制劑研發(fā)分析要點

1、一、相關(guān)文獻(xiàn)資料的查閱u相關(guān)科學(xué)書籍、期刊雜志、專業(yè)網(wǎng)站、論文專著、專利等 (Merck Index、PDR、日本橙皮書、CDE、FDA公布的溶出曲線數(shù)據(jù)庫、維普數(shù)據(jù)庫、丁香園、歐洲藥品評價局EMEA、馬丁代爾大藥典）u原料藥及制劑成品的藥典專論 （USP、EP、JP、BP、CP、USP-PF、進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)）u原研藥的有關(guān)信息 （藥物說明書，可確定藥物日最大劑量，為制訂雜質(zhì)限度提供依據(jù)）u公司內(nèi)原料藥部門的相關(guān)信息及供應(yīng)商的技術(shù)文檔（DMF） 包括原料藥的分析方法、驗證資料、合成工藝信息等二、對照制劑、對照品、色譜柱、試劑的購買u購買原研品（FDA橙皮書上的產(chǎn)品）時皆應(yīng)盡可能獲取不同時間段的多個批

2、號樣品（至少3批），如出廠不久和臨近有效期，進(jìn)行溶出曲線對比，雜質(zhì)譜對比，穩(wěn)定性對比（影響因素試驗和長期、加速穩(wěn)定性）。三、分析方法（HPLC）的摸索n 儀器設(shè)備（Agilent 、waters、Shimadzu等）n 色譜柱的選擇（C18、C8、Phenyl、CN、Chiral等）n 洗脫模式：等度或梯度 (雜質(zhì)檢測方法盡可能采用梯度洗脫）n 流動相組成及比例：乙腈/甲醇：水/緩沖液 甲醇/水、乙腈/水、加緩沖液（可加甲醇、四氫呋喃等優(yōu)化分離）n 是否用緩沖液或離子對試劑：酸、堿或中性化合物n 緩沖劑、緩沖液pH、緩沖能力及離子強度的選擇 （磷酸鹽：pH2.1-3.1、pH6.2-8.2；醋

3、酸鹽： pH3.8-5.8)n 檢測器及檢測波長的選擇 (方法開發(fā)初期，應(yīng)選DAD或PDA檢測器來開方法，雜質(zhì)方法所選波長應(yīng)能檢測到所有雜質(zhì)，且雜質(zhì)與主峰的紫外吸收相當(dāng)，并且應(yīng)該有足夠的靈敏度(LOQ濃度0.05%)；含量方法所選波長應(yīng)選擇該藥物主峰的最大吸收）三、分析方法（HPLC）的摸索n 流速、進(jìn)樣體積、柱溫n 樣品溶劑的選擇等 （盡可能用流動相來溶解，若流動相不能溶解，可先加有機溶劑溶解，再用流動相稀釋，或選用與流動相極性相近的稀釋劑）n 樣品溶液制備的振搖或超聲時間三、分析方法（HPLC）的摸索申報SFDA時，若USP、EP、CP等均收載該產(chǎn)品的雜質(zhì)檢測方法，應(yīng)先通過3個藥典方法的比

4、較，對比檢出雜質(zhì)的個數(shù)，含量，確定質(zhì)量控制最嚴(yán)格，最全面檢測方法，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化。若申報FDA時，應(yīng)該嚴(yán)格按照USP要求檢測，不得隨意更改。雜質(zhì)分析方法應(yīng)能檢測所有的工藝雜質(zhì)和降解產(chǎn)物，因此在無藥典方法參考時，制劑分析方法的開發(fā)應(yīng)盡量與本公司API的檢測方法保持一致，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化，使主峰與雜質(zhì)及雜質(zhì)與雜質(zhì)之間均能達(dá)到有效分離。現(xiàn)USP與進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)中多采用含量與雜質(zhì)相同的色譜條件。詳細(xì)說明該方法的研究進(jìn)程報告（CTD格式申報中必須要求的內(nèi)容）所開發(fā)的方法應(yīng)具有穩(wěn)定性指示能力，特別關(guān)注質(zhì)量守衡，可通過進(jìn)行強力降解試驗來證明，守衡要97%以上。必要時，可結(jié)合LC-MS。原

