DNS法測定纖維素酶活實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)及優(yōu)化方案

1、DNS法測定酶活實(shí)驗(yàn)方法總結(jié)及優(yōu)化方案目前纖維素酶沒有統(tǒng)一的測定方法，諸多因素影響纖維素酶酶活測定大小的比較。選擇適宜的酶活測定條件，提高測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，可根據(jù)有關(guān)資料中采用的測定條件，以及通過控制變量法對酶活力測定中的主要影響因素進(jìn)行研究。目前實(shí)驗(yàn)室采用測酶活方法:1、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：試管號1234561mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液/ml00.10.20.30.40.5蒸餾水量/ml0.50.40.30.20.10葡萄糖濃度/mg/ml00.20.40.60.81PH4.8磷酸氫二鈉-檸檬酸/ml1.51.51.51.51.51.5DNS試齊 U /ml333333沸水浴7min后快速冷卻加

2、入蒸餾水/ml555555530nm比色。2、酶活測定方法:管號空白管0樣品管1樣品管2酶液/ml0.50.50.5沸水滅活10mi n1%CMC-Na/ml1.51.51.545°C下反應(yīng)30min，沸水滅活10minDNS試劑/ml333沸水浴中7min顯色快速冷卻后蒸餾水/ml555考慮到酶液中培養(yǎng)基成分會(huì)對吸光值造成一定的影響，所以空白管0還是采用先將酶高溫滅活的方法，后面保持實(shí)驗(yàn)條件一致，顯色時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)曲線的顯色時(shí)間保持一致單位酶活的計(jì)算:酶活力（U / ml）二1OD n 1000 kTn：稀釋倍數(shù);K :曲線斜率；T:反應(yīng)時(shí)間，min ；1000： mg 換算成 ug.

3、以下是近期所做的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:兩種產(chǎn)纖維素酶細(xì)菌不同測試結(jié)果濃度mg/ml吸光值總酶活（10ml）單位酶活濃度mg/ml吸光值總酶活（10ml）單位酶活R2上清（未0.2290.12566776.457727.645772183上清（未0.4020.22133.851713.38517破碎）0.2390.13066779.49987.94998破碎）0.4050.222135.068513.50685R2破碎（無0.4260.233333141.963914.19639183破碎（無0.43833330.24146.0214.602緩沖未離心）0.3840.21128.37612.8376緩沖未離

4、心）0.45466660.249151.495815.14958R2破碎（無 緩沖取上清）0.3070.167667102.011210.20112183破碎（無 緩沖取上清）0.4270.234142.369514.236950.3120.170667103.836510.383650.4430.243147.845314.78453R2破碎 （1:1 緩 沖取上清）0.21566660.11871.793197.179319183破碎 （1： 1 緩 沖取上清）0.2090.11569.967946.9967940.25166660.13883.961528.3961520.16166660.08954.14915.41491測定結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)論：從以上幾種對酶液的處理方法來看，183的酶活要比R2高，兩種菌都是以胞外酶為主。目前尚沒找到有關(guān)于加緩沖溶液并且超聲破碎的文獻(xiàn)，所得測量結(jié)果與前面三種方法均不符，這一步需另外探索。根據(jù)纖維素酶活力測定條件研究（夏服寶等，飼料工業(yè)2005年第26卷第16期）和影響纖維素酶活力測定的幾個(gè)因素（劉妙蓮等，