2019分光光度計(jì)性能檢查ppt課件

1、哈爾濱醫(yī)科大學(xué)哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)一實(shí)驗(yàn)一 可見(jiàn)分光光度計(jì)性能檢查可見(jiàn)分光光度計(jì)性能檢查劉麗燕劉麗燕哈醫(yī)大公衛(wèi)學(xué)院哈醫(yī)大公衛(wèi)學(xué)院哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康亩?shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理三、試劑與器材三、試劑與器材四、儀器的使用方法四、儀器的使用方法五、實(shí)驗(yàn)步驟五、實(shí)驗(yàn)步驟主要內(nèi)容主要內(nèi)容哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)1、掌握、掌握T6新悅新悅-可見(jiàn)分光光度計(jì)主要性能的檢定方可見(jiàn)分光光度計(jì)主要性能的檢定方 法和儀器的使用。法和儀器的使用。2、熟悉儀器的主要性能和技術(shù)指標(biāo)。、熟悉儀器的主要性能和技術(shù)指標(biāo)。3、了解儀器的基本結(jié)構(gòu)。、了解儀器的基本結(jié)構(gòu)。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康墓枮I醫(yī)

2、科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)紫外可見(jiàn)分光光度法紫外可見(jiàn)分光光度法ultraviolet-visible spectro-photometry, UVS是根據(jù)物質(zhì)的分子是根據(jù)物質(zhì)的分子對(duì)紫外可見(jiàn)光區(qū)輻射的吸收特征和吸收程度，對(duì)對(duì)紫外可見(jiàn)光區(qū)輻射的吸收特征和吸收程度，對(duì)物質(zhì)的組成進(jìn)行定性或定量及結(jié)構(gòu)分析的方法。物質(zhì)的組成進(jìn)行定性或定量及結(jié)構(gòu)分析的方法。Lambert-beer定律是分光光度法定量分析依據(jù)。定律是分光光度法定量分析依據(jù)。 A=b c可見(jiàn)光區(qū)可見(jiàn)光區(qū)400760nm紫外光區(qū)紫外光區(qū)200400nm二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)結(jié)構(gòu)示意圖：光源結(jié)構(gòu)示意圖：光源單色器單色器樣

3、品池樣品池檢測(cè)器檢測(cè)器信號(hào)顯示裝置信號(hào)顯示裝置一、主要部件一、主要部件（一光源：可見(jiàn)分光光度計(jì)（一光源：可見(jiàn)分光光度計(jì)鎢燈鎢燈 =320-2500nm =320-2500nm 紫外分光光度計(jì)紫外分光光度計(jì)氫燈，氘燈氫燈，氘燈=150-400nm=150-400nm（二單色器：將光源連續(xù)光譜按波長(zhǎng)順序色散并選出所需單（二單色器：將光源連續(xù)光譜按波長(zhǎng)順序色散并選出所需單 色光。色光。（三吸收池：普通玻璃和石英玻璃。（三吸收池：普通玻璃和石英玻璃。（四檢測(cè)器：光信號(hào)變成電信號(hào)光電管、光電倍增管）。（四檢測(cè)器：光信號(hào)變成電信號(hào)光電管、光電倍增管）。（五信號(hào)顯示裝置：將輸出信號(hào)經(jīng)處理轉(zhuǎn)換成透光度或吸光（

4、五信號(hào)顯示裝置：將輸出信號(hào)經(jīng)處理轉(zhuǎn)換成透光度或吸光 度再顯示或記錄下來(lái)。度再顯示或記錄下來(lái)。二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)1、試劑：氯化鈷溶液、試劑：氯化鈷溶液2、6、10mg/ml。2、器材：、器材：T6新悅可見(jiàn)分光光度計(jì)新悅可見(jiàn)分光光度計(jì) 玻璃吸收池；玻璃吸收池；100ml燒杯；燒杯； 鏡頭紙；濾紙；一次性吸管鏡頭紙；濾紙；一次性吸管三、試劑與器材三、試劑與器材哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)四、儀器的使用方法四、儀器的使用方法1、開(kāi)機(jī)：打開(kāi)電源，儀器初始化，約、開(kāi)機(jī)：打開(kāi)電源，儀器初始化，約3min完成。完成。 預(yù)熱預(yù)熱1h。2、選擇測(cè)量模式：在初始化完成之后，、選擇測(cè)

