丹參多酚酸鹽協(xié)同纈沙坦治療高血壓腎病的臨床研究-病理學(xué)與病理生理學(xué)專業(yè)畢業(yè)論文.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)及知識產(chǎn)權(quán)歸屬承諾本學(xué)位論文在導(dǎo)師（或指導(dǎo)小組）的指導(dǎo)下，由本人獨立完成。 本學(xué)位論文研究所獲得的研究成果，其知識產(chǎn)權(quán)歸河北醫(yī)科大學(xué)所 有。河北醫(yī)科大學(xué)有權(quán)對本學(xué)位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表 與學(xué)位論文主要內(nèi)容相關(guān)的論文，第一署名為單位河北醫(yī)科大學(xué)，試 驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產(chǎn)權(quán)均歸河北醫(yī)科大學(xué)所有。 否則，承擔(dān)相應(yīng)法律責(zé)任。研究生簽名:步初犍師簽章：說g卑二級學(xué)院領(lǐng)導(dǎo)蓋章卜蕓y河北醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明導(dǎo)師簽章:本論文是在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果，除了 文中特別加以標(biāo)注和致謝等內(nèi)容外，文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰 寫的研

2、究成果，指導(dǎo)教師對此進行了審定。本論文由本人獨立撰寫， 文責(zé)自負(fù)。研究生簽名:中文摘要1英文摘要 5英文縮寫10研究論文丹參多酚酸鹽協(xié)同頌沙坦治療高血壓腎病的臨床研究前言11材料與方法12結(jié)果16附圖19附表26討論29結(jié)論33參考文獻(xiàn)34綜述高血壓腎病的研究進展38致謝55個人簡歷56丹參多酚酸鹽協(xié)同綣沙坦治療高血壓腎病的臨床研究目的：高血壓腎病(hypertensive nephropathy, hp)是原發(fā)性高血壓 病的并發(fā)癥之一，早期表現(xiàn)為微量白蛋白尿，逐漸出現(xiàn)血肌酹、尿素氮升 高，同時伴有多尿、夜尿、蛋白尿和水腫等表現(xiàn)，最終可進展為尿毒癥。國外數(shù)據(jù)表明，高血壓是慢性腎功能衰竭的第二位

3、病因，而在國內(nèi)，高血 壓是繼慢性腎小球腎炎和糖尿病腎病之后，終末期腎臟疾病的第三位病 因。許多基礎(chǔ)和臨床研究發(fā)現(xiàn)，高血壓腎病后期，盡管血壓得以控制，但 是腎臟損害仍會繼續(xù)發(fā)展。因此，降壓的同時，如何控制腎臟損害的發(fā)展 成為當(dāng)務(wù)之急。高血壓引起的局部或全身性炎癥介質(zhì)釋放和氧化應(yīng)激造成的腎血管 內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，在hp的發(fā)生過程中扮演著至關(guān)重要的角色。內(nèi)皮素是 目前發(fā)現(xiàn)的最強內(nèi)源性縮血管多肽之一，內(nèi)皮素與相應(yīng)受體結(jié)合，增加腎 小球毛細(xì)血管壓，導(dǎo)致尿蛋白漏岀增加。而降鈣素基因相關(guān)肽與內(nèi)皮素 (corp)具有拮抗作用，其通過與腎臟血管床降鈣素基因相關(guān)肽受體結(jié) 合，引起腎臟血管的舒張，增加腎小球濾過面積，

4、對腎臟血管有強大的保 護作用。研究發(fā)現(xiàn)，還原型煙酸胺腺卩票吟二核昔酸磷(nadph)氧化酶 是活性氧(ros)產(chǎn)生的主要來源，在感染、應(yīng)激和高糖等病理狀態(tài)下,nadph氧化酶被激活、催化產(chǎn)生大量ros,參與氧化應(yīng)激，影響腎臟血流動力學(xué)和腎小球濾過率。丹參多酚酸鹽是中藥丹參的水溶性提取物，研 究表明，它能夠通過抑制炎癥介質(zhì)釋放和氧化應(yīng)激對腎臟和心臟提供保 護。但對于hp的保護機制研究甚少，因此我們假設(shè)丹參多酚酸鹽能夠通 過抑制nadph氧化酶源性ros的產(chǎn)生改善hp患者腎臟功能。本研究配對測定同一 hp患者丹參多酚酸鹽聯(lián)合緘沙坦治療2周前后 血壓、血清肌酹、尿素氮、血清胱抑素c、血卩2微球蛋白，

