ABO反定型的必要性講座

1、ABO血血型型細(xì)胞上有或無A抗原或和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。可利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正（血清試驗(yàn)）反（細(xì)胞試驗(yàn)）定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。正正定定型、型、反反血清來測(cè)定紅細(xì)胞上有無相應(yīng)的A抗原或和B抗原，n反定型是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測(cè)定血清中有無相應(yīng)的抗A或抗B。操操作作過過程程得混用n（3）先加血清再加細(xì)胞n（4）要求正反定型結(jié)果相符n（5）不要使懸液干涸（玻片法），肉眼觀察必要時(shí)再用顯微鏡觀察。n（6）反定型不宜用玻片法n（7）試管法離心后應(yīng)先觀察上清液有無溶血，然后再搖動(dòng)管底紅細(xì)胞進(jìn)行觀察。ABO血血型型反反定定型型者血清或血漿n檢驗(yàn)方法：一、試管法（1）取被

2、檢者血清（或血漿）各一滴（50ul）分別加入三支標(biāo)記好的小試管中（2）分別各加一滴（50ul)A1、B、O試劑紅細(xì)胞（3）搖動(dòng)試管離心，速度1000rpm1分鐘或3400rpm15秒即可（4）先觀察是否溶血（溶血可能是陽性結(jié)果，或者是細(xì)菌污染），然后輕輕搖晃，使細(xì)胞再懸浮起來（5）觀察凝集狀況，并立即記錄結(jié)果ABO血血型型反反0ul的被檢者血清或血漿（2）在每孔內(nèi)分別加入與血清等量的A1、B、O試劑紅細(xì)胞（3）混勻（4）離心，轉(zhuǎn)速2000rpm20秒（離心后反應(yīng)板應(yīng)產(chǎn)生清晰的細(xì)胞扣及透明的上清液）（5）檢測(cè)溶血情況（6）用振蕩儀振動(dòng)微量板，振動(dòng)能使陽性反應(yīng)出現(xiàn)凝集的細(xì)胞扣，而若是陰性反應(yīng)很快細(xì)

3、胞扣消除（7）記錄結(jié)果，亦可用酶標(biāo)讀數(shù)儀ABO正正ABO反反定定型型反定型不一致需做進(jìn)一步研究。單獨(dú)反定型結(jié)果不能作為判斷血型的依據(jù)。結(jié)結(jié)果果判判讀讀血清或血漿與O型紅細(xì)胞試劑產(chǎn)生陽性反應(yīng)，則需要添加自身對(duì)照試驗(yàn)。如果自身對(duì)照為陽性，表明是自身冷凝激素導(dǎo)致。如果自身對(duì)照為陰性，則表明被檢者血清或血漿中可能存在ABO系統(tǒng)以外的其他系統(tǒng)的抗體干擾定型。結(jié)結(jié)果果判判讀讀紫色或紅細(xì)胞發(fā)生凝集，出現(xiàn)菌落或溶血嚴(yán)重，則不能使用，盡量避免因制品污染、變質(zhì)失效而造成的檢定錯(cuò)誤。2021/8/12112021/8/1212結(jié)結(jié)果果透明，無游離細(xì)胞。n3+（+）：紅細(xì)胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。n2+（+）：紅細(xì)

4、胞凝塊分散成許多小塊，見到游離細(xì)胞。n1+（+）：肉眼可見顆粒狀細(xì)小凝塊，游離細(xì)胞較多，上清液呈紅色。n（+）：肉眼很難看清，要用顯微鏡觀察。鏡下可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞凝集在一起，周圍有很多的游離紅細(xì)胞。nMF：混合外觀，即鏡下可見極少數(shù)紅細(xì)胞凝集，而極大多數(shù)紅細(xì)胞仍呈分散分布。n（）：鏡下未見凝集，紅細(xì)胞均勻分布。ABO血血型型n2.輔助診斷新生兒溶血病n3.器官移植中的應(yīng)用n4.親子鑒定及其他（如法醫(yī)學(xué)）紅紅細(xì)細(xì)胞胞ABO血血型型正正假陰性n（1）弄錯(cuò)樣品，試管或玻片n（2）實(shí)驗(yàn)過程中未加血清或抗體試劑n（3）結(jié)果判讀方法不規(guī)范，將溶血現(xiàn)象忽略n（4）血清或抗體試劑與血球比例不合適n（5）沒有在室

