第六章病原菌檢測(cè)

1、第六章第六章 食品中常見(jiàn)病原微生物食品中常見(jiàn)病原微生物檢驗(yàn)技術(shù)檢驗(yàn)技術(shù)衛(wèi)生部：食品中致病菌含量將設(shè)底線衛(wèi)生部：食品中致病菌含量將設(shè)底線 衛(wèi)生部衛(wèi)生部20112011年發(fā)布通知，就年發(fā)布通知，就食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中致病菌限量病菌限量征求意見(jiàn)。新標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了下列等征求意見(jiàn)。新標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了下列等1717類(lèi)食品中可能出類(lèi)食品中可能出現(xiàn)的沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等現(xiàn)的沙門(mén)氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌等8 8種致病菌的含量。種致病菌的含量。肉及肉制品肉及肉制品水產(chǎn)品水產(chǎn)品蛋制品蛋制品糧食制品糧食制品豆類(lèi)制品豆類(lèi)制品焙烤及油炸類(lèi)食品焙烤及油炸類(lèi)食

2、品糖果、巧克力類(lèi)及糖果、巧克力類(lèi)及可可制品可可制品蜂蜜及其制品蜂蜜及其制品加工水果加工水果藻類(lèi)制品藻類(lèi)制品飲料類(lèi)飲料類(lèi)冷凍飲品冷凍飲品發(fā)酵酒及其配制酒發(fā)酵酒及其配制酒調(diào)味品調(diào)味品脂肪，油和乳化脂脂肪，油和乳化脂肪制品肪制品果凍果凍即食食品即食食品食品食品致病菌指標(biāo)致病菌指標(biāo)食品食品致病菌指標(biāo)致病菌指標(biāo)肉及肉制品肉及肉制品沙門(mén)氏菌、空腸彎曲菌沙門(mén)氏菌、空腸彎曲菌水產(chǎn)品水產(chǎn)品沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌副溶血性弧菌副溶血性弧菌大腸埃希氏菌大腸埃希氏菌O157:H7/NMO157:H7/NM蛋制品

3、蛋制品, ,糖果、巧克力類(lèi)及糖果、巧克力類(lèi)及可可制品可可制品沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌豆類(lèi)制品豆類(lèi)制品沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌糧食制品糧食制品單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌蜂蜜及其制蜂蜜及其制品品, ,即食食品即食食品沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌調(diào)味品調(diào)味品沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌藻類(lèi)制品藻類(lèi)制品沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌副溶血性弧菌副溶血性弧菌副溶血性弧菌副溶血性弧菌果凍，加工水果，飲料類(lèi)果凍，加工水果，飲料類(lèi)冷凍飲品，發(fā)酵酒及其配冷凍飲品，發(fā)酵酒及其配制

4、酒制酒, ,焙烤及油炸類(lèi)食品焙烤及油炸類(lèi)食品脂肪，油和乳化脂肪制品脂肪，油和乳化脂肪制品沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌沙門(mén)氏菌沙門(mén)氏菌金黃色葡萄球菌金黃色葡萄球菌志賀氏菌志賀氏菌阪崎腸桿菌阪崎腸桿菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌單核細(xì)胞增生李斯特氏菌空腸彎曲菌空腸彎曲菌副溶血性弧菌副溶血性弧菌變形桿菌變形桿菌耶爾森菌耶爾森菌大腸艾希氏菌大腸艾希氏菌一般情況下，食品致病菌檢測(cè)多集中在沙門(mén)氏菌、金黃一般情況下，食品致病菌檢測(cè)多集中在沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、志賀氏菌三種菌上，但由于各種食品所含的致色葡萄球菌、志賀氏菌三種菌上，但由于各種食品所含的致

5、病菌種類(lèi)不一樣，因此，產(chǎn)品微生物致病菌的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該根據(jù)病菌種類(lèi)不一樣，因此，產(chǎn)品微生物致病菌的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該根據(jù)產(chǎn)品本身的特性來(lái)制定，而不是越多越好，增加檢測(cè)的復(fù)雜產(chǎn)品本身的特性來(lái)制定，而不是越多越好，增加檢測(cè)的復(fù)雜性。此次標(biāo)準(zhǔn)中主要規(guī)定了性。此次標(biāo)準(zhǔn)中主要規(guī)定了1717類(lèi)食品的致病菌種類(lèi)，此分類(lèi)類(lèi)食品的致病菌種類(lèi)，此分類(lèi)方法與食品添加劑、食品污染物限量標(biāo)準(zhǔn)等基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)的分類(lèi)方法與食品添加劑、食品污染物限量標(biāo)準(zhǔn)等基礎(chǔ)標(biāo)準(zhǔn)的分類(lèi)較為一致，有利于各種食品中致病菌的檢測(cè)和預(yù)防。較為一致，有利于各種食品中致病菌的檢測(cè)和預(yù)防。相關(guān)概念：相關(guān)概念：致病菌檢驗(yàn)的基本程序致病菌檢驗(yàn)的基本程序檢樣檢樣處理處理增菌培養(yǎng)增菌

