微生物的實驗室培養(yǎng)

1、專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1 微生物的實驗室培養(yǎng)一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識1、微生物、微生物 一切肉眼看不見或看不清的微小生一切肉眼看不見或看不清的微小生物的總稱。如病毒、細(xì)菌、真菌、原物的總稱。如病毒、細(xì)菌、真菌、原生生物等。生生物等。HIV大腸桿菌大腸桿菌酵母菌酵母菌如圖是酵母菌電子顯微如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉真菌真菌變形蟲變形蟲草履蟲草履蟲2 2、培養(yǎng)基、培養(yǎng)基（1 1）培養(yǎng)基的類型）培養(yǎng)基的類型按物理按物理性質(zhì)分性質(zhì)分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基按化學(xué)按化學(xué)組成分組成分天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基按目的按

2、目的用途分用途分鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基：用于菌種鑒定：用于菌種鑒定：用于菌種分離：用于菌種分離2 2、培養(yǎng)基、培養(yǎng)基（1 1）培養(yǎng)基的類型）培養(yǎng)基的類型按物理按物理性質(zhì)分性質(zhì)分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基常用的固體培養(yǎng)基：常用的固體培養(yǎng)基：瓊脂瓊脂固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可形微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可形成肉眼可見的成肉眼可見的菌落菌落。其中固體培養(yǎng)基用于其中固體培養(yǎng)基用于菌種保存及分離、鑒菌種保存及分離、鑒定菌落、活菌計數(shù)定菌落、活菌計數(shù)等，液體培養(yǎng)基常用于等，液體培養(yǎng)基常用于發(fā)酵工業(yè)。發(fā)酵工業(yè)。用于菌種的分離用于菌種的分離菌落：菌落：

3、單個或少數(shù)細(xì)菌在固體單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見的，會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。細(xì)胞群體，叫做菌落。不同的細(xì)菌的菌落特征不同不同的細(xì)菌的菌落特征不同菌落是鑒定菌種的菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征因種而異 液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔（2 2）按功能分：）按功能分：選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基。（2 2）按功能分類）按功能分類種類種類制備方法制備方法原理原理用途

4、用途舉例舉例培養(yǎng)培養(yǎng)基基依據(jù)某些微生物依據(jù)某些微生物對某些物質(zhì)的抗對某些物質(zhì)的抗性而設(shè)計性而設(shè)計加入青霉加入青霉素分離得素分離得到酵母菌到酵母菌和霉菌和霉菌培養(yǎng)培養(yǎng)基基依據(jù)微生物產(chǎn)生依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特與培養(yǎng)基中的特定試劑或化學(xué)藥定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而顯的特征變化而設(shè)計設(shè)計伊紅伊紅美美藍(lán)藍(lán)培養(yǎng)基培養(yǎng)基可以鑒別可以鑒別大腸桿菌大腸桿菌選擇選擇鑒別鑒別加入某些化加入某些化學(xué)物質(zhì)學(xué)物質(zhì)加入某種加入某種試劑或化試劑或化學(xué)藥品學(xué)藥品從眾多微從眾多微生物中生物中分分離所需離所需的的微生物微生物鑒別鑒別不同不同種類的微種類的微生物生物選擇

5、培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基:從微生物群中選擇具有從微生物群中選擇具有特定表型的細(xì)胞特定表型的細(xì)胞.使之進(jìn)行繁殖所用使之進(jìn)行繁殖所用的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基,稱為稱為選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基. 加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌 不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物 天然培養(yǎng)基有血清、天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸（

6、如雞胚和牛胚浸液）。液）。優(yōu)點：優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好培養(yǎng)效果好缺點：缺點：來源受限來源受限; ;成分成分復(fù)雜，影響對某些實復(fù)雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支易發(fā)生支原體污染原體污染; ; 根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點：優(yōu)點：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定分和含量相對固

7、定; ;成本低成本低 缺點：缺點： 缺少某些成分，缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要。長需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: :天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基：（3）按成分分：）按成分分：天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基。（2 2）培養(yǎng)基的基本成分）培養(yǎng)基的基本成分水、碳源、氮源、無機鹽水、碳源、氮源、無機鹽、思考一：從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來看，思考一：從細(xì)胞的化學(xué)元素組成來看，培養(yǎng)基中為什么都會含有這些營養(yǎng)成培養(yǎng)基中為什么都會含有這些營養(yǎng)成分？分？ C C、H H、O O、N N、P P、S S是構(gòu)成細(xì)胞是構(gòu)成細(xì)胞原生質(zhì)的基本元素，約占原生質(zhì)總量原生質(zhì)的基本元素，約占

