細胞工程復習

1、細胞工程復習資料一：名詞解釋（20分）細胞分化：是指發(fā)育起始狀態(tài)的合子沿個體發(fā)育方向不斷分化出形態(tài)結構、生理功能不同的細胞、組織、器官而最終形成完整植株的過程。即由于細胞的分工而導致其結構和功能改變或發(fā)育方式改變的過程。看護培養(yǎng)：配置好花粉粒懸液和固體培養(yǎng)基后，將完整的花藥或花藥愈傷組織置于瓊脂培養(yǎng)基上，再將滅菌后的濾紙放在花藥或愈傷組織上，然后再將欲培養(yǎng)的花粉置于濾紙上培養(yǎng)的方法。細胞雜交：是指在人工控制條件下，不經(jīng)過有性過程將不同類型的兩個或多個細胞合并成一個雙核或多核細胞的過程。外植體：從植物體上分離下來的用于離體培養(yǎng)的材料。人工種子：就是將離體培養(yǎng)中產(chǎn)生的胚狀體或芽包裹在含有養(yǎng)分和保護

2、功能的人工胚乳和人工種皮中形成的類似種子的顆粒?；ǚ叟囵B(yǎng)：又稱小孢子培養(yǎng)，或游離小孢子培養(yǎng)，指在無菌條件下，將花粉從花藥中分離出來使其成為分散或游離態(tài)，發(fā)育成單倍體植株的過程。條件培養(yǎng)基：培養(yǎng)過程中，有些細胞可能會分泌活性物質(zhì)到培養(yǎng)液中，這種培養(yǎng)過某種細胞以后，含有細胞分泌物的培養(yǎng)液稱為條件培養(yǎng)基。植物脫毒：利用物理、化學、生物學等方法除去寄生的病毒的無毒植物。成批培養(yǎng)：將一定量的細胞或細胞團接種到一定容積的液體培養(yǎng)基中進行密封培養(yǎng)的方法。體細胞雜交：又稱原生質(zhì)體融合，是指在人工控制條件下，不經(jīng)過有性過程兩種體細胞原生質(zhì)體相互融合產(chǎn)生雜種細胞。胚胎培養(yǎng)：是指在離體條件下使胚或具胚器官發(fā)育成幼苗

3、的培養(yǎng)技術。體細胞胚：又稱胚狀體，是指離體培養(yǎng)植物的體細胞，也可經(jīng)胚胎發(fā)生過程形成在形態(tài)上與合子胚相似的結構，這種結構同樣具有再生出完整植株的能力。幼胚培養(yǎng)：是指處于原胚期、球形期、心形期、魚雷期的胚培養(yǎng)?；パa選擇：兩個具有不同生理或遺傳特性的親本，在一定的培養(yǎng)條件下形成雜種細胞時能產(chǎn)生互補作用，根據(jù)這一特性進行雜種細胞選擇的方法稱為互補選擇法。懸浮培養(yǎng)：是指將游離的單細胞或小的細胞團，按照一定的細胞密度，懸浮在液體培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)的方法。植板率：（每個平板上形成的細胞團數(shù)/每個平板上接種的細胞總數(shù)）*100%種質(zhì)：是指親代通過生殖細胞或體細胞直接傳遞給子代并決定固有生物性狀的遺傳物質(zhì)。玻璃化

4、凍存：是指利用多種高濃度的冷凍保護劑聯(lián)合形成的玻璃化冷凍保護液保護懸浮細胞，直接投入液氮進行凍存的方法。微繁殖：是指在離體培養(yǎng)條件下，將來自優(yōu)良植株的莖尖、腋芽、葉片、鱗片等器官、組織和細胞進行無菌培養(yǎng)，經(jīng)過不斷地切割和重復培養(yǎng)，使其增值并再生形成完整植株，在短期內(nèi)獲得大量遺傳性均一的個體的方法。原球莖：蘭科植物的種子在萌發(fā)初期并不出現(xiàn)胚根，只是胚逐漸增大，以后種皮的一端破，膨大的胚呈小圓錐狀，稱作原球莖。半連續(xù)培養(yǎng)：是指在反應器中投料和接種培養(yǎng)一段時間后，將細胞懸液移出一部分，同時再加入新鮮培養(yǎng)液進行培養(yǎng)的方法。細胞系：初代培養(yǎng)細胞一經(jīng)傳代后便改稱為細胞系。細胞株：平板培養(yǎng)中，單個細胞經(jīng)持續(xù)

