高效液相試驗(yàn)報(bào)告

1、篇一：高效液相色譜實(shí)驗(yàn)報(bào)告 高效液相色譜實(shí)驗(yàn)報(bào)告 一 、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? 了解液相色譜的發(fā)展歷史及最新進(jìn)展 2 學(xué)習(xí)液相色譜的基本構(gòu)造及原理3 掌握液相色譜的操作方法和分析方法， 能夠通過(guò) hplc 分離測(cè)定來(lái)對(duì)目標(biāo)化合物的分析鑒定。 二 、實(shí)驗(yàn)原理 液相色譜法采用液體作為流動(dòng)相，利用物質(zhì)在兩相中的吸附或分配系數(shù)的微小差異達(dá)到分離 的目的。當(dāng)兩相做相對(duì)移動(dòng)時(shí)，被測(cè)物質(zhì)在兩相之間進(jìn)行反復(fù)多次的質(zhì)量交換，使溶質(zhì)間微 小的性質(zhì)差異產(chǎn)生放大的效果，達(dá)到分離分析和測(cè)定的目的。液相色譜與氣相色譜相比，最 大的優(yōu)點(diǎn)是可以分離不可揮發(fā)而具有一定溶解性的物質(zhì)或受熱后不穩(wěn)定的物質(zhì)，這類(lèi)物質(zhì)在 已知化合物中占有相當(dāng)大的比

2、例，這也確定了液相色譜在應(yīng)用領(lǐng)域中的地位。 高效液相色譜可分析低分子量、低沸點(diǎn)的有機(jī)化合物，更多適用于分析中、高分子量、高沸 點(diǎn)及熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物。 80%的有機(jī)化合物都可以用高效液相色譜分析，目前以已經(jīng)廣泛應(yīng)用于生物工程、制藥工程、食品工業(yè)、環(huán)境檢測(cè)、石油化工等行業(yè)。三 、高效液相色譜的分類(lèi) 吸附色譜法、分配色譜法、空間排阻色譜法、離子交換色譜法、親和色譜法、化學(xué)鍵合相色 譜法四 、高效液相色譜儀的基本構(gòu)造 高效液相色譜至少包括輸液系統(tǒng)、 進(jìn)樣器、 分離柱、 檢測(cè)器和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等幾部分。 1 輸 液系統(tǒng)： 包括貯液及脫氣裝置、高壓輸液泵和梯度洗脫裝置。貯液裝置用于存貯足夠量、符合 h

3、plc 要求的流動(dòng)相。高效液相色譜柱填料顆粒比較小，通過(guò)柱子的流動(dòng)相受到的流動(dòng)阻力很大， 因此需要高壓泵輸送流動(dòng)相。 2 進(jìn)樣系統(tǒng)： 將待測(cè)的樣品引入到色譜柱的裝置。液相色譜進(jìn)樣裝置需要滿足重復(fù)性好、死體積小、保證 柱中心進(jìn)樣、進(jìn)樣時(shí)引起的流量波動(dòng)小、便于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等多項(xiàng)要求。進(jìn)樣系統(tǒng)包括取樣、 進(jìn)樣兩項(xiàng)功能。 3 分離柱： 色譜柱是色譜儀的心臟、柱效高、選擇性好、分析速度快是對(duì)色譜柱的一般要求。商品化的 hplc 微粒填料，如硅膠和以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機(jī)聚合物微球（包括離子交換樹(shù)脂）等的粒度通常在3卩m 5卩m 7卩m以及10卩m。采用的固定相粒度甚至可以達(dá)到1卩m,而制備色譜所

