農(nóng)作物組織培養(yǎng)

1、第八章第八章 主要農(nóng)作物的組織培養(yǎng)主要農(nóng)作物的組織培養(yǎng) 以有性雜交為作為指導(dǎo)進(jìn)行育種，這種方法局限性很大，而且以有性雜交為作為指導(dǎo)進(jìn)行育種，這種方法局限性很大，而且周期長周期長植物組織培養(yǎng)已廣泛應(yīng)用于植物育種，在單倍體育種、胚培養(yǎng)、植物組織培養(yǎng)已廣泛應(yīng)用于植物育種，在單倍體育種、胚培養(yǎng)、體細(xì)胞雜交、細(xì)胞突變體篩選、遺傳轉(zhuǎn)化等方面體細(xì)胞雜交、細(xì)胞突變體篩選、遺傳轉(zhuǎn)化等方面離體無性系的快速繁殖離體無性系的快速繁殖培養(yǎng)無病毒種苗培養(yǎng)無病毒種苗 新品種的選育新品種的選育人工種子和種質(zhì)的保存。人工種子和種質(zhì)的保存。第一節(jié)第一節(jié) 農(nóng)作物組織培養(yǎng)的意義、方法與應(yīng)用農(nóng)作物組織培養(yǎng)的意義、方法與應(yīng)用 對繁殖系數(shù)

2、低的“名、優(yōu)、新、奇、特”植物品種的推廣，蘭花、安祖花、馬蹄蓮、甘薯、草莓、香蕉、甘蔗、桉樹、非洲菊等經(jīng)濟(jì)植物已開始工廠化生產(chǎn) 植物脫毒苗木培育植物脫毒苗木培育 脫毒后的馬鈴薯、甘薯、甘蔗、香蕉等植物可大幅度提高產(chǎn)量，改善品質(zhì)，蘭花、水仙、大麗花等觀賞植物脫毒后植株生長勢強(qiáng)，花朵變大，產(chǎn)花量上升，色澤鮮艷 植物新品種培育植物新品種培育 基因工程育種（抗蟲棉、抗除草劑大豆、玉米），單倍體育種-煙草單育1號、水稻“中花8號”、小麥“京花1號”，遠(yuǎn)緣雜交幼胚早期培養(yǎng)，原生質(zhì)體融合技術(shù)，選擇細(xì)胞突變體 植物種質(zhì)資源的離體保存植物種質(zhì)資源的離體保存 超低溫離體保存植物種質(zhì)，可節(jié)約大量的人力、物力和土地，

3、還可挽救那些瀕危物種 人工種子人工種子 為某些珍稀物種的繁殖以及轉(zhuǎn)基因植物、自交不親為某些珍稀物種的繁殖以及轉(zhuǎn)基因植物、自交不親和植物、遠(yuǎn)緣雜種的繁殖提供有效的手段和植物、遠(yuǎn)緣雜種的繁殖提供有效的手段第二節(jié)第二節(jié)棉花組織培養(yǎng)棉花組織培養(yǎng) 一、大量元素（一、大量元素（20倍）母液倍）母液 (g/L)藥品摩 爾 濃度（M/L）質(zhì)量濃度（g/L）5L母液所需質(zhì)量（g）備注KNO30.3838190 MgSO40.033.8/7.4(MgSO47H2O)19/37 KH2PO40.0253.417 CaCl20.066.6/8.8(CaCl22 H2O)33/44單獨(dú)溶解，最后加入二、微量元素（二、微

4、量元素（100倍）母液倍）母液 (g/L) 藥品質(zhì)量濃度(g/L)備注 5倍母液H3BO33.1加熱助溶MnSO44H2O（或MnSO4H2O）11.15（或8.45） ZnSO47H2O4.3 20倍母液CoCl26H2O0.05 CuSO45H2O0.05單獨(dú)溶解，最后加入KI1.66 NaMO42H2O0.5 微量元素二級母液（即我們平時(shí)配培養(yǎng)基時(shí)使用的微量）：取上述母液200ml，母液50ml，加蒸餾水定容至1L。 鐵鹽母液配制（所用試劑均為國藥產(chǎn)品）鐵鹽母液配制（所用試劑均為國藥產(chǎn)品）B5有機(jī)物配制有機(jī)物配制 （所用試劑均為（所用試劑均為sigma產(chǎn)品）產(chǎn)品）藥品摩爾濃度（M/L）

