尼克酸維生素PP-又稱煙酸的測(cè)定方法

1、尼克酸（維生素PP-又稱煙酸）的 測(cè)定方法尼克酸(維生素PP,又稱煙酸)的測(cè)定方法(1)此處介紹微生物法、比色法以及復(fù)合維生素制劑中的煙酰胺測(cè)定方法(分光光度法)一、微生物法1. 原理一種微生物生長(zhǎng)必需某一些維生素，Lactobacillus arabinosus的生長(zhǎng)需要尼克酸。尼克酸是指具有尼克酸生物學(xué)活性的吡啶 3-羧酸及其衍生物的總稱。它是白色晶體，是維生素中最穩(wěn)定的一種，對(duì)酸、堿、 熱、光及弱氧化劑都很穩(wěn)定，微溶于冷水，易溶于熱水及乙醇。其檢出限為10ng。2. 適用范圍本方法來源自AOAC和國(guó)標(biāo)GB12395-90。適用于食物及飼料中的尼克酸的檢測(cè)。3. 儀器(1) 電熱恒溫培養(yǎng)箱

2、(37 ± 0.5 °C )(2) 無菌室(紫外燈消毒)(3) 電熱手提式壓力蒸汽消毒器(121 C，高壓30min)(4) 液體快速混合器(5) 離心機(jī)(3000 轉(zhuǎn)，10min)(6) 堿式滴定管(7) 硬質(zhì)玻璃試管4. 試劑所用試劑皆為分析純；所用水皆為蒸餾水4.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制(1) 尼克酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(0.1mg/ml ):準(zhǔn)確稱取50.0mg已干燥恒重并儲(chǔ)于五氧化二磷干燥器中的尼克酸標(biāo)準(zhǔn)，以25%乙醇溶液溶解并定容至 500ml，于冰箱中保存。(2) 尼克酸標(biāo)準(zhǔn)中間液(1ug/m )：吸取1.00ml尼克酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于 100ml容量瓶中，用25%乙醇溶 液定

3、容，混勻，于冰箱中保存。(3) 尼克酸標(biāo)準(zhǔn)工作液(0.1ug/m ):臨用時(shí)吸取5.00ml尼克酸標(biāo)準(zhǔn)中間液，置于50ml容量瓶中，用水 定容，混勻。4.2其它試劑的配制(1) 0.5mol/L 硫酸：于2000ml燒杯中加入 700ml水，加入28ml H2SO4，用水稀釋至 1000ml。(2) 10mol/L 氫氧化鈉：溶 200g NaOH于水中，稀釋至 500ml。(3) 0.1mol/L 氫氧化鈉：，取 10ml 10mol/L NaOH，用水稀釋至 1000ml。(4) 0.04%溴甲酚綠溶液，稱取 0.1g溴甲酚綠于研缽中，加 1.4ml 0.1mol/L NaOH 研磨，加少

4、許水繼續(xù) 研磨，直至完全溶解，用水稀釋到250ml。(5) 酪蛋白(sigma公司):稱取50g不含維生素的酪蛋白，加 200ml ( 3mol/L )鹽酸，121 C磅壓力下 水解6小時(shí)，將水解物轉(zhuǎn)移至蒸發(fā)皿內(nèi)，在水浴上蒸發(fā)至膏狀。加200ml水使之溶解后再蒸發(fā)至膏狀，反 復(fù)3次，以除去鹽酸。注意：*酸解酪蛋白是為了去除酪蛋白中的維生素，確保培養(yǎng)基中不含代測(cè)的尼克酸，但酸解并不一定徹底，因此選用不含維生素的酪蛋白。*水浴蒸發(fā)時(shí)不可蒸干或使之焦糊，若溶液被蒸干，水解液所含營(yíng)養(yǎng)物已被破壞用10mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)PH值至3.5，以溴酚藍(lán)作外指示劑。力口 20g活性炭，振搖，過濾，反復(fù)操作至濾

