飼料廠化驗室檢測手冊

1、飼料廠化驗室操作手冊飼料中的水分測定1原理：試樣在105±2烘箱內，在常壓下烘干，直至恒重，逸失的重量為總水分。2測定步驟：潔凈的稱樣皿，在105±2烘箱中烘1h，取出，在干燥器中冷卻30min，稱準至0.0002g，再烘干30 min，同樣冷卻，稱重，直至兩次的重量之差小于0.0005g為恒重。用已恒重的稱樣皿稱取2份平行試樣，每份2-5g（含水量0.1g以上，樣品厚度4mm一下）。準確至0.0002g，不蓋稱樣皿蓋，在105±2烘箱中烘3h（以溫度達到105開始計時），取出，蓋好稱樣皿蓋，在干燥器中冷卻30min，稱重。在同樣烘干1h ,冷卻，稱重，直至兩次稱

2、重的重量差小于0.002g.烘干前的質量烘干后的質量水分= ×100烘干前的質量粗蛋白的測定1.原理：凱氏定氮法測定試樣中的含氮量，即在催化劑的作用下用硫酸破壞有機物，使含氮物轉化成硫酸銨，加入強堿進行蒸餾，用硼酸吸收后，再用鹽酸滴定，測出含氮量，將結果乘以換算系數6.25，算出粗蛋白的含量。2.測定步驟：.消煮：稱取樣品0.5g，準確放入凱氏燒瓶中，加入6.4g催化劑，15ml硫酸，將凱氏燒瓶置于電爐上加熱，開始小火，待樣品焦化，泡沫消失后，再加強火力（360-410），直至呈透明的藍綠色，然后再繼續(xù)加熱，至少2h.定容：消煮后冷卻，加20ml水至凱氏燒瓶中，搖勻，待消煮試樣完全冷

3、卻后轉移至100ml容量瓶中，用蒸餾水沖洗數次，并一起轉入到容量瓶中，至刻度，搖勻，做為試樣分解液。.蒸餾:.準備：將蒸餾裝置準備妥當以后，先用蒸餾水洗滌，移取分解液10ml，氫氧化鈉（40%）10ml，加入少量水，塞好入口玻璃塞，且在入口處加水密封，防止露氣，用蒸餾水沖洗冷凝管末端，在將裝有20ml硼酸和2滴甲基紅指示劑的錐形瓶放在冷凝管的末端。.滴定：將蒸餾后的吸收液立即用鹽酸標準溶液滴定，溶液由藍綠色變成灰紅色為終點。 （體積空白）×濃度×0.014×6.25 粗蛋白= ×100 試樣質量0.014 與1.00ml鹽酸標準溶液【c(Hcl)=1.0

4、00/ mol·L-1】相當的以克表示的氮的質量6.25氮換算成蛋白質的平均系數3.試劑配制：1.混合催化劑：4g硫酸銅+60g無水硫酸鈉2.氫氧化鈉：40g氫氧化鈉+100ml水3.硼酸： 1g硼酸+50ml水4.混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，在陰涼處保存3個月5.鹽酸標準溶液配制： c(Hcl)/ mol·L-1 鹽酸（ml） 1 90 0.5 45 0.1 9_4.鹽酸標定方法：取在270300溫度下干燥至恒重的基準無水碳酸鈉約0.015g，精密稱重，加水50ml使溶解，加甲基紅溴甲酚綠混合指示劑2滴，用鹽酸滴定至溶液

5、由綠色轉變?yōu)榛壹t色，在煮沸2分鐘，冷卻至室溫，繼續(xù)滴定至溶液變?yōu)榛壹t色。 空白測定: 稱蔗糖0.5g，代替試樣，進行空白滴定，消耗0.1 mol·L-1鹽酸標準溶液的體積不得超過0.2ml，消耗0.02 mol·L-1鹽酸標準溶體積不得超過0.3ml. 無水硫酸鈉的質量 濃度= (體積-空白)×0.052995.蒸餾步驟檢測：精確稱取硫酸銨0.2g，代替試樣進行消化蒸餾，測得硫酸銨含量21.19%±0.2%，可知消煮過程和試劑配制是否正常。飼料中純蛋白測定1.原理：硫酸銅在堿性溶液中，可將蛋白質沉淀，且不溶于熱水，過濾和洗滌后，可將純蛋白質含氮物分離，再

