藥物分析答案培訓(xùn)

1、1、樣品前處理目的、樣品前處理方法都有哪些？常用C18固相萃取法原理、洗脫步驟、注意事項(xiàng)。1樣品前處理目的：（1）濃縮痕量的被測(cè)組分，提高方法的靈敏度，降低檢測(cè)限；（2）去除樣本中的基體及其他干擾物質(zhì)；（3）通過衍生化，使被測(cè)物轉(zhuǎn)化成為檢測(cè)靈敏度更高的物質(zhì)或轉(zhuǎn)化為及樣本中干擾組分能夠分離的物質(zhì)，提高方法的靈敏度和選擇性；（4）保護(hù)下游分析儀器以及測(cè)試系統(tǒng)、避免影響整機(jī)性能及壽命。2樣品前處理方法：沉淀，液液萃取，固相提取，滲析/超濾，電泳，蒸餾/蒸發(fā)3常用C18固相萃取法原理：固相提取：利用固相吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物吸附，及樣品的基體和干擾化合物分離，然后再用洗脫液洗脫，達(dá)到分離和和富

2、集的目的。利用雜質(zhì)或目標(biāo)化合物及樣品基體溶劑和吸附劑之間親和力的相對(duì)大小差異實(shí)現(xiàn)凈化分離。4洗脫步驟：（1）活化:依次用強(qiáng)溶劑、弱溶劑（緩沖溶液）進(jìn)行活化；（2）上樣：用能夠溶解樣品的弱溶劑攜帶樣品上柱，既要保證樣品分析物的有效溶解，又要確保溶劑強(qiáng)度不至于把被分析化合物從柱上洗脫下來；（3）淋洗：用具有一定強(qiáng)度的混合溶劑淋洗去除干擾雜質(zhì)，確保雜質(zhì)被洗脫，而被分析化合物有效的保留在柱上；（4）洗脫：用較強(qiáng)的溶劑把被分析化合物從柱上替換洗脫下來。5注意事項(xiàng)：（1）根據(jù)分析目標(biāo)物的理化性質(zhì)選擇合適的柱；（2）一般柱要防止干涸；（3）注意控制柱載量，防止穿透過載；（4）嚴(yán)格控制上樣液和洗脫液滴速；（5

3、）防止混濁樣品堵塞柱子；2、以高效液相色譜法測(cè)定某類藥物含量為例，試述分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容。（查閱文獻(xiàn)）系統(tǒng)適應(yīng)性：1準(zhǔn)確度：指用該方法測(cè)定的結(jié)果及真實(shí)值或參考值接近的程度，用百分回收率表示2精密度：是指在規(guī)定條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差()、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差()（變異系數(shù)，）表示。 A重復(fù)性 :在相同條件下，由同一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度； B中間精密度：同一實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備所得結(jié)果的精密度。C重現(xiàn)性：不同實(shí)驗(yàn)室，不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度。3專屬性：指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法

4、能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力。是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)相互干擾程度的度量。4檢測(cè)限：試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低量。常用%、表示。5定量限：是一種含量測(cè)定的定量參數(shù)，指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。常用%、表示。6標(biāo)準(zhǔn)曲線：在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測(cè)試結(jié)果及試樣中被測(cè)物濃度直接呈正比關(guān)系的程度7線性范圍：指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的條件下，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。8耐用性：指測(cè)定條件稍有變動(dòng)時(shí)，結(jié)果不受影響的承受程度，為常規(guī)檢驗(yàn)提供依據(jù)。是衡量實(shí)驗(yàn)室和工作人員之間在正常情況下實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性的尺度。3、

5、簡(jiǎn)述高效色譜原理，從速率理論方程出發(fā)試述影響分離的因素1.高效色譜原理:當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí)，其及固定相發(fā)生相互作用。由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異，及固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同，隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，混合物在兩相間經(jīng)過反復(fù)多次的分配平衡，使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同，從而按一定次序由固定相中流出。及適當(dāng)?shù)闹髾z測(cè)方法結(jié)合，實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離及檢測(cè)。2從速率理論方程出發(fā)試述影響分離的因素: 速率方程（也稱范-弟姆特方程式）H = A + + C·u H：理論塔板高度， u：載氣的線速度(1) = 2：固定相的平均顆粒直徑：固定相的填充不均勻因子

