PCR實驗室的基本設(shè)備與要求

1、PCR 實驗室的基本設(shè)備與要求臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法第一章總則第一條 為規(guī)范臨床基因擴增檢驗實驗室管理，保證臨床基因擴增檢驗質(zhì)量，使臨床診斷和治療更為科學(xué)、合理，特制定本辦法。第二條 臨床基因擴增檢驗技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴增檢測 DNA或 RNA為方法的檢測技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（ PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（ LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)（ TAS）自主序列復(fù)制系統(tǒng)（ 3SR）和鏈替代擴增（ SDA）等。第三條 本辦法適用于開展臨床基因擴增檢驗的實驗室。臨床基因擴增檢驗實驗室設(shè)立在二級以上醫(yī)院。第四條 臨床基因擴增檢驗實驗室必須使用經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗試劑開展臨

2、床基因擴增檢驗項目。第五條 衛(wèi)生部臨床檢驗中心（以下簡稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗中心（以下簡稱省臨檢中心） 負(fù)責(zé)對所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴增檢驗實驗室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。第二章 實驗室設(shè)置和驗收第六條 擬設(shè)置臨床基因擴增檢驗實驗室的醫(yī)療機構(gòu)按照臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)（見附件）籌建實驗室；籌建完成后，由法定代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗收申請。申請時需提交以下材料：（一）醫(yī)療機構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證復(fù)印件；（二）可行性研究報告；1、 擬設(shè)臨床基因擴增檢驗實驗室機構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機構(gòu)的基本情況、對臨床基因擴增檢驗的需求以及臨床基因擴增實驗室運行的預(yù)測分析；2、

3、 擬設(shè)臨床基因擴增檢驗實驗室的設(shè)置平面圖；3、 擬設(shè)臨床基因擴增檢驗實驗室將開展的檢驗項目、實驗設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料第七條 衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關(guān)專業(yè)的專家組（以下簡稱專家組） ，按照臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)對提出申請的臨床基因擴增檢驗實驗室進(jìn)行技術(shù)驗收。驗收完成后，在20 日內(nèi)將驗收報告寄送至申請機構(gòu)。第八條 經(jīng)專家組技術(shù)驗收合格的醫(yī)療機構(gòu)將本辦法第六條規(guī)定的材料及專家組驗收報告送至省級行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級衛(wèi)生行政部門后15 日內(nèi)未收到省級衛(wèi)生行政部門不同意的意見，方可開展專家組技術(shù)驗收合格的臨床基因擴增檢驗項目。第九條 未經(jīng)專家組驗收合

4、格并報省級衛(wèi)生行政部門備案的醫(yī)療機構(gòu)不得擅自開展臨床基因擴增檢驗項目。第三章實驗室監(jiān)督管理第十條 臨床基因檢驗實驗室必須按照 臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范 （另發(fā)） 開展臨床基因擴增檢驗工作。第十一條臨床基因擴增檢驗實驗室技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)。經(jīng)培訓(xùn)合格者，由培訓(xùn)單位發(fā)給合格證書， 并將培訓(xùn)合格人員名單報衛(wèi)生部臨檢中心備案。 獲得培訓(xùn)合格證書者方可從事臨床基因擴增檢驗工作。培訓(xùn)單位為衛(wèi)生部臨檢中心，或由省級衛(wèi)生行政部門指定并經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)定的機構(gòu)。培訓(xùn)時使用規(guī)定的統(tǒng)一教材。第十二條 以科研為目的的基因擴增檢驗項目。不得向臨床出具檢驗報告，不得向病人收取任何費用。第十三條 臨床基因擴增

5、檢驗實驗室必須按照臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范開展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加衛(wèi)生部臨檢中心組織的室內(nèi)質(zhì)量評價。第十四條衛(wèi)生部臨檢中心按照本方法和臨床基因擴增實驗室工作規(guī)范協(xié)調(diào)、組織省臨檢中心對臨床基因擴增檢驗實驗室的檢驗質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測。監(jiān)測結(jié)果報省級衛(wèi)生行政部門，同時抄送被監(jiān)測的臨床基因擴增檢驗實驗室所在醫(yī)療機構(gòu)。第十五條衛(wèi)生部臨檢中心或省級臨檢中心受省級以上衛(wèi)生行政部門委托可對臨床基因擴增檢驗實驗室進(jìn)行現(xiàn)場檢查， 現(xiàn)場檢查工作人員在履行職責(zé)時應(yīng)出示證件。在進(jìn)行現(xiàn)場檢查時，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查機構(gòu)不得拒絕或隱瞞。第十六條衛(wèi)生部臨檢中心對在室間質(zhì)量評價中不合格的臨床基因擴增檢驗實驗室提出警告，