6、用凱氏定氮法測定沉淀中的蛋白質含量。2.試劑：（1）硫酸銅溶液：10g硫酸銅溶于100ml水中。（2）氫氧化鈉溶液：將2.5g氫氧化鈉溶于100ml水中。（3）氯化鋇溶液：1g氯化鋇溶于100ml水中。（4）2 mol·L-1鹽酸溶液。3. 測定步驟：準確稱取1g左右試樣，置于200ml燒杯中，加50ml水，加熱至沸，加入20ml硫酸銅溶液，20ml氫氧化鈉溶液，用玻璃棒充分攪拌，放置1h以上，用傾斜過濾（定性濾紙），然后用60-80熱水洗衣滌沉淀5-6次，用氯化鋇溶液5滴和鹽酸溶液1滴檢查濾液，直至不生成白色硫酸鋇沉淀為止。將沉淀和濾紙放在65烘箱干燥2h，然后全部轉移到凱氏燒瓶中

7、。消化后進行定氮測定。4.結果計算同粗蛋白測定一樣?？焖贉y鹽分（飼料級）1. 鹽分含量測定原理：溶液澄清，在酸性條件下，加入過量硝酸銀溶液使樣品溶液中的氯化物形成氯化銀沉淀，除去沉淀后，用硫氰酸銨回滴過量硝酸銀，根據消耗硫酸氰銨的量，計算出氯化物的含量。2. 試劑配制：Ango3：稱取硝酸銀3.4g，用少量水溶解，定容至1L，儲于棕色瓶中3. 標定：稱取在550下恒溫1h的基準氯化鈉0.02g，加50ml水，加5%鉻酸鉀指示劑1ml，用待標定的硝酸銀標準溶液滴定至磚紅色為終點。20×0.02 C = 體積4.測定步驟：稱取樣品2g左右，加200ml蒸餾水攪拌，靜止20min，吸取上清

8、液20ml放入錐形瓶，加50ml蒸餾水，加1ml鉻酸鉀（10%），用Ango3滴定成桔紅色。濃度×體積×200×0.05845CL = ×100樣品質量×20測食鹽中CL的含量稱0.02g樣品，放入錐形瓶中，加50ml蒸餾水，加1ml鉻酸鉀（10%），用Ango3滴定成桔紅色。濃度×體積×0.05845CL = ×100樣品質量粗灰分、鈣、磷連續(xù)測定（飼料級）1.原理： 試樣在550灼燒后所得殘渣，用質量百分率表示。殘渣只要是氧化物、鹽類等礦物質，也包括混入飼料中的沙石、土等，故稱粗灰分。2.步驟： 將干凈的坩堝方

9、入高溫爐，在550±20下灼燒30min。取出，在空氣中冷卻約1min，放入干燥器冷卻30min，稱其重量，在已恒重的坩堝中稱取2-5g試料，準確至0.0002g。在電爐上小心碳化至無煙，在放入高溫爐，于550±20下灼燒3h。取出，在空氣中冷卻約1min，放入干燥器中冷卻30min，稱取重量。 灰化后的質量 粗灰分= ×100% 灰化前的質量鈣：在盛有灰分的坩堝中加入10ml（1：3）鹽酸,加3滴硝酸，小心煮沸，隨即濾入100ml的容量瓶中，用蒸餾水洗滌坩堝和漏斗上的濾紙，定容至100ml，搖勻，取10ml分解液放入錐形瓶，加入50ml水，1%煮沸冷卻后的淀粉溶

10、液10ml,乙二胺1ml，三乙醇胺2 ml，孔雀石綠1滴，20%氫氧化鈉10 ml，鹽酸羥胺少許，鈣指示劑少許，然后用EDTA滴定至藍色。 EDTA體積×濃度 Ca= ×100 樣品質量試劑配制：鹽酸：1：31ml鹽酸溶于3ml蒸餾水中氫氧化鈉：20% 20g的氫氧化鈉溶于100ml的蒸餾水中三乙醇胺： 1：11ml三乙醇胺溶于1ml蒸餾水中乙二胺： 1：11ml乙二胺溶于1ml蒸餾水中孔雀石綠：0.001g孔雀石綠溶于1ml蒸餾水中，既0.1g孔雀石綠溶于100g蒸餾水中鈣黃指示劑：0.1g鈣黃綠素，0.13g甲基百里香酚藍，5g氯化鉀研細混勻，儲于磨砂口瓶中備用。（鈣紅

