生物材料檢驗(yàn)各重點(diǎn)

1、第1章 、緒論第1節(jié) 概述一基本概念生物材料(biological material)是生物體的體液(血液)、排泄物(尿液、呼出氣)、毛發(fā)和試驗(yàn)動(dòng)物臟器組織的總稱。  生物材料檢驗(yàn)(analysis of biological material)是研究生物材料中化學(xué)物質(zhì)或其代謝產(chǎn)物或由化學(xué)物質(zhì)引起機(jī)體產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)指標(biāo)變化的分析測(cè)定方法。   生物接觸限值(biological exposure limit, BEL)是為保護(hù)作業(yè)人員健康，對(duì)生物材料(尿、血、呼出氣)中污染物或其代謝產(chǎn)物所規(guī)定的最高容許濃度，或某些生物效應(yīng)指標(biāo)改變所容許的范圍。其值相當(dāng)于健康工人吸入或接觸

2、最高容許濃度的毒物時(shí)，生物材料中被測(cè)物的含量水平。生物標(biāo)志物可為三類：1.接觸性生物標(biāo)志物2.效應(yīng)性生物標(biāo)志物3.敏感性生物標(biāo)志物。 二 生物材料檢驗(yàn)方法的一般要求 1、選擇或者建立生物材料檢驗(yàn)方法時(shí)，必須考慮樣品和待測(cè)成分的理化性質(zhì)，特別要注意待測(cè)成分在樣品中的含量水平和共存成分對(duì)測(cè)定的影響。2、對(duì)分析方法的選擇性和靈敏度和準(zhǔn)確度有較高的要求。3、自動(dòng)化程度、分析操作難易程度、試劑易得性、分析周期和成本等因素也是應(yīng)該考慮的因素。 三、毒物代謝一般機(jī)制和排泄途徑（一）毒物進(jìn)入人體的途徑環(huán)境中的各種化學(xué)物質(zhì)主要通過(guò)呼吸道、皮膚黏膜和胃腸道進(jìn)入人體，而作業(yè)環(huán)境中化學(xué)物質(zhì)主要通過(guò)前兩種途徑進(jìn)入人體。

3、血/氣分配系數(shù)：空氣中有毒氣體或蒸汽中的濃度可與血液中的濃度達(dá)到平衡，平衡時(shí)在血液中濃度與肺泡氣濃度之比，對(duì)每種氣體或蒸汽是一個(gè)常數(shù)即血/氣分配系數(shù)。意義：血/氣分配系數(shù)越大表示該氣體或蒸汽越易進(jìn)入血液，而且達(dá)到飽和的時(shí)間越長(zhǎng)。呼出氣有混合呼出氣和終末呼出氣兩種。影響呼吸道對(duì)毒物吸收的因素1、血/氣分配系數(shù)2、呼吸深度與速讀3、血液循環(huán)速度4、氣溫、氣濕，有無(wú)其他溶劑共存等都將影響呼吸道對(duì)毒物的吸收量。表皮屏障不完整可加速毒物經(jīng)皮膚吸收。一般外源性化合物在胃腸道中的吸收主要是通過(guò)簡(jiǎn)單的擴(kuò)撒作用，胃腸道中外源性化合物的吸收過(guò)程的影響因素主要有胃腸蠕動(dòng)頻率和外源性化合物的溶解度和分散度。（二）毒物

4、在人體內(nèi)的分布測(cè)定血液樣品時(shí)應(yīng)視毒物在血中的分布情況而確定是否選擇血清。血漿或全血。（三）毒物在人體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化外源性化合物在體內(nèi)經(jīng)過(guò)一系列化學(xué)變化并形成其衍生物以及分解產(chǎn)物的過(guò)程稱為生物轉(zhuǎn)化或代謝轉(zhuǎn)化，所形成的衍生物即代謝物。腎臟、肺、腸等器官也具有一定的代謝轉(zhuǎn)化能力。（四）毒物的排泄途徑1. 進(jìn)入人體的毒物在肝臟等器官代謝或生物轉(zhuǎn)化后，主要經(jīng)腎臟濾過(guò)后隨尿液排泄，有部分經(jīng)膽汁進(jìn)入腸道，隨糞便排泄，也有少量可隨乳汁、汗液、精液、月經(jīng)、指甲和毛發(fā)等排出。 四 、檢驗(yàn)指標(biāo)的選擇及分類（一）檢驗(yàn)指標(biāo)選擇的基本要求1、特異性好2、具有良好的劑量-效應(yīng)關(guān)系3、穩(wěn)定性好4、有準(zhǔn)確可靠的檢測(cè)方法（二）生物

5、材料檢驗(yàn)指標(biāo)的分類1、化學(xué)物質(zhì)原形2、化學(xué)物質(zhì)代謝產(chǎn)物3、生物效應(yīng)指標(biāo) 五、檢驗(yàn)結(jié)果的評(píng)價(jià)生物接觸指數(shù)（BEI）:表示從暴露在某化學(xué)物質(zhì)時(shí)間加權(quán)平均濃度下的健康工人中所收集的生物材料生物學(xué)指標(biāo)的的水平。 第二節(jié) 樣品的收集與保存 一、樣品種類及其特點(diǎn)1.生物樣品的選擇原則(1)選用的生物材料中被測(cè)物的濃度與環(huán)境接觸水平或與健康效應(yīng)有劑量相關(guān)關(guān)系；(2)樣品和待測(cè)成分(指標(biāo))足夠穩(wěn)定以便于運(yùn)輸和保存；(3)采集生物樣品對(duì)人體無(wú)損害，能為受檢者所接受。目前用得最多的生物材料是尿液，其次是血液和呼出氣.（一）尿液尿液是最常用的生物材料檢驗(yàn)樣品，因?yàn)椴杉奖?，無(wú)損傷，容易被受檢者接受，能次啊級(jí)較大量的

6、樣品。尿樣可分為全日尿、晨尿、定時(shí)尿和隨機(jī)尿等，我們需用尿比重法或尿肌酐法校正被測(cè)物質(zhì)的濃度。這里班前指進(jìn)入工作崗位前1h，班中指的是開始工作后2h至下班前1h，班末指的是下班前1h之內(nèi)，班后指的是下班后1h之內(nèi)。（2） 血液血液，特別是靜脈血，是最常用的生物材料之一。血液樣品可分成全血、血清和血漿。加抗凝劑后分離出的上層淡黃色透明液體為血漿，不加抗凝劑分離出的上層淡黃色清夜為血清。（3） 毛發(fā)毛發(fā)的代謝緩慢，各種微量元素常在毛發(fā)中。采集發(fā)樣的主要優(yōu)點(diǎn)是采樣時(shí)候受檢者無(wú)疼痛、無(wú)創(chuàng)傷，樣品易于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，不需要特殊容器，樣品穩(wěn)定性好。頭發(fā)表面易受空氣污染物的影響，采樣后需用洗滌的方法出去表面沉積

7、物，洗滌過(guò)程和殘留的洗滌劑均有可能對(duì)測(cè)定結(jié)果帶來(lái)影響。（4） 呼出氣1.呼出氣主要成分是二氧化碳、水蒸氣和微量易揮發(fā)性有機(jī)組分。2.呼出氣的優(yōu)點(diǎn)是樣品收集方便，可以連續(xù)采樣，樣品中的干擾物質(zhì)比較少，容易為受試者所接受，缺點(diǎn)是被測(cè)物含量較低，需要濃縮采樣或者需要靈敏度更高的分析方法。3.用于生物監(jiān)測(cè)的其他的生物樣品有指甲，牙齒，分泌物等。二、樣品的收集運(yùn)輸保存和取樣（一）一般要求1.采樣時(shí)間生物半減期：是指進(jìn)入生物體內(nèi)的化學(xué)物質(zhì)的量通過(guò)各種途徑消除一半所需要的時(shí)間。2. 采樣環(huán)境3. 采樣容器：采樣前用酸溶液浸泡過(guò)夜，洗凈晾干。4. 樣品運(yùn)輸和保存5. 采樣記錄（2） 樣品采集和保存1. 尿樣：

