培養(yǎng)基配制及適用性檢查操作規(guī)程（可編輯）

1、題目培養(yǎng)基配制及適用性檢查操作規(guī)程共3頁(yè)編碼:0s-zl037-02制定人審核批準(zhǔn)人制定口期審核口期批準(zhǔn)口期頒發(fā)部門(mén)質(zhì)量部頒發(fā)數(shù)量2份生效fi期分發(fā)單位質(zhì)量部1目的：建立一個(gè)培養(yǎng)基配制操作規(guī)程，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確。2范圍：適用于微生物限度檢查用培養(yǎng)基。3責(zé)任人：質(zhì)檢員、化驗(yàn)主管。4內(nèi)容：4. 1微生物限度檢查用培養(yǎng)基的配制4. 1. 1配制用具：蒸汽滅菌器、電爐、搪瓷缸、玻璃棒、三角瓶、棉塞、細(xì)繩、 牛皮紙、天平、量筒。4. 1. 2根據(jù)配制量稱(chēng)取干燥培養(yǎng)基質(zhì)，置撼瓷缸屮，加入規(guī)定的純化水或瓊脂 等使其溶解，將搪瓷缸放到電爐上加熱煮沸。4. 1. 3根據(jù)培養(yǎng)基的配方要求調(diào)節(jié)ph值，將配好的培養(yǎng)

2、基分裝到若干個(gè)三角 瓶屮，瓶口塞好棉塞，蓋上牛皮紙捆扎好，放入滅菌器屮，滅菌條件為121°c高 壓滅菌15分鐘。4. 1.4ph7.0氯化鈉蛋引東緩沖液成分（g/l）蛋口月東氯化鈉磷酸二氫鉀磷酸氫二鉀重量lg4.3g3.56g723g方法：稱(chēng)取使用該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水緩沖液16克，加入1000ml純化水 屮，微溫溶解，分裝，115°c高壓滅菌30分鐘備用。將配好的緩沖液分裝到若干 支試管中，直接接種法緩沖液9ml/管，試管i i塞好棉塞；放入滅菌器中進(jìn)行滅菌。4. 1.5營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基成分（g/l）蛋口月東氯化鈉牛肉膏粉瓊脂重量10g5g3g15g方法：稱(chēng)取使用該處方

3、生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基33克，加入1000ml純化水 中，加熱煮沸溶解，分裝，121°c高壓滅菌15分鐘備用。4. 1.6玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基成分（g/l）重量成分(g/l)重量5g葡萄糖10g硫酸鎂0.5g磷酸二氮鉀lg瓊脂14g玫瑰紅鈉0.0133g方法：稱(chēng)取使用該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基30.5克，加入1000ml純化 水屮，加熱煮沸溶解，分裝，121°c高壓滅菌15分鐘備用。4. 1.7膽鹽乳糖培養(yǎng)基成分(g/l)重量成分(g/l)重量腺20g牛膽鹽10g乳糖5g磷酸氫二鉀4g氯化鈉5g磷酸1氫鉀1.3g方法：稱(chēng)取使用該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基37克，

4、加入1000ml純化水中，加熱煮沸溶解，分裝，121°c高壓滅菌20分鐘備用。4. 1. 8培養(yǎng)基配制注意事項(xiàng)：(1) 采用干燥培養(yǎng)基，按說(shuō)明配制，應(yīng)對(duì)滅菌后的培養(yǎng)基ph進(jìn)行校驗(yàn)。(2) 配制的培養(yǎng)基不應(yīng)有沉淀，應(yīng)于溶化后趁熱過(guò)濾，滅菌后使用。(3) 培養(yǎng)基的分裝量不得超過(guò)容器的2/3,以免滅菌時(shí)溢出。包裝時(shí)，塞 子必須塞緊，以免松動(dòng)或脫落造成染菌。(4) 培養(yǎng)基配制后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)滅菌，避免細(xì)菌繁殖。(5) 滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)保存在225°c,防止污染，可在3周內(nèi)用畢；保 存于密閉容器中，可在1年內(nèi)使用。制備好的培養(yǎng)基放置時(shí)間不宜過(guò) 長(zhǎng)，以免水分散失及染菌。(6) 宜采用水浴

5、加熱熔化瓊脂培養(yǎng)基，勿用電爐直接熔化瓊脂培養(yǎng)基，以 免營(yíng)養(yǎng)成份過(guò)度受熱而破壞。(7) 已熔化的培養(yǎng)基應(yīng)8小時(shí)內(nèi)一次用完，剩余培養(yǎng)基不宜再用。4.2培養(yǎng)基的適用性檢查4. 21微生物限度檢查中計(jì)數(shù)用培養(yǎng)基包括:(營(yíng)養(yǎng)瓊脂、玫瑰紅鈉瓊脂)、控 制菌檢查用培養(yǎng)基包括膽鹽乳糖培養(yǎng)基。4. 2. 2計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢查試驗(yàn)用菌株大腸埃希菌(escherichiacoli) cmcc (b) 44102金黃色葡糖球菌(staphylococcus aureus) cmcc (b) 26003枯草芽砲桿菌(bac訂lus subt訂is) cmcc (b) 63501白色念珠菌(candida albica