5、料工藝中的雜質(zhì)（起始物料、中間體等），如果含量不高且不降解，可以不再控制。分析方法應(yīng)盡可能在處方研究前確定，以保證處方研發(fā)數(shù)據(jù)的有效性和連續(xù)性。 四、處方前研究u原料藥理化性質(zhì)測定p 性狀 包括原料藥的顏色、氣味和外觀p 晶形 多晶型、無定形、水合物等 可影響藥物的溶解度，溶出度，顆粒流動性，可壓性，穩(wěn)定性若非穩(wěn)定晶型在生產(chǎn)中或領(lǐng)存中可能發(fā)生轉(zhuǎn)晶 如有不同晶型存在，共有幾種晶型？哪種是最穩(wěn)定晶型？原料藥采用哪種晶型？是否存在任何專利侵權(quán)問題？ 檢測方法：X衍射、紅外、DSC、TGA四、處方前研究u原料藥理化性質(zhì)測定p 粒徑分布 可影響溶出度，顆粒流動性、與輔料的混合等 檢測方法：篩分法，瑪爾文

6、激光散射掃描法、顯微鏡法p 熔點 DSC（熱分析法）p 水中的pH值p 酸堿解離常數(shù)(pKa)p 吸濕性 濕度：30%、40%、50%、60%、70%、80%和90% 時間：0、1、2、3、10、14天 CP中規(guī)定在80%RH條件下放置24小時四、處方前研究u原料藥理化性質(zhì)測定p 溶解度 有機溶劑的溶解度（甲醇、乙腈、不同濃度的乙醇（100%、75%、50%）等（溫度：室溫） pH-溶解度測定（水、pH1-7.5、pH=pKa、pH=pKa+1、pH=pKa-1)，考慮到實驗偏差，每個pH處的溶解度應(yīng)至少測定3次，并繪制“pH-溶解度”曲線，并且測定樣品溶解前后溶液的pH值及在不同pH條件下的

7、溶液穩(wěn)定性。（溫度：37） 不同濃度的SDS或吐溫80溶液（適用于水溶性差的原料藥，濃度按照1、2、5序列增加，即0.01%、0.02%、0.05%、0.1%、0.2%、0.5%、1.0%、2.0%，最高至3.0%），考慮到實驗偏差，每個pH處的溶解度應(yīng)至少測定3次，研究中應(yīng)注意不同來源的表面活性劑可能會對試驗結(jié)果帶來顯著性差異的情況。（溫度：37） 影響溶解度的因素：溶劑、pH、溫度 注意事項：降解、晶型轉(zhuǎn)變 目的：為溶出介質(zhì)選擇、含量和有關(guān)物質(zhì)測定時樣品溶液制備提供信息四、處方前研究u原料藥理化性質(zhì)測定p 原料藥的穩(wěn)定性 進(jìn)行影響因素試驗，初步考察API的穩(wěn)定性 條件：根據(jù)CP要求進(jìn)行高溫

8、（60 40）、高濕（75%RH 92.5%RH)、強光照射(4500Lux500Lux)等條件下的實驗，分別于5天、10天取樣檢測。 原料藥強力降解試驗 溶液：高溫、強酸、強堿、氧化、光照 固體：高溫、高濕、光照 重點關(guān)注各條件下的降解產(chǎn)物；質(zhì)量守衡。 應(yīng)考慮PH對降解的影響。四、處方前研究n API與輔料相容性研究 實驗條件：50(敞口)/40 RH75%(閉口) 取樣時間：2周 4周 考察內(nèi)容：性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)、DSC等 前提：1、確定了有效和穩(wěn)定的分析方法 2、完成了API降解和溶液穩(wěn)定性，明確了主要雜質(zhì) 和降解產(chǎn)物 注意實驗數(shù)據(jù)前后的邏輯性，發(fā)現(xiàn)實驗偏差，及時調(diào)查。n 藥物與藥品

9、包材相容性的研究 藥品包裝材料與藥物相容性試驗是指為考察藥品包裝材料與藥物之間是否發(fā)生遷移或吸附等現(xiàn)象，進(jìn)而影響藥物質(zhì)量而進(jìn)行的一種試驗。 藥品包材主要包括玻璃、橡膠、金屬、塑料等，注射劑應(yīng)采用正放、倒放、側(cè)放同時進(jìn)行考察。 實驗條件：按照影響因素、加速、長期穩(wěn)定性條件進(jìn)行考察 考察內(nèi)容：同影響因素、加速、長期穩(wěn)定性項目* 參考資料：YBB00142002藥品包裝材料與藥物相容性試驗指藥品包裝材料與藥物相容性試驗指導(dǎo)原則導(dǎo)原則 四、處方前研究n 溶出度或釋放度方法的研究 （重點關(guān)注溶出方法對產(chǎn)品的區(qū)分能力及溶出均一性是否合理）溶出裝置的選擇（轉(zhuǎn)籃法與漿法） 轉(zhuǎn)籃法常用于膠囊，也可用于片劑；漿法