8、通常將尿樣收集于潔凈的500ml硬質(zhì)玻璃瓶或聚乙烯瓶中，24小時(shí)尿樣則收集于容積較大的瓶中。采樣后需盡快測(cè)定尿比重或肌酐含量，以便對(duì)測(cè)定結(jié)果進(jìn)行校正。2.尿樣測(cè)定結(jié)果的兩種校正方法：校正方法有比重校正法和肌酐校正法兩種。(1)比重校正法：將尿中被測(cè)物濃度校正為標(biāo)準(zhǔn)比重(我國(guó)規(guī)定尿樣的標(biāo)準(zhǔn)比重為1.020)下的濃度，校正公式為：C校=C×（1.020-1.000）（d-1.000）=C×K式中C校-經(jīng)校正后尿中待測(cè)成分的濃度(mg/L)；C-測(cè)得的尿中待測(cè)成分的濃(mg/L)；1.020-為我國(guó)采用的尿的標(biāo)準(zhǔn)比重；d-實(shí)際測(cè)得的尿樣比重；K-校正尿比1.020的系數(shù)。(2)肌

9、酐校正法： 在一般情況下飲食、飲水量和利尿劑對(duì)肌酐的排出率沒(méi)有太大影響，健康人一天排尿所排出的肌酐量變化很小，一般在1.8g左右。因此，可用經(jīng)尿液排出1g肌酐所相應(yīng)的待測(cè)成分的量來(lái)表示尿中待測(cè)物的濃度,或經(jīng)尿液排出1.8g肌酐所相應(yīng)的待測(cè)成分的量來(lái)代表全天尿中待測(cè)成分的含量。校正公式為：尿中待測(cè)成分濃度（mgg肌酐）=實(shí)測(cè)濃度（mg/L）肌酐濃度(g/L)尿中待測(cè)成分濃度（mgd）=實(shí)測(cè)濃度（mg/L）肌酐濃度(g/L) ×1.8g/d2.血樣通常采集靜脈血或者末梢血為樣品。取末梢血時(shí)候不得用力擠壓采血部位，盡量讓其自然流出，并棄去第一滴血，避免因組織液滲出將血樣稀釋。2. 發(fā)樣通常

10、用不銹鋼剪刀采集距離頭皮約2.5cm的發(fā)段1-2g。3. 呼出氣采集呼出氣可用塑料袋和玻璃管等。4. 其它樣品（3） 取樣分析原則1. 血液、尿及其他體液必須充分混合后再取樣分析2. 骨和臟器樣品應(yīng)剔除脂肪和結(jié)締組織等異體物質(zhì)后，徹底粉碎、充分混勻后才可稱取分析樣品。3. 貯存于低溫冷凍的樣品4. 烘干粉碎、磨細(xì)或剪碎的發(fā)、骨及其他臟器組織的干樣，稱樣前必須干燥至恒重。5. 稱取樣品的量應(yīng)保證樣品的代表性，其中待測(cè)物質(zhì)的濃度或量必須滿足分析方法的定量下限。 第三節(jié) 生物材料樣品的預(yù)處理 一、 無(wú)機(jī)元素分析的樣品預(yù)處理1. 基本要求1、避免待測(cè)元素?fù)p失及污染2、盡可能減少化學(xué)試劑的用量3、操作簡(jiǎn)

11、便省時(shí)4、待測(cè)組分回收率達(dá)到分析要求5、操作過(guò)程安全性高。（1） 稀釋法（2） 酸提取法（3） 礦物化法破壞生物樣品中有機(jī)物的方法有濕消化法和干灰化法1、濕消化法 用強(qiáng)氧化性酸和其他氧化劑，結(jié)合加熱，使樣品中所有有機(jī)物破壞，待測(cè)成分變成易溶的鹽類。常用的氧化性酸有硝酸、硫酸和高氯酸，氧化劑有高錳酸鉀和過(guò)氧化氫等。（1）硝酸-高氯酸法：氧化能力強(qiáng)，反應(yīng)速度快，消化溫度低，揮發(fā)損失小。由于硝酸和高氯酸的沸點(diǎn)均較低，過(guò)量的酸液容易揮發(fā)除去。(2)硝酸-高氯酸-鹽酸法：本法用于示波極譜法測(cè)定尿中鉛鎘等元素的測(cè)定。加入鹽酸的目的是與錫生成氯化物蒸發(fā)除去，消除錫對(duì)極譜測(cè)定的干擾。(3)硝酸-高氯酸-硫酸法

12、：是應(yīng)用最廣泛的一種有機(jī)物破壞方法，適用于除揮發(fā)性元素外的金屬毒物測(cè)定時(shí)，各種生物樣品的處理。加入硫酸后，可適當(dāng)?shù)靥岣呦瘻囟?，充分發(fā)揮硝酸和高氯酸的氧化作用，防止燒干。(4) 硫酸-高錳酸鉀法：利用高錳酸鉀-硫酸在低溫下氧化尿中有機(jī)物，再用鹽酸羥胺或過(guò)氧化氫將過(guò)量的高錳酸鉀褪色，此法專用于分析尿汞時(shí)樣品的消化。2、干灰化法 干灰化法操作簡(jiǎn)便，加入試劑少，空白值低，特別適用于大批樣品的處理。但干灰化法使用的溫度高，待測(cè)成分易揮發(fā)損失，同時(shí)待測(cè)成分被坩堝材料吸留，難于溶出，使回收率降低。為了幫助灰化，降低待測(cè)成分的揮發(fā)和吸留損失，可加入適當(dāng)?shù)闹一瘎缦跛?、硫酸、硝酸鎂和氧化鎂、氫氧化鉀等。（

13、四）加壓分解法（五）微波消解法（六）酶分解法 二、有機(jī)物分析樣品的預(yù)處理（一）預(yù)空法（二）水蒸氣蒸餾法適用于分離純化揮發(fā)性化合物（3） 溶劑萃取法是利用待測(cè)組分與樣品的干擾雜志在互不相溶的兩種溶劑中的分配系數(shù)不同而達(dá)到分離。（4） 固相萃取法（5） 固相微萃取法（6） 其他提取方法 第四節(jié) 生物材料檢驗(yàn)質(zhì)量控制生物材料檢驗(yàn)的特點(diǎn)是樣品基體復(fù)雜，大多數(shù)被測(cè)物質(zhì)都是衡量組分。質(zhì)量控制實(shí)際上就是對(duì)實(shí)驗(yàn)誤差進(jìn)行控制。 一 生物材料檢驗(yàn)質(zhì)量控制一般方法實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制包括實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制和實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制（1） 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制的基本條件1. 實(shí)驗(yàn)室管理2. 檢驗(yàn)人員培訓(xùn)3. 實(shí)驗(yàn)室環(huán)境4. 儀器設(shè)備及