5、24h尿蛋白和 尿微量白蛋白；elisa方法測定血清內(nèi)皮素1 (et-1)、降鈣素基因相關(guān)肽(cgrp)及測定血清中氧化應(yīng)激過程中的代表因子：nadph氧化酶(nicotinamide vadenine dinucleotide phosphate oxidase, nox)、活性氧、蛋白質(zhì)按基、丙二醛(mda),并與單純應(yīng)用緞沙坦治療的患者進行對比, 旨在觀察聯(lián)合治療對hp患者腎功能的保護作用。探討丹參多酚酸鹽 改善hp的作用機制，為hp的合理用藥，改善預(yù)后，提供臨床研究依據(jù)。方法：1病例篩選及分組收集河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科2013年1月至2014年7月收 治的hp患者90例，參照葉

6、任高腎臟病診斷與治療學(xué)提出的高血壓腎 病診斷標(biāo)準(zhǔn)。將病例隨機分為對照組和聯(lián)合治療組，每組45例。對照組: 口服纏沙坦80mg/s；丹參多酚酸鹽治療組(以下稱聯(lián)合治療組)：口服纏 沙坦80mg/日+靜脈給予丹參多酚酸鹽注射液100mg, 1次/日；健康對照 組45例。兩組分別于給藥前及給藥2周后測定血壓并留取血清及24小時 尿上清進行下列指標(biāo)的測定。健康對照組45例在同一時間測定相同指標(biāo)。2收縮壓及舒張壓的測定。3測定血清肌酹、尿素氮、血清胱抑素c、血|32微球蛋白。4 24h尿蛋白和尿微量白蛋白。5 elisa方法測定血清內(nèi)皮素l(et-l)和降鈣素基因相關(guān)肽(cgrp)。6依試劑盒說明書測定

7、血清：nox、ros、蛋白質(zhì)撥基和mda。7統(tǒng)計學(xué)處理：所有數(shù)據(jù)采用spss 17.0統(tǒng)計軟件包行統(tǒng)計學(xué)處理,計量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(壬士s)表示。多組間比較用單因素方差分析, 多重比較釆用最小顯著差異法。pv0.05為差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：1血壓的變化聯(lián)合治療組患者治療前收縮壓和舒張壓分別為160.22±8.00和 97.89±3.74mmhg,治療后分別為 136.71 ±6.22 和 83.38±5.19 mmhg,兩者 治療后血壓均明顯減低(pv0.01);且比對照組治療后的降壓作用更明顯(p<0.01)o2血生化指標(biāo)的變化聯(lián)合治療組

8、明顯降低血肌酹水平(治療前192.75±31.01 umol/l,治療 后130.37±26.13 umol/l , p<0.01)。且效果更優(yōu)于對照組的治療 (146.51 ±28.48 umol/l, p<0.01)o 血清尿素氮治療前 11.17±3.40 mmol/l, 治療后7.50±2.11 mmol/l,顯著降低(p<0.01),但與對照組治療后比較 (8.36±2.83 mmol/l)無顯著差異。聯(lián)合治療組血清卩2微球蛋白治療前 752±224mg/l,治療后4.76±152 mg

9、/l,顯著降低(p<0.01),但與對照組 治療后比較(4.99±1.81mg/l)無顯著差異。聯(lián)合治療組血清胱抑素c治 療前222±055mg/l,治療后1.48±052 mg/l,顯著降低(p<0.01),但與對 照組治療后比較(1.52±048mg/l)無顯著差異。3尿蛋白的變化聯(lián)合治療組24小時尿蛋白治療前149573±31734mg/d,治療后明顯 降低(50087±204.05 mg/d, p <0.01)o 與對照組治療后 795.04±282.68 mg/d 相比，有顯著性差異(p<0