6、對連續(xù)二次或三次中有二次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴增檢驗結(jié)果不合格的臨床基因擴增檢驗實驗室，衛(wèi)生部臨檢中心報省級以上衛(wèi)生行政部門由省級以上衛(wèi)生行政部門責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴增檢驗項目， 限期整改。 經(jīng)專家組進(jìn)行再次技術(shù)驗收并合格，并報省級衛(wèi)生行政部門核準(zhǔn)后，方可重新開展臨床基因擴增檢驗項目。第十七條對于未經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組技術(shù)驗收合格并報省級衛(wèi)生部門備案，擅自開展臨床基因檢驗項目的醫(yī)療機構(gòu)，由省級衛(wèi)生行政部門依據(jù)醫(yī)療機構(gòu)管理條例第四十七條和醫(yī)療機構(gòu)管理條例實施細(xì)則第八十條予以處罰，并予以公告。 公告所需費用由被公告機構(gòu)支付。第十八條出現(xiàn)下列情況之一的臨床基因擴增檢驗實驗室，由省級衛(wèi)生行政部門責(zé)

7、令其停止開展臨床基因擴增檢驗，并對其所在醫(yī)療機構(gòu)予以公告。公告所需費用由被公告機構(gòu)支付：（一） 開展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術(shù)驗收合格并報省級衛(wèi)生行政部門備案臨床基因擴增檢驗項目的；（二）使用未經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑開展臨床基因擴增檢驗的；（三）在臨床基因擴增檢驗中未開展室內(nèi)質(zhì)量控制的；（四）在臨床基因擴增檢驗中未參加室間質(zhì)量評價的；（五）在臨床基因擴增檢驗中弄虛作假的；（六）以科研為目的的基因擴增檢驗項目向病人收取費用的；（七）使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴增檢驗的；第四章附則第十九條對采供血機構(gòu)的基因擴增檢驗實驗室開展基因擴增檢驗項目的管理，參照本辦法執(zhí)行。第二十條

8、衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組對申請開展臨床基因擴增檢驗的實驗室進(jìn)行技術(shù)驗收所需費用按國家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。第二十一條本辦法由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)解釋。第二十二條本辦法自發(fā)布之日起施行。附：臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)臨床檢驗擴增檢驗實驗室管理暫行辦法 ，制定本標(biāo)準(zhǔn)一、 臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)置原則（一）臨床基因擴增檢驗實驗室區(qū)域設(shè)置原則1、 試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)2、 標(biāo)本制備區(qū)3、 擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)4、 擴增產(chǎn)物分析區(qū)如使用全自動分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并。（二）各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。（三）進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)

9、>標(biāo)本制備區(qū)>擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)>擴增產(chǎn)物分析區(qū)。（四） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色） 。工作人員離開各工作區(qū)域時，不得將工作服帶出。二、工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)（一）試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)1、 2-8C 和-15C 冰箱2、混勻器3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul ）4、移動紫外燈（近工作臺面）5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）6、專用工作服和工作鞋7、專用辦公用品（二）標(biāo)本制備區(qū)1、 2-8C 冰箱、 -20C 或 -80C 冰箱2、高速臺式冷凍離心機3、混允器4、水浴箱或加熱模塊5、微量加樣器（覆蓋1-

10、1000ul ）6、可移動紫外燈（近工作臺面）7、超凈工作臺8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）9、專用工作服和工作鞋10、專用辦公用品如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。（三）擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)1、 核酸擴增儀2、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul ）3、 可移動紫外燈（近工作臺面）4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）5、 專用工作服和工作鞋6、 專用辦公用品( 四 ) 擴增產(chǎn)物分析區(qū)視檢驗方法不同而定?；緝x器設(shè)備如下：1、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul ）2、 可移動紫外燈（近工作臺面