5、量模式：在初始化完成之后，系統(tǒng)默認(rèn)進(jìn)入吸光度測(cè)量界面。如果系統(tǒng)默認(rèn)進(jìn)入吸光度測(cè)量界面。如果要進(jìn)行透光度或定量測(cè)量，可以按要進(jìn)行透光度或定量測(cè)量，可以按MODE鍵進(jìn)行切換。鍵進(jìn)行切換。哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)3、設(shè)置測(cè)量波長(zhǎng)：、設(shè)置測(cè)量波長(zhǎng)：在測(cè)量界面下，按在測(cè)量界面下，按GOTO 鍵鍵 在數(shù)字在數(shù)字鍵盤上鍵入波長(zhǎng)數(shù)值鍵盤上鍵入波長(zhǎng)數(shù)值 按按ENTER鍵鍵4、設(shè)置吸收池模式和個(gè)數(shù)：、設(shè)置吸收池模式和個(gè)數(shù)：按按SHIFT/RETURN鍵，切換至系統(tǒng)應(yīng)用界面。鍵，切換至系統(tǒng)應(yīng)用界面。（1按上翻鍵，設(shè)置吸收池類型：按上翻鍵，設(shè)置吸收池類型：1CELL固定池，只有一個(gè)吸收池可用于測(cè)量。固定池，只有一

6、個(gè)吸收池可用于測(cè)量。5CELL五聯(lián)池，最多有五個(gè)吸收池可用于測(cè)五聯(lián)池，最多有五個(gè)吸收池可用于測(cè)量。量。8CELL八聯(lián)池，最多有八個(gè)吸收池可用于測(cè)八聯(lián)池，最多有八個(gè)吸收池可用于測(cè)量。量。哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)（2按下翻鍵，設(shè)置吸收池個(gè)數(shù)。按下翻鍵，設(shè)置吸收池個(gè)數(shù)。例如：如果實(shí)驗(yàn)需要例如：如果實(shí)驗(yàn)需要6個(gè)吸收池進(jìn)行測(cè)量，個(gè)吸收池進(jìn)行測(cè)量，那么吸收池類型應(yīng)設(shè)置為那么吸收池類型應(yīng)設(shè)置為8CELL，吸收池個(gè)數(shù)設(shè)為，吸收池個(gè)數(shù)設(shè)為6。留意：留意：1、設(shè)定的吸收池個(gè)數(shù)不應(yīng)大于實(shí)際中所用到的、設(shè)定的吸收池個(gè)數(shù)不應(yīng)大于實(shí)際中所用到的吸收池個(gè)數(shù)，由于：多余的吸收池位置，仍然會(huì)有吸收池個(gè)數(shù)，由于：多余的吸收池

7、位置，仍然會(huì)有入射光通過(guò)，此時(shí)光線直接進(jìn)入到檢測(cè)器中，強(qiáng)度入射光通過(guò)，此時(shí)光線直接進(jìn)入到檢測(cè)器中，強(qiáng)度比較大，容易使檢測(cè)器疲勞。比較大，容易使檢測(cè)器疲勞。2、設(shè)置吸收池個(gè)數(shù)的正確操作是按下翻鍵進(jìn)行選擇，、設(shè)置吸收池個(gè)數(shù)的正確操作是按下翻鍵進(jìn)行選擇，而非在數(shù)字鍵盤上鍵入。如鍵入而非在數(shù)字鍵盤上鍵入。如鍵入2，鎢燈將被關(guān)掉。，鎢燈將被關(guān)掉。哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)5、自動(dòng)校零：、自動(dòng)校零：按按SHIFT/RETURN鍵，切換到測(cè)量界面。鍵，切換到測(cè)量界面。在在1號(hào)吸收池中放入空白溶液，按號(hào)吸收池中放入空白溶液，按ZERO鍵進(jìn)行空白校正。鍵進(jìn)行空白校正。留意：空白校正這一步驟，一定要在各參數(shù)設(shè)置

8、完留意：空白校正這一步驟，一定要在各參數(shù)設(shè)置完成之后，樣品測(cè)量之前進(jìn)行；同理，如果在測(cè)量成之后，樣品測(cè)量之前進(jìn)行；同理，如果在測(cè)量過(guò)程中需要改變參數(shù)，那么在參數(shù)設(shè)置完成后，過(guò)程中需要改變參數(shù)，那么在參數(shù)設(shè)置完成后，要再次進(jìn)行空白校正。要再次進(jìn)行空白校正。哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)6 6、測(cè)量樣品：從、測(cè)量樣品：從2 2號(hào)吸收池開(kāi)始，號(hào)吸收池開(kāi)始，依次放入樣品，按依次放入樣品，按STARTSTART鍵，儀器測(cè)量鍵，儀器測(cè)量全部樣品，然后顯示出最后一個(gè)樣品的吸光度值。全部樣品，然后顯示出最后一個(gè)樣品的吸光度值。讀數(shù)：用上翻鍵可查看其他樣品吸光度值。讀數(shù)：用上翻鍵可查看其他樣品吸光度值。7 7、打

