04動物細胞培養(yǎng)HXY

1、 動物的細胞和組織培養(yǎng)動物的細胞和組織培養(yǎng)：從動物體內取出組：從動物體內取出組織或細胞，模擬機體內生理條件，在體外建織或細胞，模擬機體內生理條件，在體外建立無菌、適溫和一定營養(yǎng)條件等，使之生長立無菌、適溫和一定營養(yǎng)條件等，使之生長和生存，并維持其結構和功能的技術。和生存，并維持其結構和功能的技術。 4.1.1 體外培養(yǎng)細胞的分型 按生長方式分為按生長方式分為3 3型：型： 貼壁型貼壁型細胞細胞: :附著在某一固相支持物表面才附著在某一固相支持物表面才能生長的細胞。能生長的細胞。 懸浮型懸浮型細胞細胞: :不必附著于固相支持物表面，不必附著于固相支持物表面，在懸浮狀態(tài)下即可生長的細胞。在懸浮狀態(tài)

2、下即可生長的細胞。 半貼壁型半貼壁型細胞細胞（一）貼附型細胞：（一）貼附型細胞：大多數(shù)培養(yǎng)細胞貼附生長，屬于貼壁依賴性細胞大多數(shù)培養(yǎng)細胞貼附生長，屬于貼壁依賴性細胞貼附貼附: :是大多數(shù)有機體細胞在體內生存和生長發(fā)育的基本存是大多數(shù)有機體細胞在體內生存和生長發(fā)育的基本存在方式在方式結果結果: : 基于貼附特性，使細胞與細胞之間相互結合形成組基于貼附特性，使細胞與細胞之間相互結合形成組織，有機體的絕大多數(shù)細胞必須織，有機體的絕大多數(shù)細胞必須貼附貼附于一于一固相表面固相表面才能才能生生存存和和生長生長。培養(yǎng)時：培養(yǎng)時：這些細胞被放到體外環(huán)境中以后這些細胞被放到體外環(huán)境中以后, ,同樣需要貼附于同樣

3、需要貼附于某一固相表面才能生存和生長，因而某一固相表面才能生存和生長，因而屬于貼附型細胞屬于貼附型細胞貼附貼附( (錨定或錨著錨定或錨著) )依賴型依賴型( (性性) )細胞細胞細胞在體內、外的貼附方式存在差異細胞在體內、外的貼附方式存在差異體內：體內：貼附是全方位貼附是全方位, ,外形具有復雜的立體特征外形具有復雜的立體特征體外：體外：多數(shù)情況，細胞只有一個附著平面，外多數(shù)情況，細胞只有一個附著平面，外形一般與體內時明顯不同形一般與體內時明顯不同貼附的固相表面：貼附的固相表面：玻璃、聚苯乙烯塑料玻璃、聚苯乙烯塑料按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為四大類型四大類型 1

4、 1、成纖維細胞型：、成纖維細胞型：名稱：名稱：成纖維細胞成纖維細胞來源：來源：由中胚層間充質組織起源的組織由中胚層間充質組織起源的組織真正的成纖維細胞：心肌，平滑肌，成骨細胞，真正的成纖維細胞：心肌，平滑肌，成骨細胞，血管內皮血管內皮形態(tài)：形態(tài)：似體內成纖維細胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則似體內成纖維細胞的形態(tài)，胞體梭形或不規(guī)則三角形，胞質向外伸出三角形，胞質向外伸出2323個長短不等的突起，個長短不等的突起，中有卵圓形核中有卵圓形核生長特點：生長特點：排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片，排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片， 細胞細胞- -細胞接觸易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維細胞接觸

5、易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維樣細胞，常有幾個伸長的細胞突起樣細胞，常有幾個伸長的細胞突起2 2、上皮細胞型、上皮細胞型名稱：名稱：僅形態(tài)上似體內，實際上不完全相同僅形態(tài)上似體內，實際上不完全相同來源：來源：來源于外胚層、內胚層細胞來源于外胚層、內胚層細胞, , 如：皮膚及其衍生物如：皮膚及其衍生物, ,消化道，乳腺，肺泡消化道，乳腺，肺泡, , 上皮性腫瘤上皮性腫瘤形態(tài)：形態(tài)：類似體內的上皮細胞，扁平，不規(guī)則多角形，中類似體內的上皮細胞，扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核有圓形核 生長特點：生長特點：易相連成片，相靠易相連成片，相靠緊密相連成薄層緊密相連成薄層鋪石鋪石狀生長時呈膜狀移動，很

6、少脫離細胞群而單個活動狀生長時呈膜狀移動，很少脫離細胞群而單個活動3 3、游走細胞型：、游走細胞型：呈散在生長，一般不連成片，胞質呈散在生長，一般不連成片，胞質常突起，呈活躍游走或變形運動，方向常突起，呈活躍游走或變形運動，方向不規(guī)則。此型細胞不穩(wěn)定，有時難以和不規(guī)則。此型細胞不穩(wěn)定，有時難以和其他細胞相區(qū)別。其他細胞相區(qū)別。4 4、多形型細胞：、多形型細胞：有一些細胞，如神經細胞難以確定有一些細胞，如神經細胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。 （二）懸浮型細胞：（二）懸浮型細胞：見于少數(shù)特殊的細胞，如某些類型的癌細胞及白血病見于少數(shù)特殊的細胞，如某些

7、類型的癌細胞及白血病細胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這細胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細胞容易大量繁殖。類細胞容易大量繁殖。來源：來源：血，脾或骨髓，血中白細胞癌腫細胞血，脾或骨髓，血中白細胞癌腫細胞特點：特點：在懸浮中生長良好，細胞圓形、單個或小細胞在懸浮中生長良好，細胞圓形、單個或小細胞團團優(yōu)點：優(yōu)點：生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便( (不需消不需消化化) )，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài)缺點：缺點：純化不方便，不能通過離心將死、活細胞分離純化不方便，不能通過離心將死、活細胞分離 4.1.2 培養(yǎng)細胞的生長

