致瀉大腸埃希式菌的檢驗（業(yè)內特制）

1、1厚積薄發(fā)2厚積薄發(fā) 俗稱大腸桿菌1、革蘭氏陰性菌2、桿狀、兩端鈍圓、周生鞭毛、無莢膜3、需氧及兼性厭氧4、能在普通瓊脂上生長3厚積薄發(fā)普通大腸埃希氏菌Escherichia Coli掃描照片4厚積薄發(fā)v污染水源和土壤，進而污染食物v肉類食品v乳制品v水產品等5厚積薄發(fā) v腸道內感染 腹瀉、食物中毒、腸熱癥v腸道外感染 鼠疫（烈性傳染病）、泌尿道感染、 肺炎、腦膜炎、傷口化膿、敗血癥6厚積薄發(fā)檢樣檢樣25g+營養(yǎng)肉湯營養(yǎng)肉湯225mL乳糖發(fā)酵陽性乳糖發(fā)酵陽性的發(fā)酵管的發(fā)酵管3616h腸道菌增菌肉湯腸道菌增菌肉湯麥康凱麥康凱EMB36118h24h乳糖發(fā)酵或不發(fā)酵的菌落乳糖發(fā)酵或不發(fā)酵的菌落3個

2、個5個，個，氧化酶氧化酶，革蘭氏陰性桿菌，革蘭氏陰性桿菌TSI、靛基質、靛基質、pH7.2尿素尿素KCN、賴氨酸、動力、賴氨酸、動力TSI底層底層+， H2S，KCN，尿素，尿素血清學試驗血清學試驗非左述的各種非左述的各種反應結果反應結果非大腸埃希氏菌非大腸埃希氏菌報告報告7厚積薄發(fā)（一）（一）檢驗步驟 檢樣樣品處理增菌培養(yǎng)伊紅美藍（EMB）平板分離培養(yǎng)生化鑒定血清學鑒定報告8厚積薄發(fā)1、增菌培養(yǎng)v以無菌手續(xù)稱取檢樣25 g，加在225mL營養(yǎng)肉湯中，以均質器打碎1 min或用乳缽加滅菌砂磨碎。v取出適量，接種乳糖膽鹽培養(yǎng)基，以測定大腸菌群MPN，其余的移入500mL廣口瓶內，于361培養(yǎng)6h

3、。v挑取1 環(huán)，接種于 1管30mL腸道菌增菌肉湯內，于 42培養(yǎng) 18h。 9厚積薄發(fā)2、分離培養(yǎng)v 將乳糖發(fā)酵陽性的乳糖膽鹽發(fā)酵管和增菌液分別劃線接種麥康凱或伊紅美藍瓊脂平板；v污染嚴重的檢樣，可將檢樣勻液直接劃線接種麥康凱或伊紅美藍平板，于361培養(yǎng)1824h，觀察菌落。v不但要注意乳糖發(fā)酵的菌落，同時也要注意乳糖不發(fā)酵和遲緩發(fā)酵的菌落。 10厚積薄發(fā)EMB培養(yǎng)基黑紫色或紫紅黑紫色或紫紅色，圓形，邊色，圓形，邊緣整齊，表面緣整齊，表面光滑，濕潤，光滑，濕潤，常具有金屬光常具有金屬光澤，也有的呈澤，也有的呈紫黑色，不帶紫黑色，不帶或略帶金屬光或略帶金屬光澤。澤。菌落特征菌落特征：11厚積薄

4、發(fā)3、生化檢驗v 自鑒別平板上直接挑取數(shù)個菌落分別接種三糖鐵瓊脂（TSI）或克氏雙糖鐵瓊脂（KI）。同時將這些培養(yǎng)物分別接種蛋白胨水、半固體、pH7.2 尿素瓊脂、KCN 肉湯和賴氨酸脫羧酶試驗培養(yǎng)基。以上培養(yǎng)物均在 36培養(yǎng)過夜。vTSI斜面產酸或不產酸,底層產酸, H2S陰性,KCN陰性和尿素陰性的培養(yǎng)物為大腸埃希氏菌.vTSI底層不產酸或 H2S、KCN、尿素有任何一項為陽性的培養(yǎng)物，均非大腸埃希氏菌。v必要時做氧化酶實驗或革藍氏染色鏡檢。 12厚積薄發(fā)v三糖鐵瓊脂試驗：只能利用葡萄糖的細菌，葡萄糖被分解產酸可使斜面先變黃，但因量少，生成的少量酸，因接觸空氣而氧化，加之細菌利用培養(yǎng)基中含

5、氮物質，生成堿性產物，故使斜面后來又變紅，底部由于是在厭氧狀態(tài)下，酸類不被氧化，所以仍保持黃色。而發(fā)酵乳糖的細菌，則產生大量的酸，使整個培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。細菌分解含硫氨基酸，產生H2S，與FeSO4發(fā)生反應形成FeS。 大腸桿菌，能分解葡萄糖產酸產氣，大多數(shù)能分大腸桿菌，能分解葡萄糖產酸產氣，大多數(shù)能分解乳糖，不產生解乳糖，不產生H2S。 13厚積薄發(fā)靛基質試驗：細菌分解蛋白質中的色氨酸產靛基質試驗：細菌分解蛋白質中的色氨酸產生吲哚，吲哚與對二氨基苯甲醛作用，形成生吲哚，吲哚與對二氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而成紅色。玫瑰吲哚而成紅色。14厚積薄發(fā)v脲酶試驗：細菌分解尿素產生兩分子氨，使培養(yǎng)基p

6、H升高，指示劑酚紅顯示出紅色，即證明細菌有脲酶。v動力試驗：有動力的細菌會沿著穿刺線擴散生長。v賴氨酸脫羧試驗：細菌從賴氨酸脫去羧基（-COOH），導致培養(yǎng)基pH變堿，指示劑溴麝香草酚藍就顯示出藍色，試驗結果為陽性，如果細菌不能脫酸，培養(yǎng)基不變則為黃色。15厚積薄發(fā)4、血清學試驗 v假定試驗：挑取經(jīng)生化試驗證實為大腸埃希菌的瓊脂培養(yǎng)物，用致病性大腸埃希氏菌、侵襲性大腸埃希氏菌和產腸毒素大腸埃希氏菌多價O血清和出血性大腸埃希氏菌O157血清做玻片凝集試驗。v當與某一種多價O血清凝集時，再與該多價血清所包含的單價O血清做試驗。v致瀉大腸埃希氏菌所包括的O抗原群。如與某一單價O血清呈現(xiàn)強凝集反應，即為假定試驗陽性。16厚積薄發(fā)OK多價1O55：K59（B5） O86：K61（B7）O111：K58（B4） O127a：K63（B8）OK多價2O26：K60（B6）O125：K70（B15）O126：K71（B16）O128：K6