病理科優(yōu)化制片及染色流程

1、鄰水縣人民醫(yī)院病理科優(yōu)化石蠟切片1、切片前首先裝好切片刀，把刀牢牢固定，否則，切片中就會(huì)發(fā)生許多人為現(xiàn)象。（最常見的人為現(xiàn)象是波紋，厚薄不均等）。2、 蠟塊裝到切片機(jī)的蠟塊夾上，夾持要平穩(wěn)牢固。調(diào)整好蠟塊的方位，不能偏斜，刀刃與蠟塊的上、下緣平行。切片刀與蠟塊的平面之間應(yīng)保持一定的角度（清除角），一般為38度，以免刀刃面將組織刮壞。3、 修蠟塊時(shí)要循序漸進(jìn)，力爭修出最大面，又要防止小組織被修壞、修光。4、 切片時(shí)連續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，用力要平穩(wěn)、均勻。常規(guī)切片厚35m。5、 切下的蠟片相連成帶狀。待蠟帶切至一定長度時(shí)，右手用鑷子夾住蠟片末端，左手持毛筆輕輕將蠟帶的另一端與切片刀撥離。6、 將蠟片較光滑

2、的一面朝下置于溫水中（通常撈片水溫在42左右），并用鑷子幫助展開，去除皺紋后，選擇完整、無劃痕、厚薄均勻的蠟片，附貼到載玻片上。7、 附貼時(shí)，務(wù)使蠟片與玻片之間無氣泡。玻片一端應(yīng)留有1/3的位置貼號(hào)碼標(biāo)簽用。將蠟片附貼在另外2/3的中心位置。8、 切片放入62烤箱中約3060分鐘烤片，以免發(fā)生脫片。為了防止脫片可以選用涂甘油蛋清片和掛膠片。比較常用的掛膠片有明膠片，APES膠片和多聚賴氨酸膠片等，免疫組化染色尤需要使用膠片。病理科優(yōu)化冷凍切片1、 選取適當(dāng)?shù)男迈r組織塊，放在冷凍托上，放入冷凍切片機(jī)中凍透。2、 修塊、切片。冷凍切片通常厚68m并把切片貼于載玻片上。3、 在酒精燈上輕烤片刻，放入

3、固定液中2分鐘。4、 然后快速HE染色（可在酒精燈上加熱進(jìn)行，以縮短時(shí)間）。5、 封片、貼標(biāo)簽后，送診斷室（15分鐘之內(nèi)完成）。石蠟切片常見問題及優(yōu)化解決方法問題原因解決方法組織發(fā)脆脫水、透明、浸蠟時(shí)間過長、溫度過高，或與組織本身質(zhì)地有關(guān)在切片時(shí)，邊切邊用嘴向蠟片吹氣，可能會(huì)好些切片卷起刀不鋒利，或刀鋒在另一面，或刀角度過大，切片太厚等等更換切片刀口，調(diào)整刀角度在8到10之間，調(diào)整切片厚度在3-5微米左右蠟片彎曲刀鋒不均，切片刀未磨直，切片刀與蠟塊不平行將刀安放平整，調(diào)整蠟塊切面與刀架平行厚薄不均刀、刀座及蠟塊未夾緊，組織太硬，或切片機(jī)主軸太向前，或切片機(jī)已磨損。夾緊刀架，并擰緊相關(guān)螺絲，擺放

4、切片機(jī)主軸在合適位置，找相關(guān)專業(yè)人員對切片機(jī)進(jìn)行維護(hù)，調(diào)整組織脫水程序以對組織合理脫水切片出現(xiàn)裂痕刀有缺口，石蠟內(nèi)有雜質(zhì)，組織內(nèi)有鈣化、骨片或有線結(jié), 也可能會(huì)有棉紙纖維等更換切片刀口，將石蠟過濾后使用，清除蠟塊中的異物，對于骨或者鈣化物先脫鈣后再切片切片不連片，切不下片，切片很厚，或者切片后蠟塊發(fā)白，內(nèi)陷組織脫水不佳先將蠟塊溶解，取出組織，放入加熱水浴的丙酮內(nèi)（80），3060分鐘，再進(jìn)行透明浸蠟包埋切片HE染色操作常規(guī)流程切好的片子應(yīng)在6070左右的烤箱中烘烤30分鐘以上才能進(jìn)行染色。HE染色手工程序：脫蠟1、二甲苯（AR） 5分鐘2、二甲苯（AR） 5分鐘 3、100%酒精（AR、無水乙

5、醇） 1分鐘4、100%酒精（AR、無水乙醇） 1分鐘5、95%酒精（工業(yè)酒精或醫(yī)用酒精） 1分鐘6、80%酒精（工業(yè)酒精或醫(yī)用酒精） 1分鐘7、自來水浸洗 1分鐘以上37稱為進(jìn)水過程。染色1、蘇木素染液 6分鐘2、水冼 1分鐘3、0.5-1%鹽酸酒精分化 片刻（上下三次顏色由藍(lán)變紅）4、自來水沖冼 15分鐘以上（然后95%酒精片刻，主要是避免所帶的水份稀釋以下的伊紅酒精，此步可免）5、1%伊紅酒精浸染 12分鐘6、水冼 1分鐘脫水、透明、封固95%酒精 1分鐘95%酒精 1分鐘100%酒精 1分鐘100%酒精 1分鐘石炭酸二甲苯(1:3) 10秒鐘以上稱為脫水。二甲苯 透明 1分鐘取出后用中

