細(xì)菌培養(yǎng)及檢測ppt課件

1、細(xì)菌及其培育和檢測的學(xué)習(xí)匯報(bào)目錄第一講微生物細(xì)菌學(xué)第二講細(xì)菌培育第三講大腸桿菌第四講金黃色葡萄球菌第五講真菌學(xué)及其檢測第六講微生物學(xué)及其檢測第一講 微生物細(xì)菌學(xué)細(xì)菌的定義細(xì)菌的形狀細(xì)菌的構(gòu)造細(xì)菌的生理細(xì)菌的定義細(xì)菌是一類具有細(xì)胞壁的單細(xì)胞原核型微生物。通常運(yùn)用顯微測微尺來丈量細(xì)菌的大小，以微米m作為丈量單位細(xì)菌的形狀1.球形 雙球菌：肺炎雙球菌2.鏈球菌：乳酸鏈球菌3.葡萄球菌：金黃色葡萄球菌細(xì)菌的構(gòu)造根本構(gòu)造：細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、核質(zhì)特殊構(gòu)造：莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢.球菌形狀細(xì)菌的構(gòu)造及功能細(xì)菌的構(gòu)造及功能根本構(gòu)造由外到內(nèi)細(xì)菌的依次是 細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞漿 和核質(zhì)。特殊構(gòu)造有莢膜、鞭毛

2、、菌毛和芽孢。 其中能維持細(xì)菌的固有形狀的構(gòu)造是細(xì)胞壁，控制遺傳性狀的是 核質(zhì)， 與細(xì)菌的毒力有關(guān)的構(gòu)造是 莢膜和菌毛，抵抗力強(qiáng) 的是 芽孢， 決議細(xì)菌有無運(yùn)動(dòng)性的構(gòu)造是 鞭毛。芽孢菌體細(xì)菌的生理水分7090：游離水和結(jié)合水固形物(1030：有機(jī)物蛋白質(zhì)、核酸、糖類、脂類、其他和無機(jī)物細(xì)菌的化學(xué)組成細(xì)菌的化學(xué)組成1、自養(yǎng)菌：自養(yǎng)菌具有完備的酶系統(tǒng)，合成才干較強(qiáng)，能以簡單的無機(jī)碳化物作為碳源，合成菌體所需的有機(jī)物質(zhì)。2、異養(yǎng)菌：異養(yǎng)菌不具備完備的酶系統(tǒng)，合成才干較差，必需利用有機(jī)物作為碳源，其代謝所需能量大多從有機(jī)物氧化中獲得。 致病菌多屬異養(yǎng)菌，寄生菌多屬自養(yǎng)菌。細(xì)菌的營養(yǎng)類型細(xì)菌的營養(yǎng)類型水

3、、含碳化合物、含氮化合物、無無機(jī)鹽細(xì)菌的營養(yǎng)物質(zhì)細(xì)菌的營養(yǎng)物質(zhì)1、細(xì)菌繁衍生長的條件：營養(yǎng)物質(zhì)五種營養(yǎng)成分、溫度最適生長溫度37、pH最適7.27.6、浸透壓多在等滲條件下、氣體根據(jù)細(xì)菌呼吸類型2、細(xì)菌的繁衍方式：簡單的二分裂細(xì)菌的生長繁衍細(xì)菌的生長繁衍第二講 細(xì)菌培育根據(jù)某種細(xì)菌的營養(yǎng)需求而選擇多種原料配制而成的培育基，不僅含有這種細(xì)菌生長繁衍所需求的各種營養(yǎng)物質(zhì)，還要有適宜的PH。本實(shí)驗(yàn)所用的牛肉膏蛋白胨培育基，運(yùn)用較廣泛，適于芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌等多種細(xì)菌的培育。配置好的培育基必需經(jīng)過滅菌。對不同的資料該當(dāng)采取不同的滅菌方法。培育基普通采用高壓蒸汽滅菌法，就是將待滅菌的培育基放入密閉

