探究CEACAM6與FOXP3對(duì)胰腺癌腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞和預(yù)后的影響

1、    探究ceacam6與foxp3對(duì)胰腺癌腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞和預(yù)后的影響    莫吉祥+敖彩民+彭杰摘 要：目的：分析在胰腺癌腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞預(yù)后方面ceacam6和foxp3產(chǎn)生的影響。方法：搜集2015年12月至2016年12月在中南大學(xué)湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例，通過(guò)免疫組織的化學(xué)法對(duì)患者胰腺癌組織之中ro、ceacam6、cd45、foxp3、cd8與cd3表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)探討各種指標(biāo)和病理特征、預(yù)后之間的相關(guān)性。結(jié)果：foxp3的表達(dá)和cd45ro、cd3以及cd8陽(yáng)性t細(xì)胞低浸相關(guān)，但是和cd4+t的細(xì)胞浸潤(rùn)沒(méi)有顯著相關(guān)性；ceac

2、am6高表達(dá)和cd45ro+t細(xì)胞、cd8+t細(xì)胞低浸潤(rùn)相關(guān)，和cd4+t細(xì)胞、cd3+t細(xì)胞浸潤(rùn)沒(méi)有明顯的關(guān)系。結(jié)論：腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)密度和胰腺癌預(yù)后、臨床分期以及組織分化息息相關(guān)，ceacam6與foxp3和胰腺癌的惡性程度有著相關(guān)性，且都可以對(duì)腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞進(jìn)行抑制。：r735.9：a一、引言胰腺癌消化系統(tǒng)的惡性腫瘤，主要特點(diǎn)是生存期比較短、早期診斷難度大、手術(shù)切除率比較低等。即便近幾年在胰腺癌病理生理研究方面取得一定成果，但死亡率與發(fā)病率沒(méi)有變化。胰腺癌免疫功能研究始終是一個(gè)熱點(diǎn)，通常腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞（tumor infiltrating lymphocytes，til）主

3、要是由腫瘤組織分離而來(lái)，含有腫瘤特異性的細(xì)胞毒性t 淋巴細(xì)胞與自然殺傷（natural killer，nk）的細(xì)胞，有抗腫瘤的反應(yīng)。研究中指出，腫瘤中浸潤(rùn)cd45ro+t 細(xì)胞、cd3+t 細(xì)胞以及cd8+t細(xì)胞和預(yù)后有一定關(guān)系，調(diào)節(jié)性的t細(xì)胞（regulatory t cells，t reg）有免疫抑制的效果，特異性的標(biāo)志屬于核轉(zhuǎn)錄因子的叉頭盒p3（forkhead box p3，foxp3），treg高表達(dá)和胰腺癌、卵巢癌以及結(jié)直腸癌惡性程度有正相關(guān)關(guān)系。癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，cea）屬于蛋白家族，和細(xì)胞黏附有關(guān)，因此，也叫做癌胚抗原相關(guān)的黏附分子（c

4、ea-related cell adhesion molecule，ceacam）。本文將2015年12月至2016年12月在中南大學(xué)湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例作為此次的探究對(duì)象，簡(jiǎn)析了在胰腺癌腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞預(yù)后方面ceacam6和foxp3產(chǎn)生的影響。二、研究資料和方法1.研究的資料搜集2015年12月至2016年12月在中南大學(xué)湘雅醫(yī)院治療的胰腺癌患者45例，所有患者術(shù)前均未接受放化療或免疫治療。有25例患者是男性，有20例患者是女性；患者的年齡跨度在4478歲之間，年齡均值是（69±2.91）歲。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟（union for international canc

5、er control，uicc） 的分期實(shí)施tnm 分期，25例患者是期與期，20例患者是期與期。按照組織病理的分級(jí)，有17例是高分化，有28例是中低分化。試劑：兔抗人cd8 mab、小鼠抗人cd3的單克隆抗體（monoclonal antibody，mab）以及兔抗人cd4的多克隆抗體，都選自santa cruz公司，小鼠抗人的foxp3mab、小鼠抗人的cd45romab以及兔抗人ceacam6mab都來(lái)自abcam公司，而chem mate envisiontm兔/小鼠標(biāo)所用免疫組織的化學(xué)試劑盒采購(gòu)于dako公司。2.方法將胰腺癌的石蠟包埋組織切片，大小為4微米，經(jīng)脫蠟與水化，然后用高壓

6、鍋加熱，修復(fù)抗原。通過(guò)30ml/l的雙氧水對(duì)內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶進(jìn)行滅活，添加50升兔抗人cd8mab（1100）、滅小鼠抗人cd3 mab（1100）以及兔抗人cd4多克隆抗體（1100），同時(shí)加入小鼠抗人foxp3 mab （150）、cd45ro mab（110）與兔抗人ceacam6mab（1400），在37攝氏度條件下孵育1個(gè)小時(shí)，在室溫條件下孵育30分鐘。應(yīng)用dab來(lái)顯色，用蘇木精襯染，將人扁桃體的組織作為陽(yáng)性對(duì)照，而省略一抗當(dāng)做空白的對(duì)照。3.觀察的指標(biāo)應(yīng)用半定量的方法對(duì)foxp3、cd3、ceacam6、cd4、cd45ro與cd8浸潤(rùn)、表達(dá)進(jìn)行判斷，按照染色的強(qiáng)度分成3（棕色）