6、培養(yǎng)分離培養(yǎng)分離培養(yǎng)生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定報(bào)告報(bào)告第一節(jié)第一節(jié) 沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)技術(shù)沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)技術(shù)v沙門(mén)氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界沙門(mén)氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各國(guó)各類(lèi)細(xì)菌性的食物中毒中，沙門(mén)氏菌常居前各國(guó)各類(lèi)細(xì)菌性的食物中毒中，沙門(mén)氏菌常居前列。因此，沙門(mén)氏菌的檢測(cè)是各國(guó)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)多列。因此，沙門(mén)氏菌的檢測(cè)是各國(guó)檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)對(duì)多種進(jìn)出口食品的必檢項(xiàng)目之一。種進(jìn)出口食品的必檢項(xiàng)目之一。 沙門(mén)氏菌不產(chǎn)生外毒素，但能產(chǎn)生毒力較強(qiáng)的內(nèi)毒素。沙門(mén)氏菌不產(chǎn)生外毒素，但能產(chǎn)生毒力較強(qiáng)的內(nèi)毒素。 傳播源是人、家禽、豬、牛和其他動(dòng)物。傳播源是人、家禽、豬、牛和其他動(dòng)物。 沙門(mén)氏

7、菌主要通過(guò)食物、飲水經(jīng)口感染?？纱嬖诙喾N食物沙門(mén)氏菌主要通過(guò)食物、飲水經(jīng)口感染?？纱嬖诙喾N食物中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、蝦、魚(yú)和田雞腿等。中，包括生肉、禽、蛋、奶制品、蝦、魚(yú)和田雞腿等。 根據(jù)侵入機(jī)體沙門(mén)氏菌菌種的不同，在臨床上引起四種不根據(jù)侵入機(jī)體沙門(mén)氏菌菌種的不同，在臨床上引起四種不同的疾病。同的疾病。（1）傷寒、副傷寒）傷寒、副傷寒由沙門(mén)氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引由沙門(mén)氏屬中的傷寒桿菌和甲、乙、丙型副傷寒桿菌引起。起。（2）食物中毒）食物中毒沙門(mén)氏菌屬引起的食物中毒，主要以腸炎桿菌、鼠傷沙門(mén)氏菌屬引起的食物中毒，主要以腸炎桿菌、鼠傷寒桿菌、豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌和

8、湯普遜桿菌等寒桿菌、豬霍亂桿菌、丙型副傷寒桿菌和湯普遜桿菌等最為多見(jiàn)。臨床癥狀主要是胃腸炎。病程較短，一般最為多見(jiàn)。臨床癥狀主要是胃腸炎。病程較短，一般24d,可完全恢復(fù)。可完全恢復(fù)。（3）敗血癥）敗血癥多為豬霍亂桿菌引起，甲、乙、丙型副傷寒桿菌和腸多為豬霍亂桿菌引起，甲、乙、丙型副傷寒桿菌和腸炎桿菌亦可引起敗血癥。炎桿菌亦可引起敗血癥。（4）慢性腸炎）慢性腸炎沙門(mén)氏桿菌可引起慢性、持久性腸炎。沙門(mén)氏桿菌可引起慢性、持久性腸炎。致病菌濃度：致病菌濃度：2105個(gè)個(gè)/g（mL）可引起胃腸炎可引起胃腸炎，潛伏期，潛伏期5 5小時(shí)到小時(shí)到5 5天，發(fā)病通常自攝取污染食天，發(fā)病通常自攝取污染食物后物后

9、12-3612-36小時(shí)開(kāi)始。癥狀為腹瀉，惡心，腹痛，中等程度發(fā)小時(shí)開(kāi)始。癥狀為腹瀉，惡心，腹痛，中等程度發(fā)燒，畏寒等，病程燒，畏寒等，病程2-52-5天。天?？梢饌梢饌瑵摲冢瑵摲?-287-28天，癥狀為頭痛，持續(xù)高燒，腹痛天，癥狀為頭痛，持續(xù)高燒，腹痛，渾身酸痛，乏力等，病程，渾身酸痛，乏力等，病程1-81-8周。周?？梢鹁Y可引起菌血癥，血液中存在此菌，傳播擴(kuò)散到環(huán)境中。，血液中存在此菌，傳播擴(kuò)散到環(huán)境中。革蘭氏陰性菌，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜桿菌，周生鞭毛，兼性厭氧。革蘭氏陰性菌，無(wú)芽孢、無(wú)莢膜桿菌，周生鞭毛，兼性厭氧。最適生長(zhǎng)溫度最適生長(zhǎng)溫度3737. .抗寒、耐鹽抗寒、耐

10、鹽, ,最適最適Ph6.8Ph6.87.87.8。該菌熱敏感，抗熱性差，該菌熱敏感，抗熱性差，60 60 經(jīng)經(jīng)202030min30min被殺死。被殺死。生長(zhǎng)的水分活度為生長(zhǎng)的水分活度為0.940.94。一、一、v沙門(mén)氏菌屬是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬。沙門(mén)氏菌屬是腸桿菌科中最復(fù)雜的菌屬。v抗原：抗原：可根據(jù)沙門(mén)氏菌的菌體抗原（可根據(jù)沙門(mén)氏菌的菌體抗原（O抗原）抗原）分群（分群（A,B,C等）等）再根據(jù)其鞭毛抗原（再根據(jù)其鞭毛抗原（H抗原）抗原）分血清型（分血清型（1、2等）等）食品中沙門(mén)氏菌檢測(cè)方法食品中沙門(mén)氏菌檢測(cè)方法 沙門(mén)氏菌的檢測(cè)方法：沙門(mén)氏菌的檢測(cè)方法： 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)