4、的高壓滅菌鍋內(nèi)，經(jīng)過加熱是鍋內(nèi)的冷空氣排進(jìn)以后。封鎖排氣閥并繼續(xù)加熱，這是鍋內(nèi)的壓力就會(huì)升高，最終使菌體蛋白質(zhì)凝固變性，從而到達(dá)滅菌的目的。接種環(huán)是用火焰灼燒滅菌的。將某種菌種在徹底滅菌的培育基上，經(jīng)過一段時(shí)間的培育后，就可以得到生長良好的細(xì)菌群體，它們在培育基上會(huì)呈現(xiàn)一定的形狀特征。1、經(jīng)過對牛肉膏蛋白胨培育基的配置，了解配置培育基的普通步驟和方法。2、了解滅菌的根本原理，以及實(shí)驗(yàn)中常用的滅菌方法。3、初步學(xué)會(huì)細(xì)菌培育的根本技術(shù)。一、細(xì)菌培育的實(shí)驗(yàn)原理二、目的要求大腸桿菌的生長形狀 芽孢桿菌或金黃色葡萄球菌、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂。 天平、角匙、200mL燒杯、試管、漏斗、量筒、玻璃棒、滴管、

5、膠管、彈簧夾、鐵架臺(tái)、酒精燈、石棉網(wǎng)、三腳架、火柴、紗布、棉花、牛皮紙、線繩、標(biāo)簽、接種環(huán)、精細(xì)pH試紙或pH計(jì)、金屬小筐、高壓蒸汽滅菌鍋、恒溫箱 NaCl、1mol/L的NaOH溶液、體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精溶液、蒸餾水。三、資料器具四、細(xì)菌培育的方法和步驟五、培育四、接種三、擱置斜面二、滅菌一、培育基的配置用天平稱取0.5g牛肉膏、1g蛋白胨、0.5gNaCl、2g瓊脂。將稱好的牛肉膏、蛋白胨和NaCl放入燒杯。 稱量 向上述燒杯中參與蒸餾水100ml，用玻璃棒攪勻后，放到酒精燈上加熱。當(dāng)牛肉膏和蛋白胨溶化后，參與瓊脂，并繼續(xù)用微火加熱，在瓊脂溶化的過程中，要控制火力的大小，并且不斷攪拌，以

6、免培育基溢出或燒焦。待瓊脂平安溶化后，補(bǔ)加蒸餾水至100ml。 溶化用滴管逐滴滴入1mol/L的NaCl溶液，邊滴邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙測pH，直到pH為7.47.6為止。 調(diào)pH將培育基趁熱分類到干凈的試管中，培育基的高度約為試管高度的1/5.留意:分裝時(shí)不要將培育基沾在管口和試管上段，以免引起污染。 分裝培育基分裝終了以后，在管口上加一個(gè)棉塞。棉塞能防止雜菌污染，保證通氣良好。加棉塞時(shí)，應(yīng)使棉塞長度的2/3哎試管口內(nèi)。加棉塞一、培育基的配置 每10支試管用線繩捆成一捆，并且在管口外面包上一層牛皮紙，然后，用線繩扎好。在每捆試管外掛上標(biāo)簽，注明培育基稱號、配制日期和制造者姓名。 包扎1翻開

7、高壓蒸汽滅菌鍋，將里面的滅菌桶取出，向鍋內(nèi)加水最好用開水，水面與底架平齊為宜。23456排出鍋內(nèi)的冷空氣。接通電源，當(dāng)壓力上升到49KPa時(shí)，翻開排氣閥放氣，當(dāng)壓力降到0是時(shí)，封鎖排氣閥。反復(fù)上述放氣過程一次，以徹底排出鍋內(nèi)的冷空氣。 當(dāng)鍋內(nèi)的壓力上升到98KPa時(shí)，控制火力大小，使壓力維持在98KPa左右20min。切斷電源。將扎好的試管管口向上豎放在滅菌桶內(nèi)，再將滅菌桶放回滅菌鍋。留意：滅菌桶內(nèi)的物品不能放得太擠，否那么影響滅菌效果。加蓋，并將排氣軟管插入滅菌桶的排氣槽內(nèi)。以兩兩對稱的方式，同時(shí)旋緊相對的兩個(gè)緊固螺栓，以防漏氣。當(dāng)壓力降至0以后，翻開排氣閥，10min以后，旋松緊固螺栓，取