9、印結(jié)果：在已連接打印機(jī)的情況下，按、打印結(jié)果：在已連接打印機(jī)的情況下，按PRINTPRINT鍵打印數(shù)據(jù)。鍵打印數(shù)據(jù)。8 8、結(jié)束測(cè)量：按、結(jié)束測(cè)量：按SHIFT/RETURNSHIFT/RETURN鍵，從讀數(shù)界面返鍵，從讀數(shù)界面返回測(cè)量界面，關(guān)閉電源。回測(cè)量界面，關(guān)閉電源。留意：關(guān)電源后，系統(tǒng)中存儲(chǔ)的數(shù)據(jù)結(jié)果將丟失。留意：關(guān)電源后，系統(tǒng)中存儲(chǔ)的數(shù)據(jù)結(jié)果將丟失。哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué) 測(cè)量全部完成后，切換到測(cè)量界面，然測(cè)量全部完成后，切換到測(cè)量界面，然后關(guān)閉儀器電源。后關(guān)閉儀器電源。 用蒸餾水清洗吸收池，倒扣于濾紙上晾用蒸餾水清洗吸收池，倒扣于濾紙上晾干；如果吸收池污染嚴(yán)重，沖洗后置于干；

10、如果吸收池污染嚴(yán)重，沖洗后置于70708080的酒精中浸泡。的酒精中浸泡。 將用過(guò)的儀器、試劑等放回原位。將用過(guò)的儀器、試劑等放回原位。哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)五、實(shí)驗(yàn)步驟五、實(shí)驗(yàn)步驟1、儀器外觀檢查、儀器外觀檢查2、穩(wěn)定度檢測(cè)、穩(wěn)定度檢測(cè)3、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正與波長(zhǎng)重復(fù)性、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正與波長(zhǎng)重復(fù)性4、線性誤差檢查、線性誤差檢查5、透光度重現(xiàn)性檢定、透光度重現(xiàn)性檢定6、雜散輻射率、雜散輻射率7、吸收池的配套性檢定、吸收池的配套性檢定哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)1 1、儀器外觀檢查、儀器外觀檢查 2 2、穩(wěn)定度檢測(cè)、穩(wěn)定度檢測(cè) 零點(diǎn)穩(wěn)定度：波長(zhǎng)設(shè)置零點(diǎn)穩(wěn)定度：波長(zhǎng)設(shè)置500nm500nm，將吸

11、收池推桿推，將吸收池推桿推 至最頂端，按至最頂端，按“zero“zero鍵，調(diào)節(jié)吸光度為鍵，調(diào)節(jié)吸光度為0 0，觀察，觀察3min3min，記錄讀數(shù)。示值的最大漂移量，即為零點(diǎn)穩(wěn)，記錄讀數(shù)。示值的最大漂移量，即為零點(diǎn)穩(wěn)定度。定度。 技術(shù)指標(biāo)：技術(shù)指標(biāo)： 0.002 /3min 0.002 /3min四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)3 3、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正與波長(zhǎng)重復(fù)性：、波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正與波長(zhǎng)重復(fù)性：（1 1波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正）波長(zhǎng)準(zhǔn)確度校正）系統(tǒng)自動(dòng)檢測(cè)內(nèi)置鐠釹玻璃片系統(tǒng)自動(dòng)檢測(cè)內(nèi)置鐠釹玻璃片808.0nm808.0nm的的特征波長(zhǎng)，時(shí)間大約特征波長(zhǎng)，時(shí)間大約1min1min。檢測(cè)