5、液無色。濾液加水稀釋至 500ml，加少許甲苯置冰箱中保存。*注意：活性炭不能在溶液中太久，否則容易破壞酪蛋白的營(yíng)養(yǎng)成分(待續(xù))尼克酸(維生素PP，又稱煙酸)的測(cè)定方法(2)(6) 溴酚藍(lán)：稱取0.1g溴酚藍(lán)，用1+4乙醇溶解后，再加乙醇稀釋至100ml。(7) 甲苯(8) 4mol/L 鹽酸溶液，V+V=1+4(9) 5mol/L 生理鹽水：取 9gNaCI溶于1000ml水中。(10) 胱氨酸、色氨酸溶液：稱取 4gL-胱氨酸和1gL-色氨酸溶于800ml水中，加熱至7080°C，逐滴加 入20%鹽酸，不斷攪拌，直至完全溶解為止。冷至室溫，加水稀釋至1000ml。加少許甲苯于冰箱

6、中保存。(11) 腺嘌吟、鳥嘌吟、尿嘧啶溶液：稱取硫酸腺嘌吟，鹽酸鳥嘌吟及尿嘧啶各0.1g，加75ml水和2ml 濃鹽酸，然后加熱使其完全溶解，冷卻，若有沉淀產(chǎn)生，加濃鹽酸數(shù)滴，再加熱。如此反復(fù)，直至冷卻后無沉淀產(chǎn)生為止。用水稀釋至100ml。加少許甲苯于冰箱中保存。(12) D-泛酸鈣、對(duì)氨基苯甲酸、鹽酸吡哆醇溶液：稱取D-泛酸鈣、對(duì)氨基苯甲酸、鹽酸吡哆醇各10mg于燒杯中，以水溶解并稀釋至1000ml，將此液置于棕色瓶中，加少許甲苯于冰箱中保存。*注意：此溶液見光分解，因此儲(chǔ)存于棕色瓶中(13) 0.02mol/L 醋酸溶液：取1.18ml純的冰醋酸，稀釋至 1000ml（14） 核黃素、

7、鹽酸硫胺素、生物素溶液：溶解1mg生物素結(jié)晶于100ml 0.01747mol/L 的醋酸中，取此 液4ml （相當(dāng)于40ug生物素），加入20mg核黃素和10mg鹽酸硫胺素，以0.01747mol/L醋酸溶解并稀釋至 1000ml，將此液置于棕色瓶中，加少許甲苯于冰箱中保存。*注意：此溶液見光分解，因此儲(chǔ)存于棕色瓶中（15） 甲鹽溶液：取25g磷酸氫二鉀和25g磷酸二氫鉀，加水溶解后稀釋至500ml，加少許甲苯于冰箱中 保存。（16） 乙鹽溶液：取10g硫酸鎂、0.5g氯化鈉、0.5g硫酸亞鐵和0.5g硫酸錳，加水溶解后稀釋至500m l，加5滴濃鹽酸，加少許甲苯于冰箱中保存。（17）乙醇溶

8、液 V/V=1/3（18） 溴酚藍(lán)：稱取0.1g溴酚藍(lán)，用1+3乙醇溶液溶解后，再稀釋至 100ml。（19） 0.04%溴麝香草酚藍(lán)溶液：稱取0.1g溴麝香草酚藍(lán)于研缽中，加1.6ml，0.1mol/L NaOH，研磨，加少許水繼續(xù)研磨，直至完全溶解，用水稀釋至250ml。（20） 0.004%溴麝香草酚藍(lán)溶液：量取100ml0.04%溴麝香草酚藍(lán)溶液，加水稀釋至1000ml，供滴定用。（21）基本培養(yǎng)基儲(chǔ)備液：酸解酪蛋白50ml胱氨酸、色氨酸溶液 50ml腺嘌吟、鳥嘌吟、尿嘧啶溶液10mlD-泛酸鈣、對(duì)氨基苯甲酸、吡哆醇溶液10ml核黃素、鹽酸硫胺素、生物素溶液10ml甲鹽溶液10ml乙鹽

9、溶液10ml無水葡萄糖10g無水醋酸鈉10g（或結(jié)晶醋酸鈉 NaAC.3H2O 16.6g）將上列試劑混合，用水稀釋至500ml用氫氧化鈉調(diào)PH至6.8，以溴麝香草酚藍(lán)作外指示劑。（待續(xù)）尼克酸（維生素PP，又稱煙酸）的測(cè)定方法（3）（22）瓊脂培養(yǎng)基：無水葡萄糖1g 醋酸鈉1g 蛋白胨0.8g酵母提取物干粉0.2g 甲鹽溶液0.2ml乙鹽溶液0.2ml 瓊脂1.2g混合，加水至100ml，加熱至瓊脂完全溶化，以溴麝香草酚藍(lán)為外指示劑，用鹽酸趁熱調(diào)PH至6.8，盡快倒入試管中，每管 35ml，加塞棉塞，于壓力蒸汽消毒器中121 C滅菌10min，取岀后豎直試管，冷至室溫后保存于冰箱中。4.3菌