10、.01)o尿微量白蛋白治療前9936±19.48mg/l, 治療后顯著降低( 30.30±914mg/l, p<0.01)o與對照組治療后的 54.39±14.58 mg/l 相比，也顯著降低(pvo.ol)。4 et-1和cgrp的變化hp患者et-1含量顯著高于正常組。聯(lián)合治療組治療后其水平明顯降低(105.32±4&57ng/l, 3898±11.94 ng/l) (p<0.01)；且與對照組治療后 62.18±22.77 ng/l相比，有顯著性差異(p <0.0l)o hp患者cgrp含量顯著 低于正

11、常組。聯(lián)合治療組治療后其水平有效升高(48.79i 10.72 ng/l, 8662±2683ng/l) (p<0.01)；且與對照組治療后 68.4u15.38 ng/l 相比, 有顯著性差異(pv0.01)。氧化應(yīng)激指標(biāo)的變化聯(lián)合治療組患者血nox活性，治療前3.12±0.99 u/l,治療后明顯降 低(1.57±0.78u/l, p<0.01)o比對照組(2.69±1.07 u/l)的降低作用更明 顯(pv0.05),有顯著性差異。ros 含量治療前 168.42± 14.97 intensity/l, 治療后139.15&#

12、177;20.07 intensity/l,有顯著性差異(p <0.01 )o與對照組治療 后150.19±21.49 intensity/l相比，有顯著性差異(p<0.01)o聯(lián)合治療組治 療后蛋白質(zhì)撥基含量明顯降低。治療前2.8h0.27 nmol/mg*prot,治療后 176±0.41 nmol/mg*prot , (p <0.01)。且與對照組治療后 2.09±0.32 nmol/mg*prot相比，有顯著性差異(p<0.01)o聯(lián)合治療組mda水平治療 前 1.85±0.15nmol/mgpi*ot,治療后 1.15&

13、#177;0.38nmol/mgeprot,有顯著性差異 (p <0.01 )o且與對照組治療后1.32±036 nmol/mg-prot相比，有顯著性差 異 pv0.01)。結(jié)論：1 hp患者治療前血清nadph氧化酶、活性氧(ros)、蛋白質(zhì)撥基、 丙二醛（mda）均顯著高于健康對照組。說明hp患者存在明顯的氧化 應(yīng)激。2兩組治療后均有效降低hp患者血壓，改善腎功能，同時血清et-1 和氧化應(yīng)激多個指標(biāo)明顯降低，而cgrp顯著升高，但聯(lián)合治療組的上 述指標(biāo)的改善更為明顯。提示丹參多酚酸鹽對高血壓腎病的保護機制部分 是通過抑制nadph氧化酶源性ros的產(chǎn)生進而保護腎血管內(nèi)皮

14、細(xì)胞有 關(guān)。關(guān)鍵詞：高血壓腎病，丹參多酚酸鹽織沙坦聯(lián)合用藥，腎微血管內(nèi)皮細(xì) 胞，氧化應(yīng)激the protective effect on hypertensive nephropathy withcombination of salvianolate and valsartanabstractobjective: hypertensive nephropathy (hp) is one of the complications of primary hypertension- its early symptom is microalbuminuria, and the progress sta

15、ge gradually appear higher serum creatinine, blood urea nitrogen, polyuria, nocturia, proteinuria and edema. data show that hypertension is the second cause induceingchronic renal failure abroad, while following diabetic nephropathy and chronic glomerulonephritis, is the third causes of end-stage re

16、nal disease in china. some studies found that although blood pressure can be controlled, but the kidney damage will continue to develop in the late atage of hypertensive nephropathy, along with the advancement in antihypertensive treatment, control the development of kidney damage also become a top

17、priority.damage of the microvascular endothelial cells caused by local or systemic inflammatory mediators release and oxidative stress plays a vital role in the process of the occurrence of hypertensive nephropathy. endothelin is one of the strongest endogenous shrink blood vessels polypeptide. endo

18、thelin increas the glomerular capillary pressure and urinary protein leakage when binds to its" receptors- while calcitonin gene-related peptide (cgrp) has an antagonistic effect by binding to renal vascular bed of calcitonin gene-related peptide receptor cgrp may cause renal vasodilatation, in