5、分裂，形成許多細胞團，盡可能的使每個細胞團均來自同一個細胞，這種細胞團成為細胞株。器官灌注培養(yǎng)法：利用器官的動靜脈系統(tǒng)灌注血液或含有營養(yǎng)和氧氣的培養(yǎng)液，以此維持器官在體外的長期生存。接觸抑制：細胞相互作用后，如果培養(yǎng)的是正常細胞，由于細胞的相互接觸能抑制細胞的運動的現(xiàn)象。核體：應用細胞松弛素處理培養(yǎng)細胞時，細胞內(nèi)的纖細網(wǎng)狀結構便被切斷，從而使被細胞膜所覆蓋的細胞核移位。經(jīng)離心分離，便可從胞質(zhì)體中分離得到被稱為核體的東西。非對稱融合：是指利用物理或化學方法使某親本的核或細胞質(zhì)失活后再進行的融合。對稱融合：是指兩個完整的細胞原生質(zhì)體融合，一般在融合子中包含有兩個融合親本的全套染色體和全部的細胞質(zhì)。

6、胞質(zhì)體：不含細胞核而僅含有部分細胞質(zhì)的原生質(zhì)體。選擇性篩選：通過改變培養(yǎng)基成分或添加藥物對雜交細胞進行篩選的方法稱為選擇性篩選。原代培養(yǎng)：即第一次培養(yǎng)，是指將培養(yǎng)物放置在體外生長環(huán)境中持續(xù)培養(yǎng)，中途不分割培養(yǎng)物的培養(yǎng)過程。永久細胞系：也稱連續(xù)細胞系，是指細胞獲得持久性增值能力的細胞群體。有限細胞系：原代細胞經(jīng)第一次傳代后，形成細胞群體，即具有增值能力，類型均勻的培養(yǎng)細胞一般為有限細胞系。細胞同步化：指同一懸浮培養(yǎng)體系的所有細胞都同時通過細胞周期中的某一特定時期。間接篩選：是指借助與突變表現(xiàn)型有關的性狀作為選擇指示或篩選壓的方法。超數(shù)排卵：在動物發(fā)情周期，用促性腺激素進行處理，誘發(fā)其卵巢上大量卵

7、泡同時發(fā)育并排卵的技術叫做超數(shù)排卵，簡稱超排。胚胎移植：是指對優(yōu)秀雌性動物進行超數(shù)排卵處理，在其發(fā)情配種后，從其生殖道中取出早期胚胎移植到同期發(fā)情的普通雌性動物生殖道的相應部位，讓其生產(chǎn)后代的技術。胚胎干細胞：一般是從發(fā)育早期的胚胎內(nèi)細胞團中分離培養(yǎng)出來的一種的具有自我更新、無線增值能力、能分化成代表3個胚層組織細胞能力的干細胞。胚胎分割技術：采用顯微操作系統(tǒng)將哺乳動物附植前的胚胎分成若干個具有繼續(xù)發(fā)育潛力部分的生物技術，運用胚胎分割可獲得同卵雙生后代。2、 問答（選擇、填空，簡答，論述80分）一、常用的滅菌方法有哪些，各有哪些優(yōu)缺點？ 1）濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌） 優(yōu)點：高溫高壓蒸汽對生物材

