綠原酸對Aβ引起小腦顆粒細胞損傷保護作用

1、綠原酸對ab引起小腦顆粒細胞損傷保護作用【摘 要】目的：探討綠原酸對淀粉樣b蛋白(amyloid beta-protein, ab)引起的小腦顆粒細胞損傷 的保護作用。方法：體外培養(yǎng)小腦顆粒細胞和腹腔巨噬細胞, 將經(jīng)過10umol/l ab預(yù)處理48h的巨噬細胞上清液移入神 經(jīng)細胞中，同時加200 umol/l的綠原酸。培養(yǎng)2天后，采 用mtt法、western bolt和乳酸脫氫酶檢測試劑盒檢測細胞 活性、微管相關(guān)蛋白 -2 ( microtubule- associated protein-2 , map-2 )表達水平和乳酸脫氫酶(lactic dehydrogenase, ldh)漏出

2、量。結(jié)果：將ab預(yù)處理的巨 噬細胞上清液移入到單獨培養(yǎng)的小腦顆粒細胞48h后，可使 小腦顆粒細胞活性明顯降低，僅為正常的28. 35%,加入綠原 酸后，細胞活性明顯增加達到正常的75. 82%(p2. 3乳酸脫氫酶檢測在正常培養(yǎng)的神經(jīng)細胞中，乳酸脫氫酶的量 只有802nkat/l,但在正常培養(yǎng)的神經(jīng)細胞+巨噬細胞上清液 組中，乳酸脫氫酶漏出量顯著升高，達到3046 nkat/l,說 明神經(jīng)細胞在加入經(jīng)ab誘導(dǎo)后的巨噬細胞的培養(yǎng)上清液 后，大量的神經(jīng)細胞受損，導(dǎo)致大量的乳酸脫氫酶的漏出， 而同時加入綠原酸后，在很大程度上可以減少由巨噬細胞上 清液引起的神經(jīng)細胞膜的損傷，對神經(jīng)細胞起到明顯的保護

3、作用（表2）。3討論阿爾茨海默病是以進行性癡呆為主要臨床特征的神經(jīng) 系統(tǒng)退行性疾病，其病理特征是大腦皮質(zhì)和海馬區(qū)域出現(xiàn)神 經(jīng)元缺失、神經(jīng)炎性斑塊和神經(jīng)原纖維纏結(jié)。阿爾茨海默病 造成神經(jīng)元喪失的主要機制是細胞凋亡。許多學(xué)者研究表 明，ab對神經(jīng)細胞沒有直接毒性作用，在純海馬神經(jīng)細胞 培養(yǎng)中加入ab,并未出現(xiàn)對神經(jīng)細胞的殺傷作用4。作者 對此也進行了初步研究，單獨培養(yǎng)的神經(jīng)細胞中加入ab, 只見少量的神經(jīng)細胞死亡，而經(jīng)ab孵育的巨噬細胞的上清 液能引起大量的神經(jīng)細胞凋亡。這些結(jié)果表明，ab通過激 活巨噬細胞，使其釋放一些細胞因子，進一步導(dǎo)致神經(jīng)細胞 的凋亡。在單獨培養(yǎng)的神經(jīng)細胞中也出現(xiàn)少量的細胞凋

4、亡， 因為在培養(yǎng)神經(jīng)細胞的過程中即使加入阿糖胞昔，以抑制膠 質(zhì)細胞的生長，但神經(jīng)細胞不能達到完全純化，膠質(zhì)細胞仍 存在一定的活性。因此實驗中采用ab預(yù)處理巨噬細胞，再 將上清液加入神經(jīng)細胞培養(yǎng)基中用以模擬體內(nèi)的生理狀態(tài)。綠原酸是從中藥杜仲中提取出來的主要活性成分。具有 抗炎、抗氧化、抑制氨基酸代謝等藥理作用5。它能直接 對抗炎癥介質(zhì)的作用，降低炎癥組織中前列腺素e2的釋放 量，抑制炎癥滲出，從而抑制隨后產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)。有研究 報道，綠原酸的抗炎作用的位點可能是小膠質(zhì)細胞。本實驗 結(jié)果顯示，加入綠原酸組的乳酸脫氫酶漏出量較ab預(yù)處理 巨噬細胞上清組明顯減少，對ab引起的神經(jīng)細胞膜損傷具 有保護作

5、用；map-2是細胞骨架中微管的重要組成成分之一, 是神經(jīng)細胞中的標志性微管相關(guān)蛋白，分布于胞體、樹突及 軸突中。map-2可反映神經(jīng)細胞的存活狀態(tài)和功能，其變化 可代表神經(jīng)細胞病變。應(yīng)用經(jīng)ab預(yù)處理的巨噬細胞上清可 引起神經(jīng)細胞的微管相關(guān)蛋白-2表達明顯減少；但在加入巨 噬細胞上清液的同時加入綠原酸后，小腦顆粒細胞map-2表 達明顯增加，說明綠原酸能夠抑制ab引起的神經(jīng)細胞膜損 傷和神經(jīng)細胞的死亡，對神經(jīng)細胞具有保護作用。參考文獻：1 王抒，孫蘭，杜冠華.p38mapk-控制阿爾采末病進 程的新靶點j.中國藥理學(xué)通報，2004； 20 (5)： 595-8.2 劉軍，劉嵐，曹志中，等.腫瘤壞死因子對創(chuàng)傷后 牙髓組織修復(fù)的調(diào)節(jié)作用j.中國臨床康復(fù)，2004. 8 (5)： 860-1.3 烏蘭，張澤生.金銀花中綠原酸的提取及檢測j. 食品科學(xué)，2011, 29 (6)： 130-134.4 戚向陽，張聲華，陸彩玲等杜仲葉中綠原酸的提 取分離研究