7、、2（棕黃色）、1（淺黃色）與0（無(wú)色）。按照陽(yáng)性細(xì)胞百分比分成：4（75%）、3（50%74%）、2（25%49%）、1（5%24%）與0（0%5%）。分?jǐn)?shù)相加總分劃分為：（+）為57分、（+）為34分、（+）為2分、01分為（-），（-）與（+）代表陰性的表達(dá)，（+）代表弱陽(yáng)性的表達(dá)，（+）代表強(qiáng)陽(yáng)性的表達(dá)。4.應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件統(tǒng)計(jì)所得數(shù)據(jù)本次實(shí)驗(yàn)得出數(shù)據(jù)都需要實(shí)施分析與整理，然后使用統(tǒng)計(jì)軟件spss19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)實(shí)驗(yàn)研究中出現(xiàn)的所有相關(guān)數(shù)據(jù)均進(jìn)行整理和分析，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）來(lái)表示計(jì)量資料，通過(guò)卡方（x2）表示計(jì)數(shù)資料，應(yīng)用獨(dú)立的樣本t對(duì)組間的構(gòu)成比進(jìn)行檢驗(yàn)，如果實(shí)驗(yàn)

8、所得數(shù)據(jù)經(jīng)對(duì)比以后存在統(tǒng)計(jì)意義，用p<0.05表示。三、結(jié)果1.免疫組織的化學(xué)染色結(jié)果和臨床病理相關(guān)性在期與期胰腺癌之中，foxp3與ceacam6的高表達(dá)比較高，與、期相比差異比較顯著，p<0.05；在中低分化中胰腺癌之中，foxp3與ceacam6的高表達(dá)比較高，與高分化中foxp3與ceacam6的高表達(dá)相比，有顯著差異，p<0.05（見(jiàn)表1）。2.foxp、ceacam6和t細(xì)胞相關(guān)性foxp3的表達(dá)和cd45ro、cd3以及cd8陽(yáng)性t細(xì)胞低浸相關(guān)，但是和cd4+t的細(xì)胞浸潤(rùn)沒(méi)有顯著相關(guān)性；ceacam6高表達(dá)和cd45ro+t細(xì)胞、cd8+t細(xì)胞低浸潤(rùn)相關(guān)，和cd

9、4+t細(xì)胞、cd3+t細(xì)胞浸潤(rùn)沒(méi)有明顯的關(guān)系（見(jiàn)表2）。 四、討論腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)目的可以反映宿主對(duì)癌細(xì)胞免疫應(yīng)答的強(qiáng)弱，cd45ro、cd3以及cd8與陽(yáng)性t細(xì)胞浸潤(rùn)、胰腺癌發(fā)展、總體預(yù)后有著密切相關(guān)性。本次研究顯示，foxp3的表達(dá)和cd45ro、cd3以及cd8陽(yáng)性t 細(xì)胞低浸相關(guān)，但是和cd4+t的細(xì)胞浸潤(rùn)沒(méi)有顯著相關(guān)性；ceacam6高表達(dá)和cd45ro+t細(xì)胞、cd8+t細(xì)胞低浸潤(rùn)相關(guān)，和cd4+t細(xì)胞、cd3+t細(xì)胞浸潤(rùn)沒(méi)有明顯的關(guān)系。轉(zhuǎn)錄因子的foxp3 基因與編碼產(chǎn)物scurfin 會(huì)參與到treg中樞性生成過(guò)程中，同時(shí)會(huì)對(duì)treg免疫調(diào)節(jié)的功能發(fā)揮產(chǎn)生影響。通常fox

10、p3表達(dá)和惡性腫瘤不良預(yù)后相關(guān)，foxp3一般是在抑制白細(xì)胞介素基礎(chǔ)上，對(duì)t細(xì)胞活化增殖進(jìn)行抑制。本次研究還顯示，在期與期胰腺癌之中foxp3與ceacam6的高表達(dá)比較高，與、期相比差異比較顯著，p<0.05。研究結(jié)果顯示，在期與期foxp3表達(dá)相對(duì)較高。五、結(jié)語(yǔ)綜上所述，腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)密度和胰腺癌預(yù)后、臨床分期以及組織分化息息相關(guān)，ceacam6與foxp3和胰腺癌惡性程度有著相關(guān)性，兩者都可以對(duì)腫瘤浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞進(jìn)行抑制。參考文獻(xiàn)：1彭 杰，蔣重驊，龍泓羽，等.癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞黏附分子6在胰腺癌組織中的表達(dá)及其臨床意義j.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2013（2）：57-60.2陳琳

11、琳，谷 歡，彭 杰，等.非編碼rna與胰腺癌j.中南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2014（5）：532-540.3鄭益紅，溫美福，葉新橋，等.腫瘤浸潤(rùn)t淋巴細(xì)胞在乳腺癌原發(fā)灶中的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系j.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2016（32）：19-20.4申苗苗，黃韻紅，胡云飛，等.骨髓涂片免疫組織化學(xué)與骨髓活組織檢查診斷非霍奇金淋巴瘤骨髓浸潤(rùn)的比較j.白血病·淋巴瘤，2016（12）：728-732.5崔瑩珊，陳小林，周航亮.術(shù)前外周血小板與淋巴細(xì)胞比值與結(jié)直腸癌術(shù)后患者臨床預(yù)后研究j.新醫(yī)學(xué)，2015（10）：685-689.6zhang s，defrias dv，alasadi r，et a1.endoscopic ultrasoundgu