8、原生質(zhì)總量的的9797以上。以上。碳源碳源：氮源氮源： 二氧化碳、碳酸鹽等無機碳源二氧化碳、碳酸鹽等無機碳源糖類（主要）、蛋白質(zhì)、脂肪酸糖類（主要）、蛋白質(zhì)、脂肪酸等有機碳源等有機碳源氮氣、氨氣、氨鹽、硝酸鹽等氮氣、氨氣、氨鹽、硝酸鹽等無機氮源無機氮源蛋白胨、牛肉膏等有機氮源蛋白胨、牛肉膏等有機氮源 不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水水、碳碳源源、和、和氮源氮源、 無機鹽無機鹽、等等營養(yǎng)物質(zhì)，營養(yǎng)物質(zhì)， 另外還需要滿足微生物生長對：另外還需要滿足微生物生長對：氧氣的氧氣的含量含量pHpH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、特殊營養(yǎng)物質(zhì), ,特殊營養(yǎng)物質(zhì)特殊營養(yǎng)物質(zhì)即即：例如例如: :生長因子生

9、長因子(即細(xì)菌生長必需，而自身即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶嘌呤、嘧啶) )血清中含有：血清中含有：多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）多種金屬離子；多種金屬離子； 激素；激素；促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。原等。各種生長因子各種生長因子轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)移蛋白不明成分不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基細(xì)胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培

10、養(yǎng)基（如血清）。（如血清）。1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)提供的主要營養(yǎng)牛肉膏牛肉膏5g蛋白胨蛋白胨10gNaCl5gH2O定容至定容至1000mL碳源、磷酸鹽和維生素碳源、磷酸鹽和維生素氮源和維生素氮源和維生素?zé)o機鹽無機鹽氫元素、氧元素氫元素、氧元素2.2.不同的微生物往往需要采用不同的不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方培養(yǎng)基配方 (參考教材附錄內(nèi)容參考教材附錄內(nèi)容)。思考二：思考二： 你有什么方法可以區(qū)分某一微生物你有什么方法可以區(qū)分某一微生物是自養(yǎng)生物還是異養(yǎng)生物嗎？是自養(yǎng)生物還是異養(yǎng)生物嗎？思考三：思考三：

11、你有什么方法可以將固氮菌從其他你有什么方法可以將固氮菌從其他微生物中分離出來嗎？微生物中分離出來嗎？ 培養(yǎng)基的配制原則培養(yǎng)基的配制原則： 目的要明確：目的要明確：根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的根據(jù)培養(yǎng)的微生物種類、培養(yǎng)的目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。目的等確定培養(yǎng)基的類型和配制量。 營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：營養(yǎng)要協(xié)調(diào)：培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例要適宜。例如：碳氮比比例要適宜。例如：碳氮比4 1時，谷氨酸棒狀時，谷氨酸棒狀桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為桿菌大量繁殖而產(chǎn)生谷氨酸少；碳氮比為3 1時，時，菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。菌體繁殖受抑制而谷氨酸合成量大增。

12、 pH要適宜要適宜：細(xì)菌培養(yǎng)基：細(xì)菌培養(yǎng)基pH中性或偏堿性，霉菌中性或偏堿性，霉菌培養(yǎng)基呈酸性。培養(yǎng)基呈酸性。 細(xì)菌細(xì)菌pH為為：6.5-7.5； 放線菌放線菌pH為：為：7.5-8.5； 真菌真菌pH為：為：5.0-6.03、無菌技術(shù)、無菌技術(shù)（1）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是）獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵防止外來雜菌的入侵（2）無菌技術(shù)主要包括哪些方面？）無菌技術(shù)主要包括哪些方面？（）（）消毒定義：消毒定義：指使用較為指使用較為溫和的物理或化學(xué)方溫和的物理或化學(xué)方法法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物體有害的微生物。（不包括芽孢和孢子）（不包括

13、芽孢和孢子）2.2.消毒與滅菌消毒與滅菌 有些細(xì)菌在一定的條有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做橢圓形的休眠體，叫做芽芽孢孢。芽孢的壁很厚，對干。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。環(huán)境有很強的抵抗力。 例如，有的細(xì)菌的芽例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸孢，煮沸3 3小時以后才死小時以后才死亡。芽孢又小又輕，可以亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌形成一個細(xì)菌. .（2 2）滅菌的定義