5、質(zhì)量濃度（g/L）備注FeSO47H2O0.012.78 Na2EDTA0.013.73加熱助溶藥品100ml所需質(zhì)量（g）500ml所需質(zhì)量（g）備注VB1（硫胺素）15 VB6（鹽酸吡哆醇）0.10.5NaOH助溶VB3（煙酸）0.10.5NaOH助溶加入VB6和VB1后加部分水，再加入VB3，再次加水，容量瓶定容各種激素配制（所用試劑均為各種激素配制（所用試劑均為sigmasigma產(chǎn)品）產(chǎn)品） 質(zhì)量濃度（g/L）備注2,4-D0.1無水乙醇助溶6-BA1 NAA1 L-Gly（甘氨酸）2國藥產(chǎn)品肌醇10 IAA0.5 IBA0.5NaOH助溶KT0.5NaOH助溶/鹽酸助溶*NH4NO

6、3165國藥產(chǎn)品 愈傷組織的誘導(dǎo)愈傷組織的誘導(dǎo) 0.5-1cm的下胚軸切段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，一個(gè)皿放25-30段下胚軸。一個(gè)月后挑選兩端膨大，生長正常的下胚軸繼代到新的IBA培養(yǎng)基上 非胚性愈傷組織的增殖非胚性愈傷組織的增殖 由于愈傷組織的進(jìn)一步膨大，一個(gè)皿中以20段下胚軸為宜 愈傷組織的分化愈傷組織的分化 愈傷組織經(jīng)繼代（一個(gè)月繼代一次）幾次后，有的愈傷組織轉(zhuǎn)成米粒狀顆粒，將其轉(zhuǎn)入分化培養(yǎng)基上，進(jìn)一步分化成胚狀體 成苗生根培養(yǎng)成苗生根培養(yǎng) 將分化出的小苗繼代到1/2MS培養(yǎng)基中成苗生長培養(yǎng)基上 煉苗移栽煉苗移栽 將生根良好的小苗揭開三角瓶封口膜，煉苗2-3天，然后移栽到小土缽中，遮蔭緩苗一

7、周左右移栽大田棉花下胚軸棉花下胚軸組織培養(yǎng)過程組織培養(yǎng)過程棉花下胚軸誘導(dǎo)愈傷過程中胚性愈傷組織的腺體處發(fā)生和外發(fā)生棉花下胚軸誘導(dǎo)愈傷過程中胚性愈傷組織的腺體處發(fā)生和外發(fā)生 A1：下胚軸外植體；：下胚軸外植體；A2-A4：胚性愈傷組織在腺體處發(fā)生；：胚性愈傷組織在腺體處發(fā)生；B1：愈傷組織表面的胚性細(xì)胞；愈傷組織表面的胚性細(xì)胞；B2-B4：愈傷組織表面形成胚性組織：愈傷組織表面形成胚性組織棉花體細(xì)胞胚的單細(xì)胞起源和表面發(fā)生棉花體細(xì)胞胚的單細(xì)胞起源和表面發(fā)生 A：單細(xì)胞原胚、二細(xì)胞原胚和四細(xì)胞原胚：單細(xì)胞原胚、二細(xì)胞原胚和四細(xì)胞原胚(箭頭所指箭頭所指)；B：具胚柄的多細(xì)胞原胚：具胚柄的多細(xì)胞原胚(