11、食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)門(mén)氏菌檢驗(yàn)GB 4789.42010檢樣處理檢樣處理 冷凍的檢樣冷凍的檢樣 在檢樣前最好不要解凍，將沙門(mén)氏菌在檢樣前最好不要解凍，將沙門(mén)氏菌的損傷降低到最低限度。的損傷降低到最低限度。 粉狀樣品粉狀樣品 應(yīng)將應(yīng)將225ml225ml增菌液分?jǐn)?shù)次加入，并用滅菌增菌液分?jǐn)?shù)次加入，并用滅菌玻棒攪拌成均勻懸液。玻棒攪拌成均勻懸液。 帶殼蛋類(lèi)帶殼蛋類(lèi) 在流水下用刷子刷洗蛋類(lèi)，并瀝干。將在流水下用刷子刷洗蛋類(lèi)，并瀝干。將蛋類(lèi)在含蛋類(lèi)在含0.10.1十二烷基磺酸鈉的十二烷基磺酸鈉的200mg/kg Cl200mg/kg Cl- -溶溶液中浸泡液中浸泡30min

12、30min后方可破殼取蛋。后方可破殼取蛋。從食品中分離沙門(mén)氏菌樣品制備從食品中分離沙門(mén)氏菌樣品制備 由于食品種類(lèi)繁多，且每類(lèi)中包括許多品種。因其加工方由于食品種類(lèi)繁多，且每類(lèi)中包括許多品種。因其加工方式不同，導(dǎo)致性狀各異。故在進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)按式不同，導(dǎo)致性狀各異。故在進(jìn)行微生物學(xué)檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)按不同的形狀、加工方式及檢驗(yàn)?zāi)康暮侠磉M(jìn)行檢樣處理。不同的形狀、加工方式及檢驗(yàn)?zāi)康暮侠磉M(jìn)行檢樣處理。四、檢驗(yàn)程序四、檢驗(yàn)程序選擇性瓊脂平板選擇性瓊脂平板緩沖蛋白水緩沖蛋白水增菌液增菌液增菌液增菌液三鐵糖瓊脂三鐵糖瓊脂BPW緩沖蛋白水緩沖蛋白水 用于前增菌用于前增菌:目的是使樣品中的沙門(mén)氏目的是使樣品中的

13、沙門(mén)氏菌復(fù)蘇，故培養(yǎng)時(shí)間較短。菌復(fù)蘇，故培養(yǎng)時(shí)間較短。BPW緩沖蛋白水緩沖蛋白水 1.勻質(zhì)勻質(zhì)用勻質(zhì)器勻質(zhì)器；用勻質(zhì)器勻質(zhì)器； 2. 調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH至至6.80.2； 3.在在36 1 培養(yǎng)培養(yǎng)8 h18h 無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至無(wú)菌操作將樣品轉(zhuǎn)至500 mL 錐形瓶中培養(yǎng)錐形瓶中培養(yǎng) 均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng)均質(zhì)袋，可直接進(jìn)行培養(yǎng) 凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均經(jīng)過(guò)凍肉、蛋品、乳品及其他加工食品均經(jīng)過(guò)前增菌前增菌TTB增菌選擇性增菌：選擇性增菌：此培養(yǎng)基允許沙門(mén)氏菌持續(xù)增菌，同時(shí)阻止大此培養(yǎng)基允許沙門(mén)氏菌持續(xù)增菌，同時(shí)阻止大多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。多數(shù)其他細(xì)菌的增殖。四硫磺酸鈉煌綠（四硫磺酸鈉煌綠（T

14、TB）增菌液）增菌液由如下幾部分組成：由如下幾部分組成：基礎(chǔ)液、硫代硫酸鈉、碘溶液、基礎(chǔ)液、硫代硫酸鈉、碘溶液、0.5%煌綠水溶液、牛膽鹽溶液?；途G水溶液、牛膽鹽溶液。制法：制法：基礎(chǔ)液基礎(chǔ)液900mL；硫代硫酸鈉溶液；硫代硫酸鈉溶液100mL；碘溶液；碘溶液20.0mL煌綠水溶液煌綠水溶液2.0mL；牛膽鹽溶液；牛膽鹽溶液50.0mL。以無(wú)菌操作一次加入上述成分以無(wú)菌操作一次加入上述成分增菌增菌輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物，移取輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)過(guò)的樣品混合物，移取1 mL，轉(zhuǎn)種于轉(zhuǎn)種于10 mL TTB 內(nèi)，于內(nèi)，于42 1 培養(yǎng)培養(yǎng)18 h24h。同時(shí)，另取。同時(shí)，另取1 mL，轉(zhuǎn)種于，轉(zhuǎn)種于1

15、0 mL SC 內(nèi)，于內(nèi)，于36 1 培養(yǎng)培養(yǎng)18 h24 h硫硒酸鹽胱氨酸硫硒酸鹽胱氨酸(SC)增菌液增菌液 成分：蛋白胨成分：蛋白胨 5.0 g；乳糖；乳糖 4.0 g；磷酸氫二鈉；磷酸氫二鈉 10.0 g；亞硒酸氫鈉；亞硒酸氫鈉 4.0 g；L-胱氨酸胱氨酸 0.01 g；蒸餾水；蒸餾水 1 000 mL；pH 7.00.2 制法：除亞硒酸氫鈉和制法：除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸外，將各成分加胱氨酸外，將各成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，冷至入蒸餾水中，煮沸溶解，冷至55 以下，以無(wú)菌以下，以無(wú)菌操作加入亞硒酸氫鈉和操作加入亞硒酸氫鈉和1 g/L L-胱氨酸溶液溶液胱氨酸溶液溶液10 mL（稱(chēng)取