14、：）滅菌的定義：使用使用強烈的理化因素強烈的理化因素殺死物體殺死物體內(nèi)外內(nèi)外所有的所有的微生物微生物，包括芽孢，包括芽孢和和孢子孢子，而達(dá)到，而達(dá)到完全無菌完全無菌之過程。之過程。 滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工滅菌消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。作中最普通也是最重要的技術(shù)。1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min，如牛奶的消毒如牛奶的消毒3 3、化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用70%70%酒精進(jìn)行皮酒精進(jìn)行皮膚消

15、毒膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源石碳酸、煤酚皂溶石碳酸、煤酚皂溶液等液等4 4、紫外線消毒紫外線消毒(1)消毒的方法：消毒的方法：3.3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法3、無菌技術(shù)、無菌技術(shù)（5）滅菌的方法）滅菌的方法a、灼燒滅菌灼燒滅菌：接種環(huán)、接種針、試管口接種環(huán)、接種針、試管口微生物的接種工具（接種環(huán)、接種微生物的接種工具（接種環(huán)、接種針）或其他金屬用具直接在火焰的針）或其他金屬用具直接在火焰的灼燒灼燒3、無菌技術(shù)、無菌技術(shù)（5）滅菌的方法）滅菌的方法a、灼燒滅菌：、灼燒滅菌：b、干熱滅菌：干熱滅菌：接種環(huán)、接種針、試管口接種環(huán)、接種針、試管口160170 ；12h

16、能耐高溫的需要保持能耐高溫的需要保持干燥的物品干燥的物品（玻璃器皿、金屬用具）（玻璃器皿、金屬用具）3、無菌技術(shù)、無菌技術(shù)（5）滅菌的方法）滅菌的方法a、灼燒滅菌：、灼燒滅菌：b、干熱滅菌：、干熱滅菌：c、高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌：接種環(huán)、接種針、試管口接種環(huán)、接種針、試管口100kPa 121 15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌通常用于培養(yǎng)基的滅菌 最常用的滅菌方法是最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。養(yǎng)基的營養(yǎng)成分

17、不被破壞。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。，而空氣中的其他微生物不能通過。 理化因素的作理化因素的作用強度用強度消滅微生物的消滅微生物的數(shù)量數(shù)量芽孢和孢子芽孢和孢子能否被消滅能否被消滅消毒消毒滅菌滅菌比較消毒和滅菌比較消毒和滅菌溫和的物理或溫和的

18、物理或化學(xué)方法化學(xué)方法強烈的理化因素強烈的理化因素殺死物體表面或殺死物體表面或內(nèi)部一部分內(nèi)部一部分殺死物體內(nèi)外所殺死物體內(nèi)外所有的微生物有的微生物否否是是思考四：思考四： 無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？有什么目的？無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。微生物感染。思考五：思考五：請你判斷以下材料或用具是否需要消毒請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。法。培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培

19、養(yǎng)基與培養(yǎng)皿滅菌滅菌 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手消毒消毒滅菌滅菌 二、二、實驗操作實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算計算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板思考思考1：為什么牛肉膏要用玻棒挑取，：為什么牛肉膏要用玻棒挑取， 并放在稱量紙上稱量？并放在稱量紙上稱量？ 牛肉膏比較黏稠牛肉膏比較黏稠（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算計算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板思考思考2：為什么稱取牛肉膏時動作要迅：為什么稱取牛肉膏時動作要迅 速，稱后搖及時蓋上瓶蓋？速，稱后搖及時

20、蓋上瓶蓋？ 牛肉膏（或蛋白胨）容易吸潮牛肉膏（或蛋白胨）容易吸潮（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算計算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板思考思考3：為什么要將稱好的牛肉膏連同：為什么要將稱好的牛肉膏連同 稱量紙一同放入燒杯中加熱？稱量紙一同放入燒杯中加熱？ 可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也可保證粘附在稱量紙上的牛肉膏也能溶于水中，減小誤差。能溶于水中，減小誤差。（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算計算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板思考思考4：加瓊脂的目的是什么？：加瓊脂的目的是什么？ 作為凝固劑作為凝固劑二、實驗操作二、實