8、箭箭頭所指頭所指)；C：具胚柄的體胚；：具胚柄的體胚；D-G：與愈傷組織粘連的體胚；：與愈傷組織粘連的體胚；H-I：游離的體胚：游離的體胚棉花單個(gè)胚性細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)中體細(xì)胞胚的發(fā)生和發(fā)育棉花單個(gè)胚性細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)中體細(xì)胞胚的發(fā)生和發(fā)育A：培養(yǎng)當(dāng)天；：培養(yǎng)當(dāng)天；B1-B2：培養(yǎng)：培養(yǎng)7 d；C1-C3：培養(yǎng)：培養(yǎng)14 d；D1-D3：培養(yǎng)：培養(yǎng)21 d后出現(xiàn)球形胚；后出現(xiàn)球形胚；E1-E3：心：心形胚階段；形胚階段；F1-F3：魚雷形胚階段；：魚雷形胚階段；G1-G3：子葉胚階段：子葉胚階段棉花體細(xì)胞胚發(fā)育過程中的極性建立和組織分化棉花體細(xì)胞胚發(fā)育過程中的極性建立和組織分化A：球形胚表皮原形成；：球形胚

9、表皮原形成； B：球形胚內(nèi)層細(xì)胞分裂形成基礎(chǔ)和維管組織；：球形胚內(nèi)層細(xì)胞分裂形成基礎(chǔ)和維管組織；C：內(nèi)部等軸：內(nèi)部等軸細(xì)胞軸向延長形成的心形胚；細(xì)胞軸向延長形成的心形胚；D-E：極性的逐步建立和原形成細(xì)胞層的分化；：極性的逐步建立和原形成細(xì)胞層的分化；F-G：具：具有清楚的前形成細(xì)胞層和極性的魚雷形胚；有清楚的前形成細(xì)胞層和極性的魚雷形胚；H：具有子葉原基，芽頂端分生組織、前：具有子葉原基，芽頂端分生組織、前形成層和根頂端分生組織的魚雷形胚；形成層和根頂端分生組織的魚雷形胚；I：具有：具有Y形微管組織的子葉胚形微管組織的子葉胚棉花單個(gè)胚性細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)中不同發(fā)育階段的體細(xì)胞胚棉花單個(gè)胚性細(xì)胞團(tuán)培養(yǎng)

10、中不同發(fā)育階段的體細(xì)胞胚A1-A6：球形胚；：球形胚；B1-B6：心形胚；：心形胚；C1-C6：魚雷形胚；：魚雷形胚；D1-D6：子葉胚：子葉胚第四節(jié)第四節(jié) 玉米組織培養(yǎng)玉米組織培養(yǎng)主要內(nèi)容：主要內(nèi)容： 植物組織培養(yǎng)的意義植物組織培養(yǎng)的意義. 玉米組織培養(yǎng)的目的玉米組織培養(yǎng)的目的. 研究進(jìn)展研究進(jìn)展. 目前玉米組織培養(yǎng)的主要目前玉米組織培養(yǎng)的主要方法方法. 植物組織培養(yǎng)的意義植物組織培養(yǎng)的意義 植物組織培養(yǎng)可以生產(chǎn)大量的優(yōu)良無性系植物組織培養(yǎng)可以生產(chǎn)大量的優(yōu)良無性系. 細(xì)胞融合可打破種屬間的界限，克服遠(yuǎn)緣細(xì)胞融合可打破種屬間的界限，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和性障礙雜交不親和性障礙. 可獲得單倍體、三倍

11、體及其它多倍體、非可獲得單倍體、三倍體及其它多倍體、非整倍體整倍體. 組織培養(yǎng)的植物細(xì)胞也成為在細(xì)胞水平上組織培養(yǎng)的植物細(xì)胞也成為在細(xì)胞水平上分析研究的理想材料分析研究的理想材料.玉米組織培養(yǎng)的目的玉米組織培養(yǎng)的目的 玉米組織培養(yǎng)的目的是讓外植體能夠高頻玉米組織培養(yǎng)的目的是讓外植體能夠高頻率地誘導(dǎo)出愈傷組織，建立高效率地誘導(dǎo)出愈傷組織，建立高效 的體細(xì)胞的體細(xì)胞再生體系再生體系 ，為玉米遺傳轉(zhuǎn)化和細(xì)胞工程研，為玉米遺傳轉(zhuǎn)化和細(xì)胞工程研究創(chuàng)造有利條件究創(chuàng)造有利條件 。玉米組織培養(yǎng)的研究回顧玉米組織培養(yǎng)的研究回顧 LarueLarue在在 1949年用甜玉米的胚乳作外植體年用甜玉米的胚乳作外植體，