11、指示劑：1g鈣羥酸指示劑與99g氯化鈉）EDTA：0.02 mol·L-1稱取8g乙二胺四乙酸二鈉，放入燒杯中，加200ml蒸餾水，加熱溶解，冷卻后轉入1000ml容量瓶中，用蒸餾水稀稀釋至刻度。標定：鈣標準溶液0.001g mol·L-1準確稱取在105110下烘干3h，干燥至恒重的基準碳酸鈣2.497g，溶于40ml（1：3）鹽酸中（沿燒杯壁慢慢加入），加熱除去Co2,冷卻，轉移到1000ml容量瓶中，稀釋到刻度，標定方法同測定方法同樣。 0.01×20（分解液吸取值）EDTA濃度= EDTA的體積磷：取上述分解液1ml，放入50ml的容量瓶中，加10ml釩鉬

12、酸銨顯色劑，定容至50ml，搖勻，放至20分鐘。用10毫米比色池，在420nm波長下，用分光光度計測定試樣分解液的吸光度 波長所對應得含磷量磷含量= 質量×100×分解液移取量試劑配制：釩鉬酸銨顯色劑：稱取偏釩酸銨1.25g，先加入量水，使其差不多溶解，加硝酸250ml，另取鉬酸銨25g加蒸餾水400ml溶解，冷卻后將此溶液倒入上述溶液中，加水定容至1000ml。避光保存，入生成沉淀則不能使用。磷標準溶液：將磷酸二氫鉀在105烘箱中干燥1小時，在干燥器中冷卻后稱取0.2195g，定量轉入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，用水稀釋至刻度，搖勻，即50微克/毫升的磷標準溶液。

13、標準曲線繪制： 準確吸取0ml.1ml.2ml.5ml.10ml.15ml于50ml容量瓶中，各加入釩鉬酸銨顯色劑10ml，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，靜止10分鐘以上，以0溶液為參比，用10毫米比色池，在420nm波長下，用分光光度計測定各溶液的吸光度。以磷含量為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線圖。飼料中粗脂肪的測定1.原理：用裝有乙醚的索氏脂肪提取器，提取試樣中的脂肪，稱脂肪包的重量，提取的脂肪中除脂肪外還有有機酸，磷脂，脂溶性維生素，葉綠素等，因而測定結果稱為粗脂肪或乙醚提取物。2.測定步驟：稱試樣15g（準確至0.0002g），于濾紙筒中，或用濾紙包好，放入105烘箱中，烘干120

14、min，濾紙筒應高于提取器虹吸管的高度，濾紙包長度應以可全部浸泡于乙醚中為準，將濾紙筒或包放入抽提管，在抽提瓶中加無水乙醚60-100ml，在60-75的水浴上加熱，使乙醚回流，控制乙醚回流次數約每小時10次，共回流約50次（油脂高的約70次）或檢查抽提管流出的乙醚揮發(fā)后不留下油跡為抽提終點。（約3個小時）取出試樣，仍用原提取器回收乙醚，直至抽提瓶全部回收完，取下抽提瓶，將回收的乙醚倒入乙醚瓶中保存。取出濾紙包，仍放回原稱樣皿，開蓋在105±2烘箱中烘干2h，（剛放烘箱時將烘箱門打開，使濾紙包中的乙醚揮發(fā)完以后在合上門，否者會有危險），取出，放入干燥器中冷卻，稱重，在烘干30min，

15、冷卻稱重，直至兩次誤差小于0.001g為止。 烘干后試樣的重量提取脂肪后試樣的重量 粗脂肪= ×100 烘干前試樣的重量大豆脲酶活性的測定（滴定法）1.選用范圍：本法適用于大豆制品品及其副產品中脲酶活性的測定，可確認大豆的溫熱處理程度和抗胰蛋白酶等抗營養(yǎng)因子的水平。2.定義：尿素酶活性指：在30±0.5和pH7的條件下，每分鐘每克大豆制品分解尿素所釋放的氨態(tài)氮的毫克數。3.原理： 將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合，在30保持30min，尿酶催化尿素水解產生氨的反應。用過里鹽酸中和產生的氨，再用氫氧化鈉標準溶液回滴。4. 試劑： 尿素緩沖溶液：準確稱取3.4g經110烘

