SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)分子量_第1頁
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1、1會計學(xué)SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)聚丙烯酰胺凝膠電泳法測定蛋白質(zhì)分子量分子量-SDS的性質(zhì)與作用的性質(zhì)與作用u 蛋白質(zhì)變性 0.1-1% SDS 0.1 M 2-巰基乙醇u蛋白質(zhì)變與SDS分子按比例結(jié)合 1 ：1.4SDSSDS的性質(zhì)與作用的性質(zhì)與作用聚丙烯酰胺凝膠性質(zhì)XYZ+ SDSPAGESDS-PAGEXYZ-+-結(jié)果受分子量大小和電荷的影響結(jié)果受分子量大小和電荷的影響結(jié)果只與分子量大小有關(guān)結(jié)果只與分子量大小有關(guān)-+PAGE和SDS-PAGE的比較配制分離膠溶液v制備分離膠制備分離膠凝膠配制過程要迅速, 催化劑TEMED要在注膠前再加入。注膠過程要一次性完成,避免產(chǎn)生氣泡。出現(xiàn)

2、明顯界面時，出現(xiàn)明顯界面時，分離膠凝聚完成分離膠凝聚完成（ minh）倒出水或正丁醇，倒出水或正丁醇，并用濾紙吸干并用濾紙吸干v制備分離膠制備分離膠封水的目的是使分離膠上表面平直，并排除氣泡。凝膠聚合好的標志是膠與水層之間形成清晰的界面。配制濃縮膠溶液v制備濃縮膠制備濃縮膠加入濃縮膠溶加入濃縮膠溶液液 pH 8.6v制備濃縮膠制備濃縮膠樣梳需一次平穩(wěn)插入樣梳需一次平穩(wěn)插入,梳梳口處不得有氣泡口處不得有氣泡,梳底需梳底需水平。水平。插入樣品梳插入樣品梳v上樣及電泳上樣及電泳= 蛋白樣品距加樣端遷移距離（cm）溴酚藍區(qū)帶中心距加樣端距離（cm） 相對遷移率 以每個蛋白標準的分子量對數(shù)對它的相對遷移率作圖得標準曲線，量出未知蛋白的遷移率即可測出其分于量。 u 蛋白質(zhì)變性 0.1-1% SDS 0.1 M 2-巰基乙醇u蛋白質(zhì)變與

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