5、溫或低于室溫下放置一段時(shí)間n（6）試劑失效，離心不夠n（7）使用的玻璃器皿不清潔n（8）解釋記錄不正確，書寫錯(cuò)誤等ABO正正反反定定型型管或玻片n（2）抗體試劑，紅細(xì)胞試劑或生理鹽水被污染n（3）過度離心n（4）使用的玻璃器皿不清潔n（5）解釋或記錄不正確性問題比較好解決，只要認(rèn)真的重復(fù)試驗(yàn)，仔細(xì)核對(duì)血樣和試劑，正確讀取結(jié)果以及防止書寫錯(cuò)誤既可避免。ABO正正反反定定型型原或B抗原減弱n（3）何杰金病也有類似白血病抑制抗原的作用n（4）類B抗原n（5）類孟買型n（6）抗-A，抗-B血清中存在某種低頻率抗原的抗體n（7）某些疾病如胃癌、胰腺癌患者紅細(xì)胞的血清或血漿中含有高濃度A或B血型物質(zhì)，中和

6、了抗體試劑，出現(xiàn)了假陰性反應(yīng)n（8）某些疾病血清中高活性、高濃度冷自身凝集素嚴(yán)重致敏自身紅細(xì)胞，以致在稀釋液存在的條件下，自覺地發(fā)生凝集，而不是抗體試劑的特異性作用。n（9）某些G桿菌感染可吸附于紅細(xì)胞上與抗-B凝集素反應(yīng)而凝集補(bǔ)補(bǔ)充充引起，其代謝產(chǎn)物可使紅細(xì)胞上獲得類B抗原，與抗B試劑出現(xiàn)凝集反應(yīng)的假象。n多凝集紅細(xì)胞具有以下特點(diǎn)：能被人和家兔的許多血清凝集。能與大多數(shù)成年人血清凝集，不管有無相應(yīng)的同種抗體。不被臍帶血清凝集。通常不與自身血清凝集。如有條件可用外源凝集素加以鑒別。n冷抗體也就是天然抗體，是在沒有任何可覺察的抗原刺激下而產(chǎn)生的抗體，以IgM為主，也可以是一種無察覺的免疫刺激而得

7、。正常情況下，健康人體內(nèi)均含有少量的冷抗體，效價(jià)很低，一般在1:16以下。分子量較大，不耐熱，在425鹽水中與相應(yīng)紅細(xì)胞發(fā)生肉眼可見凝集，隨著溫度升高，活性降低。如支原體及病毒性肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、再生障礙性貧血、自身免疫性溶血性貧血、紅斑狼瘡等患者，血清中有較高效價(jià)冷抗體，容易導(dǎo)致ABO正反定型出現(xiàn)全凝集現(xiàn)象。一般370.9%生理鹽水洗滌紅細(xì)胞即可排除干擾，也可用巰基乙醇或二硫蘇糖醇可將其滅活A(yù)BO正正反反定定型型、抗-B檢出率為29.3%89.4%n（2）老年人隨著年齡增加，抗體水平減弱n（3）白血病、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤以及使用免疫抑制劑的病人n（4）先天性丙種球蛋白缺乏的病

