Lowrys法Folin酚試劑法測(cè)定血清中蛋白質(zhì)的含量學(xué)習(xí)教案

1、會(huì)計(jì)學(xué)1Lowrys法法Folin酚試劑法測(cè)定血清酚試劑法測(cè)定血清(xuqng)中蛋白質(zhì)的含量中蛋白質(zhì)的含量第一頁，共24頁。方方 法法 靈敏度靈敏度 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn) 缺點(diǎn)缺點(diǎn)凱氏定氮法凱氏定氮法0.2 1.0mg 干擾少，干擾少， 準(zhǔn)確準(zhǔn)確操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí)操作復(fù)雜，費(fèi)時(shí) 紫外吸收法紫外吸收法50100mg 快速簡(jiǎn)便快速簡(jiǎn)便無損樣品無損樣品靈敏度低靈敏度低干擾物較多干擾物較多考馬斯亮藍(lán)法考馬斯亮藍(lán)法（Bradford法）法）15ug 靈敏、簡(jiǎn)靈敏、簡(jiǎn)便、快速便、快速不同蛋白質(zhì)測(cè)定時(shí)不同蛋白質(zhì)測(cè)定時(shí)有較大的偏差有較大的偏差 雙縮脲法雙縮脲法 120mg 干擾相對(duì)干擾相對(duì)少，較快少，較快靈敏度低靈敏度低第

2、1頁/共23頁第二頁，共24頁。第2頁/共23頁第三頁，共24頁。第3頁/共23頁第四頁，共24頁。第4頁/共23頁第五頁，共24頁。第5頁/共23頁第六頁，共24頁。第6頁/共23頁第七頁，共24頁。第7頁/共23頁第八頁，共24頁。第8頁/共23頁第九頁，共24頁。第9頁/共23頁第十頁，共24頁。第10頁/共23頁第十一頁，共24頁。n5、刻度吸管n6、坐標(biāo)紙第11頁/共23頁第十二頁，共24頁。l各管混勻，室溫放置各管混勻，室溫放置10min。 l向各管內(nèi)加入向各管內(nèi)加入(jir)Folin-酚試劑酚試劑, 2s內(nèi)迅速混勻！內(nèi)迅速混勻！ 40放置放置10min。l冷卻至室溫后，以冷卻至

3、室溫后，以500nm波長(zhǎng)比色，用波長(zhǎng)比色，用1號(hào)管作空白，讀取各管吸光度。號(hào)管作空白，讀取各管吸光度。試劑試劑 （ml)123456牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液牛血清白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液-0.200.400.600.80-樣品液（稀釋樣品液（稀釋300倍）倍）-0.50蒸餾水蒸餾水1.00.800.600.400.200.50堿性硫酸銅堿性硫酸銅2.02.02.02.02.02.0蛋白質(zhì)濃度（蛋白質(zhì)濃度（g/ml）04080120160？第12頁/共23頁第十三頁，共24頁。第13頁/共23頁第十四頁，共24頁。蛋白蛋白(dnbi)樣品樣品堿性堿性(jin xn)銅試劑銅試劑混勻，混勻，放放10min加酚試劑加

4、酚試劑2s混勻混勻水浴水浴10min放至室溫放至室溫比色比色第14頁/共23頁第十五頁，共24頁。測(cè)定(cdng)次數(shù)各管A值2 3 4 5 6 待測(cè)樣品(yngpn)管7123各管平均值第15頁/共23頁第十六頁，共24頁。第16頁/共23頁第十七頁，共24頁。吸光度A蛋白質(zhì)濃度C（g/ml）0.20.40.6.4080120160第17頁/共23頁第十八頁，共24頁。第18頁/共23頁第十九頁，共24頁。n血清蛋白濃度(g/ml)=樣品蛋白質(zhì)濃度2300為什么？為什么？第19頁/共23頁第二十頁，共24頁。直線形式；n 3.專一性較差，干擾物質(zhì)較多。第20頁/共23頁第二十一頁，共24頁。第21頁/共23頁第二十二頁，共24頁。MODE 0%MODE 100%第22頁/共23頁第二十三頁，共24頁。NoImage內(nèi)容(nirng)總結(jié)會(huì)計(jì)學(xué)。第1頁/共23頁。第2頁/共23頁。Lowrys法（Folin-酚試劑法）測(cè)定蛋白質(zhì)含量。在堿性溶液中,雙縮脲(H2NOCNHCONH2)能與Cu2+作用,形成紫色或紫紅色的絡(luò)合物,這個(gè)反應(yīng)叫做雙縮脲反應(yīng)。由于蛋白質(zhì)分子中含有與雙縮脲結(jié)構(gòu)相似的多個(gè)肽鍵, 因此有雙縮脲反應(yīng)。Folin-