12、首首次誘出玉米愈傷組織次誘出玉米愈傷組織，但未獲得再生植株但未獲得再生植株 。 1975年，年，Green和和Phillips首次用首次用A188的幼胚作的幼胚作外植體外植體，誘導(dǎo)出二倍誘導(dǎo)出二倍 體體 愈傷組織愈傷組織 ，并再生得，并再生得 到第一株無性系植株。到第一株無性系植株。玉米組織培養(yǎng)的研究現(xiàn)狀玉米組織培養(yǎng)的研究現(xiàn)狀 現(xiàn)在已經(jīng)能從多種外植體中誘導(dǎo)出愈傷組現(xiàn)在已經(jīng)能從多種外植體中誘導(dǎo)出愈傷組織，并再生出植株。例如：幼胚、花織，并再生出植株。例如：幼胚、花 藥、藥、幼穗等，其中幼胚是最易誘導(dǎo)，也是目前幼穗等，其中幼胚是最易誘導(dǎo)，也是目前最常用的外植體。最常用的外植體。玉米組織培養(yǎng)的主要方

13、法（簡介）玉米組織培養(yǎng)的主要方法（簡介）1、玉米花粉和花藥組織培養(yǎng)玉米花粉和花藥組織培養(yǎng) 玉米花粉和花藥的培養(yǎng)一般可獲取單倍體玉米花粉和花藥的培養(yǎng)一般可獲取單倍體植物，有利于促進(jìn)玉米遺傳育種工作的有植物，有利于促進(jìn)玉米遺傳育種工作的有效進(jìn)展。效進(jìn)展。2、 玉米莖尖和根尖離體培養(yǎng)玉米莖尖和根尖離體培養(yǎng) 玉米植株的根尖和莖尖分生組織具有良好玉米植株的根尖和莖尖分生組織具有良好的分化性能。玉米莖尖和根尖離體培養(yǎng)有的分化性能。玉米莖尖和根尖離體培養(yǎng)有利于促進(jìn)完整玉米植株的生長利于促進(jìn)完整玉米植株的生長,并且在取材并且在取材上不受季節(jié)限制。上不受季節(jié)限制。3、玉米幼胚的組織培養(yǎng)玉米幼胚的組織培養(yǎng) 玉米幼

14、胚屬于二倍體，玉米幼胚屬于二倍體， 且分生能力較強(qiáng)。幼且分生能力較強(qiáng)。幼胚是最易誘導(dǎo)，胚是最易誘導(dǎo)， 也是目前最常用的外植體，也是目前最常用的外植體， 但幼胚取材的時(shí)間受到嚴(yán)格的季節(jié)限制。但幼胚取材的時(shí)間受到嚴(yán)格的季節(jié)限制。玉米幼胚組織培養(yǎng)的全過程玉米幼胚組織培養(yǎng)的全過程1、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作 接種室消毒接種室消毒 準(zhǔn)備誘導(dǎo)培養(yǎng)基（準(zhǔn)備誘導(dǎo)培養(yǎng)基（N6+肌醇肌醇+L-脯氨酸脯氨酸1.38g/L+蔗糖蔗糖30g/L+瓊脂瓊脂7g/L+水解酪蛋白水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D2mg/mL) 滅菌滅菌2、外體消毒及挑幼胚外體消毒及挑幼胚 75%酒精擦玉米外層葉片酒精擦玉米外層葉片 至超凈工作臺，至

