小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定(BJS2020)

1、附件 2小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定BJS 2020021 范圍本方法規(guī)定了小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的高效液相色譜測(cè)定方法。本方法適用于小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測(cè)定。2 原理試樣中的苯甲羥肟酸用甲醇提取，采用高效液相色譜測(cè)定，外標(biāo)法定量。試樣中檢出苯甲羥肟酸后采用液相色譜-質(zhì)譜 /質(zhì)譜法進(jìn)行確證。3 試劑和材料除非另有說(shuō)明，本方法所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級(jí)水。3.1試劑3.1.1甲醇（ CH OH）：色譜純。33.1.2磷酸（ H PO）。343.1.3甲酸銨 （ HCOONH）：色譜純。43.2試液配制3.2.1磷酸溶液（ 0.01%）

2、：準(zhǔn)確量取 1000 mL 水，加入 100 L磷酸（ 3.1.2）得到 pH 在 2.9 ±0.1之間的磷酸溶液。甲酸銨溶液（ 5 mmol/L ）：稱取甲酸銨0.26 g（）（精確至 0.001 g），加水溶解并定容至1000 mL 。3.3標(biāo)準(zhǔn)品苯甲羥肟酸：純度不低于98%的標(biāo)準(zhǔn)品或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并發(fā)布的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。其中文名稱、英文名稱、 CAS號(hào)、分子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見(jiàn)附錄A 。3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制3.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取苯甲羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)品10 mg（精確至 0.01 mg），置于 50 mL 容量瓶中，加甲醇 -水溶液（ 50/50， v/v ）溶解并稀釋至刻度，搖

3、勻，得到濃度為200 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液， 4 避光保存，有效期90天。3.4.2標(biāo)準(zhǔn)中間液（ 20.0 g/mL）：吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.4.1） 5 mL 于 50 mL 容量瓶中，用甲醇-水溶液（ 50/50， v/v ）稀釋至刻度，搖勻，得到標(biāo)準(zhǔn)中間液，4 避光保存，有效期 60天。3.4.3標(biāo)準(zhǔn)系列工作液：吸取標(biāo)準(zhǔn)中間液（3.4.2） 0.25 mL 、 0.50 mL 、 1.25 mL 、 2.5 mL 、 5.0 mL 和12.5 mL 于 50 mL 容量瓶中， 用甲醇 -水溶液（ 50/50，v/v ）稀釋至刻度， 混勻，得到標(biāo)準(zhǔn)系列工作液。濃度分別為 0.10 g/mL、

4、 0.20 g/mL、 0.50 g/mL、 1.0 g/mL、 2.0 g/mL和 5.0 g/mL，4 避光保存，有效期 30天。4 儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測(cè)器。4.2電子天平：感量分別為1 mg 和 0.01 mg。4.3pH計(jì)：精確至 0.01。4.4渦旋振蕩器。4.5超聲波發(fā)生器。4.6高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于8000 r/min 。14.7濾膜：有機(jī)相，孔徑0.22 m。5 分析步驟5.1試樣制備稱取具代表性小麥粉或面粉處理劑樣品約200 g，混合均勻，貯存于潔凈廣口容器中，干燥避光保存?zhèn)溆谩?.2試樣處理準(zhǔn)確稱取試樣2 g（精確至0.001 g），置于 5

5、0 mL 具塞離心管中， 準(zhǔn)確加入10 mL 甲醇（），手動(dòng)振蕩20 次，渦旋 1 min ，超聲提取10 min ，在 4 下 8000 r/min 離心 5 min ，取離心后上清液5mL ，于 45 氮?dú)獯抵两?，甲?水溶液（ 50/50， v/v ）定容至1 mL ，渦旋混勻后過(guò)0.22m有機(jī)相微孔濾膜（4.7），棄去 25 滴初濾液，取續(xù)濾液作為待測(cè)試樣液。5.3液相色譜參考條件a）色譜柱： C18色譜柱（ 4.6 mm × 150 mm， 5 m）或性能相當(dāng)者。b）流動(dòng)相： A 為0.01%的磷酸溶液（3.2.1）， B為甲醇（ 3.1.1），梯度洗脫程序見(jiàn)表 1。c）

6、流速： 1.0 mL/min 。d）檢測(cè)波長(zhǎng)： 228 nm。e）柱溫： 35 。f ）進(jìn)樣量： 20 L。苯甲羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖見(jiàn)附錄B 。表 1流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間（ min ）A （%）B （%）0.09282.092814.0505015.0505015.192820.092825.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作液（）分別注入高效液相色譜儀中，測(cè)定相應(yīng)的峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.5 試樣溶液的測(cè)定將待測(cè)試樣液注入高效液相色譜儀中，得到苯甲羥肟酸的峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到試樣液中苯甲羥肟酸的濃度。試樣液中苯甲羥肟酸的濃度應(yīng)