8、料有良好的穿透力，能造成蛋白質(zhì)變性凝固而使微生物死亡，是一種最有效的滅菌方法。 缺點：如果是對培養(yǎng)基或液體溶液滅菌，滅菌時間與需要滅菌的培養(yǎng)基或液體溶液的體積密切相關，時間不足達不到滅菌效果，時間過長培養(yǎng)基內(nèi)的化學物質(zhì)遭到破壞，影響培養(yǎng)基成分。 2）過濾除菌 優(yōu)點： 物質(zhì)不會發(fā)生變性或喪失功能。3）干熱滅菌 缺點：干熱滅菌存在能源消耗大、浪費時間、安全性差問題 4）紫外線滅菌 缺點：由于紫外線穿透物質(zhì)的能力很弱，所以只適于空氣中和物體表面的滅菌，而且要求距照射物質(zhì)以不超過1.2m為宜。 5）熏蒸消毒 優(yōu)點：方法簡便，只需要把消毒的空間關閉緊密即可。 6）藥劑噴霧消毒 二、動物細胞培養(yǎng)常用的培養(yǎng)

9、基組成成分有哪幾類，在離體培養(yǎng)過程中有哪些作用？ 1）天然培養(yǎng)基： 對促進細胞生長繁殖、粘附及中和物質(zhì)的毒性有一定作用。 2）合成培養(yǎng)基：血清的加入對培養(yǎng)非常有效，但對培養(yǎng)產(chǎn)物的分離純化和檢測會造成不便。 3）無血清培養(yǎng)基 細胞外基質(zhì)能幫助細胞附著和貼壁；低分子營養(yǎng)成分是細胞生長和代謝所需的；激素與生長因子促進細胞生長繁殖；酶的抑制劑，保護細胞不受培養(yǎng)基內(nèi)殘留酶的損傷。 三、外植體的發(fā)育程度對愈傷組織的誘導和繼代有何影響？ 答：在胚性愈傷組織的誘導中，外植體的發(fā)育狀態(tài)是一個十分重要的因素。外植體在發(fā)育過程中，存在一個很短暫的時期，此期外植體內(nèi)的某些細胞處于未分化或部分分化的狀態(tài)，這些細胞具有形

10、成胚性愈傷組織的能力，而處于這一發(fā)育時期之前或之后的外植體都只能形成非胚性愈傷組織。因此，選擇適宜的取材時期可獲得理想的培養(yǎng)結果。 四、培養(yǎng)條件下的器官發(fā)生有哪些方式？影響其發(fā)生的因素有哪些？ 答：（1）有直接發(fā)生與間接發(fā)生兩種途徑。 （2）影響其發(fā)生的因素有：1、外源激素的影響2、物理因素：光照、溫度3、外植體的生理狀態(tài)4、培養(yǎng)物的年齡 。五、胚狀體的發(fā)育大約要經(jīng)過哪幾個時期？ 答：一、誘導期 二、胚胎發(fā)育期 六、控制胚性細胞同步化的方法有哪些？ 答：抑制劑法促進細胞同步分裂；低溫處理促進細胞同步分裂；滲透壓控制同步化法；同步胚的分段收集篩選法；通氣法（乙烯）。七、離體繁殖時外植體選擇應注意

11、哪些方面？ 答：生理狀態(tài)和基因型 其中生理狀態(tài)包括年齡、取材、季節(jié)、生長、環(huán)境部位。八、脫除植物病毒病有哪些方法？其原理是什么？ 物理方法 （1）、高溫處理又稱熱療法 原理:一些病毒對熱不穩(wěn)定,在高于常溫的溫度下(35-40 )即 鈍化失活,繁殖力下降,失去侵染能力,而植物基本不受傷害. (2)、低溫處理又稱冷凍療法 原理：降低溫度能使病毒活力下降。 化學處理 (1).病毒抗血清預處理 ： 用齒舌蘭環(huán)斑病毒（ORV）的血清處理蘭屬離體分生組織，提高了再生株中無ORV的植株頻率。 (2).RNA抑制劑處理： 煙草愈傷組織培養(yǎng)基中加入2-硫脲嘧啶，可除去組織中馬鈴薯Y病毒（PVY）。放線菌D和放線