10、常用于片劑，也用于膠囊劑；不建議采用小杯法（CP第三法） 注意：若采用轉(zhuǎn)籃法時，片劑或膠囊劑溶出過程中發(fā)生堵塞轉(zhuǎn)籃孔隙，樣品塌陷于籃底，或黏附于籃頂?shù)惹闆r，建議改為槳法或加沉降籃。 若在漿法檢查過程中，對于易漂浮于液面的片劑或膠囊，易發(fā)生始終黏附于溶出杯的不同部位而導(dǎo)致溶出數(shù)據(jù)均一性較差的情況（薄膜衣片或緩釋片），可采用槳法加沉降籃或改為轉(zhuǎn)籃法。轉(zhuǎn)速的選擇 應(yīng)采用較為緩和轉(zhuǎn)速，籃法：100-50rpm，漿法：50-75rpm，使溶出方法具有更好的區(qū)分能力溶出介質(zhì)體積的選擇 500ml、900ml、1000ml（需滿足漏槽條件，至少3倍于藥物飽和濃度體積的介質(zhì)體積） n 溶出度或釋放度方法的研究

11、 溶出介質(zhì)的選擇 普通制劑1）酸性藥物制劑 pH值分別為1.0或1.2、5.5-6.5、6.8-7.5和水2）中性或堿性藥物/包衣制劑 pH值分別為1.0或1.2、3.0-5.0、6.8和水3）難溶性藥物制劑 pH值分別為1.0或1.2、4.0-4.5、6.8和水4）腸溶制劑 pH值分別為1.0或1.2、6.0、6.8和水 緩釋制劑 pH值分別為1.0或1.2、3.0-5.0、6.8-7.5和水 美國統(tǒng)一采用 pH值分別為1.0、4.5、6.8和水 應(yīng)滿足藥品在該介質(zhì)中最終溶出量達(dá)85%以上 無論何種制劑都不建議采用pH8.0以上的介質(zhì)，除非有充分的依據(jù)。 盡量不采用水作為溶出介質(zhì)，因為其pH

12、值和表面張力可能隨水的來源不同而不同，且在實驗過程中也可能由于藥物和輔料的影響而發(fā)生改變。但對于藥物溶出速率與pH值無關(guān)的制劑，水也是可適的介質(zhì) 配制溶出介質(zhì)用水必須先經(jīng)脫氣處理n 溶出度或釋放度方法的研究 溶出介質(zhì)的選擇 對于難溶于水的藥物，可在溶出介質(zhì)中添加表面活性劑（十二烷基硫酸鈉或吐溫-80），但應(yīng)對添加種類與濃度進(jìn)行評價。另外由于表面活性劑的質(zhì)量可能存在明顯差異，應(yīng)注意不同來源的表面活性劑可能會對試驗結(jié)果帶來顯著性差異的情況，尤其使用十二烷基硫酸鈉時。建議采用分析級或高純度的來避免上述情況，并在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中注明使用的品牌，便于其后的試驗易于重現(xiàn)。 禁止使用有機溶劑 試驗前應(yīng)首先進(jìn)行原料

13、藥在各pH值溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性考察，以確保試驗數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確測定 也可采用pH1.2不含酶的人工胃液和pH6.8不含酶的人工腸液。 當(dāng)硬膠囊使用的囊殼為明膠膠囊時，為避免產(chǎn)生交聯(lián)現(xiàn)象影響溶出時可加入胃蛋白酶或胰蛋白酶。n溶出度或釋放度方法的研究溶出介質(zhì)的選擇 謝沐風(fēng)老師觀點1、根據(jù)該藥物在體內(nèi)吸收的主要消化道部位的生理pH2、能在一定程度上反映體內(nèi)外相關(guān)性的pH（適用于創(chuàng)新藥）3、最能體現(xiàn)不同來源制劑間彼此差異的pH4、最能反映生產(chǎn)工藝變化、偏差的pH5、溶出最低的pH6、溶出數(shù)據(jù)精密度更佳的pH測定法 UV（測定的吸收度范圍0.20.8）或HPLC；對于復(fù)方制劑，應(yīng)首選HPLC取樣時間點(普通制

