小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測定(BJS2020)

1、附件 2小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測定BJS 2020021 范圍本方法規(guī)定了小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的高效液相色譜測定方法。本方法適用于小麥粉及其面粉處理劑中苯甲羥肟酸的測定。2 原理試樣中的苯甲羥肟酸用甲醇提取，采用高效液相色譜測定，外標法定量。試樣中檢出苯甲羥肟酸后采用液相色譜-質(zhì)譜 /質(zhì)譜法進行確證。3 試劑和材料除非另有說明，本方法所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682 規(guī)定的一級水。3.1試劑3.1.1甲醇（ CH OH）：色譜純。33.1.2磷酸（ H PO）。343.1.3甲酸銨 （ HCOONH）：色譜純。43.2試液配制3.2.1磷酸溶液（ 0.01%）

2、：準確量取 1000 mL 水，加入 100 L磷酸（ 3.1.2）得到 pH 在 2.9 ±0.1之間的磷酸溶液。甲酸銨溶液（ 5 mmol/L ）：稱取甲酸銨0.26 g（）（精確至 0.001 g），加水溶解并定容至1000 mL 。3.3標準品苯甲羥肟酸：純度不低于98%的標準品或經(jīng)國家認證并發(fā)布的有證標準物質(zhì)。其中文名稱、英文名稱、 CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式見附錄A 。3.4標準溶液配制3.4.1標準儲備液：準確稱取苯甲羥肟酸標準品10 mg（精確至 0.01 mg），置于 50 mL 容量瓶中，加甲醇 -水溶液（ 50/50， v/v ）溶解并稀釋至刻度，搖

3、勻，得到濃度為200 g/mL的標準儲備液， 4 避光保存，有效期90天。3.4.2標準中間液（ 20.0 g/mL）：吸取標準儲備液（3.4.1） 5 mL 于 50 mL 容量瓶中，用甲醇-水溶液（ 50/50， v/v ）稀釋至刻度，搖勻，得到標準中間液，4 避光保存，有效期 60天。3.4.3標準系列工作液：吸取標準中間液（3.4.2） 0.25 mL 、 0.50 mL 、 1.25 mL 、 2.5 mL 、 5.0 mL 和12.5 mL 于 50 mL 容量瓶中， 用甲醇 -水溶液（ 50/50，v/v ）稀釋至刻度， 混勻，得到標準系列工作液。濃度分別為 0.10 g/mL、

4、 0.20 g/mL、 0.50 g/mL、 1.0 g/mL、 2.0 g/mL和 5.0 g/mL，4 避光保存，有效期 30天。4 儀器和設備4.1高效液相色譜儀：配有二極管陣列檢測器。4.2電子天平：感量分別為1 mg 和 0.01 mg。4.3pH計：精確至 0.01。4.4渦旋振蕩器。4.5超聲波發(fā)生器。4.6高速離心機：轉(zhuǎn)速不低于8000 r/min 。14.7濾膜：有機相，孔徑0.22 m。5 分析步驟5.1試樣制備稱取具代表性小麥粉或面粉處理劑樣品約200 g，混合均勻，貯存于潔凈廣口容器中，干燥避光保存?zhèn)溆谩?.2試樣處理準確稱取試樣2 g（精確至0.001 g），置于 5

5、0 mL 具塞離心管中， 準確加入10 mL 甲醇（），手動振蕩20 次，渦旋 1 min ，超聲提取10 min ，在 4 下 8000 r/min 離心 5 min ，取離心后上清液5mL ，于 45 氮氣吹至近干，甲醇-水溶液（ 50/50， v/v ）定容至1 mL ，渦旋混勻后過0.22m有機相微孔濾膜（4.7），棄去 25 滴初濾液，取續(xù)濾液作為待測試樣液。5.3液相色譜參考條件a）色譜柱： C18色譜柱（ 4.6 mm × 150 mm， 5 m）或性能相當者。b）流動相： A 為0.01%的磷酸溶液（3.2.1）， B為甲醇（ 3.1.1），梯度洗脫程序見表 1。c）

6、流速： 1.0 mL/min 。d）檢測波長： 228 nm。e）柱溫： 35 。f ）進樣量： 20 L。苯甲羥肟酸標準溶液的液相色譜圖見附錄B 。表 1流動相梯度洗脫程序時間（ min ）A （%）B （%）0.09282.092814.0505015.0505015.192820.092825.4 標準曲線的制作將標準系列工作液（）分別注入高效液相色譜儀中，測定相應的峰面積，以標準系列工作液的濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。5.5 試樣溶液的測定將待測試樣液注入高效液相色譜儀中，得到苯甲羥肟酸的峰面積，根據(jù)標準曲線計算得到試樣液中苯甲羥肟酸的濃度。試樣液中苯甲羥肟酸的濃度應