12、菌酮能抑制原生質(zhì)體中病毒的復制。 （3）.三氯唑核苷：病毒唑，化學名稱1,2,4-3唑-3-酰胺-1-D-呋喃核苷，可脫除馬鈴薯莖尖中的X.Y.S和M病毒生物脫毒方法原理：培養(yǎng)材料中通常不含病毒，可通過植物組織培養(yǎng)就行脫毒） （1）、莖尖分生組織培養(yǎng) （2）、微體嫁接脫毒 （3）、愈傷組織培養(yǎng)脫毒 （4）、珠心胚培養(yǎng)脫毒 （5）、花藥培養(yǎng)脫毒 九、影響莖尖分生組織培養(yǎng)去除病毒的因素都有哪些？ （1）、供體的生理狀態(tài)和部位 （2）、適當大小的莖尖分生組織的分離 （3） 、莖尖分生組織培養(yǎng)基的類型和培養(yǎng)條件十、無病毒植物的檢測方法有哪些？ （1）、直接檢測法:直接觀察 （2）、電鏡檢測法 （3 ）

13、、指示植物（敏感植物）法 （4）、血清學檢測法 （5）、分子檢測技術：PCR技術、探針雜交技術十一、簡述植物細胞大規(guī)模培養(yǎng)反應器的類型及原理？ 成批培養(yǎng)：將一定量的細胞或細胞團接種到一定容積的液體培養(yǎng)基中進行密封培養(yǎng)的方法。連續(xù)培養(yǎng)：用一定容積的但非封閉的反應器來進行大規(guī)模細胞培養(yǎng)的方法。半連續(xù)培養(yǎng)：在反應器中投料和接種培養(yǎng)一段時間后，將細胞懸液移出一部分，同時再加入新鮮培養(yǎng)液進行培養(yǎng)的方法。12、 簡述細胞固定化的幾種方法。 答：1、包埋法 其中包埋法包括： （1）海藻酸鹽包埋法 (2)k-卡拉膠包埋法 (3)瓊脂糖包埋法 (4)膜包埋法 2、吸附法 ：（1）聚氨酯泡沫吸附法 （2）尼龍網(wǎng)膜

14、固定法 （3）殼聚糖吸附法 十三、在植物細胞培養(yǎng)中如何提高植物次生代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量？ 答：（一）篩選得到高產(chǎn)細胞系（株）常用方法有： 1、克隆選擇（有相同遺傳基因的細胞群） 指通過單細胞克隆技術和細胞團克隆技術，將培養(yǎng)細胞中能夠積累較多次生代謝物且具有相同遺傳基因的細胞群挑選出來，并加以適當?shù)呐囵B(yǎng)形成高產(chǎn)細胞系。 2、抗性選擇 指在選擇壓力下，通過直接或間接的方法得到抗性變異的細胞系。 3、誘導選擇 是通過化學誘變或紫外線照射等各種物理化學方法誘變產(chǎn)生比原親本細胞全成能力高的細胞系（株） （二）培養(yǎng)條件 1適宜溫度 2、不斷調(diào)節(jié)PH 3、營養(yǎng)成分：一方面要滿足植物細胞的生長所需，另一方面要使每個

15、細胞都能合成和積累次生代謝產(chǎn)物。 4、光：包括光強、光質(zhì)和光照時間對細胞生長和次生代謝產(chǎn)物合成都有一定影響。 5、通氣量和攪拌轉速 6、前體飼喂 7、誘導子的應用：誘導子是指能引起植物細胞某些代謝強度或代謝途徑的物質(zhì)，可分為生物誘導子和非生物誘導子。不同誘導子作用于不同植物可以產(chǎn)生多種多樣的次生代謝產(chǎn)物。 十四、原生質(zhì)體的培養(yǎng)方法有哪些？各有何優(yōu)缺點？ 液體淺層培養(yǎng)法： 優(yōu)點：原生質(zhì)體在液體環(huán)境中有較強的吸收營養(yǎng)物質(zhì)的能力，表現(xiàn)出較強的細胞分裂能力。操作簡單，對原生質(zhì)體的損傷小，且易于添加新鮮培養(yǎng)基和轉移培養(yǎng)物。 缺點：原生質(zhì)體分布不均勻，常常發(fā)生原生質(zhì)體之間的粘連現(xiàn)象而影響其進一步的生長和發(fā)

