公共衛(wèi)生用品微生物檢測(cè)

1、公共場(chǎng)所公共用品的微生物檢測(cè)分析【摘要】目的為了掌握我市公共場(chǎng)所公共用品的消毒效果，提高公共衛(wèi)生用品的消毒質(zhì)量， 保障公共場(chǎng)所公共用品用具的衛(wèi)生安全，以及為我市對(duì)公共場(chǎng)所的衛(wèi)生監(jiān)督管理提供可靠科學(xué)的管理依據(jù)1。方法 在使用現(xiàn)場(chǎng)采集各種衛(wèi)生用品,對(duì)采集的物品進(jìn)行微生物檢測(cè)；gb/t 18204.6-2013 公共場(chǎng)所衛(wèi)生檢驗(yàn)方法 。結(jié)果 公共衛(wèi)生用品的合格率為91% ，致病菌檢出率較低，真菌和酵母菌的檢出率略高為 8% 。結(jié)論 定期進(jìn)行公共用品的微生物檢測(cè)，督促經(jīng)營(yíng)部門完善消毒設(shè)施建立健全消毒制度， 指導(dǎo)消毒人員掌握簡(jiǎn)便易行正確的消毒方法，確保消毒質(zhì)量和效果，保證衛(wèi)生質(zhì)量符合國(guó)家要求2?！娟P(guān)鍵詞

2、】公共場(chǎng)所；公共用品；微生物；檢測(cè)公共用品的微生物檢驗(yàn)對(duì)公共場(chǎng)所的衛(wèi)生監(jiān)督和傳染病的預(yù)防至關(guān)重要，能夠提供安全可靠的科學(xué)依據(jù)，有利于各種規(guī)章和制度的制訂和實(shí)施3。1 一般資料與方法1.1 基本資料 2015 年對(duì)我市 4 類公共場(chǎng)所：洗浴場(chǎng)所、美容院、旅店、美發(fā)理發(fā)共 435 戶、946份公共衛(wèi)生用品進(jìn)行了微生物檢測(cè)。1.1.1采樣種類及檢測(cè)項(xiàng)目：毛巾、浴袍、床單（細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌） 、拖鞋（真菌和酵母菌） 。1.2 采樣方法1.2.1 一般要求隨機(jī)抽取清洗消毒后準(zhǔn)備使用的公共用品用具，無菌操作，使用滅菌干燥棉拭子，于 10ml 滅菌生理鹽水內(nèi)浸潤(rùn)（吸取約1ml

3、 溶液）后，在用品用具的適當(dāng)部位來回均勻涂抹進(jìn)行樣品采集，再用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放入剩余的 9ml 生理鹽水內(nèi)， 4 內(nèi)送檢。1.2.2 采樣部位及采樣面積1.2.2.1在毛巾、枕巾、浴巾對(duì)折后兩面的中央5cm 5cm面積范圍內(nèi)分別均勻涂抹 5 次，每 25cm2 采樣面積為 1 份樣品，每件用品共采集2 份樣品。1.2.2.2在床單、被單的上下兩部即與頸部、腳部接觸部位5cm 5cm （25）面積范圍內(nèi)分別均勻涂抹5 次，每 25cm2 采樣面積為 1 份樣品，每件用品共采集2 份樣品。1.2.2.3睡衣、睡褲隨機(jī)選擇 2 個(gè) 5cm 5cm （25cm2 ）面積范圍內(nèi)均

4、勻涂抹5 次，每 25cm2 采樣面積為 1 份樣品，每件用品共采集2 份樣品。1.2.2.4在每只鞋的鞋內(nèi)與腳趾接觸處5cm 5cm面積范圍內(nèi)均勻涂抹5 次，1雙鞋為 1 份樣品，采樣總面積為50cm2 。1.2.3 試驗(yàn)器材及培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌器、 干熱滅菌箱、 恒溫培養(yǎng)箱： 361、無菌（試管、平皿、刻度吸管、剪刀）等。生理鹽水、營(yíng)養(yǎng)瓊脂、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液、伊紅美蘭瓊脂、乳糖發(fā)酵管、胰酪胨大豆肉湯、氯化鈉肉湯（75g/l） 、bairdparker平板、血瓊脂培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基、葡萄糖肉浸液肉湯、匹克氏肉湯、1.2.4 檢驗(yàn)步驟1.2.4.1樣品稀釋將放有采樣后棉拭

