常用pH緩沖溶液的配制和pH值

1、一）溶液配制注意事項1藥品 要有較好的質量 試劑分為優(yōu)級 純（保證試劑， Guara nteed reage nt , G. R.）、分析試齊 U （An talytical reage nt, A. R.）化學純（Chemical pure , C. P.、和實驗試劑（Laboratory reage nt , L. R、等等。工業(yè)用的化學試劑，雜質較多，只在個別情況下應用， 如配洗液用的硫酸、配干燥劑的氯化鈣等。2 藥品稱量要精確。 3配制試劑用水應用新鮮的去離子水或雙蒸餾水，比電阻值在 50 萬歐姆以上， pH 在 5.57.0 之間才可應用，在組織培養(yǎng)等特殊用途時 應注意此項要求，配制

2、一般化驗用溶液只要求用雙蒸餾水或去離子 水。4.配好后的溶液，應立即除菌處理（如高壓滅菌、抽濾或加抑菌物 質、，以防雜菌生長。（二、 0.067 （ 1/15 、 Mol/L 磷酸緩沖液1.1/15M0I/L磷酸二氫鉀溶液的配制：稱取磷酸二氫鉀（KH2P0，lR.） 9.08g ，用蒸餾水溶解后，傾入 1 000ml 容量瓶內，再稀釋至刻度（1 000ml）。2 . 1 /15Mol/L磷酸二氫鈉溶液的配制：稱取無水磷酸氫二鈉（Na2HPQ4A.R.、9.47g （或者 Na2HPO4 2H2O11.87g、用蒸餾水 溶解后，放入 1 000ml 容量瓶內，再加蒸餾水稀釋至刻度 （ 1 000

3、ml ）。 3.按附表的比例，配制成不同pH值的緩沖溶液。附表 1 磷酸鹽緩沖液配制法（單位：毫升）pH 1/15Mol/L Na2HPO4 1/15Mol/L KH2PO4 pH 1/15Mol/L Na2HPO41/15Mol/L KH2PO45.8 8.0 92.0 7.1 66.6 23.45.9 9.9 90.1 7.2 72.0 28.06.0 12.2 87.8 7.3 76.8 23.26.1 15.3 84.7 7.3 80.8 19.26.2 18.6 81.4 7.5 84.1 15.96.3 22.4 77.6 7.6 87.0 13.06.4 26.7 73.3 7.

4、7 89.4 10.66.5 31.8 68.2 7.8 91.5 8.56.6 37.5 62.5 7.9 93.2 6.86.7 43.5 56.5 8.8 94.7 5.36.8 49.6 50.4 8.1 95.8 4.26.9 55.4 44.6 8.2 97.0 3.07.0 61.1 38.9 8.4 98.0 2.0（三） 0.15Mol/L PB 液附表 2 0.15Mol/LPB 液配制法pH 0.15Mol/L Na2HPO4（ml） 0.15Mol/L NaH2PO4 （ml）6.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0

5、 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.0Na2HPO4 2H2O 分子量= 175.05 0.15Mol/L溶液含 26.7g/L 。Na2HPO4 12H2O分子量=358.22 0.15Mol/L溶液含 53.7g/L 。NaH2PO4 H2O分子量=138.000.15Mol/L溶液含 20.7g/L 。NaH2PO4 2H2O 分子量= 156.03 0.15Mol/L溶液含 23.4g/L 。（四） 0.2Mol/L PB 緩沖液附表 3 0.2mol/L PB 緩沖液配制法pH 0.2 Mol/L Na2HPO4 （ml） 0.2Mo

6、l/L NaH2PO4 （ml）5.8 8.0 92.06.0 12.3 87.76.2 18.5 81.56.4 26.5 73.56.6 37.5 62.56.8 49.0 51.07.0 61.0 39.07.2 72.0 28.07.4 81.0 19.07.6 87.0 13.07.8 91.5 8.58.0 94.7 5.30.2Mol/L Na2HPO4 2 H20溶液 35.61g/LNa2HPO412 H20溶液含 71.64g/L0.2Mol/LNaH2PO4 - H2O溶液含 27.60g/LNaH2PO4 2 H2O 溶液含 31.21g/L欲配0.1Mol/L PB緩

7、沖液則在0.2Mol/L PB緩沖液的基礎上加H2O稀釋1倍即可。欲配制PBS液時，則在溶液中加0.85 %的NaCl溶液即 可。（五）無鈣鎂離子磷酸緩沖鹽水（ PBS）（0.15Mol/L PH 7.2 ）NaCl8.0gKCl0.2gNa2HPO41.15g（如為 Na2HPO4 12H2O 則為 2.89g ）KH2PO40.2g將上述試劑依次溶于1 000ml去離子水中，完全溶解后，115C高壓 滅菌10min15min,存在4 C冰箱中備用。此液可用于配制和稀釋細 胞分散劑以及洗滌細胞培養(yǎng)物。六）硼酸鹽緩沖液（ Borate saline buffer ） 文章來自： 醫(yī)藥園 （ ）