8、出試管。最后。將滅菌鍋里的水排放干凈。二、滅菌三、擱置斜面當(dāng)培育基冷卻50左右時(shí)，將試管帶棉塞的一端擱在一根木棒上。擱置的長度要適宜，使培育基構(gòu)成的斜面的長度不超越試管總長的一半。四、接種13245用肥皂將雙手洗凈，擦干，再用酒精75棉球擦拭雙手。 當(dāng)手上的酒精揮發(fā)終了以后，點(diǎn)燃酒精燈。留意：一定要等手上的酒精揮發(fā)終了后，在點(diǎn)燃酒精燈，否那么，容易將手燒傷。接種 留意：整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作過程都要小心謹(jǐn)慎，不要碰翻酒精燈，以免燒傷。 1用左手大拇指、食指和無名指夾住菌種試管和待接種和斜面試管，右手?jǐn)Q松棉塞，不取下。 2右手拿接種環(huán)，在火焰上燒灼滅菌，特別是箍處。 3在火焰邊取下兩個(gè)棉塞，不能放下;燒灼

9、管口一周。 4將接種環(huán)伸入試管內(nèi)，冷卻后，悄然挑取少量菌體，立刻將接種環(huán)抽出。 5在火焰旁將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸到斜面培育基的底部，由里向外畫蛇形細(xì)線。 6抽出接種環(huán)后。燒管口，塞棉塞，接種環(huán)滅菌。熄滅酒精燈。實(shí)驗(yàn)后的帶菌培育基，假設(shè)用的是致病菌，必需經(jīng)高壓蒸汽滅菌后方可倒掉；假設(shè)是非致病菌，也要經(jīng)過加熱后再倒掉。接種終了，將所接菌種、接種日期、接種者姓名填寫在標(biāo)簽上。五、培育將接種后的試管放入恒溫箱內(nèi)，在25下培育57d，或在37下培育24h。 五、結(jié)論 察看斜面培育基上的細(xì)菌生長情況如何？ 細(xì)菌在液體培育基中生長后，常出現(xiàn)混濁，沉淀或構(gòu)成菌膜。 細(xì)菌接種在固體培育基上，經(jīng)過一定時(shí)間的培育

10、后，外表出現(xiàn)肉眼可見的單個(gè)細(xì)胞集團(tuán)，稱為菌落。液體培育基外表生長均勻混濁生長沉淀生長固體培育基：菌落、菌苔六、討論問題答案1.在高壓滅菌開場之前，為什么要排盡滅菌鍋內(nèi)的冷空氣？在高壓鍋滅菌以前，假設(shè)國內(nèi)的冷空氣沒排盡，當(dāng)壓力上升到98KPa，鍋內(nèi)的溫度就不會(huì)到達(dá)應(yīng)有的溫度，導(dǎo)致滅菌不徹底。2.滅菌終了以后，假設(shè)壓力未降到0就翻開排氣閥，會(huì)出現(xiàn)什么景象？為什么？假設(shè)壓力未降到0就翻開排氣閥，試管內(nèi)的培育基就會(huì)沖出管口，這是由于高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)外的壓力不平衡所致。3.這種操作為什么一定要在火焰旁進(jìn)展？空氣中存在有大量的微生物，而接種燈得火焰旁能構(gòu)成一個(gè)無菌區(qū)域，在這里操作，可以防止雜菌污染。第三講

11、 大腸桿菌定義革蘭氏陰性短桿菌，大小0.513微米。周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，無芽孢。能發(fā)酵多種糖類產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌 特性大腸桿菌是細(xì)菌，屬于原核生物；具有由肽聚糖組成的細(xì)胞壁，只含有核糖體簡單的細(xì)胞器，沒有細(xì)胞核有擬核；細(xì)胞質(zhì)中的質(zhì)粒常用作基因工程中的運(yùn)載體。 代謝大腸桿菌的代謝類型是異養(yǎng)兼性厭氧型。 大腸桿菌1 1、培育：在、培育：在LBLB液體培育基上擴(kuò)展培育液體培育基上擴(kuò)展培育2、分別： 滅菌滅菌 倒平板倒平板 培養(yǎng)培養(yǎng) 劃線分離劃線分離 LBLB液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌液體和固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌將固體培養(yǎng)基倒入將固體培養(yǎng)基倒入4 4個(gè)滅菌后的培養(yǎng)