8、特點 1. 1.貼附貼附 貼壁貼壁伸展伸展 影響因素：影響因素：鈣離子鈣離子機械、物理因素機械、物理因素生物因素生物因素細胞貼壁過程 2. 2.接觸抑制接觸抑制 細胞接觸細胞接觸停止移動停止移動 正常細胞成單層生長正常細胞成單層生長 腫瘤細胞無接觸抑制腫瘤細胞無接觸抑制，可，可以堆積生長。以堆積生長。 接觸抑制可作為區(qū)分正常細胞接觸抑制可作為區(qū)分正常細胞與癌細胞的標志之一與癌細胞的標志之一 3. 3.密度抑制密度抑制 細胞增殖，密度加大，培養(yǎng)液細胞增殖，密度加大，培養(yǎng)液營養(yǎng)成分消耗，細胞代謝物增營養(yǎng)成分消耗，細胞代謝物增多，導致發(fā)生密度抑制，細胞多，導致發(fā)生密度抑制，細胞分裂停止分裂停止4.1

9、.3 培養(yǎng)細胞的生長和增殖過程（一）單個細胞的生長過程（二）細胞系的生長過程（三）每代細胞的生長過程（一）單個細胞的生長過程 細胞周期細胞周期：一個母：一個母細胞分裂結束后形細胞分裂結束后形成的細胞到下一次成的細胞到下一次再分裂結束形成兩再分裂結束形成兩個子細胞的時期。個子細胞的時期。（二）細胞系的生長過程培養(yǎng)細胞的生命期：培養(yǎng)細胞的生命期：是指細胞在培養(yǎng)中持續(xù)增是指細胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長的時間。包括殖和生長的時間。包括原代培養(yǎng)期、傳代期及衰退原代培養(yǎng)期、傳代期及衰退期。期。細胞的生長曲線細胞的生長曲線1 1原代培養(yǎng)期：原代培養(yǎng)期：從體內取出組織從體內取出組織, ,接種培養(yǎng)到第一次傳代階段

10、（接種培養(yǎng)到第一次傳代階段（初代培養(yǎng)）初代培養(yǎng)）特點特點：1-41-4周、細胞呈活躍的移動、可見細胞分周、細胞呈活躍的移動、可見細胞分裂、形態(tài)結構和功能活動上與體內原組織相似裂、形態(tài)結構和功能活動上與體內原組織相似性大、多呈性大、多呈二倍體核型二倍體核型細胞群是異質的，細胞克隆形成率很低，即細細胞群是異質的，細胞克隆形成率很低，即細胞獨立生存性差。胞獨立生存性差。2 2傳代期：傳代期：初代培養(yǎng)細胞一經傳代后便改稱做初代培養(yǎng)細胞一經傳代后便改稱做細胞系細胞系。在全。在全生命期中此期的持續(xù)時間最長。在培養(yǎng)條件較好生命期中此期的持續(xù)時間最長。在培養(yǎng)條件較好情況下，細胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型，情

11、況下，細胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型，呈二倍體核型的細胞稱呈二倍體核型的細胞稱二倍體細胞系二倍體細胞系。為保持二。為保持二倍體細胞性質，細胞應在初代培養(yǎng)期或傳代后早倍體細胞性質，細胞應在初代培養(yǎng)期或傳代后早期凍存。一般情況下當傳代期凍存。一般情況下當傳代10105050次左右，細胞次左右，細胞增殖逐漸緩慢，以至完全停止，細胞進入第三期增殖逐漸緩慢，以至完全停止，細胞進入第三期。 3 3衰退期：衰退期：此期細胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細此期細胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細胞形態(tài)輪廓增強，最后衰退凋亡。胞形態(tài)輪廓增強，最后衰退凋亡。在細胞生命期階段，少數(shù)情況下，在以上三期在細胞生命期階

12、段，少數(shù)情況下，在以上三期任何一點，由于某種因素的影響，細胞可能發(fā)任何一點，由于某種因素的影響，細胞可能發(fā)生自發(fā)生自發(fā)轉化轉化。轉化的標志之一是細胞可能獲得。轉化的標志之一是細胞可能獲得永生性永生性或或惡性性惡性性。細胞永生性細胞永生性也稱不死性，即細胞獲持久性增殖也稱不死性，即細胞獲持久性增殖能力，這樣的細胞群體稱能力，這樣的細胞群體稱無限細胞系無限細胞系，也稱，也稱連連續(xù)細胞系續(xù)細胞系。無限細胞系的形成主要發(fā)生在第二。無限細胞系的形成主要發(fā)生在第二期末，或第三期初階段。細胞獲不死性后，核期末，或第三期初階段。細胞獲不死性后，核型大多變成型大多變成異倍體異倍體。細胞轉化亦可用人工方法。細胞轉

13、化亦可用人工方法誘發(fā)，轉化后的細胞也可能具有惡性性質。誘發(fā)，轉化后的細胞也可能具有惡性性質。（三）每代細胞的生長過程所謂細胞的所謂細胞的“一代一代”是指從細胞接種到分是指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間。這已成為培養(yǎng)工作中離再培養(yǎng)的一段時間。這已成為培養(yǎng)工作中的一種習慣說法，它的一種習慣說法，它與細胞倍增一代非同一與細胞倍增一代非同一含義含義。如某一細胞系為第。如某一細胞系為第153153代細胞，即指代細胞，即指該細胞系已傳代該細胞系已傳代153153次。它與細胞世代或倍次。它與細胞世代或倍增不同；在增不同；在細胞一代中，細胞能倍增細胞一代中，細胞能倍增3 36 6次次。 細胞傳一代后細胞傳一

14、代后，一般要經過，一般要經過以下三個階段以下三個階段：潛伏期潛伏期指數(shù)生長期指數(shù)生長期停止期停止期1 1潛伏期潛伏期游離游離: :懸浮懸浮, ,胞質回縮胞質回縮, , 全部細胞全部細胞變?yōu)閳A球形變?yōu)閳A球形吸附吸附: :貼附底物貼附底物, ,一般一般2424小時內貼小時內貼壁壁潛伏潛伏: :可有運動活動可有運動活動, ,基本無增基本無增殖殖, , 少見分裂相少見分裂相 2 2指數(shù)生長期：指數(shù)生長期：細胞增值最旺盛的階段，細胞分裂相增多。細胞增值最旺盛的階段，細胞分裂相增多。細胞細胞活力最旺盛活力最旺盛的階段，培養(yǎng)物中的階段，培養(yǎng)物中細胞數(shù)量細胞數(shù)量呈指數(shù)增長呈指數(shù)增長, ,細胞群體均一，是理想的