8、人n（5）免疫缺陷的病人n（6）M蛋白伴抗-A、抗-B減弱或缺乏n（7）嵌合體n（8）骨髓移植病人，外周血干細(xì)胞移植或臍帶移植的病人n（9）血清中存在某些額外的抗體，如抗-P1、抗-M、抗-HABO正正反反定定型型蛋白增加，如多發(fā)性骨髓瘤、巨球蛋白血癥等漿細(xì)胞病，某些何杰金淋巴瘤，纖維蛋白原水平升高會(huì)形成緡錢串。用生理鹽水洗滌病人紅細(xì)胞或向試管中加入1滴或2滴生理鹽水可驅(qū)散緡錢串假凝集。（2）血漿增溶劑：如右旋糖酐、聚乙烯吡咯酮（PVP）等可引起RBC緡錢串假凝集，解決方法與上相同（3）臍血中沃頓氏膠含有粘多糖物質(zhì)，能引起自發(fā)緡錢串假凝集。將臍血洗滌68次即可。（4）有些疾病如骨癌、胰腺癌，病

9、人血漿中過剩的可溶性血型物質(zhì)（BGSS）會(huì)中和試劑抗-A，或抗-B，在正定型中會(huì)出現(xiàn)假陰性或弱反應(yīng)。用生理鹽水洗去可解決此問題。ABO正正反反定定型型細(xì)胞抗原引起（如T抗原），見于細(xì)菌性及病毒性感染。n（2）前帶現(xiàn)象，病人的抗-A或抗-B水平不合適n（3）強(qiáng)冷凝集素：這種紅細(xì)胞常直接抗球蛋白試驗(yàn)（DAT）陽性，如果此抗體與所有成人紅細(xì)胞凝集，則反定型時(shí)與A、B型紅細(xì)胞必凝集。將患者紅細(xì)胞用37生理鹽水洗滌三次，如果血中存在強(qiáng)冷凝集素，可以做自吸收實(shí)驗(yàn)，從血清中除去自身抗體，再用譜細(xì)胞鑒定抗體特異性。體包裹紅細(xì)胞，直接抗球蛋白試驗(yàn)（DAT）呈陽性，正定型可發(fā)生混合外觀或弱凝集。n（5）溫自身抗體

10、：由AIHA、藥物引起，如甲基多巴，紅細(xì)胞包裹足夠的抗體，啟動(dòng)自然凝集，其反應(yīng)強(qiáng)度室溫較37弱得多。n（6）病人血清中有ABO同種凝集素以外的額外同種抗體，反定型紅細(xì)胞有A及B以外的抗原，以及患者血清中的其他抗體，可以凝集這些細(xì)胞。n（7）抗-A、抗-B以外的抗體，可形成抗原-抗體復(fù)合物，這種復(fù)合物可以吸附在紅細(xì)胞上。ABO正正反反定定型型的原因是可以查清的，因此首先應(yīng)重復(fù)全部試驗(yàn)，確保紅細(xì)胞懸液勿太濃或太淡，紅細(xì)胞試劑及試管無污染，標(biāo)本無混淆，如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果與原來一樣，則需做以下整套試驗(yàn)：ABO正正反反定定型型實(shí)驗(yàn)），以確定紅細(xì)胞是否被抗體致敏n（2）對(duì)被檢紅細(xì)胞以抗-A,抗-A1，抗-B,抗

11、-AB做正定型n（3）對(duì)被檢者血清以A1，A2，B細(xì)胞和臍血O細(xì)胞作反定型，以及O型譜細(xì)胞作抗體測(cè)定和抗體鑒定，同時(shí)要做自身對(duì)照（病人血清加病人紅細(xì)胞）n（4）所有試驗(yàn)在室溫孵育1530min，必要時(shí)4孵育1530min讀取結(jié)果。n（5）實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)包括鹽水介質(zhì)法，DAT或凝聚胺實(shí)驗(yàn)ABO正正反反定定型型n（3）洗滌n（4）亞型測(cè)定n（5）顯微鏡核實(shí)n（6）其他方法（酶法或直接抗球蛋白法)新新生生兒兒同族血型免疫疾病，可發(fā)病于胎兒和新生兒的早期。當(dāng)胎兒從父方遺傳下來的顯性抗原恰為母親所缺少時(shí)，通過妊娠、分娩，此抗原可進(jìn)入母體，刺激母體產(chǎn)生免疫抗體。當(dāng)此抗體又通過胎盤進(jìn)入胎兒的血循環(huán)時(shí)，可使其紅細(xì)