12、皿中，制備平面培個(gè)滅菌后的培養(yǎng)皿中，制備平面培養(yǎng)基養(yǎng)基在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)12h12h平板劃線法平板劃線法培養(yǎng)皿倒置，培養(yǎng)皿倒置，3737恒溫培養(yǎng)恒溫培養(yǎng)12241224小時(shí)小時(shí)大腸桿菌的培育和分別菌種保管菌種保管培育基的培育基的配制配制滅菌滅菌超凈工件臺(tái)超凈工件臺(tái)倒平板倒平板接種液體接種液體培育培育劃線分別劃線分別培育培育大腸桿菌檢測方法和步驟方法：用平板涂布法將樣品稀釋后每個(gè)水樣做3個(gè)濃度涂布到伊紅美藍(lán)培育基后，待長出菌落，察看符合特征的群落，計(jì)算菌落數(shù)目，從而求出總數(shù)目。培育基成分及其配置1、成分：蛋白胨10g、乳糖 1

13、0g 、磷酸氫二鉀 2g 、瓊脂 2030g、蒸餾水1000ml 、2%伊紅水溶液 20ml、0.5 %美藍(lán)水溶液 13ml 2、配置方法：先將瓊脂加至900ml蒸餾水，加熱溶解，然后參與磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使之溶解，再以蒸餾水補(bǔ)足至1000ml，調(diào)整PH為7.27.4。趁熱用脫脂棉或絨布過濾，再參與乳糖，混勻后定量分裝于燒瓶內(nèi)，置高壓蒸汽滅菌器內(nèi)以115滅菌20min，冷卻備用。臨用時(shí)參與乳糖并加熱溶化瓊脂，冷至5055，參與伊紅和美藍(lán)溶液，搖勻，傾注平板。實(shí)驗(yàn)步驟涂布平板法1 以無菌操作將檢樣25mL(或g)放于有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶內(nèi)(瓶內(nèi)予置適當(dāng)數(shù)量的玻璃

14、珠)或滅菌乳缽內(nèi),經(jīng)充分振搖或研磨做成1:10的均勻稀釋液。以8 000-10 000 r/min的速度處置1min,做成1:10的均勻稀釋液。 2 用1mL滅菌吸管汲取1:10稀釋液1mL,注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi),振搖試管混勻,做成1:100的稀釋液。 3 另取1mL滅菌吸管,按上條操作依次做10倍遞增稀釋液,每遞增稀釋一次,換用1支1mL滅菌吸管。4.將培育基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號，然后用無菌吸管汲取0.1ml菌液對號接種在不同稀釋度編號的瓊脂平板上。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻，每個(gè)稀釋度用一個(gè)滅菌刮鏟，改換稀釋度時(shí)需將刮鏟灼燒滅菌。在由低濃

15、度向高濃度涂抹時(shí)，也可以不改換刮鏟。將涂抹好的平板平放于桌上2030min，使菌液浸透入培育基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培育，至長出菌落后即可計(jì)數(shù)。第四講 金黃色葡萄球菌概括 葡萄球菌屬微球菌科，本菌有19個(gè)菌種，從人體上可檢出12個(gè)種。 葡萄球菌屬主要與皮膚腺體和溫血?jiǎng)游锏恼衬は嚓P(guān)系，有些種是人及動(dòng)物的條件致病菌。 金黃色葡萄球菌對人類有致病性，通常被稱為病原性球菌。金黃色葡萄球菌可引起化膿性炎癥，又稱為化膿性球菌。 易培育，對營養(yǎng)要求不高，在普通培育基中生長良好。需氧或兼性厭氧。最適生長溫度37，最適生長pH 7.4。耐鹽性強(qiáng)，在含1015%的氯化鈉培育基中仍能生長，可用于挑選菌種。在普通營

