利巴韋林注射液的細菌內毒素檢查

1、利巴韋林注射液的細菌內毒素檢查一、試劑和樣品：蠻試劑（批號：0508031, 靈敏度：0. 25eu/ml湛江i専康海洋生物有限公司生 產）細菌內毒素工作標準品（內毒素工作標準品2005-6, 100eu/支，中國約品生物 制品檢定所提供）利巴韋林注射液（規(guī)格：100mg/ml,批號：050302生產廠家：廣東南國藥業(yè)有 限公司）二、靈敏度復核：2-1、標準品的準備取細菌內毒索工作標準品一支，輕彈瓶壁，使粉末落入瓶底，然后用砂輪在 瓶頸上部輕輕劃痕，用75%酒精棉球擦拭后啟開，啟開過程應防止玻璃屑落入瓶內。 根據(jù)蛍試劑靈敏度的標示值（025eu/ml）,將細菌內毒素工作標準品2005-6用細

2、菌內毒素檢查用水ind溶解，在旋渦混合器上混勻15分鐘，然后通過稀釋制備成 0. 50eu/ml. 0. 25eu/ml> 0. 125eu/ml 和 0. 06eu/ml 四個濃度的內毒素標準溶液， 每稀釋一步均應在旋渦混合器上混勻30秒鐘。得 10 eu/ml；得 l oeu/ml；得 0.50eu/ml；得 0,25eu/ml；得 0.125eu/ml； 、取51細菌內毒素檢查用水溶解工作標準晶，得1 ooeu/ml； 、取第步溶液0. 2m 1+細菌內毒素檢查用水1.8 ml, 、取第步溶液0. 2ml+細菌內毒素檢查用水1.8 ml, 、取第步溶液l.omr細菌內毒素檢查用水1

3、.0 ml, 、取第步溶液1. 0ml. +細菌內毒索檢查用水1.0 ml, 、取第步溶液1.0ml +細菌內毒素檢查用水1.0 ml,、取第步溶液ml+細菌內毒素檢查用水ml,得eu/ml；、取第步溶液011+細菌內毒素檢查用水ml,得eu/ml；、取第步溶液ml+細菌內毒索檢查用水ml,得eu/ml；2-2、待復核蛍試劑的準備、取第步溶液0. 5ml+細菌內毒素檢查用水0. 5 ml,得 0.06eu/ml；取規(guī)格為0. 1ml/支的蛍試劑18支，放在試管架上，排成5列，其中4列4支, 1列2支。輕彈瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃 屑落入瓶內。每支加入0. l

4、nil檢查用水溶解，輕輕轉動瓶壁，使內容物充分溶解。2-4、加樣4 支 4 列每列分別加入 0. 1ml 的 0. 5eu/ml> 0. 25eu/ml、0. 125eu/ml 和 0. 06eu/ml的內毒索標準溶液，另2支加入0. 1ml的檢查用水作為陰性對照。加樣 結束后，將蛍試劑用醫(yī)用膠布封口，輕輕振動混勻，連同試管架放入37°c水浴或 適宜恒溫器中，試管架保持水平狀態(tài)，保溫60分鐘。2-5.結果記錄及計算方法內毒索濃度0. 50.250. 1250. 06c反應終點平1行2管3數(shù)4xc=lg-1(ex/4)二 lg_1(lg + lg + lg + lg )/4)二e

5、u/ml三、樣品常規(guī)檢查1、限值l=0. 15eu/mg （中國藥典 2005 版）。2、計算ivdmvd=cl/ 入=100x0. 15h-0. 25=603、供試品溶液的制備將樣品利巴韋林注射液稀釋到30倍和60倍備用。 、取原溶液0. 2ml+細菌內毒素檢查用水1. 8 ml,得10倍; 、取第步溶液0. 5ml+細菌內毒素檢查用水1.0ml,得型倍； 、取第步溶液1. 0ml+細菌內毒素檢查用水1.0ml,得阻倍；4、蛍試劑的準備取規(guī)格為0. 1ml/支的蛍試劑8支，放在試管架上，排成4列，每列2支。輕 彈瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后啟開備用，防止玻璃屑落入瓶內。 每支加入0. lnil檢查用水溶解，輕輕轉動瓶壁，使內容物充分溶解。4、操作加樣4-1.樣品陽性對照：（做2管）取利巴韋林注射液的30倍稀釋液和濃度為1. oeu/ml的內毒素稀釋液各0. 3ml混 合均勻,取該混合液0. bnl加入已經復溶好的蛍試劑（x =0. 25eu/ml）中即可。4-2、陽性對照:（做2管）取0. lml濃度為0. 5eu/ml的內毒素稀釋液加入已經復溶好的蛍試劑（入二0. 25eu/ml） 中即可。4-3、樣品檢查：（做2管）取利巴韋林注射液的60倍稀釋液加入已經復溶好的崔試劑（入二025eu/nil）中即