4、采用的固定相粒度通常大于10卩m。hplc填充柱效的理論值可以達(dá)到50000/m160000/m理論板，一般采用100-300mm的柱長(zhǎng)可滿足大多數(shù)樣品的分析的需要。由于柱效內(nèi)、外多種因素的影響,因此為使色譜柱達(dá)到其應(yīng)有的效率。應(yīng)盡量的減小系統(tǒng)的 死體積。 4 檢測(cè)系統(tǒng)：hplc 檢測(cè)器分為通用型檢測(cè)器和專(zhuān)用型檢測(cè)器兩類(lèi)。 通用型檢測(cè)器可連續(xù)測(cè)量色譜柱流出物 （包括流動(dòng)相和樣品組分）的全部特性變化。這類(lèi)檢測(cè)儀器包括示差折光檢測(cè)器、介電常數(shù) 檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器和磁光旋轉(zhuǎn)檢測(cè)器。這類(lèi)檢測(cè)器適用范圍廣,但是對(duì)于流動(dòng)相有響應(yīng), 受溫度變化、 流動(dòng)相流速和組成變化的影響, 檢測(cè)靈敏度低, 不能用于梯度洗

5、脫的分離模式。 專(zhuān)用型檢測(cè)器對(duì)樣品中組分的某種物理或化學(xué)性質(zhì)敏感,可用于測(cè)量被分離組分某類(lèi)特性的 變化。這類(lèi)檢測(cè)器包括紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、質(zhì)譜檢測(cè)器、放射性檢測(cè)器。5 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)： 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)可以分為數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)和專(zhuān)用智能處理系統(tǒng)兩類(lèi),前者可以完成一般的色譜數(shù) 據(jù)處理任務(wù),有些軟件可以實(shí)現(xiàn)部分儀器的控制功能。前者即一般的色譜工作站,后者通常 稱(chēng)之為專(zhuān)家系統(tǒng)。五 、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)一：數(shù)據(jù)二：11 hplc 1六 、高效液相色譜的使用中的注意事項(xiàng)流動(dòng)相：1 、流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純?cè)噭⒏呒兯螂p蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過(guò)濾后使用，過(guò)濾時(shí) 注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；2、水相流動(dòng)相需經(jīng)常更

6、換（一般不超過(guò)2 天），防止長(zhǎng)菌變質(zhì)； 樣品：1 、 采用過(guò)濾或離心方法處理樣品，確保樣品中不含固體顆粒；2、 用流動(dòng)相或比流動(dòng)相弱（若為反相柱，則極性比流動(dòng)相大；若為正相柱，則極性比流動(dòng) 相?。┑娜軇┲苽錁悠啡芤?，盡量用流動(dòng)相制備樣品液；手動(dòng)進(jìn)樣時(shí)，進(jìn)樣量盡量小，使用定量管定量時(shí)，進(jìn)樣體積應(yīng)為定量管的35倍；色譜柱：1、使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說(shuō)明書(shū)，注意適用范圍，如ph值范圍、流動(dòng)相類(lèi)型等；2、使用符合要求的流動(dòng)相； 3 、 使用保護(hù)柱；4、 如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水（如5甲醇 水溶液），再用甲醇沖洗。5、色譜柱在不使用時(shí)，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密

7、封閉兩端保存；6 、 不要高壓沖洗柱子；7、 不要在高溫下長(zhǎng)時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱；篇二：分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告高效液相色譜華南師范大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告學(xué)號(hào)： 專(zhuān)業(yè)： 年級(jí)班級(jí)： 課程名稱(chēng)：儀器分析實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：液相色譜分析混合樣品中 的苯和甲苯 實(shí)驗(yàn)時(shí)間：一、 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?:1、掌握高效液相色譜定性和定量分析的原理及方法 2、了解高效液相色譜的構(gòu)造、 原理及操 作技術(shù) 二、 實(shí)驗(yàn)原理 : 高效液相色譜法：以液體作為流動(dòng)相的色譜法。它是在經(jīng)典液相色譜實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，引入氣相 色譜的理論，在技術(shù)上采用高壓輸液泵，高效固定相和高靈敏的檢測(cè)器，而發(fā)展起來(lái)的快速 分離分析技術(shù)。具有分離效能高，檢出限低，操作自動(dòng)化和應(yīng)用范圍