6、固定相顆粒越小，填充的越均勻，A，H，柱效n。表現(xiàn)在渦流擴(kuò)散所引起的色譜峰變寬現(xiàn)象減輕，色譜峰較窄。(2).B = 2 ：彎曲因子，填充柱色譜，<1。：試樣組分分子在氣相中的擴(kuò)散系數(shù)（2·1） (1) 存在著濃度差，產(chǎn)生縱向擴(kuò)散; (2) 擴(kuò)散導(dǎo)致色譜峰變寬，H(n)，分離變差; (3) 分子擴(kuò)散項(xiàng)及流速有關(guān)，流速，滯留時(shí)間，擴(kuò)散; (4) 擴(kuò)散系數(shù)：(M載氣)-1/2 ；M載氣，B值。(3).C ·u 傳質(zhì)阻力項(xiàng)傳質(zhì)阻力包括氣相傳質(zhì)阻力和液相傳質(zhì)阻力即：C =（ + ）k為容量因子；、為擴(kuò)散系數(shù)。減小擔(dān)體粒度，選擇小分子量的氣體作載氣，可降低傳質(zhì)阻力。4、簡(jiǎn)述色譜系

7、統(tǒng)適用性試驗(yàn)。答案1：定義：該實(shí)驗(yàn)是把分析設(shè)備、電子儀器、實(shí)驗(yàn)操作和被 分析樣品作為一個(gè)整體來進(jìn)行評(píng)估。系統(tǒng)適應(yīng)性參數(shù)是根據(jù)被驗(yàn)證的方法類型，對(duì)某一特定方法而建立的。比如：有關(guān)物質(zhì)著重考慮某兩個(gè)相鄰的峰分離度，拖尾因子、面積，理論塔板數(shù); 含量分析方法考慮面積,拖尾因子，理論塔板數(shù)等。()答案2：色譜系統(tǒng)的適用性試驗(yàn)通常包括理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子等四個(gè)指標(biāo)。其中，分離度和重復(fù)性是系統(tǒng)適用性試驗(yàn)中更重大的參數(shù)。按各品種項(xiàng)下要求對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行適用性試驗(yàn)，即用規(guī)定的對(duì)照品溶液或系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行試驗(yàn)，必要時(shí)，可對(duì)色譜系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，應(yīng)適合要求。（1）色譜柱的理論板數(shù)（n）

8、 用于評(píng)價(jià)色譜柱的效用。在規(guī)定的色譜條件下，注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分峰或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同，但應(yīng)取相同單位）和峰寬（W）或半高峰寬（2），按16()2 或5.54（2）2 計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)。（2）分離度（R） 用于評(píng)價(jià)待測(cè)組分及相鄰共存物或難分離物質(zhì)之間的分離水平，是衡量色譜系統(tǒng)效用的主要指標(biāo)。除另有規(guī)定外，待測(cè)組分及相鄰共存物之間的分離度應(yīng)大于1.5；或通過驗(yàn)證，待測(cè)組分及指標(biāo)性成分之間的分離度應(yīng)大于某一規(guī)定值。分離度的計(jì)算公式為：2（21）/(W12) 或2（21）/1.70(W1, 22, 2)式中 2 為相鄰

9、兩峰中后一峰的保留時(shí)間；     1 為相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間；     W1 及W2 為此相鄰兩峰的峰寬（如圖）。當(dāng)對(duì)測(cè)定結(jié)果有歧義時(shí)，色譜柱的理論塔板數(shù)（n）和分離度（R）均以峰寬（W）的計(jì)算結(jié)果為準(zhǔn)。（3）重復(fù)性 用于評(píng)價(jià)連續(xù)進(jìn)樣后，色譜系統(tǒng)響應(yīng)值的重復(fù)性能。采用外標(biāo)法時(shí)，通常取各品種項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5 次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)尺度錯(cuò)誤應(yīng)不大于2.0%；采用內(nèi)標(biāo)法時(shí)，通常配制相當(dāng)于80%、100%和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3 種不同濃度的溶液，離別至少進(jìn)樣2

10、 次，計(jì)算平均校正因子。其相對(duì)尺度錯(cuò)誤應(yīng)不大于2.0%。（4）拖尾因子（T） 用于評(píng)價(jià)色譜峰的對(duì)稱性。為保障分離效果和測(cè)量精度，應(yīng)檢驗(yàn)待測(cè)峰的拖尾因子是否適合各品種項(xiàng)下的規(guī)定。拖尾因子計(jì)算公式為：    0.052d1式中W0.05h 為5峰高處的峰寬；d1 為峰頂點(diǎn)至峰前沿之間的距離。除另有規(guī)定外，峰高法定量時(shí)T 應(yīng)在0.951.05 之間。峰面積法測(cè)定時(shí)，若拖尾嚴(yán)重，將影響峰面積的準(zhǔn)確測(cè)量。必要時(shí)，可依據(jù)情況對(duì)拖尾因子作出規(guī)定。5、簡(jiǎn)述液質(zhì)聯(lián)用中離子化方式，其原理、特點(diǎn)。答：液質(zhì)聯(lián)用中離子化方式分為電噴霧電離()和大氣壓化學(xué)電離()。（）電噴霧電離()原理：在