10、種的制備與保存（1） 菌種的制備與保存：以阿拉伯乳酸桿菌？ Lactobacillus arabinosus 17-5 ATCC No.8014簡(jiǎn)稱Lact.A?純菌種接入2個(gè)或多個(gè)瓊脂培養(yǎng)基管中， 在37±0.5 C恒溫箱中保溫16-24小時(shí)，取出于冰箱中保存，至多不超過兩周。保存數(shù)周以上的菌種，不能立即用作制備接種液之用，一定要在使用前每天轉(zhuǎn)種一次， 連續(xù)2-3天，方可使用，否則生長(zhǎng)不好。（2） 種子培養(yǎng)液的制備：加 5ml 0.1ug/ml的尼克酸標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液于尖頭試管中，加入5ml基本培養(yǎng)基，塞好棉塞，于壓力蒸汽消毒器內(nèi)（高壓鍋）121 C下消毒10min，取岀，置于冰箱中，此

11、管可保存數(shù)周之久。5. 操作步驟5.1樣品制備：取含尼克酸約5-50ug的均勻樣品于100ml三角瓶中，加0.5mol/LH2S0450ml。放入高壓蒸汽鍋121 C下水解30min，取出，于水中冷卻，用10mol/LNaOH和0.5mol/LH2SO4調(diào)PH值至4.5，用溴甲酚綠做指示劑。將三角瓶?jī)?nèi)的溶液轉(zhuǎn)移到100ml容量瓶中，用蒸餾水定容至100ml，濾紙過濾，保存濾液于冰箱內(nèi)備測(cè)（保存期不超過36小時(shí)）。*用0.5mol/L硫酸水解，可以斷開尼克酸和其它物質(zhì)結(jié)合的鍵，使尼克酸游離出來。*觀察溴甲酚綠至草綠色為終點(diǎn)，說明溶液PH值到了 4.5.調(diào)PH值至4.5可以除去樣品中刺激和抑制細(xì)菌

12、 生長(zhǎng)的物質(zhì)，如：淀粉、脂肪酸及磷脂。許多蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)也在PH4.5，所以此PH值也可用來沉淀蛋白質(zhì)。5.2接種液的制備：使用前一天，將阿拉伯乳酸桿菌菌種由儲(chǔ)備菌種管移種于已消毒的種子培養(yǎng)液中，可同時(shí)制備兩管，在 37±0.5 C的恒溫箱中培養(yǎng)16-24小時(shí)。取出離心10分鐘（3000rpm）傾去上部液體，用已消毒的生理鹽水淋洗 2次，再加10ml消毒過的生理鹽水，將離心管置于液體快速混合器上混合，使 菌種成為混懸體，將此液倒入已消毒的注射器內(nèi)，立即使用。5.3樣品標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定：3組試管各加0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5和3.0ml工作液，每管加水稀釋至5ml，再加5

13、ml基本培養(yǎng)基，混勻，加棉塞。（待續(xù)）尼克酸(維生素PP，又稱煙酸)的測(cè)定方法(4)5.4試樣的測(cè)定：在試管中分別加入1, 2, 3, 4ml樣液，加水稀釋至 5ml，再加入5ml基本培養(yǎng)基，用棉塞塞住試管，將制備好的標(biāo)準(zhǔn)曲線和試樣測(cè)定管放入高壓鍋(121C)高壓10min，冷至室溫備用。5.5接種和培養(yǎng)：每管種一滴接種液，于37±0.5 C恒溫箱中培養(yǎng) 72小時(shí)*注意：接種后用振蕩器振蕩混勻試管中的液體。5.6滴定：從恒溫箱中取出后，將試管中培養(yǎng)液倒入50ml三角瓶中，用5ml0.004%溴麝香草酚藍(lán)分二次淋洗試管，洗液倒入該三角瓶中，以0.1mol/L氫氧化鈉溶液滴定，呈綠色即為