8、廣的特點(diǎn)。其基本原理： 利用欲分配的諸組分在固定相和流動(dòng)相間的分配有差異 （即由不同的分配系數(shù)） ， 當(dāng)兩相做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，這些組分在此兩相中分配反復(fù)進(jìn)行，從幾千次到百萬(wàn)次，即使組分的 分配系數(shù)只有微小差異， 隨著液體流動(dòng)相卻可以有明顯的差異， 最后使這些組分都得到分離， 通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀。三、 儀器和試劑 :1. 主要儀器：島津液相色譜儀 （lc-10at）配有紫外檢測(cè) phe no me nexo柱;10卩l(xiāng)微量注射器 2 、試劑： 甲醇、水苯和甲苯混合待測(cè)溶液苯標(biāo)準(zhǔn)溶液：2.0卩l(xiāng)/ml甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液：2.0卩l(xiāng)/ml苯、甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：1.0卩l(xiāng)/ml、2

9、.0卩l(xiāng)/ml、5.0卩l(xiāng)/ml、10.0 卩l(xiāng)/ml四、實(shí)驗(yàn)步驟1 、按操作規(guī)程開(kāi)機(jī)。2、. 選擇合適的流動(dòng)相配比，優(yōu)化色譜條件 通過(guò)調(diào)節(jié)溶劑甲醇和水的混合比例，從而來(lái)優(yōu)化色譜調(diào)劑。調(diào)好最佳色譜條件，控制流速為1ml/min。柱溫30C，檢測(cè)波長(zhǎng) 354nm 3、苯、甲苯定性分析在最佳條件下，待基線走穩(wěn)后，用10卩l(xiāng)微量注射器分別進(jìn)樣 10卩l(xiāng)苯和 甲 苯混合待測(cè)溶 液，10卩l(xiāng)苯標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0卩l(xiāng)/ml ）和10卩l(xiāng)甲苯標(biāo)準(zhǔn)溶液（2.0卩l(xiāng)/ml ）（微量注射器用甲醇潤(rùn)洗35遍），觀察并記錄色譜圖上顯示的保留時(shí)間，確定苯和甲苯的峰。4、苯、甲苯定量分析在最佳條件下，待基線走穩(wěn)后，用10卩

10、I微量注射器分別進(jìn)樣1.0卩l(xiāng)/ml、2.0卩l(xiāng)/ml、5.0卩l(xiāng)/ml 10.0卩l(xiāng)/ml的苯和甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液10卩l(xiāng)。觀察并記錄各色譜圖上的保留時(shí)間和峰面積。繪制苯和甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積與相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線5 、苯和甲苯混合待測(cè)溶液分析根據(jù)得到的苯和甲苯混合待測(cè)溶液的液相色譜圖上顯示的峰面積值，從繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線上查 出苯和甲苯混合待測(cè)溶液中苯和甲苯的各自的濃度。六、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理及分析 1 、色譜條件優(yōu)化2.00 色譜1.7570%1.501.251.000.750.500.250.00min分析：本次實(shí)驗(yàn)分別選擇了甲醇：水=60%：40%， 70%：30%， 80%：20%的溶劑配比，

11、通過(guò)比較不同溶劑配比條件下， 甲苯和苯的峰寬、 保留時(shí)間從而確定采用甲醇： 水=80%：20%作為本 次實(shí)驗(yàn)的最佳色譜條件。 2 、定性分析5.04.54.03.53.02.52.01.51.00.50.0-0.5min分析：在同一色譜操作條件和進(jìn)樣量下， 分別測(cè)定試樣溶液中苯和甲苯組分及已知苯和甲苯 純物質(zhì)的保留時(shí)間，并將其色譜峰、保留時(shí)間與對(duì)應(yīng)的已知苯和甲苯純物質(zhì)進(jìn)行比較，兩者 基本相同，從而確定混合樣品中含有苯和甲苯。3 、定量分析苯、甲苯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度分別為： 1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml。4、未知樣品濃度七、結(jié)果討論1 、實(shí)驗(yàn)中為什么采用標(biāo)