15、超凈工作臺，用用75%酒精擦玉米外層葉片，剝一層擦一層至酒精擦玉米外層葉片，剝一層擦一層至完完 用刀去掉用刀去掉1/3玉米籽粒玉米籽粒 挑幼胚挑幼胚 接種到準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上接種到準(zhǔn)備好的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上（暗培養(yǎng)）（暗培養(yǎng)）3、繼代繼代 準(zhǔn)備繼代培養(yǎng)基準(zhǔn)備繼代培養(yǎng)基(N6+水解酪蛋白水解酪蛋白0.1g/L+L-脯氨酸脯氨酸0.69g/L+甘露醇甘露醇20g/L+蔗糖蔗糖30g/L+瓊瓊脂脂6.5g/L+2,4-D1mg/ml) 誘導(dǎo)兩次后，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基每誘導(dǎo)兩次后，轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基每7天繼代一天繼代一次，直至出透明、黃色、堅(jiān)硬的愈傷組織，次，直至出透明、黃色、堅(jiān)硬的愈傷組織，可用于轉(zhuǎn)化可用于轉(zhuǎn)化

16、（一般繼代三次（一般繼代三次）4 4、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)化 侵染培養(yǎng)（侵染培養(yǎng)（22-25，暗培養(yǎng)，暗培養(yǎng)3天）天） 恢復(fù)培養(yǎng)（暗培養(yǎng)恢復(fù)培養(yǎng)（暗培養(yǎng)3天）天） 篩選培養(yǎng)篩選培養(yǎng) 分化培養(yǎng)分化培養(yǎng) 生根培養(yǎng)生根培養(yǎng) 壯苗壯苗5、移栽及管理、移栽及管理 移栽前，應(yīng)對移栽用的基質(zhì)進(jìn)行滅菌。移栽前，應(yīng)對移栽用的基質(zhì)進(jìn)行滅菌。 移栽前，可將培養(yǎng)物不開口移到自然移栽前，可將培養(yǎng)物不開口移到自然 光照下鍛煉光照下鍛煉2-32-3天，然后再開口練苗天，然后再開口練苗1-1-2 2天，以適應(yīng)將來自然濕度的條件。天，以適應(yīng)將來自然濕度的條件。 玉米組培苗移栽時(shí)首先應(yīng)把根部的培玉米組培苗移栽時(shí)首先應(yīng)把根部的培養(yǎng)基清洗干凈，

17、以免受細(xì)菌或真菌污養(yǎng)基清洗干凈，以免受細(xì)菌或真菌污染而影響幼苗生長。染而影響幼苗生長。 移栽移栽玉米莖尖組織培養(yǎng)的全過程玉米莖尖組織培養(yǎng)的全過程1、準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作 接種室消毒接種室消毒 準(zhǔn)備培養(yǎng)基（準(zhǔn)備培養(yǎng)基（MS+蔗糖蔗糖30g/L+瓊脂瓊脂6.5g/L) 滅菌滅菌1 1、玉米種子消毒、玉米種子消毒a)a)在在500ml500ml三角瓶中裝入三角瓶中裝入200300200300粒玉米種子粒玉米種子b)b)用用75%75%酒精清洗酒精清洗8min8minc)c)0.1%0.1%升汞升汞5min5mind)d)無菌水洗無菌水洗2 2遍遍e)e)加入無菌水靜置加入無菌水靜置8h8hf)f)0.1