14、容器5. 化學(xué)試劑和實(shí)驗(yàn)用水（2） 測(cè)試過(guò)程中的質(zhì)量控制1. 分析方法選擇優(yōu)先選擇國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)分析方法，若無(wú)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法，應(yīng)選擇靈敏度高、選擇性好、準(zhǔn)確度高、精密度好和相對(duì)快速的分析方法。2. 樣品的采集和處理3. 分析誤差與評(píng)價(jià)由空白實(shí)驗(yàn)的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)偏差計(jì)算分析方法的檢出限；比較各溶液的批內(nèi)變異和批間變異；比較樣品、加標(biāo)樣品與標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差；計(jì)算樣品的加標(biāo)回收率。（3） 繪制質(zhì)量控制圖1.目的在于對(duì)日常分析系統(tǒng)進(jìn)行經(jīng)常性核對(duì)，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題，分析原因，采取措施。2.最簡(jiǎn)單和常用的質(zhì)控圖是均值質(zhì)控圖。3.質(zhì)控圖有多種類型，包括均值控制圖、空白實(shí)驗(yàn)值控制圖、回收率控制圖、均值-極差控制圖

15、等。（四）實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)量控制最常用的方法有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)檢驗(yàn)法和雙樣圖法。 二、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)及其在生物材料檢驗(yàn)中的應(yīng)用（1） 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)我國(guó)生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分為兩個(gè)等級(jí)，即一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)具有如下特征：1、定值的準(zhǔn)確度具有國(guó)內(nèi)最高水平，每一種出證的特性量值都附有給定置信水平的不確定度；具有國(guó)家統(tǒng)一編號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書；均勻性保證在定值的精度以內(nèi)，且穩(wěn)定性在一年以上，具有規(guī)定的合格的包裝形式。2、二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：其特性量值通過(guò)與以及標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)直接比對(duì)或用其他準(zhǔn)確可靠的分析方法測(cè)試而獲得，準(zhǔn)確度和均勻性能滿足一般測(cè)量的需要，穩(wěn)定性在半年以上，或能滿足實(shí)際測(cè)量需要，報(bào)國(guó)家計(jì)量局直接備案3、實(shí)驗(yàn)室還經(jīng)常使

16、用質(zhì)量控制樣品，其作用是在一定范圍內(nèi)用于分析過(guò)程的質(zhì)量控制，保證分析結(jié)果的精密度及準(zhǔn)確度。（2） 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的作用及選用原則1. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的作用：用于評(píng)價(jià)分析方法和測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度；用于校準(zhǔn)物校準(zhǔn)各種測(cè)試儀器；作為檢驗(yàn)工作的標(biāo)準(zhǔn)和用于分析質(zhì)量保證工作。2. 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)選用原則和注意事項(xiàng)（1） 基本組成：組分越接近越好（2）濃度水平：要選擇濃度水平合適的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（3）要注意標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書中規(guī)定的有效期限（4）必須子啊分析系統(tǒng)達(dá)到穩(wěn)定后再使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，否則分析系統(tǒng)不穩(wěn)定和噪聲高、靈敏度低或存在明顯的系統(tǒng)誤差，即使使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)也無(wú)意義。第五節(jié) 生物材料樣品正常參考值的制定一、人體生物樣品正常參考值及其意義

17、人體生物樣品正常參考值值正常人的各種生理數(shù)據(jù)，組織或排泄物中各種成分的含量等。正常參考值的意義：1. 對(duì)某地區(qū)居民的血尿或頭發(fā)等生物材料中有毒有害物質(zhì)如微量元素的測(cè)定，可為該地區(qū)的生活環(huán)境污染狀況提供依據(jù)；2. 測(cè)定職業(yè)工人的尿血或頭發(fā)中的有害物質(zhì)的含量，為職業(yè)中毒診斷和療效觀察提供重要的參考依據(jù)，同時(shí)還可用于工作環(huán)境污染狀況的評(píng)價(jià)；3. 測(cè)定正常參考值可用于評(píng)價(jià)生活環(huán)境質(zhì)量與人體健康效應(yīng)，為疾病的診斷地方病的防治和診斷以及青少年生長(zhǎng)發(fā)育狀況提供依據(jù)；4. 測(cè)定正常參考值為制定或修改衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)提供重要的科學(xué)依據(jù)。 二、制定正常參考值的一般步驟及有關(guān)注意事項(xiàng)（1） 指定正常參考值的一般步驟及其有關(guān)

18、注意事項(xiàng)包括：1、選擇足夠數(shù)量的正常人作為研究對(duì)象2、根據(jù)所測(cè)定項(xiàng)目的要求采集適宜的生物材料樣品3用已經(jīng)建立并經(jīng)驗(yàn)證的方法對(duì)采集的樣品進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定4.用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法處理測(cè)定結(jié)果并計(jì)算正常參考值、（2） 制定正常參考值有關(guān)注意事項(xiàng)1、 監(jiān)測(cè)對(duì)象的選擇2、 判定分組3、 樣本含量4、 分析測(cè)定5、 確定單雙側(cè)6、 選擇適當(dāng)?shù)陌俜直确秶?、 選擇計(jì)算正常參考值范圍的方法第二章 金屬元素的測(cè)定 凡含量為人體總重量的0.01%以上者為宏量元素，含量<0.01%者稱為微量元素。很據(jù)元素在體內(nèi)的作用又可分為必需元素、治療用元素和有毒元素。（也有人分為必需元素、可能必需元素和非必需元素） 必需元素應(yīng)滿足

19、以下條件：這種元素存在于一切健康機(jī)體的所有組織中在組織中的濃度相當(dāng)恒定缺乏鈣元素時(shí)，能在不同組織中相似的結(jié)構(gòu)和生理功能性異常補(bǔ)充該元素能夠防止此類異常變化補(bǔ)充該元素可以使失常的功能及結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常目前公認(rèn)的必需微量元素有14種：鐵、銅、鋅、錳、鉻、鈷、鎳、硒、鉬、釩、錫、氟、碘、鍶治療用元素有：金、鋁、鉍、鎵、鋰、鉑、鍺等有毒元素有：鉛、鉻、砷、汞、銀、鈹、銻、碲和鉈第一節(jié) 銅 鐵 鋅一、理化特性銅（Cu）：為帶紅色光亮光澤，有較好的延展性金屬，電熱的良好導(dǎo)體。在干燥的空氣中較穩(wěn)定。主要氧化態(tài)有+1和+2價(jià)。鐵（Fe）：銀白色金屬，比較活潑，在空氣中易腐蝕，常見價(jià)態(tài)為+2、+3價(jià)。鋅（Zn）：有

20、光澤的藍(lán)白色金屬，延展性好，可制成多種合金，主要價(jià)態(tài)為+2。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)一般成年人體內(nèi)含鐵35g，其中肝脾含量最高。鐵主要經(jīng)膽汁、糞便、尿排出，也可經(jīng)皮膚、汗液、毛發(fā)排出。 鐵過(guò)量和中毒現(xiàn)象很罕見，誤服大量的鐵制劑可能會(huì)造成鐵中毒。在肝臟中蓄積，從而損害肝臟、腦下垂體、腎臟及甲狀腺的機(jī)能。中毒癥狀為嘔吐、腹瀉、腹痛、黑便、胃腸炎、胃腸道出血、急性腸壞死等。鋅的生物學(xué)作用：可作為多種酶的功能成分和激活劑 促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育 促進(jìn)維生素A的正常代謝和生理功能 參與免疫功能過(guò)程體內(nèi)鋅主要經(jīng)糞便、尿、汗、乳汁、毛發(fā)等排出。 鋅攝入過(guò)多可引起急性中毒。多由空氣或水污染、誤服等造成。中毒的主要癥狀