15、實驗用細胞群體均一，是理想的實驗用細胞細胞接觸抑制：細胞運動停止接觸抑制：細胞運動停止密度抑制：細胞終止分裂密度抑制：細胞終止分裂3 3停止期：停止期：細胞數(shù)量達飽和密度后，細胞停止增殖，進細胞數(shù)量達飽和密度后，細胞停止增殖，進入停止期，也稱入停止期，也稱平臺期平臺期。停滯期細胞雖不增。停滯期細胞雖不增殖，但仍有代謝活動，繼而培養(yǎng)液中營養(yǎng)漸殖，但仍有代謝活動，繼而培養(yǎng)液中營養(yǎng)漸趨耗盡，代謝產物積累、趨耗盡，代謝產物積累、phph降低。此時需降低。此時需做分離培養(yǎng)即傳代，否則細胞會中毒，發(fā)生做分離培養(yǎng)即傳代，否則細胞會中毒，發(fā)生形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡潛伏期潛伏期

16、指數(shù)生長期指數(shù)生長期停止期停止期4.1.4 培養(yǎng)細胞的遺傳學特征（一）染色質與染色體：（一）染色質與染色體： 正常細胞：二倍體正常細胞：二倍體 細胞發(fā)生轉化：多倍體或異倍體細胞發(fā)生轉化：多倍體或異倍體（二）細胞性別（二）細胞性別 女性：女性：barrbarr小體小體 男性：男性：y y小體小體4.1.5 體內外細胞的差異及培養(yǎng)細胞的分化 經多次傳代增殖后，培養(yǎng)細胞將失去原有經多次傳代增殖后，培養(yǎng)細胞將失去原有的組織結構和細胞形態(tài)，分化逐漸減弱或的組織結構和細胞形態(tài)，分化逐漸減弱或不顯。形態(tài)與功能逐漸單一化，細胞衰老不顯。形態(tài)與功能逐漸單一化，細胞衰老或死亡，或發(fā)生轉化，獲得不死性或惡性或死亡，

17、或發(fā)生轉化，獲得不死性或惡性性。性。 4.2.1 細胞培養(yǎng)常用液體 1. 1.水水 三蒸水、純水三蒸水、純水 2. 2.平衡鹽溶液（平衡鹽溶液（bssbss）由生理鹽水發(fā)展而來，由無機鹽和葡萄糖配制而成。由生理鹽水發(fā)展而來，由無機鹽和葡萄糖配制而成?？删S持滲透壓、調節(jié)可維持滲透壓、調節(jié)phph值、供給細胞生存所需的能量值、供給細胞生存所需的能量和無機離子。主要用于合成培養(yǎng)基的基礎液和洗滌組和無機離子。主要用于合成培養(yǎng)基的基礎液和洗滌組織、細胞等。織、細胞等。hankshanks液和液和earleearle液是常用的液是常用的bssbss基礎溶液?；A溶液。 3. 3.消化液消化液胰蛋白酶胰蛋白

18、酶edta-naedta-na溶液溶液膠原酶膠原酶 4. 4.消化酶抑制液：消化酶抑制液：用于終止消化酶的作用用于終止消化酶的作用血清血清大豆胰酶抑制劑大豆胰酶抑制劑 5. 5.培養(yǎng)基培養(yǎng)基phph調整液調整液：常用的有：常用的有：3.73.7、5.65.6、7.47.4的的nahconahco3 3溶液和溶液和hepeshepes溶液（二羥乙基哌溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）等。嗪乙烷磺酸）等。 6. 6.抗生素液抗生素液：青霉素、鏈霉素、卡那霉素、慶大青霉素、鏈霉素、卡那霉素、慶大霉素霉素 7. 7.谷氨酰胺補充液谷氨酰胺補充液：谷氨酰胺在合成培養(yǎng)基中谷氨酰胺在合成培養(yǎng)基中必須添加，它不穩(wěn)定

19、，需及時補充。必須添加，它不穩(wěn)定，需及時補充。 4.2.2 培養(yǎng)基 1. 1.培養(yǎng)基的基本要求培養(yǎng)基的基本要求 按照來源分：按照來源分：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基無血清培養(yǎng)基無血清培養(yǎng)基1. 1. 天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基q 天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：直接取自動物體液或從組織中提取的天然直接取自動物體液或從組織中提取的天然成分作培養(yǎng)液，但成分復雜，來源有限。成分作培養(yǎng)液，但成分復雜，來源有限。q （1 1）血清）血清：血漿去除纖維蛋白所得血漿去除纖維蛋白所得。營養(yǎng)豐富，其中溶營養(yǎng)豐富，其中溶有多種物質，如無機鹽離子、蛋白質及氨基酸、糖類（有多種物質，如無機鹽離子、蛋白質及氨基酸、糖類（

20、如葡萄糖等）、脂類、激素、固醇、抗體、維生素等。如葡萄糖等）、脂類、激素、固醇、抗體、維生素等。血清由于營養(yǎng)豐富，且含有多種細胞生長因子、促貼附血清由于營養(yǎng)豐富，且含有多種細胞生長因子、促貼附因子及其多活性物質，能使細胞順利增殖生長因子及其多活性物質，能使細胞順利增殖生長，應用最，應用最廣。缺點是組成復雜，使培養(yǎng)結果不穩(wěn)定。廣。缺點是組成復雜，使培養(yǎng)結果不穩(wěn)定。q 常用新生犢牛血清和胎牛血清。常用新生犢牛血清和胎牛血清。 （2 2）胚胎提取液）胚胎提取液：雞胚、牛胚提取液，能促進雞胚、牛胚提取液，能促進細胞生長。來源有限。不常用。細胞生長。來源有限。不常用。 （3 3）水解乳白蛋白）水解乳白蛋

