PCR原理及各類PCR儀學習教案

1、會計學1PCR原理原理(yunl)及各類及各類PCR儀儀第一頁，共24頁。eaction，即聚合酶鏈式反應，是一種(y zhn)用于體外擴增特定的DNA片段的分子生物學技術，PCR的最大特點，是能將微量的DNA通過復制大幅增加。第1頁/共23頁第二頁，共24頁。ng)PCRn數(shù)字PCR第2頁/共23頁第三頁，共24頁。第3頁/共23頁第四頁，共24頁。第4頁/共23頁第五頁，共24頁。/sn溫度均一性：（95時）n溫度精確性度：n溫控范圍：n熱蓋溫控范圍：30-110可調n用戶界面：反應(fnyng)曲線圖顯示n尺寸n重量n電壓n數(shù)據(jù)交換（USB接口）n保質期第5頁/共23頁第六頁，共24頁。

2、PCR儀三種儀三種(sn zhn)控溫方控溫方法的區(qū)別法的區(qū)別第6頁/共23頁第七頁，共24頁。tinBio-Rad：MJ Mini、MyCycler、PTC200、PTC240、C1000、S1000nEppendorf：Mastercycler pro S/pro/pro 384第7頁/共23頁第八頁，共24頁。熒光基團，PCR反應(fnyng)過程中，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對起始模板進行定量分析的方法。n目的：獲得初始模板DNA的濃度。n熒光定量PCR儀的關鍵是溫控和熒光激發(fā)、檢測系統(tǒng)！第8頁/共23頁第九頁，共24頁。第9頁/共23頁第十頁，共24頁。

3、確定初始(ch sh)模板的濃度q初始 DNA量越多, 熒光達到某一值（域值）時所需要的循環(huán)數(shù)越少qLog濃度與循環(huán)數(shù)呈線性關系，根據(jù)(gnj)樣品擴增達到域值的循環(huán)數(shù)就可計算出樣品中所含的模板量第10頁/共23頁第十一頁，共24頁。GTTTGGCCCCCCCAAAGGGACTTGATAGCATCGTAA第11頁/共23頁第十二頁，共24頁。衡量熒光定量衡量熒光定量儀儀n2.2.22.2.2反應體積反應體積: 10-100ul: 10-100uln2.2.32.2.3運行時間運行時間: 2: 2小時小時n2.2.42.2.4機械設計機械設計: : 樣品無需移動樣品無需移動n2.2.5 2.2.

4、5 反應后保存反應后保存: : 可降溫至可降溫至4 4保存保存第12頁/共23頁第十三頁，共24頁。第13頁/共23頁第十四頁，共24頁。n2.7 2.7 軟件系統(tǒng)軟件系統(tǒng)n2.7.12.7.1定量定量PCRPCR軟件：有絕對定量和相對定量軟軟件：有絕對定量和相對定量軟件件n* *2.7.2 PrimerExpress2.7.2 PrimerExpress軟件軟件 ：有，含正版引物：有，含正版引物與探針設計軟件，可進行與探針設計軟件，可進行Taqman MGBTaqman MGB探針的探針的設計及合成設計及合成n2.7.32.7.3 熒光校正軟件：有熒光校正軟件：有n* *2.7.4 2.7.

5、4 拷貝數(shù)分析拷貝數(shù)分析(fnx)(fnx)軟件：有，含軟件：有，含CopyCallerCopyCaller分析分析(fnx)(fnx)軟件軟件n2.7.52.7.5獨立相對定量軟件：有，可同時對無限個獨立相對定量軟件：有，可同時對無限個數(shù)據(jù)同時進行分析數(shù)據(jù)同時進行分析(fnx)(fnx)n* *2.7.6 SNP2.7.6 SNP分析分析(fnx)(fnx)軟件：有，含軟件：有，含AutoCallerAutoCaller分析分析(fnx)(fnx)軟件軟件第14頁/共23頁第十五頁，共24頁。n* *2.92.9 試劑、耗材：開放式試劑、耗材：開放式n2.102.10 裝機指標：裝機指標：9

6、9.7%99.7%的置信度下分辨的置信度下分辨50005000和和1000010000模板拷貝數(shù)的差異模板拷貝數(shù)的差異第15頁/共23頁第十六頁，共24頁。培訓培訓n6.3 6.3 技術資料：全套安裝、操作和維護使用說明技術資料：全套安裝、操作和維護使用說明書，軟件免費更新書，軟件免費更新nn7 7 質量保修期質量保修期n7.1 7.1 保修期：自驗收合格日起整機（包括配件）保修期：自驗收合格日起整機（包括配件）一年全保，終身維護一年全保，終身維護n7.2 7.2 保修點：國內至少三個保修點可提供部件更保修點：國內至少三個保修點可提供部件更換，原廠專業(yè)維修換，原廠專業(yè)維修nn* *8 8 其他

7、要求：近其他要求：近5 5年內浙江省定量年內浙江省定量(dngli(dngli ng)PCRng)PCR（須為（須為9696孔板標準型配置），用孔板標準型配置），用戶不少于戶不少于100100個，提供詳細清單。個，提供詳細清單。第16頁/共23頁第十七頁，共24頁。第17頁/共23頁第十八頁，共24頁。第18頁/共23頁第十九頁，共24頁。第19頁/共23頁第二十頁，共24頁。個(y )反應10美元（芯片+耗材）第20頁/共23頁第二十一頁，共24頁。第21頁/共23頁第二十二頁，共24頁。第22頁/共23頁第二十三頁，共24頁。NoImage內容(nirng)總結會計學。簡單進行DNA復制擴增，然后可用電泳或者紫外分光光度計進行擴增產(chǎn)物的檢測。溫度均一性：（95時）。在模塊控制下，樣品溫度通常是在模塊后才到達設置