19、crease the glomerular filtration area. reduced nicotinic acid amine adenine dinucleotide phosphate (nadph) oxidase is the main source of reactive oxygen species (ros); in of nadph oxidase is activated to produce a large number of ros under the pathological state such as infection, stress and high-su

20、gar, involved in oxidative stress, affected the renal hemodynamics and glomerular filtration rate. salvianolate is a extract of salvia medicine- it can protect to the kidneys and heart by inhibiting release of the inflammatonrymedia and oxidative stress. however, the mechanism of protection for hp r

21、emains unknown. we therefore hypothesized that salvianolate can improve renal function in patients with hp by inhibiting the generation of nadph oxidase source ros.the study pairing determination of patients with hp who treated with combination of salvianolate and valsartan, blood pressure, serum cr

22、eatinine, blood urea nitrogen, serum cystatin c, serum p2-microglobulin, 24h urinary protein and urinary albumin; elisa method to detect serum endothelin-1 (et-1), calcitonin gene-related peptide (cgrp) and serum oxidative stress in the process on behalf of factors: nadph oxidase (nicotinamide vaden

23、ine dinucleotide phosphate oxidase, nox), reactive oxygen species, protein carbonyl, and malondialdehyde (mda). compared to the simple application with patients treated with valsartan: investigate the protective effect of combination therapy on renal function in patients with hp; investigate the mec

24、hanism of salvianolate improve hp's for hp rational drug use, improving outcomes, providing a new basis.methods:1 screening and grouping of cases:ninety patients with hp were collected at kidney internal medicine of the first affiliated hospital of hebei north university from january 2013 to jul

25、y 2014. diagnostic criteria of hypertensive nephropathy was based on "diagnosis and treatment of kidney disease study ninety patients were randomized into 2 groups. the control group of 45 patients use of valsartan 80mg/d orally ； combination of salvianolate and valsartan treatment group (combi

26、ned group) of 45 patients, in addition to the use of oral valsartan 80mg/d at the same time giving intravenous injection salvianolate 1 oomg/d. the healthy control group is 45 cases. the samples of the serum and urine/24hour were collected from three groups. all the samples of the hp patients were m

27、easured before administration of the following indicators and two weeks after administration;2 systolic pressure and diastolic pressure;3 serum creatinine, blood urea nitrogen, serum cystatin c, serum p2-microglobulin;4 24h proteinuria and microalbuminuria;5 elisa method to detect serum endothelin-1

28、 (et-1), calcitonin gene-related peptide (cgrp);6 nox, ros, protein carbonyls and mda;7 experimental data were expressed as mean 土 sd, and statistical analysis was performed using spss software 17.0. one-way anova was used between groups and student-newman-keuls (snk) test was used within groups. p&

29、lt; 0.05 was considered significantly differentresults:1 blood pressurethe combined group before treatment in patients with systolic and diastolic blood pressure were 160.22 土 8.00 and 97.89 土 3.74 mmhg, respectively after treatment was 136.71 士 6.22 and 83.38±5.19 mmhg, the blood pressure were

30、 significantly reduced after treatment (p < 0.01); and the antihypertensive effect is more obvious than the control group (p < 0.01).2 renal function and serum biochemical parametersthe level of serum creatinine in the combined group was significantly reduced (pre-treatment 192.75 土 31.01 umol

31、 / l, after treatment 130.37 士 26.13 umol / l, p <0.01); while the combined group is much better than the control group (146.51 土 2&48 umol / l, p<0.01). blood urea nitrogen levels in the combined group was siginificantly lower (pre-treatment 11.17 士 3.40 mmol/l, after treatment 7.50 ±

32、; 2.11 mmol/l, p <0.01); and compared to the control group after treatment (8.36±283 mmol/l), there was no significant difierence with two groups the level of serum 02- microglobulin in the combined group is significantly decreased (pre-treatment 7.52 士 2.24mg/l, after treatment 4.76 土 l52 m

33、g/l, p <0.01); however, compared to the control group after treatment (4.99 ± 1.81 mg/l), there was no significant difierence with two groups. serum cystatin c levels in the combined group was siginificantly lower (pre-treatment 2.22 士 0.55 mg/l, after treatment 1.48 土0.52 mg/l, p <0.01);