5、子的試管充分震蕩，此液為 1:10 的樣品勻液。 用 1ml 無菌吸管或微量移液器吸取1:10 樣品勻液 1ml，沿管壁緩慢注入盛有9ml 生理鹽水稀釋液的無菌試管中，震搖試管或換用1 支無菌吸管反復(fù)吹打使其混勻，制成1:100 的樣品勻液。按同法制備10 倍系列稀釋樣品勻液，每遞增稀釋1 次，換用 1 次 1 毫升無菌吸管或吸頭。1.2.4.2細(xì)菌總數(shù)的檢驗(yàn)根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)，選擇1 個(gè)2 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液，在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋時(shí)，每個(gè)稀釋度分別吸取1ml 樣品勻液于 2 個(gè)無菌平皿內(nèi)，同時(shí)分別取 1ml 稀釋液加入兩個(gè)無菌平皿作空白對(duì)照。 將 15ml20ml、 冷卻置 4

6、550的營(yíng)養(yǎng)瓊脂傾注平皿，混合均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿，置361培養(yǎng)箱培養(yǎng) 48h2h。1.2.4.3菌落計(jì)數(shù)選取菌落數(shù)在 30cfu 300cfu 之間、無蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)；若所有稀釋度的菌落數(shù)均大于300cfu ，按稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；若所有稀釋度的菌落總數(shù)均小于30cfu ，按稀釋度最低的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；若所有稀釋度( 包括液體樣品原液 ) 平板均無菌落生長(zhǎng)， 以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。 若所有稀釋度的菌落數(shù)均不在30cfu 300cfu 之間，以最接近 30cfu或 300cfu 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。1.2.4.4大腸菌群的檢測(cè)1.2.4.4.1乳糖

7、膽鹽發(fā)酵試驗(yàn)： 將檢樣倒入雙料乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)液中，置 361培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h2h，觀察是否產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，如不產(chǎn)酸產(chǎn)氣為大腸菌群陰性，若變黃和氣體產(chǎn)生，要進(jìn)行分離培養(yǎng)和證實(shí)試驗(yàn)。1.2.4.4.2分離培養(yǎng)：自產(chǎn)酸產(chǎn)氣發(fā)酵管中取一接種環(huán)培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)接伊紅美蘭瓊脂平板上，置 361培養(yǎng)箱培養(yǎng) 18h24h，取出，觀察菌落形態(tài)，革蘭氏染色鏡檢。 （深紫黑色，具有金屬光澤的菌落 ; 紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落;淡紫紅色、中心較深的菌落）1.2.4.4.3證實(shí)試驗(yàn)：在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落接種乳糖發(fā)酵管，置 361培養(yǎng)箱培養(yǎng) 24h2h。1.2.4.5金黃色葡萄球菌的檢測(cè)1.2.4.5.1

8、將 1ml 樣品放入 9ml 氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，361培養(yǎng) 24h。從培養(yǎng)液中取12 接種環(huán)劃線接種在， baird parker 平板或用血瓊脂培養(yǎng)基，于361培養(yǎng) 24h，在 baird parker 平板培養(yǎng)基上菌落為圓形、金黃色、凸起、表面光滑、周圍有溶血環(huán)。挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，為革蘭氏陽性，成葡萄狀排列。1.2.4.5.2血漿凝固酶試驗(yàn)：吸取1:4 新鮮血漿 0.5ml 放入滅菌小試管中，再加入待檢菌 24h 肉湯培養(yǎng)物 0.5ml ?；靹?，放 361溫箱或水浴中，每30min觀察 1 次，24h 之內(nèi)如呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時(shí)以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉

9、湯培養(yǎng)物及肉湯培養(yǎng)基各0.5ml ，分別加入滅菌小試管與1:4 血漿 0.5ml 混勻，作為對(duì)照。1.2.4.5.3報(bào)告凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長(zhǎng)，經(jīng)染色鏡檢， 證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，血漿凝固酶試驗(yàn)陽性，可報(bào)告檢出金黃色葡萄球菌。1.2.4.6溶血性鏈球菌的檢測(cè)1.2.4.6.1取 1ml 液體檢樣，加入 9ml 葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線接種于血平板，如檢樣污染嚴(yán)重， 同時(shí)按上述量接種匹克氏肉湯，經(jīng) 361培養(yǎng) 24h，接種血平板，置361培養(yǎng) 24h，挑起有溶血圓形的細(xì)小菌落，在血平板上分純，然后觀察溶血情況及革蘭氏染色。鏈的長(zhǎng)短常與細(xì)菌的種類及生長(zhǎng)環(huán)境有關(guān)；液體培養(yǎng)中易呈長(zhǎng)鏈