6、性樹膠（上海產(chǎn)，預(yù)先用二甲苯溶解，粘稠度適中即可）封固。染色結(jié)果：核：藍(lán)黑色胞漿：不同程度的粉紅色肌纖維：較深的粉紅色膠元纖維：淡紅色紅細(xì)胞：桔紅色。病理染色注意事項(xiàng)1、 配制染液和其他溶液時(shí)，要根據(jù)需要和染液的保存期限決定配制數(shù)量。2、需要保存再用的染液和試劑，必須貼上標(biāo)簽，注明名稱、濃度、配制日期和用處等，妥善存放。經(jīng)常使用的染液和試劑要經(jīng)常過濾或更換新液。3、 染色器皿須洗滌干凈。必要時(shí)用酸洗液處理。將玻璃器皿浸泡于酸洗液中半天至1天，自來水沖洗數(shù)小時(shí)，再用洗滌劑刷洗，自來水沖洗數(shù)小時(shí)，蒸餾水沖洗后備用。（酸洗液配制：重鉻酸鉀300g，硫酸300ml，蒸餾水（可用自來水）3000ml。先

7、將重鉻酸鉀溶解在蒸餾水中，徐徐加入硫酸。注意：加酸時(shí)必須緩慢！并用玻璃棒不停地?cái)嚢瑁。?、染色是利用染料的不同作用，使組織與染料以不同方式進(jìn)行結(jié)合。常規(guī)染色是蘇木精和伊紅染色（簡稱HE染色）。特殊染色是根據(jù)診斷的需要對組織中的某些成分進(jìn)行非常規(guī)的染色。冷凍切片也用HE染色。少量或單個(gè)冷凍切片時(shí)手工操作比較方便。冷凍切片染染色要求在短時(shí)間（10分鐘）內(nèi)完成，在保證質(zhì)量的前提下! 越快越好。HE染色常見問題及優(yōu)化解決方法問題原因解決方法染色發(fā)白二甲苯脫蠟時(shí)間不夠，有蠟殘留延長脫蠟時(shí)間或更換二甲苯染色發(fā)灰組織固定脫水不佳或者染液配制PH不符改進(jìn)組織固定脫水程序或者改進(jìn)染液配方著色不均勻染液太少或者

8、分布不均增加染液量或在染液中加入甘油等增強(qiáng)液體親和力染色偏藍(lán)蘇木素染色時(shí)間過久或者分化不足減少蘇木素染色時(shí)間或者延長分化時(shí)間染色偏紅伊紅染色時(shí)間過長或者蘇木素染色不足改進(jìn)蘇木素染色或者減少伊紅染色時(shí)間核著色欠佳組織脫水不佳加強(qiáng)組織固定脫水，將切片用生物穿透劑進(jìn)行處理以利于蘇木素著色病理切片質(zhì)量控制1、 診斷人員在接到當(dāng)日切片并驗(yàn)收后，檢查、核實(shí)所制作的組織學(xué)切片的數(shù)量及質(zhì)量，在技術(shù)室送片記錄本或工作流程單上簽字。如發(fā)現(xiàn)切片數(shù)與取材數(shù)不符，應(yīng)及時(shí)與技術(shù)人員聯(lián)系，進(jìn)行核查。對當(dāng)天質(zhì)量不好的切片做記錄，指明技術(shù)上存在的缺陷，并于當(dāng)天交技術(shù)室。2、 技術(shù)室收到切片質(zhì)量記錄，要求在24小時(shí)內(nèi)答復(fù)，并立即

9、糾正原不足之處。另外，科內(nèi)質(zhì)量管理小組按分工，每季度復(fù)查切片一次，查出問題要采取適當(dāng)措施于以糾正，并注意落實(shí)情況。3、 切片是技術(shù)含量很高的步驟，同一蠟塊，用同一臺(tái)切片機(jī)，同一把刀，不同的操作者會(huì)切出不同質(zhì)量的片子。所以要求：切片刀必須鋒利；切片厚度35m，切片完整，無污染，無皺褶，無刀痕。組織片應(yīng)貼附在標(biāo)簽外，剩余玻片的中間。4、 胃鏡、纖維支氣管鏡、穿刺等小活檢組織切片須作連續(xù)性切片，數(shù)量不得少于6張（620張）。5、 切片、撈片時(shí)應(yīng)嚴(yán)格分塊完成，切忌在水面上殘留上一塊的碎片，以杜絕污染。6、 貼（裱）片時(shí)，必須注意蠟塊編號(hào)與載玻片上的編號(hào)完全一致，杜絕錯(cuò)誤。7、 切好的白片要進(jìn)行烤片化蠟。烤片溫度應(yīng)在6062左右，時(shí)間不能少于20分鐘或用電吹風(fēng)吹。8、 染色必須按程序操作，染色試劑必須及時(shí)過慮或更換。HE染色適中，核、漿分化對比清晰，避免過紅或過藍(lán)（注意防止蘇木素渣子和伊紅碎片出現(xiàn)）。9、 切片封固前必須經(jīng)酒精充分脫水，二甲苯透明，濕封。不得用