幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應用研究的認識

1、    幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應用研究的認識    吳肅摘 要：文章主要針對幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應用進行分析，結(jié)合當下牛結(jié)核病檢疫方法發(fā)展現(xiàn)狀，從實驗材料與方法、研究結(jié)果、研究分析方面進行深入研究與探索，更好的推動牛結(jié)核病檢疫方法的發(fā)展與進步。關鍵詞：牛結(jié)核??；檢疫方法；結(jié)核污染隨著我國畜牧業(yè)的快速發(fā)展，牛結(jié)核病情在我國的蔓延程度也逐漸加快，使得人們對于其檢疫方法逐漸重視，并通過科學方法實現(xiàn)對牛結(jié)核病的預防與控制。但當前我國經(jīng)常使用的方法為皮內(nèi)變態(tài)反應，而對其的運用也缺少相應的成熟性。一些發(fā)達國家則長使用皮內(nèi)變態(tài)反應與-

2、干擾素等試驗方法，進而在其良好的檢測效果影響下，使得其受到了人們的廣泛關注與認同。一、研究材料與方法1.研究材料。首先，準備較為完善的單純牛型提純結(jié)核菌素（ppd）與像一個的試劑盒。其中變態(tài)反應試劑主要分為進口牛型提純的ppd與禽型提純的ppd，同時還配備良好的牛結(jié)核分枝桿菌，即-干擾素檢測試劑盒。其次，研究使用的牛群主要為我國某地區(qū)2880頭活牛。2.研究方法。其一，牛結(jié)核皮內(nèi)變態(tài)反應實驗。其主要結(jié)合我國有關部門制定的動物結(jié)核并診斷技術標準進行科學的研究與處理。其二，歐美對比變態(tài)反應。其與牛結(jié)核變態(tài)反應實驗具有較強的相似性，也就是在對ppd注射的基礎上，在牛境位置的其他位置（最好為另一側(cè)）一

3、同注射注射進口牛型與禽型ppd，而兩者之間的間隔應為12厘米至15厘米之間，注射計量為每頭牛3000iu與2500iu。其中注射前后的實驗結(jié)果檢測應有同一人完成。其三，-干擾素檢測。這種實驗可分兩個方面：一方面為抗原刺激。對每頭牛都采集5ml肝素抗凝血液，并在室溫環(huán)境下30小時內(nèi)運輸?shù)綄嶒炍恢?。接著將各抗凝血提?.5ml防止在3個孔洞中，在使用100l牛型ppd、禽型ppd、陰性對照；磷鹽酸緩沖液等添加至抗凝全血中，在均勻攪拌后放置時在二氧化碳含量為5%的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16小時，其中培養(yǎng)箱溫度為37。同時在使用移液器對培養(yǎng)的上清液進行吸取，并將其防止在0.5ml離心管中，這就是刺激形成的-干擾

4、素上清。對其可第一時間使用相應的設備進行檢測或進行冷凍存儲，在條件與時間等允許時在進行檢測。另一方面為-干擾素酶聯(lián)免疫吸附實驗。即在單抗包被板上的各個孔洞中添加50l樣品稀釋液，接著在加入50l待檢測樣品，在混合后放置在室溫環(huán)境中一小時左右，這時在各孔洞中加入100l酶標抗體。并在背光的室溫環(huán)境下放置30min后添加終止液，步步高對其od值進行檢測。若牛型ppd刺激上清od值大于0.1，則明證其為陽性，若小于則為陰性。其四，頸部變態(tài)反應實驗。對該實驗附近各散戶牛群共13587頭活畜進行國內(nèi)的單純頸部變態(tài)反應檢疫處理。其五，歐盟比較變態(tài)反應。對在進行頸部變態(tài)反應實驗后檢測為陽性的牛進行比較變態(tài)反

5、應研究、-干擾素檢測以及病理解刨檢測等實驗，并通過實驗數(shù)發(fā)展，這幾種牛結(jié)核病檢疫方法的陽性符合率。二、研究結(jié)果對該研究地區(qū)附近共13587頭活畜進行頸部變態(tài)反應實驗后，檢測為陽性的數(shù)量為45頭。以此為基礎進行比較試驗可以發(fā)現(xiàn)，通過比較變態(tài)反應研究的牛型與禽型ppd分為20頭與6頭、-干擾素檢測發(fā)現(xiàn)牛型與禽型ppd分為28頭與3頭，而通過病理解剖發(fā)現(xiàn)具有病變數(shù)量為24頭。三、研究分析1.牛結(jié)核活禽檢疫方法的選擇。當前對于牛結(jié)核病的診斷措施通常為病原學診斷與免疫學診斷，其中病原學診斷可分為細菌學檢測與分子生物學檢測兩種技術。而在發(fā)達國家中經(jīng)常使用細菌學診斷方法，但因其分枝桿菌的生長較為緩慢，使得這

