by the indexes of the contents of ginsenoside rg1, ginsenoside rb1, notoginsenoside r1 and total solid matters. resultssix volumn of 70%

3、 alcohol, extracting 3 times with an hour for each time was considered the optimum extraction process of hongyao tablet. conclusionthe considerable extraction rate active components in the drugs are achieved by applying the selected technics.key words orthogonal test; hongyao tablet;extraction proce

4、ss紅藥片處方收載于中藥成方制劑二十冊中，由三七、川 莒、白芷、當歸、紅花等組成，具有活血止痛、去淤生新的 功效，臨床上用于跌打損傷、淤血腫痛、風(fēng)濕麻木的治療， 取得滿意效果。本處方藥味多，成份復(fù)雜，原制劑工藝簡單, 因此本實驗以最大限度地提取藥材中的有效成份，避免有效成份的分解流失和無效成份的溶出為原則，進行紅藥片提取 文獻報道口:紅藥片具有顯著的抗炎陣痛作用，三七是處方 君藥，有效成份是三七總皂昔。本實驗根據(jù)方中藥物的性質(zhì) 和現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果，以三七的有效成份人參皂昔rg1. 人參皂昔rbk三七皂昔r1的含量之和（以下簡稱i ）及總 固體得率為指標，采用正交試驗法優(yōu)選提取工藝。工藝的研究

5、，以減小劑量、創(chuàng)新劑型,提咼臨床療效。1材料和儀器waters2695/2996型高效液相色譜儀（美國）； 所有藥材均購自廣州致信中藥飲片有限公司。人參皂昔rb1 （批號:110704-200420）.人參皂昔 rg1 （批 號:"0703-200420）、三七皂昔 r1（批號:110745 - 200415） （中國藥品生物制品檢定所b乙月青、甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1含量測定方法的建立2.1.1 色譜條件色譜柱 kromasil c18(250 mm x4.6 mm , 5 pm);以乙睛為流動相a ,以水為流動相b ,按表1中的 規(guī)定進行梯度洗脫；檢測

6、波長為203 nmo理論板數(shù)按三七 皂昔r1峰計算是4 600。2.1.2標準曲線的繪制精密稱取人參皂昔rg仁人參皂昔 rb1,三七皂昔r1對照品適量，加甲醇制成每1 ml含人參 皂昔rg11.011 mg、人參皂昔rb11.004 mg.三七皂昔 r10.501 mg的混合溶液，即得對照品溶液。精密吸取上述 對照品溶液 3jji、5 pl、10 pl 20 pk 25 pl 30 pl，注入液 相色譜儀。按上述色譜條件測定峰面積，以人參皂昔rg1. 人參皂昔rb1.三七皂昔r1微克數(shù)為橫坐標，峰面積積分 值為縱坐標，計算回歸方程，人參皂昔rg1 : y=274 270.16x-81 834.

7、17(r=0.999 9),線性范圍:3.033 30.33 pg ;人參皂昔 rb1 : y=216 159.23x-125 326.50(r=0.999 7), 線性范圍：3.012 - 30.12 pg ;三七皂昔r1 : y=239 788.93x-38 809.08(二0.999 9),線性范圍:1.503-15.03 pg。2.1.3供試品溶液的制備2按處方量稱取藥材提取，精 密移取提取液5 ml ,(乙醇提取液則揮干乙醇后加水5 ml使 溶解),以水飽和的正下醇10 ml ,密塞，振搖10 min ,取上 清液，加3倍量以正丁醇飽和的水，搖勻，放置使分層，取正丁醇層，置蒸發(fā)皿中蒸