16、（稱(chēng)取0.1 g L-胱氨酸，加胱氨酸，加1 mol/L 氫氧化鈉溶氫氧化鈉溶液液15 mL，使溶解，再加無(wú)菌蒸餾水至，使溶解，再加無(wú)菌蒸餾水至100 mL 即即成，如為成，如為DL-胱氨酸，用量應(yīng)加倍）。搖勻，調(diào)胱氨酸，用量應(yīng)加倍）。搖勻，調(diào)節(jié)節(jié)pH。 TTB的選擇性強(qiáng)于SC，對(duì)沙門(mén)的生長(zhǎng)或多或少有點(diǎn)抑制，而SC的選擇性相對(duì)較弱，雜菌可能會(huì)比較多，為了能準(zhǔn)確分離出沙門(mén)氏菌 SC更適合傷寒沙門(mén)氏菌和甲型副傷寒沙門(mén)氏菌增菌，最適增菌溫度為36度，TTB更適合其他沙門(mén)氏菌增菌，最適增菌溫度為42度，因?yàn)樯抽T(mén)氏菌有2000多個(gè)菌型，一種增菌液不可能適合所有的沙門(mén)氏菌生長(zhǎng)，因此沙門(mén)氏菌增菌要同時(shí)用兩種

17、培養(yǎng)基增菌。 分別用接種環(huán)取增菌液分別用接種環(huán)取增菌液1環(huán)，劃線接種于一個(gè)環(huán)，劃線接種于一個(gè)BS瓊脂平板和瓊脂平板和一個(gè)一個(gè)XLD瓊脂平板（或瓊脂平板（或HE瓊脂平板或沙門(mén)氏菌屬顯色培養(yǎng)基瓊脂平板或沙門(mén)氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）。于平板）。于361分別培養(yǎng)分別培養(yǎng)18h24h（XLD瓊脂平板、瓊脂平板、HE瓊脂平板、沙門(mén)氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）瓊脂平板、沙門(mén)氏菌屬顯色培養(yǎng)基平板）或或40h48h（BS瓊脂平板），觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落特征。瓊脂平板），觀察各個(gè)平板上生長(zhǎng)的菌落特征。3分離分離亞硫酸鉍（BS）瓊脂 將前三種成分加入將前三種成分加入300mL蒸餾水（制作基礎(chǔ)蒸餾水（制作基礎(chǔ)液），硫酸亞

18、鐵和磷酸氫二鈉分別加入液），硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉分別加入20mL和和30mL蒸餾水中，檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加蒸餾水中，檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉分別加入另一入另一20mL和和30mL蒸餾水中，瓊脂加入蒸餾水中，瓊脂加入600mL蒸餾水中。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。蒸餾水中。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。冷至冷至80左右時(shí)，先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混左右時(shí)，先將硫酸亞鐵和磷酸氫二鈉混勻，倒入基礎(chǔ)液中，混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫勻，倒入基礎(chǔ)液中，混勻。將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉混勻，倒入基礎(chǔ)液中，再混勻。調(diào)節(jié)酸鈉混勻，倒入基礎(chǔ)液中，再混勻。調(diào)節(jié)pH，隨，隨即傾入瓊脂液中，混合均勻，冷至即傾入瓊脂液中，混合

19、均勻，冷至5055。加入煌綠溶液，充分混勻后立即傾注平皿。加入煌綠溶液，充分混勻后立即傾注平皿。沙門(mén)氏菌在亞硫酸鉍瓊脂沙門(mén)氏菌在亞硫酸鉍瓊脂(BS瓊脂瓊脂)上典型特征上典型特征 沙門(mén)氏菌在 37 培養(yǎng) 24-48 小時(shí)后，棕褐色或灰色至黑色，有時(shí)有金屬光澤，周?chē)囵B(yǎng)基呈棕色或黑色，有些菌株呈灰綠色 , 周?chē)囵B(yǎng)基不變或微變暗。沙門(mén)氏菌在膽硫乳瓊脂沙門(mén)氏菌在膽硫乳瓊脂(DHL瓊脂瓊脂)上典型特征上典型特征 沙門(mén)氏菌在 37 培養(yǎng) 22-24 小時(shí)后，無(wú)色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色。有些菌株無(wú)色半透明 。 沙門(mén)氏菌在沙門(mén)氏菌在HE瓊脂上典型特征瓊脂上典型特征 在 37 培養(yǎng) 18-24 小時(shí)后

20、， 沙門(mén)氏菌、亞利桑那菌和變形桿菌為藍(lán)綠色至藍(lán)色、有或無(wú)黑色中心的菌落；大腸桿菌和大腸菌群為粉紅色菌落，有沉淀環(huán)； ，無(wú)色半透明有黑色中心或幾乎全為黑色。志賀氏菌和普羅菲登斯菌為綠色、濕潤(rùn)而隆起菌落。 4.1自選擇性瓊脂平板上分別挑取自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落，個(gè)以上典型或可疑菌落，接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不接種三糖鐵瓊脂，先在斜面劃線，再于底層穿刺；接種針不要滅菌要滅菌,直接接種賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，直接接種賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基和營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，于于361培養(yǎng)培養(yǎng)18h24h，必要時(shí)可延長(zhǎng)至，必要時(shí)可延長(zhǎng)至48h。在三。在三糖鐵