21、驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算計算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板思考思考5：加入瓊脂后，為什么要用玻棒：加入瓊脂后，為什么要用玻棒 不斷攪拌？不斷攪拌？ 防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算計算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板思考思考6：在滅菌前，用牛皮紙或舊報紙：在滅菌前，用牛皮紙或舊報紙 包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目 的是什么？的是什么？在滅菌時能避免水蒸氣凝結(jié)時浸濕棉在滅菌時能避免水蒸氣凝結(jié)時浸濕棉塞；在取出錐形瓶時，也起到

22、隔絕空塞；在取出錐形瓶時，也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。氣中雜菌污染的作用。（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基計算計算稱量稱量溶化溶化滅菌滅菌倒平板倒平板思考思考7：培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？：培養(yǎng)皿能否用高壓蒸汽滅菌？ 不能，因為培養(yǎng)皿要保持干燥，不能，因為培養(yǎng)皿要保持干燥，應(yīng)該用干熱滅菌。應(yīng)該用干熱滅菌。倒平板倒平板 1.1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？估計培養(yǎng)基的溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐

23、形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。時，就可以進(jìn)行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。的微生物污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)

24、水珠，凝固后答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。這個平板培養(yǎng)微生物。二、實驗操作二、實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（二）純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌 常用的接

25、種方法：常用的接種方法： 平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法和稀釋涂布平板法。1.平板劃線法 1. 1.為什么在操作的第一步以及每次劃線為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物； 每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌

26、種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。漸減少，以便得到菌落。 劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。 2. 2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3. 3.在作第

27、二次以及其后的劃線操作在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。而來的菌落。2.稀釋涂布法稀釋涂布法（1）系列稀釋操作：）系列稀釋操作：移液管移液管電動助吸器電動助吸器/電動移液器電動移液器移液槍槍頭移液槍槍頭微量移液器微量移液器

28、（2）涂布平板操作）涂布平板操作這個方法可用于細(xì)菌的純化；這個方法可用于細(xì)菌的純化；可選擇最后一個稀釋度的菌液進(jìn)行可選擇最后一個稀釋度的菌液進(jìn)行涂板。涂板。也可用于樣品中活菌的數(shù)目；也可用于樣品中活菌的數(shù)目；選擇幾個稀釋度的菌液進(jìn)行涂板。選擇幾個稀釋度的菌液進(jìn)行涂板。稀釋涂布平板法（操作）稀釋涂布平板法（操作） 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第操作要求，想一想，第2 2步應(yīng)如何進(jìn)行無步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？菌操作？ 應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無無菌菌”。例如

29、，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。二、實驗操作二、實驗操作（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（一）制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（二）純化大腸桿菌（二）純化大腸桿菌 常用的接種方法：常用的接種方法： 平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法和稀釋涂布平板法。（三）將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種（三）將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入的培養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h和和24h后，觀察并記錄后，觀察并記錄三、結(jié)果分析與評價三、結(jié)果分析與評價1.斜面

30、保藏斜面保藏臨時保存臨時保存菌種的保藏菌種的保藏2.甘油保藏甘油保藏長期保存長期保存斜面保藏四、課題延伸四、課題延伸四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1 12 2 d d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。否則需要重新制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則大小基本一致，并符

31、合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。 （三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同會有明顯不同本課題知識小結(jié)本課題知識小結(jié): :練習(xí)1.外科手術(shù)器械和罐頭食品的處理，要外科手術(shù)器械和罐頭食品的處理，要以能夠殺死什么為標(biāo)準(zhǔn)以能夠殺死什么為標(biāo)準(zhǔn)A 球

32、菌球菌 B 桿菌桿菌 C 螺旋菌螺旋菌 D 芽孢芽孢D2.某學(xué)校打算開辟一塊食用菌栽培基某學(xué)校打算開辟一塊食用菌栽培基地地,以豐富學(xué)生的勞動技術(shù)課內(nèi)容以豐富學(xué)生的勞動技術(shù)課內(nèi)容,首先首先對食用菌實驗室進(jìn)行清掃和消毒處理對食用菌實驗室進(jìn)行清掃和消毒處理,準(zhǔn)備食用菌栽培所需的各種原料和用準(zhǔn)備食用菌栽培所需的各種原料和用具具,然后從菌種站購來各種食用菌菌種然后從菌種站購來各種食用菌菌種.請回答以下問題請回答以下問題:對買回來的菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)對買回來的菌進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng),首先制首先制備試管培養(yǎng)基備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需的原料：白胨培養(yǎng)基所需的原料：_其中提供氮源