8、整理： zfg1 .硼酸（H 3BO30.2Mol/L 硼酸：硼酸 12.37g 加水至 1 000ml 。2.硼砂（ Na2B4O7）0.05Mol/L 硼砂：硼砂 19.07g 加水至 1 000ml 。附表4 不同pH的0.2MOI/L硼酸緩沖液配制法pH 0.05Mol/L 硼砂（ ml） 0.2Mol/L 硼酸（ ml） pH 0.05Mol/L 硼砂（ mI） 0.2MOI/L 硼酸（ mI）7.4 1.0 9.0 8.2 3.5 6.57.6 1.5 8.5 8.4 4.5 5.57.8 2.0 8.0 8.7 6.0 4.08.0 3.0 7.0 9.0 8.0 2.0（七）巴

9、比妥緩沖液1 . pH8.2 離子強度 0.05MOI/L 巴比妥緩沖液 巴比妥鈉47.6g蒸餾水3 000mI1.17N HCI55.0mI（1.17 N HCI=193ml 濃 HCI 加 1 807ml 蒸餾水） 將 4.76g 巴比妥鈉溶于 3 000mI 蒸餾水。 加 1.17 N HCl 55ml 。 用HCI調節(jié)pH到8.2，并加蒸餾水至4 265ml。2 pH8.4 0.06Mol/L 巴比妥緩沖液巴比妥 1.84g 巴比妥鈉 10.30g 加蒸餾水至 1 000.00ml3 pH8.6 0.06Mol/L 巴比妥緩沖液 巴比妥1.66g巴比妥鈉12.76g加蒸餾水1 000.

10、00ml（八） 0.2Mol/L 醋酸鹽緩沖液 見表附表 5 附表 5 0.2Mol/L 醋酸鹽緩沖液配制法pH 0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl(ml)pH 0.2Mol/LTris（ml）0.1Mol/LHCl(ml)23 C37 C23 C 37 C9.10 8.95 25 5 8.06 7.90 25 27.58.92 8.76 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.75 8.60 25 10.5 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.5 7.66 7.

11、52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.5(九)三羥甲基甲烷鹽酸緩沖液( Tris HCl 緩沖液)不同 pH， 0.05Mol/L25ml0.2Mol/L三羥甲基氨基甲烷加 x mIO.INHCI，加水稀釋至1OOml (見下表)附表6 Tris HCI緩沖液配制法pH 0.2Mol/LTris(ml) 0.1NHCl(ml) pH 0.2Mol/LTris(ml) 0.1NHCl(ml)23C 37 C 23 °C 37 °C9.10 8.96 25 5

12、 8.05 7.90 25 27.58.92 8.78 25 7.5 7.96 7.82 25 30.08.74 8.60 25 10.0 7.87 7.73 25 32.58.62 8.48 25 12.5 7.77 7.63 25 35.08.50 8.37 25 15.0 7.66 7.52 25 37.58.40 8.27 25 17.5 7.54 7.40 25 40.08.32 8.18 25 20.0 7.36 7.22 25 42.58.23 8.10 25 22.5 7.20 7.05 25 45.08.14 8.00 25 25.025三羥甲基氨基甲烷（ Tris ）分子量

13、 =121.140.2Mol/L 三羥甲基氨基甲烷： Tris24.23g ，加水至 1 000ml 。0.1NHCl ：取 HCl8.6ml ，加水至 1 000ml 。（十） 0.5Mol/L pH9.5 碳酸鹽緩沖液NaHCO33.70gNa2CO30.60g溶于 600.00ml 蒸餾水中即得。不用時塞緊瓶塞，以免吸收空氣中二氧化碳使 PH 下降。最好小量配 制。（十一）甘油磷酸緩沖液1配制 pH8.0 磷酸緩沖液0.1Mol/L Na2HPO4 94.50ml0.1N NaH2PO4 5.50ml混合即可29 份甘油與 1 份 pH8.0 磷酸緩沖液混合，即為甘油磷酸緩沖液。 用途：

14、用于免疫熒光試驗。（十二）Hank's 液1貯存液NaCl80.00gKCl4.00gNa2HPO412 H201.52gKH2PO40.60g葡萄糖4.00g0.4 酚紅液 50.00ml雙餾水加至 100.00ml115 C高壓滅菌15min,冰凍保存。2工作液貯存液1份雙餾水9份115 C高壓滅菌15min。臨用時用滅菌的5.6 % NaHCO液調pH值至7.2 左右（溶液呈橙紅色） 。（十三）萘（鈉）氏試劑（ Nessler 'sreagent ）配方 1：氯化汞6.0g碘化鉀12.4g20% NaOH30ml加蒸餾水至100ml配方 2：碘化汞11.5g碘化鉀8g蒸餾