34、 but compared to the control group after treatment (1.52 土 0<48 mg/l), there was no significant difference with both group.3 proteinuriacombined therapy can significantly reduce 24h proteinuria (pretreatment 1495.73 土 317.34 mg/d, after treatment 500.87 ± 204.05 mg/d, p<0.01); and the com

35、binec group was more lower than the control group (795.04 ± 282.68 mg/d, p vo.01). combinec therapy can significantly reduce microalbuminuria (pre-treatment 99.36 土 19.48 mg/l, after treatment 30.30 土 9.14mg/ l, p <0.01); and the combination group was more siginificantly lower than the contr

36、ol group (54.39 ± 14.58 mg/ l, p <0.01).4 serume匸 1 and cgrpetl levels in patients with hypertensive nephropathy was significantly higher than the normal group; combined therapy can significantly reduce et-l (pre-treatment 105.32 土 4&57 ng/l, after treatment 38.98 士 11.94 ng/l, p <0.0

37、1); and the combination group is more lower than the control group (62.18 土 22.77 ng/l, p <0.01). cgrp levels in patients with hypertensive nephropathy was significantly lower than the normal group; combined therapy can significantly increace cgrp (pre-treatment 4&79 ± 10.72 ng/l, after

38、treatment 86.62±26.83ng/l, p <0.01); and the combined group was more higher than the control group (68.41±15.38 ng/l, p <0.01).5 reactive oxygen species (ros)the level of nox in the combined group was significantly reduced (pre-treatment 3.12 土 0.99 u/l, after treatment 1.57 士 0.78 u

39、/l, p <0.01); and the combined group was more lower than the control group (2.69 士 l07 u/l, p<0.05). combined therapy could significantly reduce ros (pre-treatment 168.42 士 14.97 intensity/l, after treatment 139.15 土 20.07 intensity/l, p <0.01); and the combination group is more lower than

40、the control group (150.19±21.49 intensity/l, p <0.01). protein carbonyls levels in the combined group is siginificantly reduced (pre-treatment 2.81 士 0.27 nmo"mgprot, after treatment 1.76 士 0.41 nmol/mg*prot, p <0.01); and the combined group was more lower than the control group (2-0

41、9 土 0.32 nmol/mgprot, p <0.01). combined therapy can significantly reduce mda (pre-treatment 1.85 土 0.15nmol/mg*prot> after treatment 1.15 土 0.38nmol/mg*prot, p<0.01); and the combined group was more lower than the control group (1.32 ± 0.36 nmol/mgeprot, p <0.01).conclusion:1 the p

42、atients with hypertensive nephropathy befbr treatment have significance increased levels of serum nadph oxidase, reactive oxygen species (ros), protein carbonyl, malondialdehyde (mda) than those with the healthy control group; these suggested that is the patients with hypertensive nephropathy have e

43、xisted obvious oxidative stress2 by contrast with before treatment, both therapys had been reduced blood pressure in patients with hypertensive nephropathy, improved renal function, and reduced serum et-1 and multiple indicators of oxidative stress significantly, while both therapys had been increas

44、ed significantly cgrplevel. in the combination therapy group, these parameters had been improved more apparent. these results showed that combination of salvianolate and valsartan has a significantly protective effect on hypertensive nephropathy, which may be related by inhibiting nadph oxidase-deri

45、ved ros generation and thus protection of renal microvascular endothelial cells.key words: hypertensive nephropathy, valsartan, combination of salvianolate and valsartan, renal microvascular endothelial cells, oxidative stress英文縮寫英文縮寫英文全稱中文全稱aceiangiotensin-converting血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制enzyme inhibitors劑arbs

46、angiotensin receptor blockers血管緊張素受體阻斷劑bpblood pressure血壓bunblood urea nitrogen血尿素氮ccbscalcium channel blockers鈣通道阻滯劑cgrpcalcitonin gene-related peptide降鈣素基因相關(guān)肽ckdchronic kidney disease慢性腎臟病cys ccystatin c胱抑素cesrdend stage of renal disease終末期腎病et-1endothelin-1內(nèi)皮素gfrglomerular filtration rate腎小球濾過濾ma