16、干的磷酸二氫鉀和4.45g磷酸氫二鈉，用蒸餾水溶解后定容至1000ml，再將30g尿素溶解在此緩沖液中，可保持一個月。 0.1 mol·L-1鹽酸溶液：用量筒量取8.4ml濃鹽酸（GB 622），注入1000ml容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度。 0.1mol·L-1氫氧化鈉（GB 629）標準溶液 ：按GB 601的規(guī)定配制。（5ml NaOH飽和溶液定容至1L）5. 測定步驟： 準確稱取已粉碎的試樣約0.2g（精確至0.0001g），置于刻管中（如活性很高，只稱0.05g）。加入10ml尿素緩沖溶液，立即蓋好試管并劇烈搖動，馬上置于（30±0.5）恒溫水浴中，準確

17、計時保持30min。取下后立即加入10ml 0.1mol·L-1鹽酸溶液,并迅速冷卻至20，將試管中內容物無損地移入50ml燒杯中，用5ml蒸餾水沖洗試管2次，立即用0.1mol·L-1的氫氧化鈉標準溶液滴定至pH 4.7,記錄氫氧化鈉標準溶液的消耗量。同時做空白試驗。尿素苯酚磺試劑法（脲酶活性）1.原理：在尿素苯酚磺指示劑存在的條件下，以尿素轉變成氨的多少及顯色度檢測大豆餅中的脲酶的活性。2.試劑與溶液： 0.2mol·L-1氫氧化鈉溶液：量取澄清的飽和氫氧化鈉溶液11.2ml，置于1000ml容量瓶中，用新沸過的冷水稀釋至刻度，混勻即可。 0.1 mol

18、83;L-1硫酸溶液：量取5.6ml濃硫酸，注入已加了少量蒸餾水的1000ml容量瓶中，冷卻稀釋至刻度。 尿素苯酚磺指示劑：取1.2g苯酚紅溶于30ml 0.2 mol·L-1氫氧化鈉溶液中，用蒸餾水稀釋至300ml，加入90g尿素，溶解后再用水稀釋至2000ml，加70ml 0.1 mol·L-1硫酸溶液，稀釋至3000ml。配好的溶液應呈琥珀色，若溶液轉變呈桔紅色時，用再適量滴加0.1 mol·L-1硫酸溶液，調成琥珀色。試劑最好現配現用。3.測定步驟： 取粉碎的大豆粕少許，在表面皿上均勻的鋪成薄層，用吸管吸取尿素苯酚磺指示劑，浸濕表面皿上平鋪的大豆粕，放置5

19、min，觀察顯色結果。4.結果判定： 無任何紅點出現時，再放置25min，若仍無紅點出現時，說明被檢大豆粕沒有脲酶活性，是過熟的大豆粕。 有少數紅點，或表面有25%-50%紅點出現，表示含有微量脲酶，大豆粕可以使用。 若大豆粕表面75%-100%被紅點覆蓋，說明脲酶活性很強，粕過生，不能直接使用。揮發(fā)性鹽基氮（VBN）測定方法 1、原理：利用弱堿性試劑氧化鎂使試樣中堿性含氮物質游離而被蒸餾出來，用硼酸吸收，再用標準酸滴定，計算出含氮量。2、試劑： 1、0.lmolL鹽酸標準溶液（無水碳酸鈉標定）：吸取分析純鹽酸8.3mL，用蒸餾水定容至1000mL。2、0.01mol/L鹽酸標準溶液：用0.1

20、mol/L鹽酸標準溶液稀釋獲得。3、2%硼酸溶液：分析純硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。4、混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個月以內。5、1%氧化鎂溶液：化學純氧化鎂1.0g溶于100mL蒸餾水振接成混懸液。3、測定： 1、稱取15g試樣(精確到0.001g)于250mL具塞錐形瓶中，加蒸餾水100mL，振蕩搖勻30min后靜置，上清液為樣液。 2、取20mL2%的硼酸溶液于150mL錐形瓶中，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液。 3、蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器的水中應加甲基紅指示劑數滴，硫酸數滴，且保持此溶液

21、為橙紅色，否則補加硫酸。 4、準確移取10mL樣液注入蒸餾裝置的反應室中，再加入10mL 1%的氧化鎂溶液，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，將玻璃塞塞好，且在入口處加水封好，防止漏氣，蒸餾10min，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。 5、吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L鹽酸標準液滴定，溶液由藍綠色變?yōu)榛壹t色為終點，同時進行試劑空白測定。4、測定結果計算： （鹽酸體積空白）×濃度×14揮發(fā)性鹽基氮的含量×100 （ 質量×分解液體液）÷分解液總體積2、重復性：每個試樣取兩個平行樣進行測定，以其算