21、有腹痛、嘔吐、腹瀉、里急后重、厭食等，由呼吸道進(jìn)入則表現(xiàn)為低熱、感冒樣癥狀、食欲不振等。三、樣品采集及保存 銅鐵鋅測(cè)定的樣品主要是血液（以血清最常見）和頭發(fā)，偶爾采用骨、組織和體液等。血樣短期保存在4冰箱中。長(zhǎng)期保存在-20冰箱中。四、血清中銅鐵鋅的測(cè)定火焰原子吸收法是最方便，最廣泛的方法。6. 原理 經(jīng)處理后的血清樣品溶液噴入空氣-乙炔焰中，被測(cè)元素轉(zhuǎn)變成基態(tài)原子蒸汽，基態(tài)原子蒸汽吸收由該元素空心陰極燈輻射出的特殊譜線產(chǎn)生分析信號(hào)，與標(biāo)準(zhǔn)比較定量。7. 樣品處理 取血清樣品用1%硝酸或6%正丁醇溶液稀釋510倍，混勻備用。8. 注意事項(xiàng) 由于鐵的譜線較多，應(yīng)選用比較窄的光譜通帶以防止譜線干擾

22、。 第二節(jié) 鈣和鎂一、理化特性鈣（Ca）銀白色，在空氣中與氧緩慢作用，與冷水作用緩慢。鈣是堿土金屬中最活潑的元素。氧化態(tài)為+2。鎂（Mg）銀白色，能和大多數(shù)非金屬和酸反應(yīng)。氧化態(tài)為+2。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)鈣不但是骨骼和牙齒的主要組成成分，還具有參與細(xì)胞分裂、增殖、收縮、運(yùn)動(dòng)、凝集、分泌、興奮活動(dòng)等重要生理功能。鈣的主要作用：維持細(xì)胞的通透性 維持正常的神經(jīng)興奮的傳遞和肌肉的收縮舒張 幫助血液凝固并調(diào)控血液酸堿平衡 參與或激活多種酶的活性 刺激精子的成熟 除去結(jié)腸膜上癌灶性物質(zhì)人體鈣主要通過(guò)尿、汗、乳汁和糞便排出。三、血中鈣和鎂的測(cè)定2、 樣品處理 取血清樣品并用1%的硝酸稀釋20倍，混勻備

23、用。骨樣可在800下干灰化0.5h，將樣品轉(zhuǎn)移至適宜容器中，加2ml濃硝酸溶解，待完全溶解后用純水定容，稀釋100200倍，備用。第五節(jié) 鉛一、理化性質(zhì)鉛（Pb）灰藍(lán)色或銀灰色的軟金屬，四乙基鉛曾作為汽油防爆劑，是大氣鉛污染的主要來(lái)源之一。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)鉛及其化合物可通過(guò)呼吸道、消化道吸收，少數(shù)化合物可通過(guò)皮膚吸收。吸收的鉛很快進(jìn)入血液并分布到各個(gè)軟組織，以肝、腎、肺的濃度最高，以后又重新分布，主要進(jìn)入礦化組織，如骨骼和牙齒。血鉛濃度常代表近期的環(huán)境暴露水平，進(jìn)入血液的鉛約96%存在于紅細(xì)胞。鉛主要通過(guò)糞、尿排出另外也可通過(guò)乳汁、唾液、汗液排出。血鉛和尿鉛為鉛接觸和鉛負(fù)荷的主要生物監(jiān)測(cè)

24、指標(biāo)。血鉛濃度常被用于衡量鉛的暴露水平。尿鉛濃度是測(cè)定體內(nèi)鉛負(fù)荷的最好指標(biāo)。三、樣品采集及保存1、 尿樣 收集一次尿樣，測(cè)量比重，如不能立即分析，按1%的比例加入硝酸，在4冰箱內(nèi)可保存2周。2、 血樣 采末梢血常取于手指或耳垂，在皮膚上迅速針刺一定深度，讓血自然流出，不宜用力擠壓，以免組織液稀釋血液影響結(jié)果。四、尿鉛和血鉛的測(cè)定1、二硫腙比色法 是測(cè)定尿鉛和血鉛的經(jīng)典分析方法，只需一臺(tái)可見光分光光度計(jì)便可。但是接觸氰化鉀和三氯甲烷等有害物質(zhì)。2、萃取-火焰原子吸收光譜法3、石墨爐原子吸收光譜法 只需將尿樣和血樣稀釋后便可直接測(cè)定。（一）石墨爐原子吸收光譜法注意事項(xiàng)：（1）基體改進(jìn)劑的作用：由于

25、尿樣組分復(fù)雜不恒定，故常在尿樣中加入集體改進(jìn)劑（4%磷酸二氫銨-6%抗壞血酸），能有效地克服基體干擾。 （2）背景吸收的減免：裝有塞曼效應(yīng)或自吸效應(yīng)背景校正的儀器均能正確地扣除背景。第六節(jié) 鎘一、理化特性鎘（Cd）略帶淡藍(lán)的銀白色金屬，質(zhì)軟并富有延展性。在空氣中穩(wěn)定。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)鎘是一種有毒元素，在人體內(nèi)蓄積性很強(qiáng)，主要蓄積在腎臟和肝臟，約占總蓄積量的50%。最早影響腎功能和肝功能，主要表現(xiàn)為低分子蛋白尿和肺水腫癥狀。慢性鎘中毒還可引起骨質(zhì)疏松或骨質(zhì)軟化。WHO推薦，無(wú)職業(yè)接觸者血鎘正常值一般在5ug/L以下，職業(yè)接觸工人血鎘生物限值為5.1ug/L。尿鎘主要反映體內(nèi)鎘的負(fù)荷量。三、

26、樣品采集及保存2. 血液8、 末梢血9、 靜脈血（2） 尿液尿液一般收集晨尿和全日尿，在無(wú)污染環(huán)境中進(jìn)行。四、血和尿中鎘的測(cè)定（1） 火焰原子吸收分光光度法（2） 石墨爐原子吸收分光光度法（3） 微分電位溶出法第三章 非金屬化合物及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定接觸途徑：冶煉、化工、農(nóng)藥、合成橡膠、非金屬礦開采、電子工業(yè)第一節(jié) 一氧化碳一、 理化性質(zhì)CO為無(wú)色、無(wú)臭、無(wú)刺激性的有毒氣體。燃燒時(shí)成藍(lán)色火焰，高溫下與硫反應(yīng)生成羰基硫，與過(guò)渡金屬反應(yīng)生成金屬羰基化合物。二、 代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、人體接觸一氧化碳有職業(yè)接觸和非職業(yè)接觸兩種。職業(yè)接觸：冶金工業(yè)中煉焦、煉鐵、鑄造、熱處理，化學(xué)工業(yè)中合成氨、生產(chǎn)光氣、

27、丙酮、甲醇；煤礦瓦斯爆炸；非職業(yè)接觸：民用煤爐、汽車尾氣、吸煙。2、中毒機(jī)制：CO進(jìn)入機(jī)體后，與血液中血紅蛋白生成碳氧血紅蛋白，影響血氧血紅蛋白的解離，阻礙氧的釋放。3、CO與血紅蛋白的親和力比氧與血紅蛋白的親和力高200300倍，而碳氧血紅蛋白比血氧血紅蛋白的解離速度慢3600倍。血液中形成的碳氧血紅蛋白和血氧血紅蛋白的比例在很大程度上取決于CO和O2的分壓。4、檢測(cè)指標(biāo)：1）碳氧血紅蛋白。輕度中毒濃度10%，中度中毒30%，重度中毒50%。 2）呼出氣中CO含量。三、樣品采集及保存1、呼出氣 采樣應(yīng)在接觸CO 3h后臨近工作班末進(jìn)行，收集終末呼出氣。如無(wú)便攜式直讀儀器，可保存于采樣管和采氣