11、帶電小液滴溶劑蒸發(fā)，產(chǎn)生離子發(fā)射的過程中形成的，溶劑由液相泵輸送到 ，經(jīng)其內(nèi)的不銹鋼毛細(xì)管，從毛細(xì)管的頂端流出，這時(shí)毛細(xì)管被加了24的高壓，由于高壓和霧化氣的作用，流動(dòng)相從毛細(xì)管頂端流出時(shí)，會(huì)形成扇狀噴霧(含樣品和溶劑離子的小液滴）。電噴霧電離()特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)Ø 分子量確認(rèn)Ø 適合于揮發(fā)及不揮發(fā)的溶質(zhì)Ø 適合于離子化及極性的溶質(zhì)Ø 好的靈敏度Ø 高分子量測(cè)定Ø 適合于毛細(xì)管色譜缺點(diǎn)Ø 相對(duì)較低的流速。Ø 在溶液中必須離子化。Ø 在高鹽條件下會(huì)發(fā)生離子抑制。Ø 產(chǎn)生加和離子影響結(jié)果。Ø 有

12、限的結(jié)構(gòu)信息（）：大氣壓化學(xué)電離()原理：在大氣壓條件下利用尖端高壓（電暈）放電促使溶劑和其他反應(yīng)物電離、碰撞，及電荷轉(zhuǎn)移等方式，形成一個(gè)反應(yīng)氣等離子區(qū)，樣品分子通過等離子區(qū)時(shí)，發(fā)生質(zhì)子轉(zhuǎn)移，形成了(MH) 或 ()離子或加和離子。大氣壓化學(xué)電離()特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)Ø 利用所得到1+及1進(jìn)行分子量確認(rèn)Ø 源參數(shù)調(diào)整簡(jiǎn)單，容易使用Ø 耐受性好，噴霧器及針的位置不關(guān)鍵Ø 流速可達(dá)2.0Ø 好的靈敏度缺點(diǎn)Ø 有限的結(jié)構(gòu)信息Ø 易發(fā)生熱裂解Ø 低質(zhì)量時(shí)化學(xué)噪聲大Ø 不適合做分子量大于1000的化合物Ø 大多數(shù)

13、的接口需要揮發(fā)性緩沖液6、離子色譜法原理、檢測(cè)器種類，其關(guān)鍵部件抑制器及淋洗液發(fā)生器的作用；簡(jiǎn)述脈沖安培檢測(cè)器測(cè)定糖類或氨基酸的原理。1. 離子色譜法原理：離子色譜的分離機(jī)理主要是離子交換，有3種分離方式，它們是高效離子交換色譜（）、離子排斥色譜 （）和離子對(duì)色譜 （）。用于3種分離方式的柱填料的樹脂骨架基本都是苯乙烯-二乙烯基苯的共聚物，但樹脂的離子交換功能基和容量各不相同。用低容量的離子交換樹脂，用高容量的樹脂，用不含離子交換基團(tuán)的多孔樹脂。3種分離方式各基于不同分離機(jī)理。的分離機(jī)理主要是離子交換，主要為離子排斥，而則是主要基于吸附和離子對(duì)的形成 。2. 離子色譜法檢測(cè)器種類:電導(dǎo)檢測(cè)器；

14、安培檢測(cè)器，紫外可見檢測(cè)器；熒光檢測(cè)器；電子捕獲質(zhì)譜檢測(cè)器。3. 抑制器的作用及淋洗液發(fā)生器的作用：A降低背景噪聲B提高檢測(cè)靈敏度4. 脈沖安培檢測(cè)器測(cè)定糖類或氨基酸的原理：用安培法檢測(cè)氨基酸：通常采用金工作電極、（或玻璃）參比電極和鈦對(duì)電極。在 1213 溶液中，在金工作電極和參比電極之間施加一個(gè)較高的電位，氨基酸在金電極表面被氧化，大多數(shù)氨基酸開始先被氧化為亞胺（1），然后進(jìn)一步氧化為腈基化合物（2），另外，少量的亞胺發(fā)生水解生成醛類化合物（3）反應(yīng)過程如下：（1）(2) + 2 + + 2（2） + 2 + 2（3） + H2O + 37、簡(jiǎn)述氣相色譜法，常用檢測(cè)器、種類和特點(diǎn)及其在藥品