14、終點(diǎn)，此時(shí)PH約6.8，繪制尼克酸標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，用測(cè)定管得到的值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查到測(cè)定管內(nèi)所含尼克酸的量。*水解液的PH值調(diào)至6.8是為了不同的試劑加入基本培養(yǎng)基時(shí)，不致改變基本培養(yǎng)基的PH值。(此乳酸菌生長(zhǎng)的適宜PH值為6.8 )6. 計(jì)算以尼克酸標(biāo)準(zhǔn)系列的不同微克數(shù)為橫坐標(biāo)，滴定所需0.1mol/L氫氧化鈉 毫升數(shù)為縱坐標(biāo)，作為標(biāo)準(zhǔn)曲線。x=(cxv/m)x fx( 100/1000)X-樣品中尼克酸的含量，mg/100g；C-每毫升樣品中尼克酸含量的平均值，ug/ml ;V-樣品水解液定容總體積，ml;F-樣品試液的稀釋倍數(shù)；m-試樣質(zhì)量，g；100/1000-折算成每100g樣品中尼克

15、酸含量，mg7. 舉例取一螺旋藻樣品1.004g (m)，處理后定容為100ml (V)，從中取1ml稀釋至25ml ( F)，取1，2，3，4ml 入試管中，加入水和培養(yǎng)基，高壓消毒，培養(yǎng)，滴定，測(cè)量根據(jù)曲線分別得出四管C值為0.037，0.073，0.110，0.136，所以四管平均值為 C= (0.037+0.073/2+0.110/3+0.136/4) /4=0.036。代入方程式為：X=(CXV/n)x Fx( 100/1000 ) = (0.036 x 100/1.004 )x 25x( 100/1000 ) =8.96 (mg/100g)因此得出每100克螺旋藻中含8.96毫克尼

16、克酸。8. 注意事項(xiàng)(1) 當(dāng)管中尼克酸的量少于 0.05或多于0.3ug，即超過標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍時(shí)所得到的數(shù)值不能用于計(jì)算。(2) 3mol/L鹽酸的配制方法：取 250ml濃鹽酸，加入750ml蒸餾水，共配成1L 3mol/L的鹽酸1天左右，撈岀后再用自來水和蒸餾水清(3) 試管應(yīng)先用洗衣粉清洗后，用水沖凈，再放入酸缸中浸泡洗干凈，涼干，方可再用尼克酸(維生素PP，又稱煙酸)的測(cè)定方法(5)二、比色法1. 原理煙酸和煙酰胺于Ph=4.5下用稀NH40H提取，再與CNBr溶液與10%對(duì)氨基苯磺酸反應(yīng)，測(cè)其比色值。2. 適用范圍選自AOAC適用范圍：適用于藥物、食物和飼料3. 儀器設(shè)備(1)容量瓶

17、，100ml(2)錐形瓶，250ml(3)電熱板(4)高壓釜(121 C，30min)(5)離心管，5ml(6)漏斗(7)通風(fēng)櫥(8)酸式滴定管比色計(jì)(藥物 430-450nm，谷物470nm)4.試劑所用試劑皆為分析純；所用水皆為蒸餾水4.1尼克酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(1)尼克酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(100gg/ml):將50mgUSPS道參比標(biāo)準(zhǔn)(貯于P2O5干燥器中，放于暗處保存。(2)標(biāo)準(zhǔn)中間液1( 10gg/ml):取少量貯備液放置至室溫。用蒸餾水將10.0ml貯備液稀釋至100ml(3)標(biāo)準(zhǔn)工作液 n(4gg/ml):將恢復(fù)至室溫的貯備液2.0ml用蒸餾水稀釋至50ml。4.2其它試劑(1) 稀氫氧化銨

18、溶液：5mlNH4OH用H2O稀釋至250ml(2) 稀鹽酸：V+V=1+5(3) 磷酸緩沖液(pH= 8):將60gNa2HPO47H2O和10gKH2PO4溶于蒸餾水中并稀釋至 200ml。(4) 溴化氫溶液(10%,通風(fēng)櫥中制備)：將370ml H2O溫?zé)嶂?0 C，并加入40gCNBr。振蕩至溶解冷卻 并稀釋至400ml。溶液在冰箱保存。*CNBr劇毒，切勿與皮膚接觸，必須在通風(fēng)櫥中操作。(5) 10%對(duì)氨基苯磺酸溶液：按每次 1ml將NH4OHTO到20g對(duì)氨基苯磺酸和170ml蒸餾水的混合液中，直至酸溶解為止。用鹽酸與蒸餾水溶液(1:1)調(diào)節(jié)pH至4.5，采用溴甲酚綠指示劑指示。稀