7、在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi)，超出線性范圍應(yīng)稀釋試樣液后重新進(jìn)行分析。5.6 定性測(cè)定試樣液和濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液同時(shí)進(jìn)樣分析，試樣液中被測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi)，則可初步認(rèn)定試樣中存在苯甲羥肟酸，需按附錄C 方法進(jìn)行確證。5.7 空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按試樣同法操作。6 分析結(jié)果的表述試樣中被測(cè)組分的含量按式（1）計(jì)算： （ 1）式中：X 試樣中苯甲羥肟酸的含量，單位為毫克每千克（mg/kg ）；c 由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到的待測(cè)試樣液中苯甲羥肟酸的濃度，單位為微克每毫升（ g/mL）；V1 試樣提取液體積，單位為毫升（mL ）；V3 試樣經(jīng)提取濃縮后的最終

8、定容體積，單位為毫升（mL ）；V2 用于濃縮分取的試樣提取液體積，單位為毫升（mL）；m 試樣質(zhì)量，單位為克（g）；1000 單位換算系數(shù)。3計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。8 準(zhǔn)確度本方法在0.3 mg/kg 3.0 mg/kg 添加濃度范圍內(nèi)，苯甲羥肟酸的回收率在70%110% 之間。9 方法檢出限和定量限當(dāng)取樣量為2 g，提取溶液體積為10 mL ，并濃縮5 倍時(shí)，本方法中苯甲羥肟酸的檢出限為0.1mg/kg ，定量限為0.3 mg/kg 。4附錄 A苯甲羥肟酸相關(guān)信息表 A.1苯甲羥肟酸名稱、CAS 號(hào)、分

9、子式、相對(duì)分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式名稱CAS 號(hào)分子式分子量結(jié)構(gòu)式苯甲羥肟酸495-18-1C H7NO2137.147Benzohydroxamic acid5附錄 B苯甲羥肟酸高效液相色譜圖及紫外吸收光譜圖苯甲羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 g/mL）的液相色譜圖見(jiàn)圖B.1。苯甲羥肟酸圖 B.1苯甲羥肟酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.0 g/mL ）的高效液相色譜圖6附錄 C苯甲羥肟酸液相色譜-質(zhì)譜 /質(zhì)譜確證試驗(yàn)C.1液相色譜參考條件a）色譜柱： C18色譜柱（ 2.1 mm × 50 mm， 1.7 m）或性能相當(dāng)者。b）流動(dòng)相： A 為5 mmol/L 甲酸銨溶液（）， B為甲醇（），梯度洗脫程序見(jiàn)表C.

10、1。c）流速： 0.3 mL/min 。d）柱溫： 35 。e）進(jìn)樣量： 5 L。表 C.1流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間（ min ）A（%）B（ %）09285.020805.19287.0928C.2質(zhì)譜參考條件a) 離子源：電噴霧離子源（ ESI源）。b) 檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（ MRM ）。c) 掃描方式：負(fù)離子模式掃描。d) 電噴霧電壓： -2.5 KV 。e) 脫溶劑溫度： 500 。f)干燥氣（氮?dú)猓┝魉伲?00 L/h 。g) 碰撞氣（氬氣）流速：0.12 mL/min 。h）定性離子對(duì)，定量離子對(duì)，錐孔電壓和碰撞能量見(jiàn)表C.2。表 C.2苯甲羥肟酸質(zhì)譜參數(shù)7化合物名稱離子對(duì)（ m/

11、z）錐孔電壓（ V ）碰撞能量（ V）苯甲羥肟酸136/58*3512136/923514注： * 代表定量離子對(duì)。附錄C所列儀器條件僅供參考，采用不同質(zhì)譜儀器時(shí)，儀器參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。C.3定性判定按照 C.1 和 C.2 的條件測(cè)定試樣液和標(biāo)準(zhǔn)溶液。試樣液和濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液同時(shí)進(jìn)樣分析，試樣液中被測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi)；且試樣液中被測(cè)組分定性離子的相對(duì)豐度與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的定性離子的相對(duì)豐度進(jìn)行比較，偏差不超過(guò)表C.3 規(guī)定的范圍，則可判定為試樣液中存在苯甲羥肟酸。表 C.3定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（ %）>50>2050>102010允許的相對(duì)偏差（ %）±20±25±30±50苯甲羥肟酸的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM ）離子色譜圖見(jiàn)圖 C.1 。圖C