16、養(yǎng)瓊脂平板上培育1824，可構(gòu)成圓形、外表光滑、不透明的菌落?？僧a(chǎn)生金黃色色素，色素為脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落內(nèi)，不滲至培育中。培育特性 在血平板上可構(gòu)成明顯透明的溶血環(huán)。為型溶血。 可產(chǎn)生卵磷脂，在卵黃高鹽培育基上構(gòu)成周圍有白色沉淀環(huán)的菌落。 大多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅實(shí)驗(yàn)、 VP實(shí)驗(yàn)多為陽性，不產(chǎn)生靛基質(zhì)。觸酶陽性。檢測方法資料與方法1、資料培育基：7.5%NaCl肉湯培育基，血瓊脂平板培育基按常規(guī)方法制造試劑：7.5%NaCl肉湯培育基，革蘭氏染色，血瓊脂平板，Baird-Parker瓊脂平板，生理鹽水，兔血漿1：4，器材：溫箱，顯微鏡，天平，均質(zhì)

17、器，載玻片，L型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，試管及試管架，研磨，1ml注射器，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：安康的小白鼠2、方法 待檢樣品25g+225ml滅菌生理鹽水直接計(jì)數(shù)法 增菌培育方法Baird-Parker瓊脂平板 7.5%NaCl肉湯培育基 血平板 血平板涂片染色鏡 溶血察看動(dòng)物接種實(shí)驗(yàn) 血漿凝固實(shí)驗(yàn)報(bào)告第五講 真菌學(xué)及其檢測 1、真菌是一類具有細(xì)胞壁，不含葉綠素，無根、莖、葉的分化，以寄生或腐生方式生存的真核微生物。異養(yǎng)型。真菌種類多，有10余萬種，大多對人體無害，有的甚至有益。繁衍方式兩種：即無性和有性繁衍。還有少數(shù)真菌，能致人、動(dòng)植物發(fā)病，稱為病原性真菌。一、真菌學(xué)2、分類： 酵母菌酵母菌

18、霉菌霉菌 擔(dān)子菌擔(dān)子菌真真 菌菌二、檢測標(biāo)本直接鏡檢墨汁染色乳酸酚棉藍(lán)染色不染色抗原檢出分別培育二相性真菌氫氧化鉀消化后涂片鏡檢腦心浸液病原性真菌腦心浸液沙氏培育基 血瓊脂平板察看菌落性狀和菌絲孢子形狀顯微鏡檢查濕片法或直接涂片高倍視野鏡檢，見有菌絲孢子或單細(xì)胞真菌有診斷價(jià)值，但不能確定真菌種類第六講 微生物學(xué)及其檢測一、微生物學(xué) 1、 微生物是指廣泛分布于自然界中的一群肉眼看不到的微小生物，具有單細(xì)胞或簡單的多細(xì)胞構(gòu)造，或沒有細(xì)胞構(gòu)造的一群最低等的生物。 2、微生物特性 主要有四個(gè)方面 種類多 分布廣 繁衍快 易變異3、微生物的形狀構(gòu)造4、微生物的化學(xué)組成C，H，O，N，P，S以及其他元素

19、5、微生物的營養(yǎng)物質(zhì) 1 水和無機(jī)鹽 2 碳源:凡能為微生物提供生長繁衍所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì) 3氮源：凡能為微生物提供所必需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì) 來源：周圍環(huán)境中得有機(jī) 無機(jī)含氮物質(zhì) 作用:主要用于合成蛋白質(zhì)，核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物 4 能源:能為微生物生命活動(dòng)提供最初能源來源的營養(yǎng)物質(zhì)或輻射能 5生長因子：微生物生長不可短少的微量有機(jī)物 6、微生物檢測步驟一、液體樣品： 1、打來紫外燈滅菌30min 2、把一切做誒生物的物品一并帶入無菌室 3、用酒精棉對手進(jìn)展消毒，取出滅菌平皿并編號根據(jù)本廠的菌落數(shù)進(jìn)展編號以下樣液的菌落數(shù)小于100 4、用滅菌吸管汲取1ml滅菌鹽水放入編號為“0的平皿中 5、喲偶那個(gè)滅菌吸管分別汲取1ml樣品放入編號為原液的兩個(gè)平皿中假設(shè)盛裝樣液的容器誒桶裝那么應(yīng)先把樣液轉(zhuǎn)入滅菌容器中再進(jìn)展取樣 6、汲取樣液1ml放入滅菌的9ml鹽水中，搖勻后分別