12、胞凝集破壞，引起胎兒或新生兒的免疫性溶血癥。這對(duì)孕婦無影響，但病兒可因嚴(yán)重貧血、心衰而死亡，或因大量膽紅素滲入腦細(xì)胞引起核黃疸而死亡，即使幸存，其神經(jīng)細(xì)胞和智力發(fā)育以及運(yùn)動(dòng)功能等，都將受到影響。n母兒血型不合，主要有ABO和Rh型兩大類，其他如MN系統(tǒng)也可引起本病，但極少見。ABO血型不合較多見，病情多較輕，易被忽視。Rh血型不合在我國少見，但病情嚴(yán)重，常致胎死宮內(nèi)或引起新生兒核黃疸。AB型。胎兒的A、B抗原即為致敏源。Rh血型中有6個(gè)抗原，分別為C、c、D、d、E、e，其中以D抗原性較強(qiáng)。致溶血率最高，故臨床上以抗D血清來檢驗(yàn)。當(dāng)母親或新生兒紅細(xì)胞與已知的抗D血清發(fā)生凝集，即為Rh陽性，反之

13、則為陰性。Rh陰性的孕婦，偶亦可被其他抗原致敏而產(chǎn)生抗體，如抗E抗C抗體等，從而發(fā)生母兒血型不合。n胎兒紅細(xì)胞正常不能通過胎盤，僅在妊娠或分娩胎盤有破損時(shí)，絨毛血管內(nèi)胎兒紅細(xì)胞才能進(jìn)入母體，并根據(jù)進(jìn)入的量、致敏次數(shù)，影響到抗體產(chǎn)生的多少及最后引起胎嬰兒溶血的輕重等。n血型抗體是一種免疫球蛋白，有IgG、IgM兩種。IgG分子量?。?Sr球蛋白），為不完全抗體（膠體介質(zhì)抗體或遮斷性抗體），能通過胎盤；而IgM分子量大（19S球蛋白），為完全抗體（鹽水凝集抗體），不能通過胎盤。Rh、ABO血型抗體能通過胎盤起作用的是IgG新新生生兒兒溶溶鐵血黃素沉著。n（二）骨髓及髓外造血組織呈代償性增生，肝脾腫

14、大，鏡檢在肝、脾、肺、胰、腎等組織內(nèi)可見散在髓外造血灶。n（三）貧血導(dǎo)致心臟擴(kuò)大，血漿蛋白低下、全身蒼白、水腫、胸腹及心包等組織內(nèi)可同兇散在髓外造血灶。n（四）高膽紅素血癥可引起全身性黃疸及核黃疸。核黃疸多發(fā)生在基底核、海馬鉤回及蒼白球、視丘下核、尾狀核、齒狀核等處。神經(jīng)細(xì)胞變性，胞漿黃染，核消失。n輕癥者多無特殊癥狀，溶血嚴(yán)重者，可出現(xiàn)胎兒水腫、流產(chǎn)、早產(chǎn)甚至死胎。娩出后主要表現(xiàn)為貧血、水腫、肝脾腫大、黃疸及核黃疸。癥狀的輕重取決于抗體的多少、新生兒成熟度及代償性造血能力等。（三）三）新新生生兒兒者注意黃疸出現(xiàn)時(shí)間，加重速度和程度。若出生時(shí)貧血嚴(yán)重，臍血血紅蛋白12g者，應(yīng)考慮輸血；2、27天，重點(diǎn)是針對(duì)并防止因高膽紅素