18、%0.1%升汞升汞8min8ming)g)無菌水洗無菌水洗5 5遍遍h)h)裝入鈑盒裝入鈑盒i)i)2828暗培養(yǎng)暗培養(yǎng)3 3天天2、接種、接種 取出培養(yǎng)三天后的種子，接種到取出培養(yǎng)三天后的種子，接種到MS固體固體培養(yǎng)基中，根向下伸入培養(yǎng)基中，芽向上，培養(yǎng)基中，根向下伸入培養(yǎng)基中，芽向上，芽萌發(fā)得不太好的繼續(xù)放進(jìn)飯盒中再培養(yǎng)。芽萌發(fā)得不太好的繼續(xù)放進(jìn)飯盒中再培養(yǎng)。接種到接種到MS固體培養(yǎng)基中的芽放回固體培養(yǎng)基中的芽放回28暗培暗培養(yǎng)養(yǎng)3-4天。天。3 3、玉米莖尖轉(zhuǎn)化、玉米莖尖轉(zhuǎn)化取出取出MS固體培養(yǎng)基中的芽放在無菌濾紙上固體培養(yǎng)基中的芽放在無菌濾紙上切根切根 鑷子夾胚軸，在莖尖處用刀尖切半邊

19、。鑷子夾胚軸，在莖尖處用刀尖切半邊。 在莖尖生長點(diǎn)劃一小口。在莖尖生長點(diǎn)劃一小口。 轉(zhuǎn)化后，接種于轉(zhuǎn)化后，接種于MS培養(yǎng)基中，進(jìn)行暗培養(yǎng)培養(yǎng)基中，進(jìn)行暗培養(yǎng)。3、移栽及其管理、移栽及其管理 培養(yǎng)培養(yǎng)35天后，將其移栽至至花盆中，其天后，將其移栽至至花盆中，其 中注意事項(xiàng)與前面的相同。后期的管理也中注意事項(xiàng)與前面的相同。后期的管理也于前者相近。于前者相近。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院第五節(jié) 馬鈴薯的脫毒培養(yǎng)目的要求: (1)掌握馬鈴薯脫毒培養(yǎng)的大致過程，了解馬鈴薯脫毒苗的鑒定方法; (2)掌握馬鈴薯的生物學(xué)習(xí)性： (3)熟悉微型薯的生產(chǎn)過程濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院微型薯濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院濱 州 職

20、 業(yè) 學(xué) 院 馬鈴薯是一種全球性的重要經(jīng)濟(jì)作物。適應(yīng)性廣，營養(yǎng)價(jià)值高，耐貯藏適運(yùn)輸，既是一種重要的糧食作物也是一種調(diào)節(jié)市場供應(yīng)的重要蔬菜。馬鈴薯原產(chǎn)于拉丁美洲，當(dāng)被發(fā)現(xiàn)可以食用后，很快傳到世界各地，成為栽培很廣的一種作物。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院但是，當(dāng)發(fā)現(xiàn)從外地引種栽培12個(gè)周期后，明顯發(fā)現(xiàn)產(chǎn)量降低，植株變矮，并有卷葉的現(xiàn)象產(chǎn)生，經(jīng)檢測證明這是由于病毒引起的退化現(xiàn)象。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院 危害馬鈴薯的病毒有17種之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花葉病毒、紡錘形塊莖病毒等。由于馬鈴薯是無性繁殖作物，病毒逐代積累，日益嚴(yán)重，引起嚴(yán)重退化。馬鈴薯病毒可使塊莖產(chǎn)量減少50%80%。

21、濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院法國Morel和他的同事們，1955年從患病馬鈴薯植株中選取到了無病植株，為治療作物病毒開辟了新途徑。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院一、特性和生物學(xué)習(xí)性1、馬鈴薯的形態(tài)特性(1)根 馬鈴薯的根系由初生根和匍匐根兩部分組成。(2)莖 馬鈴薯分地上部分和地下部分，地上主莖在形成16片葉子后，由花芽封頂，并在花的下部發(fā)生兩個(gè)側(cè)枝，從而構(gòu)成馬鈴薯的主要同化系統(tǒng)。地下莖包括主莖的地下部分、匍匐莖和塊莖。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院（3）葉 馬鈴薯先出土的葉是初生葉，全緣，心臟形。以后發(fā)生的葉奇數(shù)羽狀全裂單葉，在葉柄基部與主莖相連處著生有托葉。（4）花 馬鈴薯的花為聚傘花序，第一或第二花序開放，