12、準(zhǔn)曲線法作為定量的方法？ 答：因?yàn)閷?shí)驗(yàn)中待測(cè)溶液的組分只有苯和甲苯兩種物質(zhì)， 組分比較簡(jiǎn)單。 只要在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中， 嚴(yán)格控制且定量進(jìn)樣，就能采用操作、計(jì)算簡(jiǎn)便的標(biāo)準(zhǔn)曲線法得出準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若采用 歸一化法或內(nèi)標(biāo)法，雖然能得到準(zhǔn)確更高的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，但由于實(shí)驗(yàn)操作、計(jì)算復(fù)雜，不能快 速分析，故實(shí)驗(yàn)中采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法作為定量的方法。2在選擇溶劑時(shí)，溶劑的極性是選擇的重要依據(jù)。采用正相液 -液分配分離時(shí)： 首先選擇中等極性溶劑， 若組分的保留時(shí)間太短， 降低溶劑極性， 反之增加。也可在低極性溶劑中，逐漸增加其中的極性溶劑，使保留時(shí)間縮短。3選擇流動(dòng)相時(shí)應(yīng)注意的幾個(gè)問(wèn)題（1 ）盡量使用高純度試劑作流動(dòng)相，防

13、止微量雜質(zhì)長(zhǎng)期累積損壞色譜柱和 使檢測(cè)器噪聲增 加。如使固定液溶解流失； 酸性溶（2）避免流動(dòng)相與固定相發(fā)生作用而使柱效下降或損壞柱子。 劑破壞氧化鋁固定相等。4）流動(dòng)相同時(shí)還3）試樣在流動(dòng)相中應(yīng)有適宜的溶解度，防止產(chǎn)生沉淀并在柱中沉積。 應(yīng)滿足檢測(cè)器的要求。當(dāng)使用紫外檢測(cè)器時(shí)，流動(dòng)相不應(yīng)有紫外吸收。 4影響分離的因素與提高柱效的途徑 1)液體的黏度比氣體大一百倍，密度為氣體的一千倍，故降低傳質(zhì)阻力是提高柱效主要途 徑，降低固定相粒度可提高柱效。2)液相色譜中，不可能通過(guò)增加柱溫來(lái)改善傳質(zhì)； (恒溫) 3)改變淋洗液組成、極性是改 善分離的最直接的因素。 5. 高效液相色譜與氣相色譜的主要區(qū)別

14、可歸結(jié)于以下幾點(diǎn)：(1) 進(jìn)樣方式的不同：高效液相色譜只要將樣品制成溶液，而氣相色譜需加熱氣化或裂解；(2) 流動(dòng)相不同， 在被測(cè)組分與流動(dòng)相之間、 流動(dòng)相與固定相之間都存在著一定的相互作用力；(3) 由于液體的粘度較氣體大兩個(gè)數(shù)量級(jí)， 使被測(cè)組分在液體流動(dòng)相中的擴(kuò)散系數(shù)比在氣體流 動(dòng)相中約小 45 個(gè)數(shù)量級(jí)；(4) 由于流動(dòng)相的化學(xué)成分可進(jìn)行廣泛選擇， 并可配置成二元或多元體系， 滿足梯度洗脫的需 要，因而提高了高效液相色譜的分辨率(柱效能) ；(5) 高效液相色譜采用 510lm 細(xì)顆粒固定相，使流體相在色譜柱上滲透性大大縮篇三：高效 液相實(shí)驗(yàn)報(bào)告化學(xué)與環(huán)境化學(xué)科學(xué)學(xué)院分析化學(xué) 駱洪偉 2

15、0144015016 高效液相實(shí)驗(yàn)報(bào)告一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?. 了解高效液相的實(shí)驗(yàn)原理。2. 學(xué)習(xí)并掌握高效液相色譜儀 (hplc) 的操作步驟。二、實(shí)驗(yàn)原理 高效液相色譜由儲(chǔ)液器，泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成，儲(chǔ)液器中的 流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱內(nèi)，由于樣 品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸 附解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi) 流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀。三、hplc 的介紹及操作步驟 高效液相色譜儀主要包括高壓輸送系統(tǒng)