14、劑） 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中為單點取樣，一般為刻鐘的整數(shù)倍（15、30、45、60、90、120min)；有些治療窗窄，防止突釋的產(chǎn)品會訂多個取樣點。 溶出曲線：間隔5、10或15分鐘取樣；通常規(guī)定5、10、15、20、30、45、60分鐘n 溶出度或釋放度方法的研究注意點 上述研究應(yīng)盡可能有對照制劑數(shù)據(jù)的支持。 應(yīng)取12片與原研制劑進(jìn)行多條溶出曲線對比，每種介質(zhì)溶出量必須有一點達(dá)到85%以上，且F2均應(yīng)大于50，計算時間點應(yīng)不少于3個，且溶出量在85%以上的時間點不得多于1個。在處方研究時，時間點盡可能多點，這樣對于F2的跟蹤評價更加充分和清晰 當(dāng)出現(xiàn)主成分在某pH介質(zhì)中極不穩(wěn)定，溶解后即迅速分解，無法

15、測定的情況，則該介質(zhì)溶解度可不測定，其溶出曲線亦可免做。 對于溶出曲線測定第1個時間點的各溶出數(shù)據(jù)的RSD大于20%，以及在其后的時間點的溶出數(shù)據(jù)RSD大于10%，溶出結(jié)果就可以被認(rèn)為具有高度變異性。溶出結(jié)果的高度變異性使得處方、工藝等變化對制劑質(zhì)量的影響無法進(jìn)行測定和評估。應(yīng)從方法適用性或處方本身考慮予以解決 對于溶出度考察需在不同pH介質(zhì)中進(jìn)行，在方法建立階段，尚有必要對溶出前后的pH是否發(fā)生變化進(jìn)行檢查。 若溶出度均值超出含量2.0%以上，則說明溶出度測定方法有干擾。五、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立如果已有多個藥典標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)采用最嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)包括：性狀、鑒別、檢查、含量n 性狀 制劑的

16、性狀是考察樣品的外形和顏色。如片劑應(yīng)描述是什么顏色的壓制片或包衣片（包薄膜衣和糖衣），除去包衣后片芯的顏色，以及片子的形狀，如異形片（長條形、橢圓形、三角形等）；片面有無印字或刻痕或有商標(biāo)記號等也應(yīng)描述。硬膠囊劑應(yīng)描述內(nèi)容物的顏色、形狀等。注射劑一般為澄明液體（水溶液），但也有混懸液或粘稠性溶液，需注意對顏色的描述，還應(yīng)考察貯藏過程中性狀是否有變化。五、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立n 鑒別 通常采用靈敏度高、專屬性較強、操作較簡便、不受輔料干擾的方法對制劑進(jìn)行鑒別。鑒別試驗一般至少采用二種以上不同類的方法，如化學(xué)反應(yīng)法、色譜法（HPLC、GC、TLC）、和光譜法（UV、IR） 化學(xué)反應(yīng)法： 選擇官能團專屬的

17、化學(xué)反應(yīng)進(jìn)行鑒別。包括顯色反應(yīng)、沉淀反應(yīng)等 色譜法： HPLC、GC法采用保留時間對比來鑒別；TLC法采用比移值（Rf）和顯色等進(jìn)行鑒別。 光譜法： IR是鑒別試驗的重要方法，應(yīng)注意根據(jù)產(chǎn)品的性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)闹谱鞣椒?。UV應(yīng)規(guī)定在指定溶劑中的最大吸收波長，必要時，規(guī)定最小吸收波長；或規(guī)定幾個最大吸收波長處的吸光度比值或特定波長處的吸光度，以提高鑒別的專屬性。五、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立n 檢查 各種制劑需進(jìn)行的檢查項目，除應(yīng)附合相應(yīng)的制劑通則中的共性規(guī)定外（具體內(nèi)容參照CP2010藥典附錄中制劑通則），還應(yīng)根據(jù)其特性、工藝及穩(wěn)定性考察結(jié)果，制訂其他的檢查項目 溶出度（普通制劑：片劑或膠囊劑） 取樣時間點及