47、microalbuminuria微量白蛋白尿mapmean arterial pressure平均動脈壓mdamalondialdehyde丙二醛mdrdmodification of diet in renal disease study腎臟病飲食調(diào)節(jié)研究mrfitmultiple risk factor多重危險因素干預(yù)試驗nkfnational kidney foundation全國腎臟基金會noxnicotinamide vadenine dinuc leotide phosphate oxidasenadph氧化酶raasrenin-angiontensin-aldosteron腎素血

48、管緊張素醛固酮e system系統(tǒng)rosreactive oxygen species活性氧scrserum creatinine血肌酹snasympathetic nerve activity交感神經(jīng)活性丹參多酚酸鹽協(xié)同緞沙坦治療高血壓腎病的臨床研究原發(fā)性高血壓是我國尤其北方地區(qū)的常見病及多發(fā)病，長期高血壓 引發(fā)的靶器官損害是其死亡的主要病因，高血壓腎病(hypertensive nephropathyp)是原發(fā)性高血壓的重要并發(fā)癥，也是引起終末期腎病(end stage of renal disease, esrd)的常見病因之一。1999年的統(tǒng)計資料表明， 我國高血壓腎病占esrd的9.

49、6%,僅次于原發(fā)性腎小球腎炎及糖尿病腎高血壓是腎臟損害的重要獨立危險因素，可顯著增加腎臟疾病的發(fā)病 率以及腎功能衰竭的發(fā)生率和致死率。而腎臟損害又加重高血壓.從而形 成惡性循環(huán)。以往認(rèn)為，高血壓的長期發(fā)展大多導(dǎo)致心、腦并發(fā)癥，而腎 臟并發(fā)癥的出現(xiàn)相當(dāng)緩慢。但近年研究表明，高血壓初期即發(fā)生腎小動脈 痙攣，隨后出現(xiàn)慢性缺血缺氧。腎小管上皮細(xì)胞的高水平的氧耗使得腎臟 對缺氧非常敏感。傳統(tǒng)研究表明，發(fā)生高血壓腎病的關(guān)鍵因素包括：交感 神經(jīng)的高活性狀態(tài)、腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)(raas)激活、血管 硬化、鈉水潴留以及基因易感。由于多因素、多環(huán)節(jié)參與腎病發(fā)生發(fā)展, 彼此間的相互影響，機理十分復(fù)雜，必須探

50、討作用于多層面的聯(lián)合用藥方 案。因此除了公認(rèn)的抗raas活性和降低尿蛋白水平為基礎(chǔ)的聯(lián)合治療 方案外，我們還需要尋找新的途徑治療高血壓引起的腎臟損傷。緘沙坦作為一種angll受體(ati型)拮抗劑備受推崇，它選擇性、 競爭性與ati受體結(jié)合，從而阻斷angll介導(dǎo)的生物學(xué)功能，抑制其收 縮腎臟血管的作用，明顯減輕腎小球內(nèi)血管高壓力，改善腎組織的血流動 力學(xué)指標(biāo)，降低腎小球血管基底膜的通透性，改善血管內(nèi)皮細(xì)胞的生理學(xué) 功能。最新的研究發(fā)現(xiàn)，高血壓引起的局部或全身性的炎癥介質(zhì)釋放和 氧化應(yīng)激造成的腎血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷在高血壓腎病的發(fā)生過程中扮演著 至關(guān)重要的角色。丹參多酚酸鹽是中藥丹參的水溶性提取物

51、，主要成分 為丹參乙酸鎂，此外，還包括紫草酸鎂、紫草酸鉀、丹參素鉀、迷迭香酸 鈉、異丹參乙酸二鉀等。大量研究表明，丹參多酚酸鹽能夠通過抑 制炎癥介質(zhì)釋放和氧化應(yīng)激的方式對血管內(nèi)皮細(xì)胞提供保護。但針對高血 壓腎病的研究較少。因此，本研究對高血壓腎病患者常規(guī)應(yīng)用血管緊張素 受體拮抗劑緘沙坦降壓的同時聯(lián)合丹參多酚酸鹽，觀察其對hp的腎臟保 護效果。并對丹參多酚酸鹽保護高血壓腎病進程的作用機制進行探討。材料與方法1材料1.1研究對象收集河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科2013年1月至2014年7月收 治的hp患者90例，隨機分為對照組和聯(lián)合治療組，每組45例。1.1.1病例組的納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)納入標(biāo)準(zhǔn)