6、ns) cmcc (f) 98001黑曲霉菌(aspergillus niger) cmcc (f) 98003銅綠假單胞菌(pseudomonas aeruginosa) cmcc (b) 101044. 2. 3檢查方法4. 2. 3. 1培養(yǎng)基制備 按規(guī)定程序新鮮配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂（被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng) 基）、玫塊紅鈉培養(yǎng)基（被檢培養(yǎng)基和對(duì)照培養(yǎng)基）、膽鹽乳糖培養(yǎng)基，滅菌后備 用。4. 2. 3. 2營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基4. 2. 3. 2. 1方法:取7個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種大腸埃希菌、金黃色葡糖球菌、 枯草芽砲桿菌各2皿，每皿接種1ml菌液（含菌50loocfu）,另一平皿不接種 菌作為空白對(duì)照，

7、傾注對(duì)照營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后于3035°c倒置培 養(yǎng)48h, i|-數(shù)；被檢培養(yǎng)基同法操作。4. 2. 3. 2. 2結(jié)果判斷：若被檢培養(yǎng)基的菌落平均數(shù)不小于對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平 均數(shù)的70%,且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致，則判斷該培養(yǎng)基 的適用性檢查符合規(guī)定。4. 2. 3. 3玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基4.2. 3. 3. 1方法：取5個(gè)無(wú)菌平皿，分別接種白色念珠菌，黑曲霉菌各2皿， 每皿接種lml菌液（含菌50loocfu）,另一平皿不接種菌作為空白對(duì)照，傾注 對(duì)照玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固后于倒置培養(yǎng)72h,計(jì)數(shù)；被檢培養(yǎng)基同 法操作。4. 2. 3. 3.

8、 2結(jié)果判斷：若被檢培養(yǎng)基的菌落平均數(shù)不小于對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落平 均數(shù)的70%,且菌落形態(tài)、大小應(yīng)與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致，則判斷該培養(yǎng)基 的適用性檢查符合規(guī)定。4. 2. 3.4膽鹽乳糖培養(yǎng)基4.2. 3.4. 1方法：新鮮配制100ml/瓶的對(duì)照膽鹽乳糖培養(yǎng)基4瓶，121°c滅菌 15min,備用。分別接種大腸埃希菌、銅綠假單胞菌以及金黃色葡糖球菌各一瓶, 接種菌液量lml （不大于loocfu）,另一瓶不接種菌作為空白對(duì)照；被檢培養(yǎng)基 同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。4.2. 3.4.2結(jié)果判斷：培養(yǎng)18小時(shí)，與對(duì)照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基屮試驗(yàn)菌 應(yīng)生長(zhǎng)良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁；

9、培養(yǎng)48小吋，空白培養(yǎng)瓶和接種金黃 色葡糖球菌的培養(yǎng)瓶應(yīng)不得渾濁。4. 2. 3. 5mug 培養(yǎng)基4.2. 3. 5. 1方法：新鮮配制5ml/支的對(duì)照mug培養(yǎng)基,121°c滅菌15min,備用。 取3支，接種大腸埃希菌2支，接種菌液0.加1 （不大于loocfu）,另支不接 種菌作為空白對(duì)照，培養(yǎng)5小時(shí)，在366nm紫外光燈下觀察結(jié)果；被檢培養(yǎng)基同 法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。4. 2. 3. 5. 2結(jié)果判斷：空白培養(yǎng)管應(yīng)不得渾濁，且366nm處觀察無(wú)熒光；與對(duì)照 培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基中試驗(yàn)菌應(yīng)生長(zhǎng)良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基變渾濁，366nm 處應(yīng)呈現(xiàn)熒光。若熒光不明顯，則可延長(zhǎng)至

10、24h。4. 2. 3. 6麥康凱瓊脂培養(yǎng)基4. 2. 3. 6. 1方法:新鮮配制對(duì)照麥康凱瓊脂培養(yǎng)基,12vc滅菌15min,冷卻至 60°c傾注平1111, 35°c培養(yǎng)箱預(yù)培8h后備用。取5個(gè)無(wú)菌麥康凱瓊脂平板，分別 涂布接種大腸埃希菌和乙型副傷寒沙門(mén)菌各5皿，接種菌液0. 1ml （含菌50 loocfu）,另一平板不接種菌作空白對(duì)照，涂布均勻后于規(guī)定溫度倒置培養(yǎng)；被 檢培養(yǎng)基同法操作。4. 2. 3. 6. 2結(jié)果判斷：培養(yǎng)18小吋，被檢培養(yǎng)基菌落大小、形態(tài)特征及顏色應(yīng) 與對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落一致；培養(yǎng)24小吋，空白平板應(yīng)無(wú)菌落生長(zhǎng)。4. 2. 3. 7四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（ttb）4. 2. 3. 7. 1方法:新鮮配制10ml/支的對(duì)照ttb培養(yǎng)基基礎(chǔ),121°c滅菌15min, 備用。臨用前，無(wú)菌操作加入0.2ml碘試液和0. lml亮綠試液。取5支，分別接 種乙型副傷寒沙門(mén)菌和金黃色葡萄球菌各2支，接種菌液lml （不大于loocfu）, 另一支不接種菌作為空白對(duì)照；被檢培養(yǎng)基同法操作，置規(guī)定溫度培養(yǎng)。4.2. 3. 7.2結(jié)果判斷：培養(yǎng)18小時(shí)，與對(duì)照培養(yǎng)基比較，被檢培養(yǎng)基屮試驗(yàn)菌 應(yīng)生長(zhǎng)良好，表現(xiàn)為液體培養(yǎng)基上清渾濁；培養(yǎng)24h,空白的培養(yǎng)管和接種