22、恰是塊莖強(qiáng)盛膨大之時(shí)，此時(shí)是需要不斷澆水的形態(tài)標(biāo)志。 (5) 果實(shí)、種子 馬鈴薯果實(shí)為球形或橢圓形漿果。種子小。扁平腎形。種子可用來繁殖，但后代性狀分離大。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院2、 生物學(xué)習(xí)性馬鈴薯性喜冷氣候，不耐高溫和霜凍，解除休眠的塊莖4下發(fā)芽，發(fā)芽適溫為1218。地上莖葉生長溫度為1721，25以上時(shí)生長不良，葉變小，超過30和7以下莖葉停止生長，-1時(shí)受凍。塊莖形成要求晝溫1424，夜溫1214，土溫1618。土溫20以上時(shí)塊莖形成緩慢，而且容易引起退化，高溫下養(yǎng)分多用于芽和匍匐莖生長不易形成塊莖，2530時(shí)已經(jīng)長成的塊莖也變成細(xì)長莖，結(jié)薯期要求12h左右的短日照和疏松、濕潤、肥沃以

23、及通氣良好的土壤條件。土壤板結(jié)，薯塊表面粗糙和薯形不整。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院馬鈴薯生產(chǎn)中普遍存在有種性退化問題，表現(xiàn)為植株長勢衰弱，株形矮化，分枝變少，薯塊變小，產(chǎn)量逐降低，造成退化的原因和學(xué)說多種，綜合而言，主要是薯塊生長錐細(xì)胞發(fā)生階段性衰老而導(dǎo)致種性退化，而病毒和細(xì)菌病害的侵染，以及肥水、營養(yǎng)條件不良等都會加劇其退化程度。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院二、馬鈴薯脫毒技術(shù)馬鈴薯在營養(yǎng)繁殖時(shí)易受病毒的浸染，當(dāng)條件適合時(shí)，病毒就會在植株內(nèi)增殖，轉(zhuǎn)運(yùn)和積累，隨著世代傳遞，病毒危害逐年加重，一般可造成減產(chǎn)50以上。研究發(fā)現(xiàn)，有30多種病毒易感染馬鈴薯，并引起品種退化，嚴(yán)重影響馬鈴薯的生產(chǎn)。通過微莖尖組織

24、培養(yǎng)技術(shù)能從馬鈴薯體內(nèi)脫除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院因此，采用組織培養(yǎng)技術(shù)，通過一定良種繁殖體系，生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)種薯，是保證馬鈴薯高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)的一項(xiàng)有效措施。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院全國現(xiàn)有馬鈴薯播種面積300多萬公頃，且有逐步增加的趨勢，每年需合格種薯45億公斤，脫毒原種4億公斤，脫毒小薯或微型薯45億粒。因此，脫毒馬鈴薯推廣具有廣闊的市場前景，對于增加農(nóng)民收入和發(fā)展馬鈴薯產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)具有十分重要的意義。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院我國的馬鈴薯平均單產(chǎn)僅為13.60噸/公頃，是世界單產(chǎn)最高國這瑞士（48.80噸/公頃）的1/4。造成如此大的差別，最主

25、要的因素就是種薯質(zhì)量差，品種布局不合理。采用脫毒快繁技術(shù)，種用脫毒種薯，一般可增產(chǎn)30-50%，甚至成倍增產(chǎn)，充分發(fā)揮品種的潛能，提高馬鈴薯生產(chǎn)能力。如果我國現(xiàn)有馬鈴薯播種面積的1/3（即114萬公頃）用脫毒種薯，就可年增產(chǎn)糧食100多億公斤。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院我國在70年代用莖尖組織培養(yǎng)方法得到脫毒馬鈴薯試管苗，并成功地獲得脫毒復(fù)壯的馬鈴薯，開始了脫毒種薯的生產(chǎn)和推廣。八五期間，農(nóng)業(yè)部在全國范圍內(nèi)設(shè)立了6個(gè)馬鈴薯原原種基地建設(shè)和種薯生產(chǎn)項(xiàng)目，初步形成了脫毒草種薯生產(chǎn)體系。共推廣脫毒種薯36.5-40萬公頃，獲經(jīng)濟(jì)效益近30.8億元。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院我國已有許多科研、推廣單位開展了