33、的主要是其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物質(zhì)是提供能源的主要物質(zhì)是_；瓊脂的作用是瓊脂的作用是_，它不提供營，它不提供營養(yǎng)。養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏凝固劑凝固劑微生物在生長過程中對各種成分所微生物在生長過程中對各種成分所需量不同需量不同,故制備培養(yǎng)基時各成分要有故制備培養(yǎng)基時各成分要有合適的合適的_,在燒杯加入瓊脂后要不在燒杯加入瓊脂后要不停地停地_,防止防止_.比例比例攪拌攪拌瓊脂糊底引起燒杯破裂瓊脂糊底引起燒杯破裂將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放加棉塞后

34、包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入入_中滅菌，壓力為中滅菌，壓力為_，溫度為溫度為_，時間，時間_，滅，滅菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力菌完畢拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力 _，將試管取出。，將試管取出。 高壓滅菌鍋高壓滅菌鍋100KPa121 15 30min自然降至零后自然降至零后 使用高壓蒸汽滅菌鍋時注意使用高壓蒸汽滅菌鍋時注意,先向鍋先向鍋內(nèi)倒入內(nèi)倒入 _，把鍋內(nèi)水加熱煮沸并，把鍋內(nèi)水加熱煮沸并將基中原有冷空氣徹底排除后將鍋密閉將基中原有冷空氣徹底排除后將鍋密閉.適量水適量水從一支試管向另一支試管接種時注從一支試管向另一支試管接種時注意，接種環(huán)要在酒精燈意，接種環(huán)要在酒精燈_焰滅菌焰滅菌.并且并且待接種環(huán)待

35、接種環(huán)_后沾取菌種，試管口不后沾取菌種，試管口不能離開酒精燈火焰附近能離開酒精燈火焰附近,將接種的試管將接種的試管放入放入_冰箱中保藏冰箱中保藏.外外冷卻冷卻43 3、不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。、不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以下列有關(guān)一種以CO2CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營養(yǎng)的描述中，不正確的是營養(yǎng)的描述中，不正確的是A.A.氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素B.B.碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)C.C.無機鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)無機鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)D.D

36、.水是該微生物的營養(yǎng)要素之一水是該微生物的營養(yǎng)要素之一4 4、下列所述環(huán)境條件下的微生物，能正常生、下列所述環(huán)境條件下的微生物，能正常生長繁殖的是長繁殖的是A.A.在缺乏生長素的無氮培養(yǎng)基中的圓褐固氮菌在缺乏生長素的無氮培養(yǎng)基中的圓褐固氮菌B.B.在人體表皮擦傷部位的破傷風(fēng)桿菌在人體表皮擦傷部位的破傷風(fēng)桿菌C. C. 在新配制的植物礦質(zhì)營養(yǎng)液中的酵母菌在新配制的植物礦質(zhì)營養(yǎng)液中的酵母菌D.D.在滅菌后的動物細(xì)胞培養(yǎng)液中的禽流感病毒在滅菌后的動物細(xì)胞培養(yǎng)液中的禽流感病毒5 5、通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生、通過選擇培養(yǎng)基可以從混雜的微生物群體中分離出所需的微生物。在缺乏物群體中分離出所需的微生

37、物。在缺乏氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長；氮源的培養(yǎng)基上大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和在培養(yǎng)基中加入青霉素可以抑制細(xì)菌和放線菌；在培養(yǎng)基中加入放線菌；在培養(yǎng)基中加入10%10%酚可以抑酚可以抑制細(xì)菌和霉菌。利用上述方法能從混雜制細(xì)菌和霉菌。利用上述方法能從混雜的微生物群體中的微生物群體中分別分離出分別分離出（多選（多選 A.A.大腸桿菌大腸桿菌 B.B.霉菌霉菌 C.C.放線菌放線菌 D.D.固氮細(xì)菌固氮細(xì)菌DBCDBC6 6關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的確的A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無機物只提供無機鹽除水以外的無機物只提供無機鹽 D.D.無機氮源也能提供能量無機氮源也能提供能量D7 7下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解的是的是A.A.防止雜菌污染防止雜菌污染 B.B.消滅雜菌消滅雜菌C.C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D.D.滅菌必須在接種前滅菌必須在接種前B 解析：滅菌是微生物發(fā)酵過程的一個重要