21、白：是乳白蛋白經蛋白酶和肽是乳白蛋白經蛋白酶和肽酶水解后的產物，含豐富氨基酸。用酶水解后的產物，含豐富氨基酸。用hankshanks液配液配制成制成0.5%0.5%溶液，與合成培養(yǎng)基按比例混合使用。溶液，與合成培養(yǎng)基按比例混合使用。多用于細胞系和原代細胞的培養(yǎng)。多用于細胞系和原代細胞的培養(yǎng)。 （4 4）膠原）膠原：膠原是從動物真皮或大鼠尾腱中提膠原是從動物真皮或大鼠尾腱中提取的，具改善細胞表面特性促使其附著生長的作取的，具改善細胞表面特性促使其附著生長的作用。用。2. 2. 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基是用化學物質人工模擬合成，種類相合成培養(yǎng)基是用化學物質人工模擬合成，種類相當多。合成培養(yǎng)

22、基成分已知，便于對實驗條件的控制當多。合成培養(yǎng)基成分已知，便于對實驗條件的控制。但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法。但與天然培養(yǎng)基相比，有些天然的未知成分尚無法用已知的化學成分所替代，因此，細胞培養(yǎng)中使用的用已知的化學成分所替代，因此，細胞培養(yǎng)中使用的基礎合成培養(yǎng)基基礎合成培養(yǎng)基還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分還必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分，以克服合成培養(yǎng)基的不足。最普遍的作法是，以克服合成培養(yǎng)基的不足。最普遍的作法是加入小加入小牛血清，稱為完全培養(yǎng)基牛血清，稱為完全培養(yǎng)基。 基本培養(yǎng)基，基本培養(yǎng)基，如如109109培養(yǎng)液、培養(yǎng)液、dmemdmem、tc199tc199、rpmi-

23、1640rpmi-1640、memmem培養(yǎng)液等。培養(yǎng)液等。 合成培養(yǎng)基的組成：合成培養(yǎng)基的組成： （1 1）氨基酸：氨基酸是細胞合成蛋白質的基本成分，）氨基酸：氨基酸是細胞合成蛋白質的基本成分， 1212種必須氨基酸必須由培養(yǎng)液提供。需加一定量的谷種必須氨基酸必須由培養(yǎng)液提供。需加一定量的谷氨酰胺。氨酰胺。 （2 2）維生素：包括水溶性和脂溶性兩類。一般由血清）維生素：包括水溶性和脂溶性兩類。一般由血清供應。供應。 （3 3）無機離子：包括大量和微量無機離子，通常也可）無機離子：包括大量和微量無機離子，通常也可由血清提供。由血清提供。 （4 4）碳源：以葡萄糖為主。）碳源：以葡萄糖為主。 （

24、5 5）其他：嘌呤、嘧啶、輔酶及抗氧化劑等。）其他：嘌呤、嘧啶、輔酶及抗氧化劑等。 動物血清成分復雜，各種生物大小分子混動物血清成分復雜，各種生物大小分子混合在一起，有些成分至今尚未合在一起，有些成分至今尚未明確明確，后期對培，后期對培養(yǎng)產物的分離、提純以及檢測會造成一定困難養(yǎng)產物的分離、提純以及檢測會造成一定困難。另外高質量的動物血清來源有限，成本高，。另外高質量的動物血清來源有限，成本高，限制了它的大量使用。限制了它的大量使用。 3.3.無血清培養(yǎng)基無血清培養(yǎng)基 無血清培養(yǎng)基不加動物血清，一般由無血清培養(yǎng)基不加動物血清，一般由基礎基礎培養(yǎng)培養(yǎng)液液和和替代血清的替代血清的添加添加成分成分（細

25、胞生長有效（細胞生長有效因子，激素等）兩部分組成。因子，激素等）兩部分組成。 可保證實驗結果的準確性和穩(wěn)定性。但成可保證實驗結果的準確性和穩(wěn)定性。但成本較高，針對性較強，一種無血清培養(yǎng)基只適本較高，針對性較強，一種無血清培養(yǎng)基只適用于某一類細胞的培養(yǎng)。用于某一類細胞的培養(yǎng)。 主要用于：研究細胞生長因子、單克隆抗體的主要用于：研究細胞生長因子、單克隆抗體的制備、以及細胞分泌產物研究制備、以及細胞分泌產物研究 （1 1）基礎培養(yǎng)）基礎培養(yǎng)液液 根據(jù)不同培養(yǎng)細胞選擇合適的合成培養(yǎng)基根據(jù)不同培養(yǎng)細胞選擇合適的合成培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基。常用作為基礎培養(yǎng)基。常用dmemdmem和和f12f12以以1 1：

26、1 1比例混比例混合作為基礎培養(yǎng)基，用合作為基礎培養(yǎng)基，用nahconahco3 3或或hepeshepes溶液調整溶液調整p ph h。（2 2）補充成分）補充成分激素和生長因子激素和生長因子：激素有胰島素、生長激素和多種：激素有胰島素、生長激素和多種生長因子如表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、生長因子如表皮生長因子、成纖維細胞生長因子、增殖刺激因子、類胰島素生長因子等。主要是刺激增殖刺激因子、類胰島素生長因子等。主要是刺激生長，維持細胞功能的作用。生長，維持細胞功能的作用。結合蛋白結合蛋白和轉運蛋白和轉運蛋白：主要是轉鐵蛋白（增強細胞：主要是轉鐵蛋白（增強細胞攝取培養(yǎng)基中鐵的能力，可螯合痕

27、量有害金屬離子攝取培養(yǎng)基中鐵的能力，可螯合痕量有害金屬離子）和白蛋白（參與運載一些脂類、金屬離子等，也）和白蛋白（參與運載一些脂類、金屬離子等，也有螯合過量微量元素的作用）兩種蛋白。有螯合過量微量元素的作用）兩種蛋白。 貼壁和鋪展因子貼壁和鋪展因子：幫助細胞貼壁和鋪展。如：幫助細胞貼壁和鋪展。如纖黏蛋白、血清鋪展因子、膠原等。纖黏蛋白、血清鋪展因子、膠原等。 微量元素和低分子量營養(yǎng)因子微量元素和低分子量營養(yǎng)因子：硒元素、?。何?、丁二胺、亞油酸等。二胺、亞油酸等。 酶抑制劑酶抑制劑：常用大豆胰酶抑制劑。：常用大豆胰酶抑制劑。影響動物細胞培養(yǎng)的因素影響動物細胞培養(yǎng)的因素 （1 1）溫度）溫度