12、完成后，系統(tǒng)顯示實(shí)測(cè)波長(zhǎng)值。檢測(cè)完成后，系統(tǒng)顯示實(shí)測(cè)波長(zhǎng)值。=示示-808 -808 1nm1nm時(shí)，按時(shí)，按enterenter鍵校正，鍵校正，=示示-808-8081nm1nm時(shí)，不需波長(zhǎng)校正，按鍵，時(shí)，不需波長(zhǎng)校正，按鍵，再按再按enterenter，系統(tǒng)返回系統(tǒng)應(yīng)用界面。，系統(tǒng)返回系統(tǒng)應(yīng)用界面。 開(kāi)機(jī)，預(yù)熱開(kāi)機(jī)，預(yù)熱按按SHIFT/RETURN按數(shù)字鍵按數(shù)字鍵9哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)（2 2波長(zhǎng)重現(xiàn)性檢定波長(zhǎng)重現(xiàn)性檢定 以蒸餾水為參比，測(cè)定以蒸餾水為參比，測(cè)定CoCl2CoCl2溶液溶液(6mg/ml)(6mg/ml)在在510nm510nm處的吸光度英文縮寫(xiě)為處的吸光度英文縮寫(xiě)

13、為A A或或ABSABS）。逐一作）。逐一作3 3次次丈量，記錄吸光度值。代入公式計(jì)算波長(zhǎng)重復(fù)性丈量，記錄吸光度值。代入公式計(jì)算波長(zhǎng)重復(fù)性, ,并繪制波并繪制波長(zhǎng)吸收曲線。長(zhǎng)吸收曲線。 3131maxiii 結(jié)果分析：重現(xiàn)性應(yīng)小于結(jié)果分析：重現(xiàn)性應(yīng)小于0.4nm。留意：吸收池不得有氣泡。倒溶液至三分之二處即可。留意：吸收池不得有氣泡。倒溶液至三分之二處即可。哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)4、線性誤差檢查：、線性誤差檢查：測(cè)量界面。測(cè)量界面。（1設(shè)置波長(zhǎng)鍵：設(shè)置波長(zhǎng)鍵： =510nm（2設(shè)置吸收池個(gè)數(shù)：設(shè)置吸收池個(gè)數(shù)：（3空白校正：空白校正：（4丈量：將丈量：將2、6、10mg/ml的的CoCl2

14、溶液溶液分別倒入分別倒入2、3、4號(hào)吸收池中，按號(hào)吸收池中，按START鍵開(kāi)始測(cè)量，記錄吸光度讀數(shù)。測(cè)量三次。鍵開(kāi)始測(cè)量，記錄吸光度讀數(shù)。測(cè)量三次。哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)計(jì)算并分析結(jié)果：計(jì)算并分析結(jié)果：線性誤差計(jì)算公式：線性誤差計(jì)算公式：%100*%100*%100*,333322221111332211321321AAAAAAAAAAAAKCAKCAKCACCCAAAK線性誤差線性誤差線性誤差結(jié)果分析：結(jié)果分析：吸光度值范圍吸光度值范圍允許線性允許線性誤差誤差0.10.360.30.630.60.84哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)5、透光度重現(xiàn)性檢定、透光度重現(xiàn)性檢定 以蒸餾水為參比，測(cè)

15、定以蒸餾水為參比，測(cè)定6mg/mlCoCl2510nm處的透光度英文縮寫(xiě)處的透光度英文縮寫(xiě)T），分別測(cè)定），分別測(cè)定3次，記次，記錄讀數(shù)。錄讀數(shù)。結(jié)果分析：重現(xiàn)性應(yīng)小于結(jié)果分析：重現(xiàn)性應(yīng)小于0.15。 3131maxiiiTTT 哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)6、雜散輻射率、雜散輻射率 以蒸餾水為參比，測(cè)定以蒸餾水為參比，測(cè)定50g/LNaNO2在在 360nm處的透光度，即為儀器在此波長(zhǎng)處的雜處的透光度，即為儀器在此波長(zhǎng)處的雜散輻射率。散輻射率。 技術(shù)指標(biāo)：技術(shù)指標(biāo)： 雜散輻射率雜散輻射率0.1哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)minmaxTTT7、吸收池的配套性檢定、吸收池的配套性檢定檢查方法：檢查方法：700nm分別測(cè)定蒸餾水透光度，空氣分別測(cè)定蒸餾水透光度，空氣調(diào)零，其中最大讀數(shù)與最小讀數(shù)之差，應(yīng)不超過(guò)規(guī)調(diào)零，其中最大讀數(shù)與最小讀數(shù)之差，應(yīng)不超過(guò)規(guī)定值。定值。 0.5%。T哈爾濱醫(yī)科大哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)本卷須知1、吸收池為光學(xué)玻璃制造，其透光面不能與硬物接、吸收池為光學(xué)玻璃制造，其透光面不能與硬物接 觸，也不得用手觸摸，池外溶液只能用擦鏡紙將觸，也不得用手觸摸，池外溶液只能用擦鏡紙將 毛面摺里面，