26、脫毒馬鈴薯的研究和生產(chǎn)，在生產(chǎn)上產(chǎn)生了一定的經(jīng)濟(jì)效益和增產(chǎn)效果，但由于長期以來各自為政，技術(shù)方法和脫毒標(biāo)準(zhǔn)不盡統(tǒng)一，未能發(fā)揮出脫毒種薯應(yīng)有的增產(chǎn)潛力。到目前為止，我國仍未建立國家級的脫毒種薯質(zhì)量監(jiān)督和病毒檢測制度。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院1脫毒種薯生產(chǎn)程序采用微莖尖組織培養(yǎng)的方法，誘導(dǎo)出苗，采用聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法或指示植物方法鑒定馬鈴薯病毒和類病毒，經(jīng)鑒定后，無主要病毒及類病毒的試管苗可定為脫毒試管基礎(chǔ)苗。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院試管基礎(chǔ)苗在無菌條件下，采用固體、液體培養(yǎng)基相結(jié)合的方法，進(jìn)行擴(kuò)繁基礎(chǔ)苗，在防蟲網(wǎng)室栽植或封閉溫室扦插，生產(chǎn)出原原種（或稱脫毒小薯）。用原原種在一定隔離條件下產(chǎn)生原種1代

27、，以后逐級稱為原種2代、良種1代、良種2代。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院2莖尖培養(yǎng)脫毒（1） 取材和培養(yǎng)一般多采用在室內(nèi)發(fā)芽，芽經(jīng)熱處理（38）2周。然后取頂芽或側(cè)芽1厘米的莖尖，在自來水下沖洗干凈，無菌條件下先用70的酒精浸潤組織15-20秒，再用2的次氯酸鈉溶液浸泡4-5min，然后用無菌水沖洗3次。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院把消毒好的芽放在解剖鏡下仔細(xì)剝離，逐層剝?nèi)ビ兹~，露出圓滑的生長點(diǎn)，可以留1-2個(gè)葉原基，0.20.3毫米，隨即接種于MS液體培養(yǎng)基上，每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5mgBA，2%蔗糖，p H值5.8。培養(yǎng)條件：2125、2000-3

28、000 lx、12h/d。2-3周愈傷，4-5周綠點(diǎn)，3-6月長成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。（2） 繼代和生根培養(yǎng)成功的馬鈴薯脫毒苗，經(jīng)ELISA（試劑盒）鑒定后（試管苗應(yīng)每3月檢測一次，每年4次）鑒定后，采用固體、液體培養(yǎng)基相結(jié)合方法擴(kuò)繁。取試管苗單節(jié)切段扦插在（或平放）固體培養(yǎng)基上，每瓶可插20個(gè)左右莖段，經(jīng)20d左右發(fā)育成510cm高小植株，繼續(xù)進(jìn)行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖58倍，試管苗多接種在液體培養(yǎng)基上，進(jìn)行淺層靜止液體培養(yǎng)。濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院培養(yǎng)基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸鈣10，3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，14-16小時(shí)光照，每3周繼代一次，單芽莖段約1厘米，可插也可平放，原則試管苗用2年3年。 濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院濱 州 職 業(yè) 學(xué) 院(3) 馴化 為增強(qiáng)試管苗對溫室內(nèi)環(huán)境條件的適應(yīng)能力，移植前對試管苗要進(jìn)行光、溫鍛煉。煉苗期溫室內(nèi)的溫度：白天2327，夜間不低于14。煉苗的具體方法是：移植前7d左右，將長有35片葉、高23cm的試管苗，在不開瓶口的狀態(tài)下，從