7、在標準曲線線性范圍內(nèi)，超出線性范圍應稀釋試樣液后重新進行分析。5.6 定性測定試樣液和濃度接近的標準溶液同時進樣分析，試樣液中被測物質(zhì)的保留時間與標準溶液中對應的保留時間偏差在±2.5%之內(nèi)，則可初步認定試樣中存在苯甲羥肟酸，需按附錄C 方法進行確證。5.7 空白試驗除不加試樣外，均按試樣同法操作。6 分析結(jié)果的表述試樣中被測組分的含量按式（1）計算： （ 1）式中：X 試樣中苯甲羥肟酸的含量，單位為毫克每千克（mg/kg ）；c 由標準曲線計算得到的待測試樣液中苯甲羥肟酸的濃度，單位為微克每毫升（ g/mL）；V1 試樣提取液體積，單位為毫升（mL ）；V3 試樣經(jīng)提取濃縮后的最終

8、定容體積，單位為毫升（mL ）；V2 用于濃縮分取的試樣提取液體積，單位為毫升（mL）；m 試樣質(zhì)量，單位為克（g）；1000 單位換算系數(shù)。3計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。7 精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8 準確度本方法在0.3 mg/kg 3.0 mg/kg 添加濃度范圍內(nèi)，苯甲羥肟酸的回收率在70%110% 之間。9 方法檢出限和定量限當取樣量為2 g，提取溶液體積為10 mL ，并濃縮5 倍時，本方法中苯甲羥肟酸的檢出限為0.1mg/kg ，定量限為0.3 mg/kg 。4附錄 A苯甲羥肟酸相關(guān)信息表 A.1苯甲羥肟酸名稱、CAS 號、分

9、子式、相對分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式名稱CAS 號分子式分子量結(jié)構(gòu)式苯甲羥肟酸495-18-1C H7NO2137.147Benzohydroxamic acid5附錄 B苯甲羥肟酸高效液相色譜圖及紫外吸收光譜圖苯甲羥肟酸標準溶液（1.0 g/mL）的液相色譜圖見圖B.1。苯甲羥肟酸圖 B.1苯甲羥肟酸標準溶液（1.0 g/mL ）的高效液相色譜圖6附錄 C苯甲羥肟酸液相色譜-質(zhì)譜 /質(zhì)譜確證試驗C.1液相色譜參考條件a）色譜柱： C18色譜柱（ 2.1 mm × 50 mm， 1.7 m）或性能相當者。b）流動相： A 為5 mmol/L 甲酸銨溶液（）， B為甲醇（），梯度洗脫程序見表C.

10、1。c）流速： 0.3 mL/min 。d）柱溫： 35 。e）進樣量： 5 L。表 C.1流動相梯度洗脫程序時間（ min ）A（%）B（ %）09285.020805.19287.0928C.2質(zhì)譜參考條件a) 離子源：電噴霧離子源（ ESI源）。b) 檢測方式：多反應監(jiān)測（ MRM ）。c) 掃描方式：負離子模式掃描。d) 電噴霧電壓： -2.5 KV 。e) 脫溶劑溫度： 500 。f)干燥氣（氮氣）流速：700 L/h 。g) 碰撞氣（氬氣）流速：0.12 mL/min 。h）定性離子對，定量離子對，錐孔電壓和碰撞能量見表C.2。表 C.2苯甲羥肟酸質(zhì)譜參數(shù)7化合物名稱離子對（ m/

11、z）錐孔電壓（ V ）碰撞能量（ V）苯甲羥肟酸136/58*3512136/923514注： * 代表定量離子對。附錄C所列儀器條件僅供參考，采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。C.3定性判定按照 C.1 和 C.2 的條件測定試樣液和標準溶液。試樣液和濃度接近的標準溶液同時進樣分析，試樣液中被測物質(zhì)的保留時間與標準溶液中對應的保留時間偏差在±2.5%之內(nèi)；且試樣液中被測組分定性離子的相對豐度與濃度接近的標準溶液中對應的定性離子的相對豐度進行比較，偏差不超過表C.3 規(guī)定的范圍，則可判定為試樣液中存在苯甲羥肟酸。表 C.3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（ %）>50>2050>102010允許的相對偏差（ %）±20±25±30±50苯甲羥肟酸的多反應監(jiān)測（MRM ）離子色譜圖見圖 C.1 。圖C