28、袋中，立即密封。2、血液 在接觸CO 3h 后工作班末或接觸最高濃度時(shí)采樣，采集靜脈血或末梢血。4冰箱保存，一般可保存一周。四、血中碳氧血紅蛋白的測(cè)定（一）分光光度計(jì)法1. 原理：1) 血液中含四種血紅蛋白成分:還原血紅蛋白、氧合血紅蛋白、碳氧血紅蛋白、微量高鐵血紅蛋白2) 利用還原劑將氧合血紅蛋白和高鐵血紅蛋白還原成血紅蛋白3) 待測(cè)血樣在420nm、432nm下有最大吸收峰2. 樣品采集與保存：采集末梢血于4冰箱中保存3. 測(cè)定方法（1） 摩爾吸光系數(shù)的測(cè)定：用同一濃度的血樣制的Hb夜和HbCO液，測(cè)定其在430nm和420nm兩個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度值，代替摩爾吸光系數(shù)。（2） 血樣測(cè)定4注意

29、事項(xiàng)：（1）所用氮?dú)夂脱鯕鈶?yīng)為高純度的，若不純，則含微量的CO，干擾測(cè)定結(jié)果。（2）連二亞硫酸鈉遇睡易分解，在空氣中易被氧化失效，應(yīng)以小瓶分裝使用，避免接觸空氣和水分。（3）必須使用新鮮血液。（4）測(cè)試液盡量避免接觸空氣，及時(shí)測(cè)定，否則會(huì)造成結(jié)果偏低。第二節(jié) 二硫化碳一、 理化特性二硫化碳在常溫下為無(wú)色透明、略帶芳香味的液體，工業(yè)呈微黃色，并有爛蘿卜氣味。是揮發(fā)性、易燃性、爆炸性、腐蝕性都很強(qiáng)的物質(zhì)。二硫化碳體內(nèi)代謝產(chǎn)物TTCA，其是二硫化碳與谷胱甘肽結(jié)合所生成的特異性產(chǎn)物。二、 代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、 二硫化碳是一種氣體麻醉劑，損害神經(jīng)和血管，對(duì)皮膚有刺激作用，皮膚接觸有灼燒、麻木感。短時(shí)間

30、吸入高濃度二硫化碳可發(fā)生嚴(yán)重急性中毒，重度中毒可短時(shí)間呈興奮狀態(tài)，繼之出現(xiàn)譫妄、昏迷、意識(shí)喪失。2、 吸入途徑：呼吸道和皮膚3、 人體接觸3060mg/m3濃度的二硫化碳后不久尿中就有TTCA排出，尿中TTCA濃度在接觸結(jié)束時(shí)達(dá)到峰值，隨后逐漸下降。4、 檢測(cè)指標(biāo)：尿中TTCA和終末呼出氣中二硫化碳四、尿中TTCA測(cè)定應(yīng)用高效液相色譜法測(cè)定尿中TTCA原理：尿樣經(jīng)鹽酸酸化后，用乙醚提取TTCA，濃縮后注入液相色譜儀，用紫外檢測(cè)器在273nm波長(zhǎng)下測(cè)定。以保留時(shí)間定性，峰高定量。本法最低測(cè)定濃度為20ug/L（1ml尿樣）；測(cè)定范圍040mg/L。 第三節(jié) 硒二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、硒是人體必

31、需的微量元素。它是谷胱甘肽過(guò)氧化酶的活性中心，和維生素E一起能阻斷自由基的連鎖反應(yīng)。硒具有抗氧化作用，能保護(hù)細(xì)胞免受過(guò)氧化物損傷。硒能清除體內(nèi)自由基，具有抗腫瘤作用。缺硒還能引起克山病、大骨節(jié)病的發(fā)生。2、檢測(cè)指標(biāo)：尿硒（國(guó)外正常值為4.846ug/L;國(guó)內(nèi)均值為2482ug/L）、血硒(國(guó)外正常值為0.0570.32ug、L；國(guó)內(nèi)均值為0.197ug/L)四、尿和血中硒的測(cè)定（一）熒光分光光度法（二）原子熒光光譜法（三）氫化物發(fā)生-原子吸收光譜法第四節(jié) 碘二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、碘是人體必需的微量元素，是甲狀腺的重要組成部分。正常情況下，血液中碘大部分是以蛋白質(zhì)結(jié)合的形式存在（大部分是T4

32、和T3的碘），其次是血漿中無(wú)機(jī)碘。 缺碘可導(dǎo)致單純甲狀腺腫大，還可導(dǎo)致小兒腦發(fā)育障礙、智力低下。機(jī)體中碘過(guò)量可引起碘性甲亢、碘性甲腫和碘性甲低等問(wèn)題。2、生物檢測(cè)指標(biāo)：尿碘、血清碘第五節(jié) 砷一、 理化特性單質(zhì)砷有黑色、灰色、黃色三種同素異構(gòu)體。砷的化合物種類很多，如砷化氫、砷的硫化物、氧化物、砷酸鉛、砷酸鈣等二、 代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)1、 砷的職業(yè)接觸主要是金屬礦開采和砷的精煉過(guò)程。2、 砷可經(jīng)呼吸道、皮膚、消化道進(jìn)入體內(nèi)。人體內(nèi)的砷化物90%以上在紅細(xì)胞內(nèi)，與珠蛋白迅速結(jié)合并隨血液循環(huán)分布到身體各組織和器官，尤其毛發(fā)、指甲、骨骼中的砷可形成牢固的儲(chǔ)存庫(kù)。3、 體內(nèi)吸收的砷主要從尿中排出。向外排

33、出的砷主要為五價(jià)砷，三價(jià)砷在體內(nèi)引起甲基化生成甲基砷酸和二甲基砷酸。三價(jià)砷化合物比五價(jià)砷化合物排出慢，毒性也高。4、 生物檢測(cè)指標(biāo)：尿砷（正常參考值為12260ug/L平均值為130ug/L）、毛發(fā)砷（平均值為0.8ug/L）四、尿和發(fā)中砷的測(cè)定（一）DDC-Ag分光光度法1、 原理：在砷化鉀和酸性氯化亞錫存在下，使五價(jià)砷還原為三價(jià)砷，然后與新生態(tài)氫反應(yīng)，生成砷化氫氣體。砷化氫氣體首先通過(guò)乙酸鉛浸泡過(guò)棉花出去硫化氫，然后通入DDC-Ag(二乙基二硫代氨基甲酸銀)的三氯甲烷溶液中，銀杯砷化氫還原成紅色膠態(tài)銀，可在520nm波長(zhǎng)測(cè)定其吸光度。2、 樣品處理（1） 尿樣：先用硫酸和硝酸消化至三氧化硫

34、冒白煙，冷卻，加高氯酸加熱至溶液透明，冷卻后轉(zhuǎn)入砷化氫發(fā)生瓶中。取相同體積的蒸餾水做空白對(duì)照。（2） 發(fā)樣：取洗凈發(fā)樣，先用硫酸和硝酸消化至棕黑色，去出冷卻，加硝酸數(shù)滴在加熱消化直至無(wú)色或淡黃色，冷卻，再加高氯酸直至產(chǎn)生白色煙霧，冷卻后加水，繼續(xù)加熱至再次冒白煙即可。冷卻后轉(zhuǎn)入砷化氫發(fā)生瓶中，同樣做空白試驗(yàn)。第四章芳香烴及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定 芳香烴：分子結(jié)構(gòu)中含有苯環(huán)的烴類的統(tǒng)稱。 芳香烴的分類：?jiǎn)苇h(huán)芳香烴（苯及其同系物），多環(huán)芳香烴（聯(lián)苯，聯(lián)多苯，稠環(huán)芳香烴）。 芳香烴在乙醇中的溶解度，隨側(cè)鏈上碳原子數(shù)的增加而降低，但沸點(diǎn)隨分子量的增加而升高。 苯環(huán)上含有的取代基團(tuán)較苯本身更易被氧化。 芳香烴