21、瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)，沙門(mén)氏菌屬的反應(yīng)糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基內(nèi)，沙門(mén)氏菌屬的反應(yīng)結(jié)果見(jiàn)下表。結(jié)果見(jiàn)下表。4生化試驗(yàn)生化試驗(yàn)4.2接種三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí)接種三糖鐵瓊脂和賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基的同時(shí),可直接可直接接種蛋白胨水接種蛋白胨水（供做靛基質(zhì)試驗(yàn)）、尿素瓊脂（供做靛基質(zhì)試驗(yàn)）、尿素瓊脂（pH7.2）、氰）、氰化鉀化鉀（KCN）培養(yǎng)基，也可在初步判斷結(jié)果后從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基，也可在初步判斷結(jié)果后從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落接種。于上挑取可疑菌落接種。于361培養(yǎng)培養(yǎng)18h24h，必要時(shí)，必要時(shí)可延長(zhǎng)至可延長(zhǎng)至48h，按表，按表3判定結(jié)果。將已挑菌落的

22、平板儲(chǔ)存于判定結(jié)果。將已挑菌落的平板儲(chǔ)存于25或室溫至少保留或室溫至少保留24h，以備必要時(shí)復(fù)查。，以備必要時(shí)復(fù)查。三糖鐵（三糖鐵（TSI）瓊脂試驗(yàn)）瓊脂試驗(yàn)可同時(shí)觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)可同時(shí)觀察乳糖和蔗糖發(fā)酵產(chǎn)酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。葡萄糖被酸或產(chǎn)酸產(chǎn)氣（變黃）；產(chǎn)生硫化氫（變黑）。葡萄糖被分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因分解產(chǎn)酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成接觸空氣而氧化，加之細(xì)菌利用培養(yǎng)基中含氮物質(zhì)，生成堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)堿性產(chǎn)物，故使斜面后來(lái)又變紅，底部由于是

23、在厭氧狀態(tài)下，酸類(lèi)不被氧化，所以仍保持黃色。下，酸類(lèi)不被氧化，所以仍保持黃色。 如果細(xì)菌又能分解含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，培養(yǎng)基如果細(xì)菌又能分解含硫化合物，產(chǎn)生硫化氫，培養(yǎng)基底部變黑。底部變黑。 制好的培養(yǎng)基對(duì)照管斜面紅色，底面黃色培養(yǎng)基全黃色斜面、底部黃色，并產(chǎn)生H2S斜面紅色，底部黃色，產(chǎn)生H2S底面黃色，并產(chǎn)生CO2沙門(mén)氏菌的沙門(mén)氏菌的TSI試驗(yàn)試驗(yàn)靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)靛基質(zhì)（吲哚）試驗(yàn)?zāi)承┘?xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，某些細(xì)菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來(lái)。吲哚與對(duì)二生成吲哚。吲哚的存在可用顯色反應(yīng)表現(xiàn)出來(lái)。吲哚與對(duì)二甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化

24、合物。甲基氨基苯醛結(jié)合，形成玫瑰吲哚，為紅色化合物。1 1、未接種、未接種2 2、尿素酶陽(yáng)性、尿素酶陽(yáng)性3 3、尿素酶陰性、尿素酶陰性尿素酶試驗(yàn)?zāi)蛩孛冈囼?yàn)有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生有些細(xì)菌能產(chǎn)生尿素酶，將尿素分解、產(chǎn)生2 2個(gè)分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。個(gè)分子的氨，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，酚紅呈粉紅色。4.2.1反應(yīng)序號(hào)反應(yīng)序號(hào)A1：典型反應(yīng)判定為沙門(mén)氏菌屬。如尿素、：典型反應(yīng)判定為沙門(mén)氏菌屬。如尿素、KCN和賴(lài)氨酸脫羧酶和賴(lài)氨酸脫羧酶3項(xiàng)中有項(xiàng)中有1項(xiàng)異常，按表項(xiàng)異常，按表4可判定為沙可判定為沙門(mén)氏菌。門(mén)氏菌。如有如有2項(xiàng)異常為非沙門(mén)氏菌。項(xiàng)異常為非沙門(mén)氏菌。表表4沙門(mén)氏

25、菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表沙門(mén)氏菌屬生化反應(yīng)初步鑒別表4.2.2反應(yīng)序號(hào)反應(yīng)序號(hào)A2：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門(mén)氏菌靛基質(zhì)：補(bǔ)做甘露醇和山梨醇試驗(yàn)，沙門(mén)氏菌靛基質(zhì)陽(yáng)性變體兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)陽(yáng)性變體兩項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性，但需要結(jié)合血清學(xué)鑒定結(jié)果進(jìn)行判定。行判定。4.2.3反應(yīng)序號(hào)反應(yīng)序號(hào)A3：補(bǔ)做：補(bǔ)做ONPG。ONPG陰性為沙門(mén)氏菌，同時(shí)陰性為沙門(mén)氏菌，同時(shí)賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性賴(lài)氨酸脫羧酶陽(yáng)性,甲型副傷寒沙門(mén)氏菌為賴(lài)氨酸脫羧酶陰性。甲型副傷寒沙門(mén)氏菌為賴(lài)氨酸脫羧酶陰性。5.4.2.4必要時(shí)按表必要時(shí)按表5進(jìn)行沙門(mén)氏菌生化群的鑒別。進(jìn)行沙門(mén)氏菌生化群的鑒別。表表5沙門(mén)氏菌