16、、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)及 梯度洗脫等輔助裝置。其工作流程如圖 1所示。 1.高壓輸液系統(tǒng) 高壓進(jìn)樣系統(tǒng)的作用是提供足夠恒定的高壓，使流動(dòng)相以穩(wěn)定的流量快速滲透通過(guò)固定相。 高壓輸液系統(tǒng)由貯液器、高壓泵、過(guò)濾器和梯度洗脫裝置組成，其核心部件是高壓泵，要求高壓泵具有輸出壓力(1.5 X 1074.5 x 107pa)，輸出流量恒定(精度0.1ml min-1)，流量設(shè)定范圍可調(diào)。梯度洗脫裝置的作用是在分離過(guò)程中，按一定程序連續(xù)改變流動(dòng)相中多種不同 性質(zhì)溶劑的配比，以改變流動(dòng)相的極性、離子強(qiáng)度或酸度等，從而提高試樣的分離效率，縮 短分析時(shí)間，使色譜峰形得到改善，提高測(cè)定的靈敏度

17、和定量的準(zhǔn)確度。此外，還附有加熱 脫氣、超聲波脫氣等裝置，以排除溶解在流動(dòng)相或試樣中的氣體。2. 進(jìn)樣系統(tǒng) 在高效液相色譜中，一般采用旋轉(zhuǎn)式六通閥于高壓下進(jìn)樣。采用旋轉(zhuǎn)式六通閥進(jìn)樣的優(yōu)點(diǎn)是 進(jìn)樣量可變范圍大，耐高壓，宜于進(jìn)樣自動(dòng)化，但易造成色譜峰柱前擴(kuò)展。3. 分離系統(tǒng) 液相色譜柱一般采用內(nèi)壁拋光的優(yōu)質(zhì)不銹鋼管或厚壁玻璃管。為使工作壓力不致過(guò)高，柱長(zhǎng) 都比較短，一般在 530cm,柱徑為45mm柱子的填充取決于柱填料的性能，對(duì)于生物膠 或離子交換樹(shù)脂等，因遇到溶劑會(huì)膨脹，所以必須采用勻漿濕法填充。為防止顆粒大的填料 先沉降而產(chǎn)生分層現(xiàn)象,可采用等密度溶劑 (四氯乙烷和四氯乙烯混合物 )配成勻漿

18、。用高壓 泵將其快速壓入裝有流動(dòng)相的色譜柱中,經(jīng)沖洗后,即可使用。4. 檢測(cè)記錄系統(tǒng) 高效液相色譜檢測(cè)器要求具有靈敏度高、噪聲低、線性范圍寬、響應(yīng)快、死體積小等特點(diǎn)， 且對(duì)溫度和流量的變化不敏感。目前，液相色譜常用檢測(cè)器有紫外光度檢測(cè)器、示差折光檢 測(cè)器、熒光檢測(cè)器和電化學(xué)檢測(cè)器等。5.hplc 操作步驟(1) 過(guò)濾流動(dòng)相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。(2) 對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣 10-20 分鐘。(3) 打開(kāi) hplc 工作站 (包括計(jì)算機(jī)軟件和色譜儀) ，連接好流動(dòng)相管道， 連接檢測(cè)系統(tǒng)。 (4) 進(jìn)入 hplc 控制界面主菜單，點(diǎn)擊 manual ，進(jìn)入手動(dòng)菜單。(5) 有一段時(shí)間沒(méi)

19、用，或者換了新的流動(dòng)相，需要先沖洗泵和進(jìn)樣閥。沖洗泵，直接在泵的 出水口，用針頭抽取。沖洗進(jìn)樣閥，需要在 manual 菜單下，先點(diǎn)擊 purge ，再點(diǎn)擊 start ， 沖洗時(shí)速度不要超過(guò) 10ml min-1。(6) 調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動(dòng)相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過(guò)2000。點(diǎn)擊injure，選用合適的流速，點(diǎn)擊on,走基線，觀察基線的情況。(7) 設(shè)計(jì)走樣方法。 點(diǎn)擊 file ，選取 select?users?and?methods ，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個(gè)新的方法，點(diǎn)擊new?method。選取需要的配件，包括進(jìn)樣閥，泵，檢測(cè)器等,