35、中毒一般由于吸入其蒸氣所致，經(jīng)腸胃道吸收較快，不易經(jīng)皮膚吸收。 甲苯比苯和乙苯的急性毒性稍強(qiáng)，支鏈越多，毒性作用越低。在慢性毒性方面，絕大多數(shù)芳香烴對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有毒作用；少數(shù)可致造血系統(tǒng)損壞，其中苯毒性最強(qiáng)。液態(tài)芳香烴對(duì)皮膚，粘膜有刺激作用。皮膚經(jīng)刺激可引起皮炎，吸入肺中可引起肺水腫，出血，發(fā)炎等。芳香烴化合物的來(lái)源除苯并a芘外，是以芳香烴為原料的化工企業(yè)如合成橡膠等生產(chǎn)過(guò)程產(chǎn)生。苯并芘產(chǎn)生于各種燃料的不完全燃燒及有機(jī)物的熱解過(guò)程。芳香烴化合物的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)：呼出氣中芳香烴化合物的原形，尿中的代謝產(chǎn)物。 第一節(jié) 苯一、理化特性苯：煤焦油分餾或經(jīng)石油裂解的產(chǎn)物，常溫下為特殊芳香味無(wú)色透明液體，極易

36、揮發(fā)，微溶于水，與有機(jī)溶劑互溶，易溶于油和脂肪，能與氧化劑發(fā)生劇烈反應(yīng)，不能與乙硼共存。 酚：又名苯酚、石炭酸、羥基苯，是苯在人體內(nèi)的主要代謝產(chǎn)物，隨尿排出。白色半透明針狀結(jié)晶，有特殊氣味有毒有腐蝕性。暴露在空氣中易變紅色。2、 代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo) 苯進(jìn)入人體的途徑：以呼吸道為主，經(jīng)皮膚吸收少，液體經(jīng)消化道吸收完全。 苯進(jìn)入人體后主要分布在含脂質(zhì)較多的組織和器官中。 苯屬中等毒類有機(jī)化合物，為致癌物，急性毒作用主要抑制神經(jīng)中樞，慢性毒作用主要抑制造血機(jī)能及神經(jīng)系統(tǒng)，造成再生障礙性貧血和白血病。液態(tài)苯可由呼吸道直接吸入，引起肺水腫和出血。 苯在人體內(nèi)的代謝：50%以原形經(jīng)呼吸道排出，10%以原形

37、貯存于體內(nèi)各組織，40%在肝臟代謝。 酚為苯的主要代謝產(chǎn)物，尿中酚可作為監(jiān)測(cè)苯接觸的指標(biāo)。并認(rèn)為當(dāng)尿酚值大于10mg/L時(shí)，提示有苯的接觸。正常人尿酚水平為2 18mg/L，平均58mg/L。ACGIH規(guī)定接觸苯時(shí)尿中總酚的生物接觸指數(shù)為50mg/L（班末）。 呼出氣中苯的含量也可作為監(jiān)測(cè)苯接觸指標(biāo)。 由于個(gè)體差異較大，尿酚僅適合作群體接觸程度的監(jiān)測(cè)指標(biāo)，又由于接觸苯酚時(shí)，尿酚濃度也會(huì)升高，所以測(cè)定呼出氣中苯最為確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。三、樣品采集及保存 呼出氣和尿樣常作為接觸苯的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)試樣。 1.呼出氣 采集接觸苯后次日班前的終末呼出氣，氣樣在分析前需濃縮。常用吸附劑有Tenax-GC,活性炭等。方

38、法：采集時(shí)讓受試者正常呼吸1min后，將采氣管兩端活塞打開，采氣管一端含入口中，向管內(nèi)吐氣，吐氣完畢關(guān)上活塞；室溫運(yùn)輸和保存，在室溫保存能穩(wěn)定6小時(shí)，24小時(shí)后損失率明顯上升。 2、尿樣 正常人取晨尿，對(duì)苯接觸者取班末尿?yàn)橐?。四、呼出氣中苯的分?氣相色譜法： 1、原理 終末呼出氣樣品收集在50ml呼出氣采集管內(nèi)，然后用清潔空氣將樣品吹入活性炭管內(nèi)，使樣品中的苯吸附在活性炭上，最后于280熱解吸，載氣將釋出的苯帶入FFAP柱中，氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。 2、樣品處理 37恒溫箱中2小時(shí)取出，盡快與活性炭管連接，用100ml注射器，用清潔空氣將呼出氣吹過(guò)活性炭，

39、使苯吸附在活性炭上，供測(cè)定。 3、儀器及操作條件 色譜柱：2m X 3mm FFAP：6201紅色擔(dān)體=15:100 柱溫110 氣化室溫度150 檢測(cè)室溫度150 載氣流速：35ml/min。 4、注意事項(xiàng)（1）采樣應(yīng)在無(wú)污染室內(nèi)進(jìn)行（2）當(dāng)回收率低于75%時(shí)檢查六通閥是否泄漏，或是否需要更換活性炭。（3）本實(shí)驗(yàn)條件下，苯與乙醇分離不完全。五、尿中苯酚的測(cè)定測(cè)定方法：分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法。 （一） 氣相色譜法1、原理 尿樣經(jīng)加熱酸解，用乙醚萃取苯酚，經(jīng)色譜柱分離，氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。2、樣品處理 取5ml尿樣于具塞試管中，加入1ml鹽酸搖

40、勻加塞。于90水浴1h后冷至室溫，加水稀釋至10ml。加3ml無(wú)水乙醚，密塞振搖1min，靜置分層，將乙醚層補(bǔ)足體積至3ml，必要時(shí)離心，乙醚層供檢測(cè)。3、儀器操作條件 如要分離苯酚及鄰、間、對(duì)甲酚用液晶柱；如要將苯酚與對(duì)甲苯分離，用FFAP柱4、注意事項(xiàng) （1）乙醚層補(bǔ)足一定體積。 （2）采用峰高，外標(biāo)法定量，氣相色譜操作條件對(duì)測(cè)定的影響大，可采用內(nèi)標(biāo)法定量，以硝基苯作內(nèi)標(biāo)物（3）對(duì)甲酚是人尿中的正常成分，可與苯酚共存。（二） 4-氨基安替比林分光光度法第6章 原理 尿樣在酸性條件下水解，游離酚隨水蒸氣蒸出，堿性條件下，于氧化劑鐵氰化鉀存在下，與4-氨基安替比林反應(yīng)生成紅色化合物，比色定量。

41、3、注意事項(xiàng)（1）外源性酚的污染可用測(cè)定游離酚的辦法來(lái)檢查（2）4-氨基安替比林與間甲酚、鄰甲酚有與苯酚類似的顯色反應(yīng)，但此二者在尿中一般不存在。對(duì)甲酚雖生理性排泄量比較大，但其對(duì)顯色基本無(wú)干擾。 （3）尿樣預(yù)處理如果用直接蒸餾法，則尿酚回收率較低，約70%。第二節(jié) 甲苯和二甲苯一、理化特性甲苯和二甲苯均為無(wú)色透明有芳香味的易揮發(fā)性液體。二甲苯有三種同分異構(gòu)體，理化性質(zhì)相似。甲苯體內(nèi)代謝產(chǎn)物馬尿酸，二甲苯體內(nèi)代謝產(chǎn)物甲基馬尿酸。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)常溫常壓下以蒸汽態(tài)存在于空氣中，經(jīng)呼吸道吸入人體，液態(tài)可經(jīng)皮膚，消化道吸收。人體中甲苯主要分布在脂肪組織、肝臟、腎、腦、血清中；二甲苯在脂肪組織、