28、：哺乳動物最適溫度哺乳動物最適溫度36.536.50.5 0.5 ；對低溫耐受性比高溫強。對低溫耐受性比高溫強。 （2 2）p ph h：7.4之間。低于之間。低于6.86.8或高于或高于7.67.6細胞細胞生長受到影響，生長受到影響，甚至死亡。甚至死亡。偏酸性耐受較強，偏堿性偏酸性耐受較強，偏堿性很快死亡。很快死亡。 （3 3）氣體）氣體：o o2 2；coco2 2，還可調節(jié)，還可調節(jié)p ph h。 （4 4）滲透壓）滲透壓：不同細胞要求不同。不同細胞要求不同。 定義定義 動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)：就是將動物組織或細胞從：就是將動物組織或細胞從機體中取出，分散成單個細胞，

29、給予必要機體中取出，分散成單個細胞，給予必要的生長條件，模擬體內的生長環(huán)境，使其的生長條件，模擬體內的生長環(huán)境，使其在體外繼續(xù)生長和增殖的技術。在體外繼續(xù)生長和增殖的技術。 體外培養(yǎng)可分為體外培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)和和傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)。動物細胞體外培養(yǎng)的特點動物細胞體外培養(yǎng)的特點: :大多數(shù)須附著在固體或半固體的表面才能生長。大多數(shù)須附著在固體或半固體的表面才能生長。對于營養(yǎng)要求苛刻，除氨基酸、維生素、鹽類、葡對于營養(yǎng)要求苛刻，除氨基酸、維生素、鹽類、葡萄糖或半乳糖外，還需要血清。萄糖或半乳糖外，還需要血清。對培養(yǎng)環(huán)境極其敏感，包括對培養(yǎng)環(huán)境極其敏感，包括p ph h、溶解氧、溫度、剪、溶

30、解氧、溫度、剪切力等都需嚴格監(jiān)控。切力等都需嚴格監(jiān)控。生長緩慢，培養(yǎng)時間長，培養(yǎng)代價大生長緩慢，培養(yǎng)時間長，培養(yǎng)代價大污染問題難以控制。污染問題難以控制。 幼齡動物取動物器官和組織剪碎組織胰蛋白酶處理細胞培養(yǎng)養(yǎng)單個細胞轉入培養(yǎng)液中進行轉入培養(yǎng)液中進行原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) 4.3.1 原代培養(yǎng) 原代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。原代細胞。 特點：特點：原代細胞剛剛離體，生物學特性未發(fā)生大變原代細胞剛剛離體，生物學特性未發(fā)生大變化，仍具有二倍體遺傳特性，最接近和反應生物體化，仍具有二倍體遺傳特性，最接近和反應生物體內生長特性，內生長特性，是藥物檢測、

31、細胞分化的很好實驗工是藥物檢測、細胞分化的很好實驗工具。具。 原代細胞通常由多種細胞組成（異質性），細胞獨原代細胞通常由多種細胞組成（異質性），細胞獨立生存性差立生存性差過程過程 組織組織取材取材 組織細胞的分離分離 培養(yǎng)培養(yǎng) 機械法機械法 消化法消化法 動物胚胎或幼齡動動物胚胎或幼齡動物的組織、器官物的組織、器官細胞懸液細胞懸液胰蛋白酶胰蛋白酶1 1代細胞代細胞原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)5050代細胞代細胞傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)無限傳代無限傳代單個細胞單個細胞加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液動物組織細胞間隙動物組織細胞間隙中含有一定量的彈中含有一定量的彈性纖維等蛋白質，性纖維等蛋白質，將細胞網(wǎng)絡起來形將細胞網(wǎng)絡起來形成具有

32、一定彈性和成具有一定彈性和韌性的組織和器官。韌性的組織和器官。（分解彈性纖維）（分解彈性纖維） （一）組織取材（一）組織取材 1. 1. 雞胚組織：用于病毒與疫苗研究雞胚組織：用于病毒與疫苗研究 2. 2. 鼠胚組織：與人最相近的哺乳動物組織，取材鼠胚組織：與人最相近的哺乳動物組織，取材方便，易于培養(yǎng)。方便，易于培養(yǎng)。機機械械法法分分離離胚胚胎胎 3. 3. 皮膚和粘膜：多來源于手術，需嚴格消皮膚和粘膜：多來源于手術，需嚴格消毒以消滅細菌霉菌。毒以消滅細菌霉菌。 4. 4. 血細胞：靜脈取血、指尖或耳垂取血。血細胞：靜脈取血、指尖或耳垂取血。加加肝素肝素抗凝劑防止凝血?？鼓齽┓乐鼓?5.

33、5. 內臟和實體瘤：主要源于外科手術和活內臟和實體瘤：主要源于外科手術和活檢組織。檢組織。 （二）組織細胞的分離（二）組織細胞的分離 有有機械法機械法和和消化法消化法兩大類兩大類 1. 1.機械法：機械法： 離心分離法：離心分離法：適用于細胞懸液組織。適用于細胞懸液組織。500-1000rpm500-1000rpm離心離心5-10min5-10min。 切割分離法：切割分離法：用剪刀剪切成用剪刀剪切成1mm1mm3 3左右的小塊。左右的小塊。 機械分散法：機械分散法：擠壓和研磨，適用于纖維含量少的擠壓和研磨，適用于纖維含量少的組織。組織。 （二）組織細胞的分離（二）組織細胞的分離 2. 2.消