20、根據(jù)需要而不同。選完后,點(diǎn)擊 protocol 。一個(gè)完整的走樣方法需要包括： a. 進(jìn)樣前 的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進(jìn)樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時(shí)間，隨不同的樣品而不同。(8) 進(jìn)樣和進(jìn)樣后操作。選定走樣方法,點(diǎn)擊 start 。進(jìn)樣,所有的樣品均需過(guò)濾。方法走 完后,點(diǎn)擊 postrun ,可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后,再用上面的方法走一段基 線,洗掉剩余物。(9) 關(guān)機(jī)時(shí),先關(guān)計(jì)算機(jī),再關(guān)液相色譜。(10) 登記。四、注意事項(xiàng)1. 泵的使用和維護(hù)注意事項(xiàng) 為了延長(zhǎng)泵的使用壽命和維持其輸液的穩(wěn)定性,必須按照下列注意事項(xiàng)進(jìn)行操作： 防止任何固體

21、微粒進(jìn)入泵體，因?yàn)閴m埃或其它任何雜質(zhì)微粒都會(huì)磨損柱塞、密封環(huán)、缸體 和單向閥,因此應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒。流動(dòng)相最好在玻璃容器內(nèi)蒸餾,而常用的方法是濾過(guò)，可采用 millipore 濾膜(0.2卩m或0.45卩m)等濾器。泵的入口都應(yīng)連接 砂濾棒(或片) 。輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。 流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)，尤其是在停泵過(guò) 夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下。如果將含緩沖液的流動(dòng)相留在泵內(nèi),由于蒸發(fā)或泄漏,甚至只是由 于溶液的靜置,就可能析出鹽的微細(xì)晶體,這些晶體將和上述固體微粒一樣損壞密封環(huán)和柱 塞等。因此,必須泵入純水將泵充分清洗后,再換成適合于色譜

22、柱保存和有利于泵維護(hù)的溶 劑(對(duì)于反相鍵合硅膠固定相,可以是甲醇或甲醇 -水)。 泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完，否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會(huì)磨損柱塞、缸體或密封 環(huán),最終產(chǎn)生漏液。 輸液泵的工作壓力決不要超過(guò)規(guī)定的最高壓力，否則會(huì)使高壓密圭寸環(huán)變形，產(chǎn)生漏液。 流動(dòng)相應(yīng)該先脫氣，以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響流量的穩(wěn)定性，如果有大量氣泡，泵就無(wú) 法正常工作。如果輸液泵產(chǎn)生故障,須查明原因,采取相應(yīng)措施排除故障： 沒(méi)有流動(dòng)相流出，又無(wú)壓力指示。原因可能是泵內(nèi)有大量氣體，這時(shí)可打開(kāi)泄壓閥，使泵 在較大流量(如 5ml/min )下運(yùn)轉(zhuǎn),將氣泡排盡,也可用一個(gè) 50ml 針筒在泵出口處幫助抽出 氣體。另一個(gè)可能原因是密封環(huán)磨損，需更換。 壓力和流量不穩(wěn)。原因可能是氣泡，需要排除；或者是單向閥內(nèi)有異物，可卸下單向閥， 浸入丙酮內(nèi)超聲清洗。有時(shí)可能是砂濾棒內(nèi)有氣泡，或被鹽的微細(xì)晶?；蜃躺奈⑸锊糠?堵塞，這時(shí)，可卸下砂濾棒浸入流動(dòng)相內(nèi)超聲除氣泡， 或?qū)⑸盀V棒浸入稀酸 （如 4mol/l 硝酸） 內(nèi)迅速除去微生物，或?qū)Ⅺ}溶解，再立即清洗。 壓力過(guò)高的原因是管路被堵塞，需要清除和清洗。壓力降低的原因則可能是管路有泄漏。 檢查堵塞或泄漏時(shí)應(yīng)逐段進(jìn)行。2. 梯度洗脫 在進(jìn)行梯度洗脫時(shí)，