26、屬各生化群的鑒別沙門(mén)氏菌屬各生化群的鑒別4.3如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，如選擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)，可根據(jù)可根據(jù)5.4.1的初步判斷結(jié)果，從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑的初步判斷結(jié)果，從營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上挑取可疑菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙?，使用生化鑒定菌落，用生理鹽水制備成濁度適當(dāng)?shù)木鷳乙?，使用生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。試劑盒或全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。5.5血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定5.5.1抗原的準(zhǔn)備抗原的準(zhǔn)備一般采用一般采用1.21.5瓊脂培養(yǎng)物作玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。瓊脂培養(yǎng)物作玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。O血清不凝集時(shí)，

27、將菌株接種在瓊脂量較高的（如血清不凝集時(shí)，將菌株接種在瓊脂量較高的（如23）培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于培養(yǎng)基上再檢查；如果是由于Vi抗原的存在而阻止了抗原的存在而阻止了O凝集凝集反應(yīng)時(shí)，可挑取菌苔于反應(yīng)時(shí)，可挑取菌苔于1mL生理鹽水中做成濃菌液，于酒精生理鹽水中做成濃菌液，于酒精燈火焰上煮沸后再檢查。燈火焰上煮沸后再檢查。H抗原發(fā)育不良時(shí)，將菌株接種在抗原發(fā)育不良時(shí)，將菌株接種在0.550.65半固體瓊脂平板的中央，俟菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí)，半固體瓊脂平板的中央，俟菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí)，在其邊緣部分取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^(guò)裝有在其邊緣部分取菌檢查；或?qū)⒕晖ㄟ^(guò)裝有0.30.4半固半固體瓊脂的小玻管體瓊脂的小玻

28、管1次次2次，自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后再檢查。次，自遠(yuǎn)端取菌培養(yǎng)后再檢查。5.5.2多價(jià)菌體抗原（多價(jià)菌體抗原（O）與多價(jià)鞭毛抗原（）與多價(jià)鞭毛抗原（H）鑒定）鑒定在玻片上劃出在玻片上劃出2個(gè)約個(gè)約1cm2cm的區(qū)域，挑取的區(qū)域，挑取1環(huán)待測(cè)菌，環(huán)待測(cè)菌，各放各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個(gè)區(qū)域下部加環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部，在其中一個(gè)區(qū)域下部加1滴多價(jià)菌體（滴多價(jià)菌體（O）抗血清，在另一區(qū)域下部加入）抗血清，在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽滴生理鹽水，作為對(duì)照。再用無(wú)菌的接種環(huán)或針?lè)謩e將兩個(gè)區(qū)域內(nèi)的水，作為對(duì)照。再用無(wú)菌的接種環(huán)或針?lè)謩e將兩個(gè)區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動(dòng)混合菌落研

29、成乳狀液。將玻片傾斜搖動(dòng)混合1min，并對(duì)著黑暗背，并對(duì)著黑暗背景進(jìn)行觀察，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽(yáng)性反應(yīng)。景進(jìn)行觀察，任何程度的凝集現(xiàn)象皆為陽(yáng)性反應(yīng)。注：本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱，注：本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱，避免降低其選擇性，貯于室溫暗處，超過(guò)避免降低其選擇性，貯于室溫暗處，超過(guò)48h會(huì)會(huì)降低其選擇性，本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備，第二天使用。降低其選擇性，本培養(yǎng)基宜于當(dāng)天制備，第二天使用。A.5.1成分成分蛋白胨蛋白胨12.0g，牛肉膏，牛肉膏3.0g，乳糖，乳糖12.0g，蔗糖，蔗糖12.0g水楊素水楊素2.0g，膽鹽，膽鹽20.0g，氯化鈉，氯

30、化鈉5.0g。瓊脂瓊脂18.0g20.0g，蒸餾水，蒸餾水1000mL0.4溴麝香草酚藍(lán)溶液溴麝香草酚藍(lán)溶液16.0mLAndrade指示劑指示劑20.0mL甲液甲液20.0mL，乙液，乙液20.0mL，pH7.50.2A.5HE瓊脂瓊脂A.5.2制法制法將前面七種成分溶解于將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液;將瓊脂將瓊脂加入于加入于600mL蒸餾水內(nèi)。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。蒸餾水內(nèi)。然后分別攪拌均勻，煮沸溶解。加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi)加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi),調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH。再加入指示劑。再加入指示劑,并與瓊并與瓊脂液合并脂液合并,待冷至待冷至5055傾注

31、平皿。傾注平皿。注注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱，本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，在制備過(guò)程中不宜過(guò)分加熱，避免降低其選擇性。避免降低其選擇性。甲液的配制甲液的配制硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉34.0g，檸檬酸鐵銨，檸檬酸鐵銨4.0g，蒸，蒸餾水餾水100mL乙液的配制乙液的配制去氧膽酸鈉去氧膽酸鈉10.0g，蒸餾水，蒸餾水100mLAndrade指示劑指示劑酸性復(fù)紅酸性復(fù)紅0.5g，1mol/L氫氧化鈉溶氫氧化鈉溶液液16.0mL，蒸餾水，蒸餾水100mL將復(fù)紅溶解于蒸餾水中將復(fù)紅溶解于蒸餾水中,加入氫氧化鈉溶液。數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅加入氫氧化鈉溶液。數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色不全褪色不全,再加氫氧