15、溶劑殘留測(cè)定中的應(yīng)用。1).常用檢測(cè)器: 熱導(dǎo)檢測(cè)器、氫火焰離子化檢測(cè)器、電子捕獲檢測(cè)器、火焰光度檢測(cè)器、氮磷檢測(cè)器。2).種類：根據(jù)檢測(cè)器的響應(yīng)原理，可將其分為濃度型和質(zhì)量型檢測(cè)器。濃度型：檢測(cè)的是載氣中組分濃度的瞬間變化，即響應(yīng)值及濃度成正比。如、。質(zhì)量型：檢測(cè)的是載氣中組分進(jìn)入檢測(cè)器中速度變化，即響應(yīng)值及單位時(shí)間進(jìn)入檢測(cè)器的質(zhì)量成正比。如、。根據(jù)應(yīng)用范圍，分為通用型檢測(cè)器和選擇型檢測(cè)器通用型：對(duì)所有物質(zhì)有響應(yīng)，如、。選擇型：對(duì)特定物質(zhì)有高靈敏響應(yīng)，如、。根據(jù)工作過程，分為破壞型檢測(cè)器和非破壞型檢測(cè)器破壞型：檢測(cè)過程中樣品遭到破壞，不能回收。如、。非破壞型：檢測(cè)過程中樣品不遭到破壞，可以回

16、收。如、。3).特點(diǎn)及其應(yīng)用：符號(hào)檢測(cè)方法物理常數(shù)法氣相電離法氣相電離法光度法氣相電離法質(zhì)譜法工作原理熱導(dǎo)率差異火焰電離化學(xué)電離分子發(fā)射熱表面電離電離及質(zhì)量色散結(jié)合類型濃度型通用型非破壞性質(zhì)量型準(zhǔn)通用型破壞性質(zhì)量型選擇型非破壞性濃度型選擇型破壞性質(zhì)量型選擇型破壞性質(zhì)量選擇型靈敏度250010-11g10-13g硫10-10g磷10-11g氮5×10-11g磷2×10-12g線形范圍104106102-104硫102磷103-104105105應(yīng)用范圍所有化合物有機(jī)化合物電負(fù)性化合物硫、磷化合物氮、磷化合物、農(nóng)藥殘留所有化合物(結(jié)構(gòu)檢定)應(yīng)用1：在職業(yè)病和法庭分析中，經(jīng)常要測(cè)

17、定體液等中的苯、甲苯、二甲苯等有毒成分，采用頂空分析是一種有效、方便、快速的方法。司法部司法鑒定科學(xué)技術(shù)學(xué)院制訂了分析水、尿、血中苯類化合物的靜態(tài)頂空分析方法。方法： 5青霉素小瓶，取1試樣（水、尿、血），加入0.4內(nèi)標(biāo)物和約1g硫酸銨至飽和，加蓋密封，置于80 °C的恒溫器中30，取0.6頂空的氣樣色譜分析。色譜柱：2m× 2；80-100目；固定液 20M柱溫：110 °C ，以10 °C 程序升溫到110 °C。應(yīng)用2：分析血樣中的酒精是頂空氣相色譜應(yīng)用最廣泛的方法，可檢查汽車司機(jī)是否酒后駕車。方法： 樣品平衡溫度 50°C；平

18、衡時(shí)間 30； 色譜柱：30m × 0.53；石英毛細(xì)管柱； 固定液：聚二甲苯硅氧烷；8、原子發(fā)射光譜的原理，及其在中藥產(chǎn)品中重金屬分析方面的優(yōu)缺點(diǎn)。（文獻(xiàn)）1. 原子發(fā)射光譜的原理：原子發(fā)射光譜法是根據(jù)處于激發(fā)態(tài)的待測(cè)元素原子回到基態(tài)時(shí)發(fā)射的特征譜線對(duì)待測(cè)元素定性及定量分析的方法。原子發(fā)射光譜法包括了三個(gè)主要的過程，即：由光源提供能量使樣品蒸發(fā)、形成氣態(tài)原子、并進(jìn)一步使氣態(tài)原子激發(fā)而產(chǎn)生光輻射；將光源發(fā)出的復(fù)合光經(jīng)單色器分解成按波長(zhǎng)順序排列的譜線，形成光譜；用檢測(cè)器檢測(cè)光譜中譜線的波長(zhǎng)和強(qiáng)度。由于待測(cè)元素原子的能級(jí)結(jié)構(gòu)不同，因此發(fā)射譜線的特征不同，據(jù)此可對(duì)樣品進(jìn)行定性分析；而根據(jù)待測(cè)元素原子的濃度不同，因此發(fā)射強(qiáng)度不同，可實(shí)現(xiàn)元素的定量測(cè)定。2. 及其在中藥產(chǎn)品中重金屬分析方面的優(yōu)缺點(diǎn)（文獻(xiàn)）：優(yōu)點(diǎn)：檢出限低、精密度高、選擇性好、基體效應(yīng)小、線性范圍寬和多元素同時(shí)測(cè)定。缺點(diǎn)：9、藥品穩(wěn)定性測(cè)試目的、原料藥穩(wěn)定性測(cè)試的