34、化法：可使組織疏松，細胞分開，細胞容易消化法：可使組織疏松，細胞分開，細胞容易生長，成活率高。生長，成活率高。 胰蛋白酶消化法：胰蛋白酶消化法：適于消化細胞間質較少的適于消化細胞間質較少的軟組織，對傳代細胞也適用。使用濃度一般為軟組織，對傳代細胞也適用。使用濃度一般為0.1%-0.5%0.1%-0.5%，用不含鈣、鎂離子的，用不含鈣、鎂離子的bssbss配制，配制，ph8-9ph8-9。血清有抑制其活性作用。血清有抑制其活性作用。 胰蛋白酶消化法有熱胰蛋白酶消化法有熱(37)(37)和冷和冷(4 )(4 )兩種處理兩種處理。 膠原酶消化法：膠原酶消化法：膠原酶是由細菌中提取出的膠原酶是由細菌中

35、提取出的酶，適用于消化纖維組織、上皮組織或膠原成酶，適用于消化纖維組織、上皮組織或膠原成分的組織?？捎煤}、鎂離子的分的組織?？捎煤}、鎂離子的bssbss配制或溶配制或溶于含血清的培養(yǎng)液中。使用濃度一般為于含血清的培養(yǎng)液中。使用濃度一般為0.1-0.1-0.3mg/ml0.3mg/ml，3737溫育。溫育。 優(yōu)點：消化緩和、無需機械振蕩優(yōu)點：消化緩和、無需機械振蕩 缺點：價格昂貴缺點：價格昂貴 可與胰蛋白酶混用可與胰蛋白酶混用其他消化酶消化法其他消化酶消化法：鏈霉蛋白酶、黏蛋白酶、透：鏈霉蛋白酶、黏蛋白酶、透明質酸酶等。明質酸酶等。螯合劑消化法：螯合劑消化法：常用螯合劑有檸檬酸鈉、常用螯合劑

36、有檸檬酸鈉、edta-edta-nana2 2等。可用不含鈣、鎂離子的等?？捎貌缓}、鎂離子的bssbss配制成配制成0.02%0.02%溶液。溶液。edtaedta適于消化傳代細胞，不受血清抑制，消化后需適于消化傳代細胞，不受血清抑制，消化后需徹底清洗。徹底清洗。 （三）培養(yǎng)方法（三）培養(yǎng)方法 1. 1.組織塊培養(yǎng)法組織塊培養(yǎng)法：簡便，成功率較低：簡便，成功率較低 2. 2.單層細胞培養(yǎng)法單層細胞培養(yǎng)法: :將解離得到的細胞用培養(yǎng)液將解離得到的細胞用培養(yǎng)液配制成一定密度的細胞懸液，接種培養(yǎng)。配制成一定密度的細胞懸液，接種培養(yǎng)。 3. 3.懸浮細胞培養(yǎng)法懸浮細胞培養(yǎng)法：指細胞懸浮在培養(yǎng)液中生指

37、細胞懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖的培養(yǎng)方法。少數(shù)動物細胞（血液和淋長增殖的培養(yǎng)方法。少數(shù)動物細胞（血液和淋巴組織細胞等非貼壁動物細胞）可懸浮生長，巴組織細胞等非貼壁動物細胞）可懸浮生長，采集組織分散、過濾、離心、純化、漂洗后接采集組織分散、過濾、離心、純化、漂洗后接種培養(yǎng)。種培養(yǎng)。 4.3.2 傳代培養(yǎng) 傳代培養(yǎng)：傳代培養(yǎng)：從原代培養(yǎng)的細胞繼續(xù)轉接培養(yǎng)稱從原代培養(yǎng)的細胞繼續(xù)轉接培養(yǎng)稱為傳代培養(yǎng)。為傳代培養(yǎng)。 動物細胞培養(yǎng)類型動物細胞培養(yǎng)類型: : 非貼壁培養(yǎng)：非貼壁培養(yǎng)：也叫懸浮培養(yǎng)。用于血液白細胞、淋也叫懸浮培養(yǎng)。用于血液白細胞、淋巴組織細胞、某些腫瘤細胞、雜交瘤細胞、轉化細巴組織細胞、某些腫瘤細

38、胞、雜交瘤細胞、轉化細胞系等的培養(yǎng)，可在培養(yǎng)液中懸浮生長。胞系等的培養(yǎng)，可在培養(yǎng)液中懸浮生長。 貼壁培養(yǎng)：貼壁培養(yǎng)：大多數(shù)動物細胞需貼附于帶適量正電荷大多數(shù)動物細胞需貼附于帶適量正電荷的固體或半固體表面進行培養(yǎng)。的固體或半固體表面進行培養(yǎng)。 貼壁生長細胞的傳代（消化法）貼壁生長細胞的傳代（消化法）： 要求細胞覆蓋要求細胞覆蓋80%80%以上以上1. 1.吸出舊的培養(yǎng)液。用不含鈣、鎂離子的吸出舊的培養(yǎng)液。用不含鈣、鎂離子的bssbss溶液清洗。溶液清洗。2. 2.加入加入0.25%0.25%胰蛋白酶和胰蛋白酶和0.02%edta0.02%edta混合液解離細胞?；旌弦航怆x細胞。3. 3.2-5m

39、in2-5min檢查，如有細胞間隙變大，加入蛋白酶抑制劑或檢查，如有細胞間隙變大，加入蛋白酶抑制劑或血清培養(yǎng)液終止消化。血清培養(yǎng)液終止消化。4. 4.離心，棄上清液，加入離心，棄上清液，加入hankshanks液漂洗兩次。液漂洗兩次。5. 5.吸管輕輕吹打，加入新鮮培養(yǎng)液，制成懸液，計數(shù)并調吸管輕輕吹打，加入新鮮培養(yǎng)液，制成懸液，計數(shù)并調整其密度。整其密度。6. 6.重新接種培養(yǎng)。重新接種培養(yǎng)。 2 2. . 半懸浮生長細胞的傳代半懸浮生長細胞的傳代 消化法或直接吹打法消化法或直接吹打法 3. 3. 懸浮生長細胞傳代懸浮生長細胞傳代 離心法：培養(yǎng)物轉移到離心管，離心法：培養(yǎng)物轉移到離心管，10