32、化鈉溶液再加氫氧化鈉溶液1mL2mL。A.6.1成分成分酵母膏酵母膏3.0g，L-賴(lài)氨酸賴(lài)氨酸5.0g，木糖，木糖3.75g，乳糖，乳糖7.5g，蔗糖蔗糖7.5g，去氧膽酸鈉，去氧膽酸鈉2.5g，檸檬酸鐵銨，檸檬酸鐵銨0.8g，硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉6.8g，氯化鈉，氯化鈉5.0g，瓊脂瓊脂15.0g，酚紅，酚紅0.08g蒸餾水蒸餾水1000mL，pH7.40.2A.6木糖賴(lài)氨酸脫氧膽鹽（木糖賴(lài)氨酸脫氧膽鹽（XLD）瓊脂）瓊脂除酚紅和瓊脂外，將其他成分加入除酚紅和瓊脂外，將其他成分加入400mL蒸餾水中，煮沸溶解，蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)pH。另將瓊脂加入。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中，煮

33、沸溶解。蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑，待冷至將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑，待冷至5055傾注平皿。傾注平皿。注注:本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，不宜過(guò)分加熱，貯于室溫暗處。本培養(yǎng)基不需要高壓滅菌，不宜過(guò)分加熱，貯于室溫暗處。宜于當(dāng)天制備，第二天使用。宜于當(dāng)天制備，第二天使用。A.6.2制法制法蛋白胨蛋白胨20.0g，牛肉膏，牛肉膏5.0g，乳，乳糖糖10.0g，蔗，蔗糖糖10.0g葡萄糖葡萄糖1.0g，硫酸亞鐵銨（含，硫酸亞鐵銨（含6個(gè)結(jié)晶水）個(gè)結(jié)晶水）0.2g酚酚紅紅025g或或5.0g/L溶液溶液5.0mL，氯化鈉，氯化鈉5.0g硫代硫酸鈉硫代硫酸鈉0.2g，

34、瓊瓊脂脂12.0g，蒸餾水，蒸餾水1000mLpH7.40.2A.7三糖鐵（三糖鐵（TSI）瓊脂）瓊脂除酚紅和瓊脂外，將其他成分加入除酚紅和瓊脂外，將其他成分加入400mL蒸餾水中，煮沸溶蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)解，調(diào)節(jié)pH。另將瓊脂加入。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中，煮沸溶解。蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑，混勻，分裝試管，將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑，混勻，分裝試管，每管約每管約2mL4mL，高壓滅菌，高壓滅菌12110min或或11515min，滅菌后置成高層斜面，呈桔紅色。，滅菌后置成高層斜面，呈桔紅色。蛋白胨水蛋白胨水蛋白胨（或胰蛋白胨）蛋白胨（或

35、胰蛋白胨）20.0g，氯化鈉，氯化鈉5.0g，蒸餾水，蒸餾水1000mL，pH7.40.2將上述成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)將上述成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH，分裝小試，分裝小試管管,121高壓滅菌高壓滅菌15min。靛基質(zhì)試劑靛基質(zhì)試劑柯凡克試劑：將柯凡克試劑：將5g對(duì)二甲氨基甲醛溶解于對(duì)二甲氨基甲醛溶解于75mL戊醇中戊醇中,然后緩慢加入濃鹽酸然后緩慢加入濃鹽酸25mL。歐歐-波試劑：將波試劑：將1g對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于對(duì)二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95乙乙醇內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸醇內(nèi)。然后緩慢加入濃鹽酸20mL。挑取小量培養(yǎng)物接種挑取小量培養(yǎng)物接種,在在361培養(yǎng)培養(yǎng)1d2

36、d，必要時(shí)可，必要時(shí)可培養(yǎng)培養(yǎng)4d5d。加入柯凡克試劑約。加入柯凡克試劑約0.5mL，輕搖試管，輕搖試管,陽(yáng)性者陽(yáng)性者于試劑層呈深紅色；或加入歐于試劑層呈深紅色；或加入歐-波試劑約波試劑約0.5mL，沿管壁流下，沿管壁流下，覆蓋于培養(yǎng)液表面覆蓋于培養(yǎng)液表面,陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。陽(yáng)性者于液面接觸處呈玫瑰紅色。注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氯酸。每批蛋白胨買(mǎi)來(lái)后，應(yīng)先注：蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氯酸。每批蛋白胨買(mǎi)來(lái)后，應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用。用已知菌種鑒定后方可使用。試驗(yàn)方法試驗(yàn)方法蛋白胨蛋白胨1.0g,氯化鈉氯化鈉5.0g，葡萄糖，葡萄糖1.0g，磷酸二氫鉀，磷酸二氫鉀2.0g0.4酚

37、酚紅紅3.0mL，瓊，瓊脂脂20.0g，蒸餾水，蒸餾水1000mL20%尿素溶液尿素溶液100mL，pH7.20.2除尿素、瓊脂和酚紅外，將其他成分加入除尿素、瓊脂和酚紅外，將其他成分加入400mL蒸餾水中，煮蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)沸溶解，調(diào)節(jié)pH。另將瓊脂加入。另將瓊脂加入600mL蒸餾水中，煮沸溶解。蒸餾水中，煮沸溶解。將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑后分裝，將上述兩溶液混合均勻后，再加入指示劑后分裝，121高壓滅高壓滅菌菌15min。冷至。冷至5055,加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液。尿素加入經(jīng)除菌過(guò)濾的尿素溶液。尿素的最終濃度為的最終濃度為2。分裝于無(wú)菌試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆谩７盅b于無(wú)菌