18、限度（Q）的制訂：以第1次出現(xiàn)溶出量均在85%以上兩時間點，且該兩點溶出量差在5%以內(nèi)時（即“平臺期”)，取前一時間點作為質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中取樣時間點，并將該點溶出量減去15%作為溶出限度。這就將通常認(rèn)為的“溶出度取樣時間點常選擇溶出曲線拐點處后推10-20min”原則予以明確化和具體化，即“拐點處后的10-20min”即為溶出飽和“平臺期”。由此推斷：溶出限度一般僅有70%、75%、80%、85%四個數(shù)值。如第一時間點為20min，由于其不為刻種的整數(shù)倍，一般提高至15min，但限度僅減去10%。五、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立n 檢查 釋放度（緩釋制劑、控釋制劑、腸溶制劑） 緩釋制劑、控釋制劑取樣時間點及限度（

19、Q）的制訂：應(yīng)至少設(shè)定3個時間點（服用方式1天2次）或4個時間點數(shù)（服用方式1天1次）：第1點為避免“突釋”，應(yīng)設(shè)定試驗1-2小時后或釋放量相當(dāng)于標(biāo)示量10%-30%的時間點；第二點是為考察藥品溶出特性，應(yīng)設(shè)定在釋放量約50%的時間點；最后一點是為確保藥物釋放量超過80%的時間點。如共擬定4點，第2、3、4個時間點的釋放量應(yīng)分別約為40%、60%和80%。任何一點的擬定范圍均不應(yīng)超過標(biāo)示量的20%，且各點釋放限度交叉范圍建議不要超過5%，除非體內(nèi)特征可顯示出相應(yīng)的可接受性和波動性。 五、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立n 檢查 釋放度（緩釋制劑、控釋制劑、腸溶制劑） 腸溶制劑取樣時間點及限度（Q）的制訂(CP2

20、010附錄中規(guī)定）： 溶出介質(zhì)：0.1NHCl ； 取樣時間：2小時； 限度：6片釋放量均小于10%； 溶出介質(zhì)：pH6.8緩沖液 取樣時間：45分鐘（75%）、 30分鐘（75%）或各品種項下規(guī)定的時間 限度：除另有規(guī)定，6片的溶出度應(yīng)為標(biāo)示量的70% 注：對于主成分在0.1NHCl中不穩(wěn)定的腸溶制劑，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中還應(yīng)訂入“酸中釋放量”，即測定在酸中釋放后的片劑所含的主成分量，一般限度訂為不得低于90%。*USP對溶出限度的要求為：Q+5% 崩解時限 五、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立n 檢查 有關(guān)物質(zhì)（雜質(zhì)） 有關(guān)物質(zhì)主要是指在生產(chǎn)過程中帶入的工藝雜質(zhì)（起始原料、中間體、聚合體、異構(gòu)體、反應(yīng)副產(chǎn)物），以及在

21、穩(wěn)定性考察過程中的降解產(chǎn)物。但制劑中雜質(zhì)的考察重點是降解產(chǎn)物，包括制劑生產(chǎn)工藝過程中、穩(wěn)定性考察過程中和強降解試驗下產(chǎn)生的雜質(zhì)。若上述工藝雜質(zhì)也是降解產(chǎn)物，也應(yīng)訂入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 限度的確定 各國藥典、進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)、ICH中的規(guī)定 與原研藥進(jìn)行雜質(zhì)譜對比（0天與穩(wěn)定性）-必須做 以列表方式對比分析雜質(zhì)譜情況，具體包括各保留時間雜質(zhì)的種類、個數(shù)及含量情況，采用HPLC-DAD、LC-MS等手段確認(rèn)相應(yīng)雜質(zhì)的同質(zhì)性。若在質(zhì)量對比研究與穩(wěn)定性研究中顯示，樣品檢出多個原研制劑中不存在且含量大于ICH中雜質(zhì)鑒定限規(guī)定的限度，應(yīng)對上述雜質(zhì)進(jìn)行鑒定等相應(yīng)研究（制備雜質(zhì)，并進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)），或者通過處方工藝將其降低至鑒定限度以下。 每日最大劑量報告閾值1g0.1%1g0.05%鑒別閾值1mg1.0%或5 ug TDI，（取閾值低者）1-10mg0.5%或20 ug TDI，（取閾值低者）10mg-2g0.2%或2 mg TDI，（取閾值低者）2g0.10%質(zhì)控閾值10mg1.0%或50 ug TDI，（取閾值低者）10-