40、00r/min1000r/min離心離心。棄上清液，沉淀細胞加新培養(yǎng)液混勻傳代。棄上清液，沉淀細胞加新培養(yǎng)液混勻傳代。 4.3.3 常用培養(yǎng)技術 1. 1.懸滴培養(yǎng)：懸滴培養(yǎng)：又稱植塊懸滴培養(yǎng)法，又稱植塊懸滴培養(yǎng)法，19071907年由哈里森首創(chuàng)年由哈里森首創(chuàng)。即將組織或器官植塊接種在一張蓋玻片上，滴上一滴培養(yǎng)。即將組織或器官植塊接種在一張蓋玻片上，滴上一滴培養(yǎng)液，然后翻轉蓋玻片使植塊及營養(yǎng)液懸掛于蓋玻片下，再置液，然后翻轉蓋玻片使植塊及營養(yǎng)液懸掛于蓋玻片下，再置于一凹形載玻片上，最后用熔蠟密封后放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。于一凹形載玻片上，最后用熔蠟密封后放于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 優(yōu)點：優(yōu)點：1 1）容易換

41、片。）容易換片。 2 2）培養(yǎng)物在培養(yǎng)過程中，不需移動位置，有利于組織分）培養(yǎng)物在培養(yǎng)過程中，不需移動位置，有利于組織分化?；?. 2.培養(yǎng)瓶培養(yǎng)：培養(yǎng)瓶培養(yǎng)：指將培養(yǎng)對象直接接種于培養(yǎng)瓶內指將培養(yǎng)對象直接接種于培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)。培養(yǎng)。 19231923年，卡雷爾（年，卡雷爾（carrelcarrel）設計了卡氏瓶。采用的）設計了卡氏瓶。采用的材料對細胞無毒，透明材料對細胞無毒，透明懸浮細胞培養(yǎng)瓶懸浮細胞培養(yǎng)瓶滾動培養(yǎng)瓶滾動培養(yǎng)瓶貼壁細胞培養(yǎng)瓶貼壁細胞培養(yǎng)瓶n 蓋玻片蓋玻片+ +培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法培養(yǎng)瓶培養(yǎng)法：先以蓋玻片為生長表面，：先以蓋玻片為生長表面，將擬培養(yǎng)細胞或組織接種于蓋玻片上，然后放進將擬

42、培養(yǎng)細胞或組織接種于蓋玻片上，然后放進培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。 優(yōu)點優(yōu)點：1 1）可以避免培養(yǎng)瓶表面粗糙等原因對培養(yǎng)物的影響）可以避免培養(yǎng)瓶表面粗糙等原因對培養(yǎng)物的影響2 2）可以方便顯微觀察、染色等操作，以及永久保存）可以方便顯微觀察、染色等操作，以及永久保存3 3）增加了培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積。）增加了培養(yǎng)瓶培養(yǎng)面積。3. 3.旋轉管培養(yǎng)：旋轉管培養(yǎng)： 蓋爾（蓋爾（geygey，19331933年）、劉易斯（年）、劉易斯（lewislewis，19341934年）建立該方法。年）建立該方法。 特點特點：是培養(yǎng)中組織塊或細胞交替地與培養(yǎng)液和空：是培養(yǎng)中組織塊或細胞交替地與培養(yǎng)液和空氣直接

43、接觸，有利于物質交換和細胞生長。氣直接接觸，有利于物質交換和細胞生長。缺點缺點：不易在顯微鏡下觀察。：不易在顯微鏡下觀察。4. 4.克隆培養(yǎng)法克隆培養(yǎng)法：又稱單細胞分離培養(yǎng)法，：又稱單細胞分離培養(yǎng)法，就是將就是將細胞懸液中獲得的單個細胞用于培養(yǎng)，使之重新細胞懸液中獲得的單個細胞用于培養(yǎng)，使之重新繁殖成一個新的細胞群體的培養(yǎng)技術。繁殖成一個新的細胞群體的培養(yǎng)技術。 細胞株細胞株 : :由由細胞系細胞系進一步克隆化，而獲得進一步克隆化，而獲得的由的由單一細胞單一細胞形成的細胞群體。形成的細胞群體。 初代細胞和有限細胞系的克隆培養(yǎng)比較困難，初代細胞和有限細胞系的克隆培養(yǎng)比較困難，無限細胞系、轉化細胞

44、系和腫瘤細胞等則比較無限細胞系、轉化細胞系和腫瘤細胞等則比較容易容易 提高克隆形成率的措施：提高克隆形成率的措施：合理安排接種的密度（合理安排接種的密度（1010個細胞個細胞/ml/ml）使用克隆培養(yǎng)基（使用克隆培養(yǎng)基（ham12kham12k培養(yǎng)液）培養(yǎng)液）使用同源細胞的使用同源細胞的條件培養(yǎng)液條件培養(yǎng)液在培養(yǎng)中加入胎牛血清或其他添加劑、激素和在培養(yǎng)中加入胎牛血清或其他添加劑、激素和生長因子生長因子將祖細胞接種到將祖細胞接種到飼養(yǎng)細胞飼養(yǎng)細胞層或其他可適應的生層或其他可適應的生長基質表面長基質表面 條件培養(yǎng)液條件培養(yǎng)液：已經培養(yǎng)過某種細胞的培養(yǎng)液（內：已經培養(yǎng)過某種細胞的培養(yǎng)液（內含該細胞分

45、泌的活性物質，包括少量生長因子）含該細胞分泌的活性物質，包括少量生長因子）與一定比例新鮮培養(yǎng)液混合的培養(yǎng)液。可促進與與一定比例新鮮培養(yǎng)液混合的培養(yǎng)液?？纱龠M與支持其他種細胞的生長。支持其他種細胞的生長。 飼養(yǎng)細胞飼養(yǎng)細胞：也稱滋養(yǎng)細胞，是一層經過射線照射：也稱滋養(yǎng)細胞，是一層經過射線照射或裂霉素或裂霉素c c作用后失去分裂能力，供其他細胞附作用后失去分裂能力，供其他細胞附著的細胞層。能促進克隆細胞的生長，利于克隆著的細胞層。能促進克隆細胞的生長，利于克隆的形成。的形成。 克隆培養(yǎng)技術：克隆培養(yǎng)技術： 1.稀釋鋪板法 2.飼養(yǎng)層克隆法 3.膠原膜板或血纖維蛋白膜層板克隆法 4.瓊脂克隆法 5.多