19、釋至200ml。*注：因?yàn)槿芤河蓄伾珪?huì)影響最后結(jié)果，所以稀釋結(jié)束后溶液應(yīng)幾乎無色(6) 55%對(duì)氯基苯磺酸溶液：在 55g對(duì)氨基苯磺酸中加入 27ml蒸餾水和27mlNH4OH振搖至溶解。(必要 時(shí)加溫)。用NH4OH或 5NHCl調(diào)pH為7,再用蒸餾水稀釋至 100ml。(保存在暗處)(待續(xù))尼克酸(維生素PP,又稱煙酸)的測(cè)定方法(6)5. 操作步驟5.1樣品制備(1) 藥物：將藥品研碎，溶于蒸餾水中，稀釋定容。取10mL樣品于錐形瓶中，加入 10mLHCl在電熱板 上加熱蒸發(fā)至約2mL，冷卻，加入25-50mL蒸餾水，用40%NaO或 KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至2.5-4.5。過濾， 棄去1

20、0mL處液，轉(zhuǎn)移至容量瓶中定容，使溶液含尼克酸約 4g/mL。*注：溶液的尼克酸含量應(yīng)在 50-200gg/mL(2) 非谷類食品及飼料：稱取約 28g樣品，加入0.5mol/L H2S04200mL，混勻，在高壓釜中121C加熱 半個(gè)小時(shí)。冷卻，用10mol/LNaOH調(diào)節(jié)pH值至4.5，以溴甲酚綠作外指示劑，用蒸餾水稀釋至250mL，過 濾。取17g (NH4 2SO4于50mL容量瓶中，吸取40mL樣品液，用H2O稀釋定容，強(qiáng)力振搖。過濾，混勻，取1mL作比色測(cè)定用。如果樣品中尼克酸含量為16mg/1b。最終液濃度3.2屈/mL。移取40mL標(biāo)準(zhǔn)工作液 n至盛有17g ( NH4 2SO

21、4的50mL容量瓶中，用蒸餾水稀釋定容，此液含尼克酸3.2 卩 g/mLo*注：加入H2SO4主要是為了去除樣品中的蛋白及其它雜質(zhì)，以防其對(duì)測(cè)量結(jié)果造成影響(3)谷類產(chǎn)品：隨同樣品做 1試劑空白和5個(gè)濃度的工作標(biāo)準(zhǔn)液。 分別將1.5gCa (OH 2放入7個(gè)錐形瓶中，移入 0、5、10、15、20、25mL標(biāo)準(zhǔn)中間液I和2.5g樣品(含100gg煙酸)，加入蒸餾水至90mL振搖混勻。高壓121 C下2小時(shí)。趁熱混勻，冷卻至 40C，轉(zhuǎn)移至1 00mL容量瓶中，稀釋定容。從容量瓶移50mL上清液至離心管中，冰浴 15min或置于冰箱中2 小時(shí)。離心15min，吸取20mL上清液 至盛有8g (

22、NH4 2SO4和 2mL磷酸鹽緩沖液的離心管中。振蕩溶解并溫?zé)嶂?5-60 °C。離心5min，過濾。5.2操作程序(1 )藥物制劑和非谷類食物和飼料：假如10%勺對(duì)氨基苯磺酸溶液，CNBr溶液，在通風(fēng)櫥中用酸式滴定管滴入，用標(biāo)準(zhǔn)工作液 n,如下表制備各管：試劑標(biāo)準(zhǔn)空白樣品空白標(biāo)準(zhǔn)溶液(mL) 1.0 1.0H2O( mL) 5.0 5.0稀 NH4OH( mL) 0.5 0.510%對(duì)氨基苯磺酸 2.0 2.0稀 HCl (mL) 0.5 0.5樣品溶液標(biāo)準(zhǔn)溶液(mL) 1.0 1.0稀 NH4OH( mL) 0.5 0.5CNBr (mL) 5.0 5.010%對(duì)氨基苯磺酸(m