10、；固體培養(yǎng)基中常呈短鏈，不形成芽孢，無鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。血平板上該菌為灰白色，半透明或不透明。1.2.4.6.2報(bào)告在血平板上為灰白色菌落， 半透明或不透明， 表面光滑有乳頭， 鏡檢為革蘭氏陽性無芽孢球菌，圓形或卵圓形，呈鏈狀排列，菌落周圍有溶血環(huán)，可報(bào)告為樣品中檢出溶血性鏈球菌。1.2.4.7真菌和酵母菌的檢測(cè)1.2.4.7.1用滅菌吸管吸取 1:10 稀釋液 2ml，分別注入到 2 個(gè)滅菌平皿內(nèi)， 每皿1ml。另取 1ml 注入 9ml 滅菌鹽水管中，換1 支 1ml 滅菌吸管吹吸 5 次，此液為1:100 稀釋液。按上述操作順序作10 倍遞增稀釋液，每稀釋一次，換1 支 1ml滅菌吸管，根

11、據(jù)樣品的污染情況， 選擇 3 個(gè)合適的稀釋度。 將溶化并冷卻至 45左右的培養(yǎng)基注入平皿內(nèi)， 凝固后，倒置于 2528溫箱中，3 天后開始觀察，共培養(yǎng)觀察一周。1.2.4.7.2菌落計(jì)數(shù)：通常選擇菌落數(shù)在5cfu 50cfu 之間的平皿進(jìn)行計(jì)數(shù)，同稀釋度的兩個(gè)平皿的菌落平均數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為每毫升檢樣中所含菌落數(shù)。若兩個(gè)稀釋度的菌落數(shù)皆在規(guī)定范圍之間或3 個(gè)稀釋度皆不在此范圍， 按菌落總數(shù)方法計(jì)數(shù)。2 結(jié)果我市公共場(chǎng)所的公共衛(wèi)生用品的合格率為91% ，致病菌檢出率較低，真菌和酵母菌的檢出率略高為8% 。大型公共場(chǎng)所的合格率相對(duì)較高4。表一 我市公共場(chǎng)所的公共衛(wèi)生用品的合格情況行業(yè)戶數(shù)樣品數(shù)合

12、格數(shù)合格率 % 美發(fā)理發(fā)119 238 205 86 大型賓館10 40 38 95 小型旅店192 192 177 92 大型洗浴6 120 112 93.3 小型浴池87 174 154 88.5 美容院21 182 172 95 合計(jì)435 946 859 91 表二公共用品的檢出情況種類樣品數(shù)菌落總數(shù)超標(biāo)數(shù)大腸菌群檢出數(shù)金黃色葡萄球菌檢出數(shù)溶血性鏈球菌檢出數(shù)真菌和酵母菌超標(biāo)數(shù)床單256 21 10 2 0 - 浴袍120 10 2 0 1 - 拖鞋300 - - - - 24 毛巾270 12 4 1 0 - 總檢出率7% 5% 1% 0.3% 8% 合計(jì)946 43 16 3 1 2

13、4 3 結(jié)論通過此次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我市公共場(chǎng)所的公共衛(wèi)生用品的合格率為91% ，致病菌檢出率較低，真菌和酵母菌的檢出率略高為8% 。大型公共場(chǎng)所的合格率相對(duì)較高，與大型公共場(chǎng)所的消毒意識(shí)強(qiáng)、基本上能按規(guī)定做到一客一換一消有關(guān)。小型浴池和小型理發(fā)店的合格率略低，與這些場(chǎng)所服務(wù)員流動(dòng)大、 缺乏消毒意識(shí)有關(guān)。為此，建議衛(wèi)生監(jiān)督部門，要以公共用品用具的清洗消毒為重點(diǎn)，特別是小型浴池拖鞋的清洗消毒， 進(jìn)行經(jīng)常性的衛(wèi)生監(jiān)督， 定期進(jìn)行公共用品的微生物檢測(cè)，督促經(jīng)營(yíng)部門完善消毒設(shè)施建立健全消毒制度，指導(dǎo)消毒人員掌握簡(jiǎn)便易行正確的消毒方法，確保消毒質(zhì)量和效果，保證衛(wèi)生質(zhì)量符合國(guó)家要求5。同時(shí)，完善微生物檢驗(yàn)室的設(shè)施，提高檢驗(yàn)人員的技術(shù)水平，保證檢驗(yàn)結(jié)果的科學(xué)性、準(zhǔn)確性。參考文獻(xiàn)1 林吉年 . 丹陽市公共場(chǎng)所公共用品消毒質(zhì)量監(jiān)測(cè)j. 中國(guó)消毒學(xué)雜志 , 2012, 29(4):151-152. 2 蔣林. 徐州鐵路地區(qū)公共場(chǎng)所消毒質(zhì)量狀況調(diào)查j.