46、孔塑料培養(yǎng)板單細胞克隆法5. 5.細胞同步化培養(yǎng)細胞同步化培養(yǎng)：用自然的或人工的方法獲：用自然的或人工的方法獲得細胞周期同步化的細胞群體。得細胞周期同步化的細胞群體。篩選同步化細胞篩選同步化細胞 誘導同步化細胞誘導同步化細胞 m期細胞震蕩脫落法期細胞震蕩脫落法 離心洗脫法離心洗脫法 梯度沉降法梯度沉降法 血清饑餓法血清饑餓法 異亮氨酸營養(yǎng)缺乏法異亮氨酸營養(yǎng)缺乏法 dnadna合成抑制劑阻斷法合成抑制劑阻斷法 秋水仙素阻斷法秋水仙素阻斷法 6. 6.動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)1. 1. 分批式操作分批式操作 2. 2. 流加式操作流加式操作 3. 3. 半連續(xù)式操作半連續(xù)式操作 4

47、. 4. 連續(xù)式操作連續(xù)式操作 5. 5. 灌流式操作灌流式操作 優(yōu)點：操作簡單，培養(yǎng)周期短，污染和細胞突變的風險小。優(yōu)點：操作簡單，培養(yǎng)周期短，污染和細胞突變的風險小。缺點：費用高，每一次收液后，都要進行一系列新的接種放大缺點：費用高，每一次收液后，都要進行一系列新的接種放大的準備工作，此期間生產停工。而且收液率低的準備工作，此期間生產停工。而且收液率低. .優(yōu)點：生產效率高，可反復長期培養(yǎng)，反復收獲產品。優(yōu)點：生產效率高，可反復長期培養(yǎng)，反復收獲產品。優(yōu)點：反應器的培養(yǎng)狀態(tài)可以達到恒定，細胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下優(yōu)點：反應器的培養(yǎng)狀態(tài)可以達到恒定，細胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下生長。生長。缺點：開放式操作，容

48、易造成污染。細胞容易發(fā)生變異，且對缺點：開放式操作，容易造成污染。細胞容易發(fā)生變異，且對設備等要求高。設備等要求高。優(yōu)點：培養(yǎng)狀態(tài)恒定，細胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下生長。產量高等優(yōu)點：培養(yǎng)狀態(tài)恒定，細胞在穩(wěn)定的狀態(tài)下生長。產量高等. .6. 6.動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng)動物細胞的大規(guī)模培養(yǎng) 細胞系細胞系：原代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)：原代培養(yǎng)物開始第一次傳代培養(yǎng)后的細胞稱為細胞系。分為有限細胞系、后的細胞稱為細胞系。分為有限細胞系、無限細胞系。無限細胞系。 細胞株細胞株 : :由由細胞系細胞系進一步克隆化，而獲得的進一步克隆化，而獲得的由由單一細胞單一細胞形成的細胞群體。形成的細胞群體。 二倍體細胞：二倍體

49、細胞：細胞群染色體數(shù)目與原供體二倍細胞群染色體數(shù)目與原供體二倍細胞染色體數(shù)相同或基本相同（細胞染色體數(shù)相同或基本相同（2n2n細胞占細胞占7575或或8080以上）的細胞群。如僅數(shù)目相同，而核以上）的細胞群。如僅數(shù)目相同，而核型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。型不同的即染色體形態(tài)有改變者為假二倍體。為保持二倍體細胞能長期被利用，一般在初代為保持二倍體細胞能長期被利用，一般在初代或或2 25 5代即大量凍存作為原種。代即大量凍存作為原種。 遺傳缺陷細胞：遺傳缺陷細胞：從有先天遺傳缺陷者取材（主從有先天遺傳缺陷者取材（主要為成纖維細胞）培養(yǎng)的細胞，或用人工方法要為成纖維細胞）培養(yǎng)的細胞，或用

50、人工方法誘發(fā)突變的細胞，都屬遺傳缺陷細胞。這類細誘發(fā)突變的細胞，都屬遺傳缺陷細胞。這類細胞可能具有二倍體核型，也可呈異倍體。胞可能具有二倍體核型，也可呈異倍體。 腫瘤細胞系或株：腫瘤細胞系或株：是現(xiàn)有細胞系中最多的是現(xiàn)有細胞系中最多的一類，我國已建細胞系主要為這類細胞。一類，我國已建細胞系主要為這類細胞。腫瘤細胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型腫瘤細胞系多由癌瘤建成，多呈類上皮型細胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有細胞，常已傳幾十代或百代以上，并具有不死性不死性和和異體接種致瘤性異體接種致瘤性。 細胞系或細胞株的命名細胞系或細胞株的命名 helahela：為供體患者的姓名（來源于宮頸癌）：為供體患

51、者的姓名（來源于宮頸癌）chocho：中國地鼠卵巢細胞（：中國地鼠卵巢細胞（chinese hamster chinese hamster ovaryovary）宮宮-743-743：宮頸癌上皮細胞，：宮頸癌上皮細胞，19741974年年3 3月建立月建立nih3t3nih3t3：美國國立衛(wèi)生研究院（：美國國立衛(wèi)生研究院（national national institute of healthinstitute of health）建立；每）建立；每3 3天傳代，每次接天傳代，每次接種種3 310105 5細胞細胞mlml。細胞系或株的鑒定、管理和使用細胞系或株的鑒定、管理和使用 atccatcc入庫細胞要求檢測項目如下：入庫細胞要求檢測項目如下：培養(yǎng)簡歷：培養(yǎng)簡歷：組織來源日期、物種、組織起源、性組織來源日期、物種、組織起源、性別、年齡、供體正常或異常健康狀態(tài)、細胞已傳別、年齡、供體正常或異常健康狀態(tài)、細胞已傳代數(shù)等代數(shù)等凍凍 存存 液：液：培養(yǎng)基和防凍液名稱培養(yǎng)基和防凍液名稱細胞活力：細胞活力：融解前后細胞接種存活率和生長特性融解前后細胞接種存活率和生長特性培培 養(yǎng)養(yǎng) 液：液：培養(yǎng)基種類和名稱（一般要求不含抗培