42、腎上腺、骨髓、腦、血液和肝臟組織中。甲苯和二甲苯為低毒類有機(jī)化合物，毒性作用表現(xiàn)在大劑量時(shí)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制作用和對(duì)皮膚黏膜的刺激作用。尿中馬尿酸作為甲苯的監(jiān)測(cè)指標(biāo)是非特異性的。以靜脈血中甲苯作為監(jiān)測(cè)指標(biāo)。甲基馬尿酸可作為二甲苯的監(jiān)測(cè)指標(biāo)。終末呼出氣中甲苯的解除限值我國(guó)為班末1530min為20mg/m3，班前為5mg/m3。尿中馬尿酸職業(yè)接觸生物限值我國(guó)為1.5g/g肌酐（班末）。三、樣品采集及保存1、呼出氣 終末呼出氣為甲苯和二甲苯的特異性監(jiān)測(cè)指標(biāo)。2、尿樣 由于馬尿酸的半減期較短，采樣時(shí)間要嚴(yán)格控制。樣品4可保存2周，-20保存一個(gè)月。四、呼出氣中甲苯和二甲苯的測(cè)定方法：氣相色譜法和氣相

43、色譜-質(zhì)譜連用法。 （一）氣相色譜法1、原理 用Tenax GC吸附管濃縮采樣 分析時(shí)將Tenax GC吸附管放入熱解吸儀中，250解吸后，由氮?dú)庵苯虞d入色譜柱分離，氫火焰離子化檢測(cè)其檢測(cè)，保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。2、色譜分析參考條件 （二）氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法 此法定性更為準(zhǔn)確可靠。五、尿中馬尿酸和甲基馬尿酸的測(cè)定方法：分光光度法、氣相色譜法、高效液相色譜法（最常用） （一）吡啶-苯磺酰氯光度法測(cè)定尿中馬尿酸1、原理 尿中馬尿酸在吡啶或喹啉存在下，與苯磺酰氯反應(yīng)生成黃色化合物，在乙醇溶液中于470nm波長(zhǎng)下比色定量。2、樣品處理和測(cè)定3、注意事項(xiàng) （1）尿樣顏色較淺，又經(jīng)多倍稀釋時(shí)，

44、可不做尿樣空白，因其對(duì)最終結(jié)果影響較大。 （2）試劑加入順序不能顛倒 （3）喹啉與苯磺酰氯的比例對(duì)馬尿酸的顯色有顯著影響 （4）本法干擾因素較多，采樣時(shí)應(yīng)同時(shí)收集接觸前的尿樣以及非接觸者的尿樣，作為對(duì)照。 （5）甲基馬尿酸對(duì)馬尿酸測(cè)定有正干擾。 （二）高效液相色譜測(cè)定法1、原理 尿樣中馬尿酸和甲基馬尿酸經(jīng)酸水解后用乙酸乙酯萃取，最后經(jīng)反向C18色譜柱分離，紫外檢測(cè)其檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積定量。2、儀器操作條件3、樣品處理和測(cè)定 取1ml尿樣于10ml離心管中，加0.1ml鹽酸溶液（1+1）、0.3g氯化鈉和4ml乙酸乙酯，于旋渦混合器上混合1min，以1000r/min離心5min

45、，取0.4ml乙酸乙酯層于具塞試管中，70水浴中揮干。加1ml水溶解殘留物，進(jìn)行測(cè)定。第三節(jié) 乙 苯一、理化特性 乙苯經(jīng)人體的主要代謝產(chǎn)物扁桃酸（MA），又名苯乙醇酸、苦杏仁酸等。見光易變色有腐蝕性。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)乙苯屬低毒類有機(jī)化合物，高濃度引起神經(jīng)中樞系統(tǒng)反應(yīng)。經(jīng)呼吸道進(jìn)入人體為主，消化道為次，皮膚一般不吸收。三、樣品采集及保存呼出氣中乙苯和尿中扁桃酸為監(jiān)測(cè)指標(biāo)。 （一）呼出氣參照甲苯，二甲苯的采集方法。 （二）尿樣班后尿樣，立即測(cè)定。酸化后的尿樣可在-20保存一個(gè)月。五、尿中扁桃酸的測(cè)定 方法：高效液相色譜法、氣相色譜法 高效液相色譜法1、原理 尿樣加鹽酸酸化后，經(jīng)二氯甲烷-異丙

46、醇混合溶液萃取、濃縮進(jìn)樣，由反向C18色譜柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)。以保留時(shí)間定性，內(nèi)標(biāo)法峰面積定量。2、色譜條件3、樣品處理和測(cè)定4、注意事項(xiàng) （1）二氯甲烷沸點(diǎn)低易被氮?dú)獯蹈桑嵝詶l件下對(duì)尿中雜質(zhì)萃取較少，對(duì)扁桃酸的萃取率很低?；旌陷腿∪軇┰谑覝剌^高時(shí)易揮發(fā)，故標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)定期核對(duì)。 （2）流動(dòng)相中的磷酸能有效抑制扁桃酸的電離，改善峰形有利于色譜分離。 （3）樣品的PH值，柱溫以及甲醇在流動(dòng)相中的比例均影響扁桃酸與尿中其他物質(zhì)的分離效果，測(cè)定時(shí)須實(shí)際調(diào)整操作條件。 第四節(jié) 苯 乙 烯一、理化性質(zhì)苯乙烯：無(wú)色至淡黃色折射率很高的油狀液體。苯乙烯體內(nèi)代謝產(chǎn)物有苯羥乙酸和苯乙醛酸。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)

47、指標(biāo)苯乙烯是制造聚苯乙烯塑料的單體。苯乙烯在人體和動(dòng)物體內(nèi)均無(wú)蓄積。我國(guó)規(guī)定的生物接觸限值是尿中苯乙醇酸加苯乙醛酸班末295mmol/mol肌酐（400mg/g肌酐），或下一班前120mmol/mol肌酐（150mg/g肌酐）三、樣品采集及保存1、呼出氣 用玻璃采樣管采集樣品2、尿樣 班后尿或下一班前尿80100ml，低于10下運(yùn)輸。置于4冰箱保存7d，-20保存2周。四、呼出氣中苯乙烯的測(cè)定1、原理 用Tenax吸附管或活性炭管采集的呼出氣中苯乙烯，熱解吸后進(jìn)樣。經(jīng)聚乙二醇6000柱分離后，氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，峰高定量。2、色譜分析條件3、注意事項(xiàng)（1）注射器配置的苯乙烯

48、標(biāo)準(zhǔn)氣要在短時(shí)間內(nèi)應(yīng)用（2）苯乙烯適宜熱解吸溫度300350，計(jì)算結(jié)果時(shí)應(yīng)用解吸效率校正。五、尿中苯乙醇酸和苯乙醛酸的測(cè)定 方法：氣相色譜法，高效液相色譜法。 第五節(jié) 苯并【a】芘3. 理化特性苯并a芘是有機(jī)物和含碳燃料熱解過(guò)程的產(chǎn)物。致癌性強(qiáng)1-羥基芘是芘的一個(gè)主要代謝產(chǎn)物。4. 代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)致癌性強(qiáng)1-羥基芘是芘的一個(gè)主要代謝產(chǎn)物5. 樣品采集和保存采集接觸者班后尿樣50100ml，用玻璃瓶采樣后立即側(cè)比重。6. 尿中1-羥基芘的測(cè)定 方法：高效液相色譜法和同步熒光測(cè)定法。第五章芳香族硝基和氨基化合物及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定苯的氨基和硝基化合物的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)主要是血中高鐵蛋白及尿或血中各種