52、：根據(jù)葉任高腎臟病診斷與治療學(xué)提出的高血壓腎病診 斷標(biāo)準(zhǔn)卩習(xí)必需條件：為原發(fā)性高血壓；出現(xiàn)蛋白尿前一般已有5年以 上的持續(xù)性高血壓；有持續(xù)性蛋白尿（一般為輕、中度），鏡檢有形成 分少；有視網(wǎng)膜動脈硬化或動脈硬化性視網(wǎng)膜改變。本組納入患者的其他資料:有髙血壓性左室肥厚、冠心病、心力 衰竭；有腦動脈硬化或腦血管意外病史；血尿酸升高；腎小管功能 損害先于腎小球功能損害；病程進展緩慢。排除標(biāo)準(zhǔn)：繼發(fā)性高血壓；合并有糖尿?。缓喜⒛X、肝、造血 系統(tǒng)等嚴(yán)重原發(fā)疾病；正在或3個月內(nèi)服用過影響測定結(jié)果的藥物； 精神病患者；妊娠或哺乳期婦女；過敏體質(zhì)或?qū)Χ喾N藥物過敏者； 原發(fā)性腎小球疾??；其他原因引起的腎臟損害。

53、1.1.2健康對照組健康對照組為我院體檢健康者45例，入選者在年齡結(jié)構(gòu)、性別組成 與兩組患者一般狀況等方面比較無顯著性差異（p>0.05）,資料具有可比 性。所有入選患者和健康對照組均簽署知情同意書。治療期間患者停用其 他影響血壓的藥物。1.2給藥方法聯(lián)合治療組45例（丹參多酚酸鹽聯(lián)合緘沙坦組），口服緘沙坦80mg, 每日一次,聯(lián)合靜脈輸注丹參多酚酸鹽注射液100mg,每日一次；對照組45例(繩沙坦組)，僅口服繩沙坦80mg,每日一次。兩組均給藥2周, 測量血壓并留取血尿標(biāo)本進行相關(guān)指標(biāo)測定。13實驗儀器與試劑1.3.1主要儀器全自動生化分析儀 動態(tài)血壓監(jiān)測儀 低溫離心機 86°

54、;c低溫冰箱 20°c普通冰箱 電熱恒溫水槽'各種規(guī)格微量移液器 電子天平(o.olmg) 電子天平(lmg)恒溫磁力攪拌器 紫外分光光度計 漩渦混勻器 全自動酶標(biāo)儀 722分光光度計1.3.2主要材料及試劑 丹參多酚酸鹽注射液 繳沙坦內(nèi)皮素1 elisa檢測 試劑盒降鈣素基因相關(guān)肽 (cgrp)檢測試劑盒 活性氧(ros)含量檢 測試劑盒 蛋白質(zhì)鎌基含量檢測 試劑盒丙二醛(mda)含量檢日本日立 7600-110美國迪姆有限公司dms-abp型 美國熱電labofuge 400r型 美國熱電702型青島海爾bcd-213ka型上海精宏實驗設(shè)備有限公司dk-8ab型 德國ep

55、pendorf公司德國賽多利斯股份公司le225d型 上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司ja31o3 型常州金城教學(xué)儀器廠hj-3型日本日立u-3900德國eppendorf公司 美國分子設(shè)備公司spectramaxm3型 上海光學(xué)儀器進出口有限公司上海綠谷制藥有限公司商品名代文，北京諾華制藥有限公司 上海聯(lián)碩生物科技有限公司上海聯(lián)碩生物科技有限公司南京建成生物工程研究所南京建成生物工程研究所南京建成生物工程研究所測試劑盒石家莊制藥注射用生理鹽水2測定指標(biāo)和方法2.1血壓動態(tài)血壓監(jiān)測儀監(jiān)測收縮壓及舒張壓的變化。（上午8點，患者安靜 臥床狀態(tài)下，測量二次取平均血壓）2.2血尿樣本的采集兩組患者分別于治