22、術平均值為結果。允許相對偏差為5%油脂酸價測定 取干燥的錐形瓶（帶手套?。７Q重記錄，加入測樣2-3g，稱重記錄，取燒杯加入50ml醇醚，5滴酚酞指示劑，Naoh滴定空白體積變成粉紫色，把滴定的醇醚倒入盛有測樣的錐形瓶中，搖勻，再滴5滴酚酞指示劑，用Naoh滴定成粉紅色，半分鐘之內不變色。計算公式： 濃度×（體積空白）×56.11酸價= 樣品質量試劑配制：Naoh標準溶液0.05mol/L配制方法1：取2g氫氧化鈉放入1000ml容量瓶中，用新沸過的冷水定容至1000ml，搖勻。方法2：取飽和溶液2.8ml，用新沸過的冷水定容至1000ml標定：取在105-110干燥至恒重

23、的基準鄰苯二甲酸氫鉀約0.2g，精密稱重，加新沸過的冷水50ml，搖勻，使其溶解，加酚酞指示劑2滴，用本液滴定至粉紅色。 鄰苯二甲酸氫鉀質量濃度 = - Naoh體積×0.2042中性醇醚：2：1（2ml乙醇+1ml乙醚）1%酚酞乙醇指示劑：1g酚酞+100ml乙醇油脂TBA值的測定方法1.原理： 油脂受到光、熱、空氣中氧等的作用，發(fā)生酸敗。分解出醛、酮之類的化合物。丙二醛就是分解產物的一種，它能與TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉紅色化合物，在532nm波長處有吸收高峰，利用此性質即能測出丙二醛含量，從而推導出油脂酸敗的程度。2.操作步驟：1、標準曲線的繪制 準確吸取上述標準溶液0.

24、0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于納氏比色管中，加水至總體積為5ml，加入5ml TBA溶液，然后按樣品測定步驟進行，測得吸光度并繪制標準曲線。2、樣品制備與檢測 準確稱取均勻的豆油15g，置于100ml具塞三角瓶內，準確加入25ml三氯乙酸混合液，振搖半小時（保持油脂融溶狀態(tài)），用四層濾紙過濾，除去油脂。準確移取上述濾液10ml置于25ml比色管內，準確加入TBA溶液10ml，混勻，加塞，置于90水浴內保溫40min，取出，冷卻1h，移入小試管內，離心5min，上清液傾入25ml納氏比色管中，加入5ml氯仿，搖勻，靜置，分層，吸出上清液于532nm波長處，用1-5cm

25、比色皿比色（同時作空白試驗）。 3.試劑配制： 1、0.02mol/L TBA水溶液：稱取TBA 0.288g加熱溶于水中，并稀釋至100ml；2、三氯乙酸混合液：稱取三氯乙酸7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀釋至100ml； 3、氯仿（分析純）；4、丙二醛標準溶液：稱取0.315g 1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀釋至1000ml，此溶液每ml相當于丙二醛100g，置于冰箱內保存。準確吸取10ml，稀釋至100ml，此溶液每ml相當于丙二醛10g，備用。 丙二醛濃度×混合液體積×(濾液體積TBA水溶液體積)丙二醛 = 油脂質量×TBA水溶液體積 油脂

26、過氧化值測定方法1.原理: 油脂氧化過程中產生過氧化物，與碘化鉀作用，生成游離碘，以硫代硫酸鈉溶液滴定，計算過氧化值。 2.試劑和溶液: 1、飽和碘化鉀溶液：稱取14g碘化鉀，加10ml水溶解，必要時微熱使其溶解，冷卻后貯于棕色瓶中； 2、三氯甲烷冰乙酸混合液：量取40ml三氯甲烷，加60ml冰乙酸，混勻； 3、1%淀粉試劑：將淀粉0.5g用少許冷水調成糊狀，倒入50ml沸水中調勻，煮沸，臨時用現配；4、0.01mol/L硫代硫酸鈉標準溶液；（26g硫代硫酸鈉/16無水硫代硫酸鈉溶于1000ml水中）0.1 mol·L-1配制：稱取2.6g硫代硫酸鈉/1.6無水硫代硫酸鈉于1000ml容量瓶中，用適量新沸（煮沸10分鐘）過的水溶解并稀釋至1000ml，搖勻，放置2周以后備用。硫代硫酸鈉標定方法： 取適量基準重鉻酸鉀在120烘箱中烘至恒重(3h)，然后稱取0.15g，精確至0.0001g，置于碘量瓶中，溶于25ml煮沸并冷卻的蒸餾水中，加2g碘化鉀及20%硫酸溶液20ml，搖勻，于