MS培養(yǎng)基配方

1、實驗八 MS培養(yǎng)基的配制和滅菌一、實驗?zāi)康模毫私馀囵B(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程和分裝方法。、實驗材料:天平、牛角匙、量筒、燒杯、攪拌機(jī)、膠桶、組培瓶、6種母液、白沙糖、活性炭、卡拉膠三、方法步驟1母液配制大量元素(母液I ) mg/L 100ml。 微量元素(母液U ) (3)鐵鹽(母液川) 有機(jī)成分(母 液W) IV A和W B 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)(2, 4-D, NAA)以上各種營養(yǎng)成分的用量，除了母液 I為10倍濃縮液外，其余的均為100倍濃縮液。其中，母液I、母液U及母液V的配制方法是：每種母液中的幾種成分稱量完畢后，分別用少量的蒸餾水徹底溶解，然后再將它們混溶，最后定容到1 L

2、 o母液川的配制方法是：將稱好的FeS04 7H2O和Na2-EDTA 2H2O分別放到450 mL蒸餾水 中，邊加熱邊不斷攪拌使它們?nèi)芙?，然后將兩種溶液混合，并將 pH調(diào)至5.5，最后定容到1 L，保存在棕色玻璃瓶中。各種母液配完后，分別用玻璃瓶貯存，并且貼上標(biāo)簽，注明母液號、配制倍數(shù)、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培養(yǎng)基中還需要加入2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)、萘乙酸(NAA)、6芐基嘌呤(6BA)等 植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)，并且分別配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是：分別稱取這3種物質(zhì)各10 mg，將2，4-D和NAA用少量(1 mL)無水乙醇預(yù)溶，將6BA用少量(1 mL

3、)的物質(zhì)的量濃度為0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，溶解過程需要水浴加熱，最后分別定容至100 mL ,即得質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL的母液。2、培養(yǎng)基配制(1) 配制培養(yǎng)液用量筒從各種母液中分別取出所需的用量：母液I為100 ml，母液U、M、V A和V B各10ml。再取2，4-D 10ml、NAA 2ml，與各種母液一起放入燒杯中。(2) 稱取54g卡拉膠；300g蔗糖；活性炭1g。(3) 在膠桶中加入規(guī)定量的各種母液，包括生長調(diào)節(jié)物質(zhì)。(4) 加水定容至1升，開攪拌機(jī)，攪勻混合液。定容至 10升，攪勻。(5) 向母液混合物加入白沙糖，繼續(xù)攪拌；然后停一下攪拌機(jī)再加卡拉膠，開攪拌機(jī)

4、混勻;接著再停攪拌機(jī)加活性炭，開攪拌機(jī)攪勻。(6) 調(diào)pH 用滴管吸取物質(zhì)的量濃度為1 mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培養(yǎng)基中， 邊滴邊攪拌，并隨時用精密的 pH試紙(5.47.0)測培養(yǎng)基的pH，一直到培養(yǎng)基的pH為5.8 為止(培養(yǎng)基的pH必須嚴(yán)格控制在5.8)(7) 將培養(yǎng)基分裝到所選用的培養(yǎng)容器中，約30ml/瓶。(8) 蓋住瓶口(9) 滅菌。待需要滅菌的物品碼放完畢，蓋上鍋蓋。在 98 kPa、121.3 C下，滅菌20 min。滅菌后取出錐形瓶，讓其中的培養(yǎng)基自然冷卻凝固。最好放置1d后再使用。四、分析1. MS母液分得更加細(xì)，一般實驗室只分大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)

5、成分四大類。這里將大量元素中鈣離子與硫酸根離子分開配，避免產(chǎn)生不溶物，將硼酸也單獨(dú)列出來。另外， 培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長繁殖和(或)代謝產(chǎn)物的形成和積累。2. 在配制培養(yǎng)基時應(yīng)盡量利用廉價且易于獲得的原料作為培養(yǎng)基成分。例如能用卡拉膠就不 用瓊脂。3. 用攪拌機(jī)比較方便。但要人工不好，分配溶液缺乏量化。4. 加入活性炭可使培養(yǎng)基變黑，有利于離體生根，還可以降低分泌物的毒害作用。附：MS培養(yǎng)基配方:成分分子量使用濃度（mg/L）大量元素（母液I）硝酸鉀101.111900硝酸銨80.041650磷酸二氫鉀136.09170硫酸鎂246.47370氯化鈣147.02440微量元素（母液U）碘化鉀166.010.83硼酸61.836.2硫酸錳223.0122.3硫酸鋅287.548.6鉬酸鈉241.950.25硫酸銅249.680.025氯化鉆237.930.025鐵鹽（母液川）乙二胺四乙酸二鈉372.2537.3硫酸亞鐵