49、代謝產(chǎn)物。第一節(jié) 苯胺一、理化特性苯胺為無(wú)色油狀液體，易揮發(fā)，具有特殊氣味，久置顏色可變?yōu)樽厣?。微溶于水，易溶于苯、乙醇、乙醚、和四氯化碳等有機(jī)溶劑。苯胺體內(nèi)代謝產(chǎn)物是對(duì)氨基苯酚無(wú)色、白色或淡黃色結(jié)晶。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)苯胺可經(jīng)過(guò)呼吸道、皮膚和消化道進(jìn)入，經(jīng)皮膚吸收是引起中毒的主要原因。經(jīng)呼吸道進(jìn)入的苯胺，經(jīng)氧化后可形成苯基羥胺，然后再氧化成對(duì)氨基酚，與硫酸、葡萄糖醛酸結(jié)合經(jīng)尿排出。苯胺接觸者血液中高鐵血紅蛋白和尿中對(duì)氨基酚的含量明顯升高，故血樣和尿樣常用作接觸苯胺的生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)試樣。三、樣品采集和保存苯胺需在班末或班后2h內(nèi)采樣。用100ml玻璃瓶收集接觸者班后尿樣，常溫下待會(huì)實(shí)驗(yàn)室于4

50、冰箱中可保存3d。采樣前應(yīng)了解受檢者是否服用藥物。四、尿中對(duì)氨基苯酚的測(cè)定尿中對(duì)胺苯酚的測(cè)定方法有分光光度法、高效液相色譜法和薄層層析法等(一)鹽酸萘乙二胺光度法1.原理 尿樣家鹽酸水解后，于中性溶液中用乙酸乙酯萃取對(duì)氨基酚，再酸化反萃取至鹽酸溶液中，經(jīng)重氮化后，用鹽酸萘乙二胺顯色，于波長(zhǎng)582nm處比色定量。2.樣品處理和測(cè)定 3.注意事項(xiàng)（1）在采集尿樣前了解受檢者是否服用磺胺、撲熱息痛等藥物，并做好記錄。（2）對(duì)氨基酚的氨基重氮化后與鹽酸萘乙二胺顯色的深度與酸度有關(guān)，酸度應(yīng)控制在0.05mol/L為宜。（3）由于對(duì)氨基酚的氨基受羥基影響，與亞硝酸鈉作用后，與鹽酸萘乙二胺在常溫下顯色較慢而

51、不穩(wěn)定，應(yīng)選擇在60水浴保溫1h后立即顯色，顯色溶液在30min內(nèi)保持穩(wěn)定。（二）高效液相色譜法1.原理 尿樣加鹽酸加熱水解后，在酸性條件下用乙酸乙酯提取出去部分干擾物，然后在中性條件下用乙酸乙酯提取尿樣中對(duì)氨基酚，用高效液相色譜法測(cè)定。以保留時(shí)間定性，用峰高或峰面積定量。2.樣品處理和測(cè)定 3.儀器操作條件 反相C18鍵合固定相色譜柱：250mm×4.6mm；柱溫：50；流動(dòng)相：甲醇-水=30+70；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm.4.注意事項(xiàng)（1）采樣后應(yīng)盡早加酸丶，低溫保存。（2）尿中對(duì)氨基酚部分以結(jié)合態(tài)存在，為測(cè)定對(duì)氨基酚總濃度，須將結(jié)合態(tài)對(duì)氨基酚水解，尿樣中

52、加酸后，于沸水浴中加熱1h，可完全水解。（3）水解后尿樣中有未知組分，在中性條件下能與對(duì)氨基酚一起被萃取出來(lái)，干擾測(cè)定。因此，必須在酸性條件下，用乙酸乙酯預(yù)萃取，除掉干擾物，然后再于中性條件下萃取對(duì)氨基酚，預(yù)萃取過(guò)程中對(duì)氨基酚基本無(wú)損失。（4）用堿溶液調(diào)節(jié)溶液PH值不易控制，而用固體磷酸氫二鉀調(diào)節(jié)，操作簡(jiǎn)單，但加入量要足夠，否則影響萃取率。第二節(jié) 硝基苯一、理化性質(zhì)硝基苯未無(wú)色或淡黃色具有苦杏仁味的油狀液體，見光顏色變深。微溶于水，易溶于乙醇、苯、乙醚及其他有機(jī)溶劑。硝基苯的體內(nèi)代謝產(chǎn)物對(duì)-硝基酚（PNP）為白色或黃色片狀晶體，有強(qiáng)還原性。二、代謝和生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)硝基苯屬脂溶性化合物，主要經(jīng)呼吸

53、道、皮膚、消化道吸收。硝基苯在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為對(duì)硝基苯酚和對(duì)氨基酚與葡萄糖醛酸和硫酸結(jié)合，隨尿排出，少量由肺排除。硝基苯接觸者尿中對(duì)硝基酚和對(duì)氨基酚的排出量明顯增高，所以，對(duì)硝基酚和對(duì)氨基酚常作為生物監(jiān)測(cè)指標(biāo)。三、樣品采集和保存1、尿樣 用具蓋乙烯塑料瓶采集接觸者班后尿樣，盡快測(cè)量比重，若用鄰甲酚分光度法檢測(cè)，則要求100ml加3滴甲醛，置于4冰箱中可保存3d。若用高效液相色譜法，則要求100ml加34滴鹽酸，置于4冰箱中可保存2周。2、臟器 取胃、腦、肝、肺等臟器作為樣品，一般取分析量的3倍，盛裝于干燥、潔凈的容器中搗碎，用10%的酒石酸酸化，小火緩慢加熱煮沸。開始用15%氫氧化鈉溶液吸收一些酸、

54、醛類棄去，然后用50%乙醇作吸收液收集1030ml溜液，并盡快檢測(cè)。四、尿中對(duì)硝基酚的測(cè)定（一）鄰甲酚分光光度發(fā)1.原理 尿樣經(jīng)水解后，結(jié)合的對(duì)硝基酚轉(zhuǎn)化為游離形式，用有機(jī)溶劑萃取對(duì)硝基酚，再用氫氧化銨溶液反萃取，用三氯化鈦還原對(duì)硝基酚，生成的對(duì)氨基酚與鄰甲酚作用，形成靛酚藍(lán)于620nm波長(zhǎng)處比色定量。2、樣品處理和測(cè)定3、注意事項(xiàng)（1）加三氯化鈦溶液后，一定要振搖至黃色沉淀為止。（2）在3.0mol/l氫氧化銨溶液的堿性條件下，30min就可顯色完全顏色在120min內(nèi)保持穩(wěn)定。（二）高效液相色譜法1、原理 尿液經(jīng)加酸加熱水解后，用乙酸乙酯萃取對(duì)硝基酚，反相C18柱分離，318nm波長(zhǎng)下檢測(cè)，以保留時(shí)間定性，峰高或峰面積測(cè)定。2、樣品處理和測(cè)定3、儀器操作條件 4、注意事項(xiàng) （1）采樣后應(yīng)盡早加酸，低溫保存。（