6、種方法在使用時需要消耗大量的時間。隨著科學技術的不斷發(fā)揮，一些研究人員創(chuàng)建了pcr對牛結(jié)核病進行診斷，各種試驗結(jié)果標準其敏感性相對較弱，其原因可能與體內(nèi)分支桿菌的繁殖特性具有一定的關聯(lián)。同時這些方法需要對死亡家禽病料進行收集，所以病原學檢測不太符合活禽檢疫需求。另外免疫學檢測方法可分為抗體檢測與細胞免疫檢測兩種方法，而其牛結(jié)核的免疫主要以免疫細胞為基礎，這也使得抗體檢測敏感度相對較小，所以當前在牛結(jié)核臨床診斷期間，細胞免疫學診斷方法有著較為廣泛的使用。2.干擾素實驗分析。當前牛-干擾素實驗檢測有著有著較為廣泛的使用與寬闊的發(fā)展空間，并逐漸成為發(fā)達國家主要的牛結(jié)核并檢疫方法。其中-干擾素試驗與進

7、口比較變態(tài)反應試驗都有著較強的符合率，同時還可在實驗中對直接進行這一試驗，使其判斷結(jié)果具有較強的客觀性，與皮試試驗相比較，試驗所需要使用的時間也相對較短。若在特殊條件下以-干擾素試驗為基礎與標準對檢疫結(jié)果為陽性的牛進行撲殺時，會有效的降低牛不殺數(shù)量，避免養(yǎng)殖人員出現(xiàn)不必要的經(jīng)濟損失。與此同時，這種方法還可與布病檢疫進行有機結(jié)合，即在進行一次抽血后可對兩種病疫進行科學的檢測。所以這也使得-干擾素試驗在牛結(jié)核病檢疫中有著較為廣闊的發(fā)展空間。同樣這一方法也存在著相應的不足與缺陷，其中檢測成本較高以及需要在具有較強水平實驗室中進行檢測是其主要的問題之一。3.比較變態(tài)反應分析?，F(xiàn)階段，各發(fā)達國家主要以比

8、較變態(tài)反應為基礎對結(jié)核檢測為陽性牛群進行捕殺。我國相關研究實驗也證明了，比較變態(tài)反應可較好對一些禽類ppd陽性牛進行清除，但卻認為禽型ppd陽性主要是由禽分支桿菌引發(fā)的非特異反應。在該次實驗中，這種檢測方法的陽性符合率約為47.8%，與-干擾素試驗的陽性符合率66.7%相比較小。而其禽型檢出率卻遠遠高于-干擾素試驗，其主主要原可能為人們操作以及主觀分析判斷期間相關因素所導致。4.病理解剖檢測。對病牛尸體進行解剖，進而較為直觀的分析與觀測結(jié)核病位置，這也是得該方法具有較強的直觀性。在該次研究期間，病理解刨與常規(guī)的ppd變態(tài)反應試驗的符合率都相對較小，而比較變態(tài)試驗與-干擾素試驗的符合率則相對較高

9、，這也在一定程度上表明了存在禽類結(jié)核的干擾，并充分的證明了-干擾素試驗與比較變態(tài)反應試驗具有較強的精準性。與此同時，在病理解刨期間若沒有發(fā)現(xiàn)結(jié)核病灶時，也不可證明其沒有感染結(jié)核病癥，其中病理解剖還有著相應的危險性，因此在臨床普查中的推廣受到阻礙。四、結(jié)語綜上所述，通過實際分析與研究后可以發(fā)現(xiàn)，國產(chǎn)ppd檢測仍屬于我國當前進行牛結(jié)核病檢疫期間，需要不斷進行推廣與優(yōu)化的主要技術與方法。該方法可較為良好的檢測出結(jié)核剛性牛，同時在輔助其他方法可更好的實現(xiàn)其發(fā)展與進步。參考文獻：1巴提馬·賽甫拉.牛結(jié)核病檢疫方法研究進展研究j.北京農(nóng)業(yè)，2014（27）.2徐敏，許禮義，王六合，王文秀，馬衛(wèi)平，呼西旦，徐志光，孫國林.幾種牛結(jié)核病檢疫方法在結(jié)核污染牛群中的應用研究j.草食家畜，2011（02）.3劉金曄，郝永清.牛結(jié)核病檢疫方法