11、）3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）4、 專用工作服和工作鞋5、 專用辦公用品臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范為使基因擴增檢驗技術(shù)有效地應(yīng)用于臨床，更好地為疾病的預(yù)防、診斷和治療服務(wù)， 保證檢驗質(zhì)量，特制定本規(guī)范。一、臨床基因擴增檢驗實驗室的規(guī)范化設(shè)置及其管理臨床基因擴增檢驗實驗室的規(guī)范化設(shè)置詳見臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法( 衛(wèi)醫(yī)發(fā) 200210 號文 ) 附件臨床基因擴增檢驗實驗室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)。為避免污染，必須嚴(yán)格遵循臨床基因擴增檢驗實驗室設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)設(shè)置臨床基因擴增檢驗實驗室。臨床基因擴增檢驗實驗室四個隔開的工作區(qū)域中每一區(qū)域都須有專用的儀器設(shè)備。各區(qū)域都必須有

12、明確的標(biāo)記， 以避免設(shè)備物品如加樣器或試劑等從其各自的區(qū)域內(nèi)移出從而造成不同的工作區(qū)域間設(shè)備物品發(fā)生混淆。進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向順序，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、 標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)( 簡稱擴增區(qū) ) 至產(chǎn)物分析區(qū)，避免發(fā)生交叉污染。 在不同的工作區(qū)域應(yīng)使用不同顏色或有明顯區(qū)別標(biāo)志的工作服，以便于鑒別。此外，當(dāng)工作者離開工作區(qū)時，不得將各區(qū)特定的工作服帶出。清潔方法不當(dāng)也是污染發(fā)生的一個主要原因，因此實驗室的清潔應(yīng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)至擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進(jìn)行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。( 一 ) 試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)下述操作在該區(qū)進(jìn)行：貯存試

13、劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的材料應(yīng)直接運送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過產(chǎn)物分析區(qū)。 在打開含有反應(yīng)混合液的離心管或試管前，應(yīng)將其快速離心數(shù)秒。 試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。當(dāng)貯存試劑溶液經(jīng)檢查可用后，應(yīng)將其分裝貯存?zhèn)溆茫苊庥捎诮?jīng)常打開反應(yīng)管吸液而造成污染。含反應(yīng)混合液的離心管或試管在冰凍前都應(yīng)快速離心數(shù)秒。大多數(shù)用于擴增的試劑都應(yīng)冰凍貯存。 為避免因單次反應(yīng)取液而頻繁的凍融主貯存試劑，應(yīng)分裝冰凍貯存試劑溶液。貯存試劑的分裝體積根據(jù)通常在實驗室內(nèi)一次測定所需的擴增反應(yīng)數(shù)來決定。主反應(yīng)混合液的組成成份尤其是聚合酶的適用性和穩(wěn)定

14、性通過預(yù)試驗來檢查，評價結(jié)果必須有書面報告。 對于 " 熱啟動 " 技術(shù) ( 在第一個高溫變性步驟后加入酶) ，聚合酶也可不包含在主反應(yīng)混合液中。在整個本區(qū)的實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外， 操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施。嚴(yán)禁用嘴吸取液體，加樣器和吸頭等必須經(jīng)高壓處理。工作結(jié)束后必須立即對工作區(qū)進(jìn)行清潔。本工作區(qū)的實驗臺表面應(yīng)可耐受諸如次氯酸鈉的化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。 實驗臺表面的紫外照射應(yīng)方便有效。由于紫外照射的距離和能量對去污染的效果非常關(guān)鍵，因此可使用可移動紫外燈(254nm 波長 ) ，在工作完成后調(diào)至實驗臺上 6090cm 內(nèi)照射。由于擴增產(chǎn)物僅幾百 bp，對紫外線損傷不敏感，因此紫外照射擴增片段必須延長照射時間，最好是照射過夜。實驗室及其設(shè)備的使用必須有日常記錄。( 二 ) 標(biāo)本制備區(qū)下述操作在該區(qū)進(jìn)行：臨床標(biāo)本的保存，核酸 (RNA、