15、水50ml（完全溶解后）過濾，加 20% NaOH 50m。用途：檢測溶液中氨離子。（十四）阿氏（Alsever ' s）液葡萄糖2.05g檸檬酸鈉0.80g氯化鈉0.42g蒸餾水100ml溶解后，以10%寧檬酸調節(jié)pH至6.1，過濾，分裝，10磅10min 火菌，4 C保存。（十五）青、鏈霉素混合液（簡稱 S. P.液或雙抗液）青霉素（ 40 萬 U）5 支鏈霉素（200萬卩g）1支分別溶于 100ml 火菌無離子水中或共同溶于 200ml 火菌無離子水 中，混合后分裝小瓶，置 -10 °C -20 C冰箱保存?zhèn)溆茫?萬單位 卩 g/ml）。臨用時，按 1%的量加入營養(yǎng)液或

16、其他溶液中，最后濃度是青霉素 100U/ml，鏈霉素 100ug/ml。（十六）洗液（清潔液）配方 1 ：重鉻酸鉀150g蒸餾水300ml濃硫酸3 000ml將重鉻酸鉀加入蒸餾水中， 使之自然溶解或水浴溶解， 亦可在大坩堝 中加熱溶解， 然后慢慢加入濃硫酸， 邊加邊攪拌， 見發(fā)熱過劇則稍停， 冷卻后再繼續(xù)加。此為強洗液。盛清潔液的容器要堅固，上加厚玻璃蓋，操作時要穿橡皮圍裙、 長統(tǒng)膠靴、戴上眼鏡和厚膠皮手套，以保安全。洗液一旦變綠，表示鉻酸已經還原， 失去了氧化能力，不宜再用。如將這樣洗液加熱，再加適量重鉻酸鉀，又可重新使用。配方 2：濃硫酸50%蒸餾水50%重鉻酸鉀5%此為中等強度洗液。配方

17、 3：重鉻酸鉀100g蒸餾水1 000ml加熱溶解，冷卻后緩慢加入工業(yè)硫酸100ml此液為弱洗液， 為棕紅色。使用此液時，必須預先用熱肥皂水將玻璃 器皿洗凈，經自來水沖洗，瀝干然后才能浸入，否則該洗液很快失效 緩沖溶液（英文： buffer solution ）是一種能在加入少量 酸或堿和水時大大減低pH變動的溶液。pH緩沖系統(tǒng)對維持 生物的正常pH 值和正常生理環(huán)境起到重要作用。多數(shù) 細胞僅能在很窄的pH范圍內 進行活動，而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的 pH變化。 在生物體中有三種主要的pH緩沖體系，它們是 蛋白質緩沖系統(tǒng)、重 碳酸鹽緩沖系統(tǒng)以及 磷酸鹽 緩沖系統(tǒng)。每種緩沖體系所

18、占的分量在各 類細胞和 器官 中是不同的。在生化研究工作中， 常常需要使用緩沖溶液來維持實驗體系的 酸 堿度。研究工作的溶液體系pH值的變化往往直接影響到研究工作的 成效。如果“提取 酶”實驗體系的 pH 值變動或大幅度變動， 酶活性 就會下降甚至完全喪失。 所以配制緩沖溶液是一個不可或缺的關鍵步 驟。 編輯本段 常用作緩沖溶液常用作緩沖溶液的酸類由 弱酸 及其共軛酸鹽組合成的溶液具有 緩沖作用。 生化實驗室常用的緩沖系主要有 磷酸、檸檬酸 、碳酸、醋 酸、巴比妥酸 、Tris （三羥甲基氨基甲烷 ）等系統(tǒng)，生化實驗或 研究 工作中要慎重地選擇緩沖體系， 因為有時影響實驗結果的因素并不是 緩沖

19、液的pH值，而是緩沖液中的某種 離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、 磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產生不需要的化學反應。硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成 復鹽 、如蔗糖。檸檬酸鹽： 檸檬酸鹽離子容易與鈣結合， 所以存在有鈣離子的情 況下不能使用。磷酸鹽：在有些實驗，它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物，重 金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。 而且它在 pH7.5 以上時緩 沖能力很小。三羥甲基氨基甲烷： 它可以和重金屬一起作用， 但在有些系統(tǒng)中 也起抑制作用。其主要缺點時 溫度效應 。這點往往被忽視，在室溫 pH是7.8的Tris 緩沖液，4C時是8.4 , 37C時是7.4，因此，4C 配制的緩沖

20、液在37 C進行測量時，其氫離子濃度就增加了 10倍。在 pH7.5 以下，其緩沖能力極為不理想。 編輯本段 緩沖溶液組成 緩沖體系由1、弱酸和它的鹽（如 HAc-NaAc）2、弱堿和它的鹽（ NH3.H2O-NH4Cl）3、多元弱酸的酸式鹽及其對應的次級鹽 （如 NaH2PO4-Na2HPO4 的水溶液組成。 編輯本段 決定緩沖液pH值的因素設緩沖系統(tǒng)的弱酸的 電離常數(shù) 為 K （平衡常數(shù)），平衡時弱酸的 濃度為酸，弱酸鹽的濃度為 鹽 ，則由弱酸的電離平衡式可得下式：H+ = Ka 弱酸/ 共軛堿 pH = pKa + log 共軛堿/ 弱酸 這就是 Henderson-Hasselbach 等式。 如果 弱酸 = 共軛堿，pH = pKa