8、干，殘渣加甲醇溶解，定容至5 ml , 作為供試品溶液。2.1.4空白溶液的制備按處方量稱取除三七外的其余藥 材進行提取，按“2.1.3”項下制備空白供試品溶液。2.1.5含量測定照中國藥典2005年版一部附錄vi 項高效液相色譜法測定。分別精密吸取對照品溶液與供試品 溶液各10 pl ,注入液相色譜儀，測定，即得。見圖102.2醇提和水提工藝的比較2.2.1按處方量稱取各藥材，加10倍70%的乙醇，提取 兩次，每次1.5 h ,過濾，合并濾液，并定容至1 000 ml量 瓶中，按七.1.3”項下制備供試品溶液。2.2.2按處方量稱取各藥材，加10倍水，提取2次，1.5h/次，過濾，合并濾液，

9、并定容至1 000 ml量瓶中，按u2.1.3j, 項下制備供試品溶液。測定上述兩種藥液中i的含量。結(jié)果見 表2,可見處方采用乙醇提取三七有效成份含量比水提取高30% ,所以確定以乙醇提取藥材。2.3醇提工藝研究!1!2.3.1正交試驗設(shè)計根據(jù)方中藥物的性質(zhì)和現(xiàn)代藥理學(xué)研究結(jié)果，以測定人參皂昔rg、人參皂昔rbk三七皂昔r1 的含量和總固體得率為指標，用正交試驗優(yōu)選三七提取工藝 條件。根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，選取影響提取效果的因素和水平，試驗方案見表3。2.3.2樣品溶液的制備：按處方量稱取三七和其他藥材,按l9 ( 34 )試驗列號各條件分別回流提取、濾過，定容到1 000ml ,放置備用。2.3.

10、3總固體得率的測定：精密量取樣品液100ml ,100 1059干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干后，至干燥箱內(nèi)干 燥5 h,于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，待恒重時，精密稱重，計 算總固體得率。結(jié)果見表4。2.3.4供試品溶液的制備:按“243”項下制備供試品溶液。2.3.5含量測定：按“2廣項測定供試品溶液中i的含量。2.3.6試驗數(shù)據(jù)與方差分析，見表5。2.3.7結(jié)果分析：比較各因素的極差值可以看岀，影響提取效果的因素順序為c>d>a>b ,提取時間、提取次數(shù)對 提取效果影響顯著，確定三七等藥材較優(yōu)的提取工藝條件為a2b1c2d3. a2b1c3d3o2.3.8比較驗證實驗：分別稱取

11、藥材以較優(yōu)的工藝 a2b1c2d3. a2b1c3d3提取，按2廣項下測定供試品溶液 中i的含量，測定總固體得率。經(jīng)驗證兩工藝提取處方中i的 含量、總固體得率無統(tǒng)計學(xué)意義差異。確定處方的最優(yōu)提取工藝為a2b1c2d3，即加6倍70%的乙 次。2.4三七提取率的研究2.4.1三七藥材供試液的制備精密稱定三七粉末(過四號 篩)0.6 g ,精密加入甲醇50 ml ,稱定重量,放置過夜，置 809水浴上保持微沸2 h ,放冷，再稱定重量，用甲醇補足 減失的重量，搖勻、濾過、取續(xù)濾液，即得。按“2廣項下測 定供試品溶液中i的含量，并將此含量作為三七藥材有效成份 含量與供試品進行對照。結(jié)果三七中i的含量

12、為0.095( g/g ), 符合中華人民共和國藥典的要求。2.4.2提取率的計算采用優(yōu)選的提取工藝，測定提取液中 i的含量，結(jié)果i的含量為0.092 ( g/g ),提取率為 0.092/0.095x100% =96.84% ,說明采用的工藝是完全可行 的。3討論3.1通過考察處方的水提、醇提的必要性，發(fā)現(xiàn)：三七中 三七皂昔為三話類化合物，可溶于乙醇、乙醞、丙酮和氯仿, 由于多糖的引入可溶于水。處方中以70%乙醇提取比水為溶 劑的提取效果約高30% ,所以考慮以乙醇提取處方藥材。3.2提取工藝過程中，單因素考察了三七最粗粉、粗粉、 中粉、細粉對提取效率的影響，最后預(yù)試得到，粗粉的提取 效率最高，中粉、細粉可能是粒徑比粗粉小