38、試管內(nèi)，放成斜面?zhèn)溆?。A.9尿素瓊脂（尿素瓊脂（pH7.2）試驗(yàn)方法試驗(yàn)方法挑取瓊脂培養(yǎng)物接種挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在在361培養(yǎng)培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。尿，觀察結(jié)果。尿素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。素酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色。蛋白胨蛋白胨10.0g，氯化鈉，氯化鈉5.0g，磷酸二氫鉀，磷酸二氫鉀0.225g磷酸氫二鈉磷酸氫二鈉5.64g，蒸餾水，蒸餾水1000mL，0.5氰化鉀氰化鉀20.0mL將除氰化鉀以外的成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，分裝后將除氰化鉀以外的成分加入蒸餾水中，煮沸溶解，分裝后121高壓滅菌高壓滅菌15min。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。每。放在冰箱內(nèi)使其充分冷卻。

39、每100mL培培養(yǎng)基加入養(yǎng)基加入0.5氰化鉀溶液氰化鉀溶液2.0mL（最后濃度為（最后濃度為1:10000），），分裝于無(wú)菌試管內(nèi)分裝于無(wú)菌試管內(nèi),每管約每管約4mL,立刻用無(wú)菌橡皮塞塞緊立刻用無(wú)菌橡皮塞塞緊,放在放在4冰箱內(nèi)冰箱內(nèi),至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基至少可保存兩個(gè)月。同時(shí)，將不加氰化鉀的培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基作為對(duì)照培養(yǎng)基,分裝試管備用。分裝試管備用。A.10氰化鉀氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基培養(yǎng)基將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液，挑取將瓊脂培養(yǎng)物接種于蛋白胨水內(nèi)成為稀釋菌液，挑取1環(huán)接種環(huán)接種于氰化鉀（于氰化鉀（KCN）培養(yǎng)基。并另挑?。┡囵B(yǎng)基。并另挑取1環(huán)接種于

40、對(duì)照培養(yǎng)基。環(huán)接種于對(duì)照培養(yǎng)基。在在361培養(yǎng)培養(yǎng)1d2d，觀察結(jié)果。如有細(xì)菌生長(zhǎng)即為，觀察結(jié)果。如有細(xì)菌生長(zhǎng)即為陽(yáng)性（不抑制），經(jīng)陽(yáng)性（不抑制），經(jīng)2d細(xì)菌不生長(zhǎng)為陰性（抑制）。細(xì)菌不生長(zhǎng)為陰性（抑制）。注注:氰化鉀是劇毒藥氰化鉀是劇毒藥,使用時(shí)應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏使用時(shí)應(yīng)小心，切勿沾染，以免中毒。夏天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口天分裝培養(yǎng)基應(yīng)在冰箱內(nèi)進(jìn)行。試驗(yàn)失敗的主要原因是封口不嚴(yán)不嚴(yán),氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度氰化鉀逐漸分解，產(chǎn)生氫氰酸氣體逸出，以致藥物濃度降低，細(xì)菌生長(zhǎng)，因而造成假陽(yáng)性反應(yīng)。試驗(yàn)時(shí)對(duì)每一環(huán)節(jié)降低，細(xì)菌生長(zhǎng)，因而造成

41、假陽(yáng)性反應(yīng)。試驗(yàn)時(shí)對(duì)每一環(huán)節(jié)都要特別注意。都要特別注意。試驗(yàn)方法試驗(yàn)方法蛋白胨蛋白胨5.0g，酵母浸膏，酵母浸膏3.0g，葡萄糖，葡萄糖1.0g，蒸餾水，蒸餾水1000mL，1.6溴甲酚紫溴甲酚紫-乙醇溶液乙醇溶液1.0mLL-賴(lài)氨酸或賴(lài)氨酸或DL-賴(lài)氨酸賴(lài)氨酸0.5g/100mL或或1.0g/100mLpH6.80.2除賴(lài)氨酸以外的成分加熱溶解后除賴(lài)氨酸以外的成分加熱溶解后,分裝每瓶分裝每瓶100mL，分別加入，分別加入賴(lài)氨酸。賴(lài)氨酸。L-賴(lài)氨酸按賴(lài)氨酸按0.5加入，加入，DL-賴(lài)氨酸按賴(lài)氨酸按1加入。調(diào)節(jié)加入。調(diào)節(jié)pH。對(duì)照培養(yǎng)基不加賴(lài)氨酸。分裝于無(wú)菌的小試管內(nèi)，每管。對(duì)照培養(yǎng)基不加賴(lài)氨酸。分裝于無(wú)菌的小試管內(nèi)，每管0.5mL，上面滴加一層液體石蠟，上面滴加一層液體石蠟，115高壓滅菌高壓滅菌10min。A.11賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基賴(lài)氨酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種，于361培養(yǎng)培養(yǎng)18h24h，觀察結(jié)果。氨基酸脫羧酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫，觀察結(jié)果。氨基酸脫羧酶陽(yáng)性者由于產(chǎn)堿，培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色。陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物，但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色。陰性者無(wú)堿性產(chǎn)物，但因