23、l) 2.0 2.0H2O( mL) 0.5 0.5*注：CNBr有毒，注意通風(fēng)每只樣品都要分別制備樣品空白。待續(xù)尼克酸(維生素PP，又稱煙酸)的測(cè)定方法(7)將標(biāo)準(zhǔn)和樣品移入試管中，分別加入5mL蒸餾水作為標(biāo)準(zhǔn)空白和樣品空白。轉(zhuǎn)動(dòng)試管內(nèi)的液體，立即加入稀NH4OH轉(zhuǎn)動(dòng)，加對(duì)氨基苯磺酸，再次旋轉(zhuǎn)混合。立即加入0.5mL稀HCI，混勻，置于光電比色計(jì)上,加入對(duì)氨基苯磺酸后約 30s內(nèi)在430和450nm波長(zhǎng)之間任意波長(zhǎng)調(diào)節(jié)儀器至0的A值。從加入稀NH4OHfCNBr溶液并再次轉(zhuǎn)動(dòng)混勻，在加入 CNBr溶液始按標(biāo)準(zhǔn)空白同樣的方法處理標(biāo)準(zhǔn)溶液。立即轉(zhuǎn)動(dòng)管子，加后30s后轉(zhuǎn)動(dòng)管子，加入對(duì)氨基苯磺酸溶液

24、，再轉(zhuǎn)動(dòng)。立即加入0.5mL蒸餾水，混勻，加塞。，測(cè)量。(加入對(duì)氨基苯磺酸溶液后 1.5min時(shí)顏色最深，保留2min，然后慢慢褪色。)將樣品空白設(shè)在0A,測(cè)樣品溶液的 A值。若標(biāo)準(zhǔn)和樣品液含量大致相等，則尼克酸含量與A值成正比。(2) 谷類制品：取5只試管，其中兩只加入 5mL標(biāo)準(zhǔn)液，兩只加入 5mL樣品液，另一只加入 5mL蒸餾水 做試劑空白。于一只空白管，一只標(biāo)準(zhǔn)管和一只樣品管各加10mL蒸餾水，將所有管置于冰中冰浴 30min。對(duì)剩下的管按順序加入 10mL冷的CNBr, 30s后加入1.0mL55%對(duì)氨基苯磺酸溶液。用標(biāo)準(zhǔn)空白在470nm處，調(diào)比色計(jì)為0A,加入對(duì)氨基苯磺酸后 12-

25、15min讀出其它各管的 A值。*放入比色計(jì)前，試管必需冷卻一致，每管必需拭干。如管呈霧狀，浸于熱水中片刻，測(cè)定前拭干。6. 計(jì)算將扣除試劑空白的標(biāo)準(zhǔn) A對(duì)尼克酸含量gg/ml作圖，畫出適宜的直線，從此圖上求出已扣除樣品空白和試劑空白后樣品校正的 A所對(duì)應(yīng)的濃度CoMg尼克酸/g樣品=C/10ng樣品7. 注意事項(xiàng)(1) CNBr溶液有毒，要注意安全。(2) 樣品不同，處理方法不同，不要混淆。(3) 注意通風(fēng)櫥的通風(fēng)。(4) 因?yàn)椴捎帽壬y(cè)量，因此樣品含有色素易干擾測(cè)定，影響測(cè)定結(jié)果的正確性。(5) 試管應(yīng)先用洗衣粉清洗后，用水沖凈，再放入酸缸中浸泡1天左右，撈出后再用自來水和蒸餾水清 洗干

26、凈，涼干，方可再用。尼克酸(維生素PP，又稱煙酸)的測(cè)定方法(8)三、復(fù)合維生素制劑中的煙酰胺測(cè)定-分光光度法1. 原理在PH約4.5處將煙酰胺抽提到 KH2PO4溶液中，再與CNBr和巴比士酸反應(yīng)。用分光光度法測(cè)定反應(yīng)產(chǎn) 物。煙酸含量超過煙酰胺三倍量時(shí)干擾煙酰胺測(cè)定。2. 適用范圍選自AOAC ;適用于復(fù)合維生素制劑檢測(cè)3. 儀器(1) 攪拌器(2) 量筒(3) 錐形瓶(4) 高壓釜(12C，15min )分光光度計(jì)(550nm4試劑所用試劑皆為分析純；所用水皆為蒸餾水4.1.煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液：(1) 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(250g/mL)： 50mgUSP煙酰胺標(biāo)準(zhǔn)加60%乙醇溶解并稀釋到 200mL。在10C貯存。(2) 標(biāo)準(zhǔn)工作液(5gg/mL):將少量貯備液溫?zé)嶂潦覝亍Ｈ〕?mL用0.3%KH2PO4溶液稀釋至100mL o4.2其它試劑(1) 溴化氰溶液：10%，將370