56、療前一天和治療后2周，早晨空腹采取靜脈血 2-3ml,健康對照組45例空腹采取靜脈血2-3ml,不加抗凝劑，30min內(nèi) 進行離心（1000轉(zhuǎn)/分鐘，5分鐘），留取血清儲存至20°c冰箱備用。兩 組患者分別于治療前一天和治療后2周留取24小時尿，離心后取上清儲 存至20°c冰箱備用。同一參數(shù)病例組和健康對照組血清和尿上清標(biāo)本集 中測定。2.3血肌酹、尿素氮、血清胱抑素c、血02微球蛋白釆用全自動生化分析 儀檢測。2.4 24h尿蛋白定量、尿微量白蛋白：用全自動生化分析儀檢測。2.5 elisa方法測定：血漿內(nèi)皮素1 （et1）、降鈣素基因相關(guān)肽（cgrp）。2.6 nadp

57、h 氧化酶（nicotinamide vadenine dinucleotide phosphate oxidase,nox）測定：（比色法）分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相 同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50m，待測 樣品孔中先加樣品稀釋液40m，然后再加待測樣品10卩1 （樣品最終稀釋 度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動 混勻。用封板膜封板后置37°c溫育30分鐘。小心揭掉封板膜，棄去液體, 甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。每孔 加入酶標(biāo)試劑50卩1,空白孔除外。溫育（操作

58、同3）。洗滌。每孔先加入 顯色劑a50m，再加入顯色劑b50m，輕輕震蕩混勻,37°c避光顯色15 min。 每孔加終止液50卩1,終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。以空白孔調(diào)零,450nn） 波長依序測量各孔的吸光度（od值）。測定應(yīng)在加終止液后15 min以內(nèi)完成。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算nadph氧化酶活性。2.7活性氧（ros）含量檢測：（化學(xué)熒光法）樣本分別設(shè)測定管和對照管各加10)11待測樣品，加200|xl 1 oommo 1/lpbs稀釋，測定管加入1011 dcfh-da工作液，對照管加入10gl pbs。 混勻，37°c準(zhǔn)確水浴30mino激發(fā)波長490

59、,發(fā)射波長525檢測熒光強度。 2.8蛋白質(zhì)撥基含量檢測：(比色法)樣本分別設(shè)測定管和對照管各加100卩1待測樣品，測定管加400皿試 劑三，對照管加400山試劑四，混旋lmin, 37°c避光反應(yīng)30min。各加試 劑五500卩1,渦旋混勻lmin, 4°c 12000轉(zhuǎn)/min離心10min,棄上清，留 沉淀。加無水乙醇乙酸乙酯混合液looojil,渦旋混勻lmin, 4°c 12000轉(zhuǎn) /min離心10min,棄上清，留沉淀，重復(fù)4次。加試劑六12501,混勻， 37°c準(zhǔn)確水浴15mino渦旋混勻，將全部沉淀溶解，12000轉(zhuǎn)/min離心 15

60、min,取上清370nm處，5cm光徑石英比色皿測定od值。試劑六調(diào)零。蛋白質(zhì)按基含量=測定od值-對照od值x 1巧x 10'(nmolingprot) 22x比色光徑(cm)x樣本蛋白濃度(mgprol l) °2.9丙二醛(mda)含量檢測：(硫代巴比妥酸法)樣本分別設(shè)測定管和對照管各加100卩1待測樣品，然后，加入試劑一 100皿，混勻，加入試劑二3ml,測定管加試劑三lml,對照管加50%冰醋 酸lmlo漩渦混懸器混勻，置沸水中煮40min,流水迅速冷卻，4000轉(zhuǎn)/min 離心10min,吸取上清液，1cm比色杯，532nm比色，蒸憾水調(diào)零，讀取 測定管及標(biāo)準(zhǔn)管吸光度值。md4含量測定0d值-對照0d值標(biāo)準(zhǔn)品濃度待測樣本蛋白濃度=“ x于(rmiol i ingprot 標(biāo)準(zhǔn)0d值-空白0d值(lomnol / “)(mgprot / ml)2.10統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)釆用s