16、育。此外，難以跟蹤觀察某一個細胞的發(fā)育情況。 雙層培養(yǎng)法液體-固體雙層培養(yǎng)法： 優(yōu)點：固體培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質(zhì)可以緩慢釋放到液體培養(yǎng)基中，如果在下層固體培養(yǎng)基中添加一定量的活性炭，則還可能吸附培養(yǎng)物產(chǎn)生的一些有害物質(zhì)，促進原生質(zhì)體的分裂和細胞團的形成。 缺點：不易觀察細胞的發(fā)育過程。 固體薄層培養(yǎng)法 優(yōu)點：使原生質(zhì)體處于固定位置，避免了原生質(zhì)體的漂浮游動，有利于對單個原生質(zhì)體的細胞壁再生及細胞團形成的全過程進行定點觀察。 缺點：培養(yǎng)基溫度對薄層質(zhì)量和原生質(zhì)體分布有一定影響；另外，固體中單細胞生活能力弱，通氣狀況不良，第一次細胞分裂時間會推遲2d左右。十五、PEG融合與電融合各有何特點？電融合的原

17、理是什么？ PEG法特點：融合成本低；融合產(chǎn)生的雜種細胞率較高。但融合較為繁瑣，PEG可能導致細胞生活力的下降，對細胞有毒害作用電融合特點：(1)融合率高、重復性強、對原生質(zhì)體傷害小。 (2)裝置精巧、方便簡單、可在顯微鏡下觀察或錄像融合過程。 (3)免去PEG誘導后的洗滌過程、誘導過程可控制性強等。 電融合的原理：交流電場使原生質(zhì)體表面電荷偶極化，沿著電極排列，形成串珠。施加直流電場后，形成串珠的原生質(zhì)體在質(zhì)膜接觸處發(fā)生穿孔，開始遺傳物質(zhì)的交流。 十六、體細胞雜交有哪些遺傳特征？如何進行鑒定？ 答：1、形態(tài)學鑒定、具有兩個親本的特征 2、細胞學鑒定、染色體核型、數(shù)目、形態(tài) 核型和形態(tài)相似，數(shù)

18、目相加 3、同工酶鑒定、雜種同工酶譜往往是雙親酶譜的總和 4、分子生物學鑒定十七、試述雜種細胞的選擇方法？ 答：一、互補選擇法：（1）生長互補選擇法 （2）營養(yǎng)缺陷型互補選擇法（3）抗性互補選擇法 （4）細胞代謝互補選擇法 2、 機械選擇法：（1）利用融合親本的形態(tài)色澤上的差異篩選雜種細胞 （2）利用熒光素標記分離雜種細胞 （3）應用熒光激活細胞分選儀自動分離雜種細胞 。十八、花藥培養(yǎng)過程中低溫預處理的原理是什么? 答：低溫處理的作用機理：低溫可改變花粉粒第一次有絲分裂紡錘體的軸向，形成兩個均等細胞，使得花粉朝著胚胎方向發(fā)育；低溫使花粉保持較長時間的活力，使營養(yǎng)細胞得以完成細胞質(zhì)的改組而轉向胚

19、胎發(fā)生。 十九、如何對獲得的花粉植株進行倍性鑒定？染色體加倍的方法有哪些？ 答：倍性鑒定有直接鑒定法（染色體計數(shù)法）和間接鑒定法兩大類，其中間接鑒定法分為1.植株形態(tài)觀察法 2.細胞形態(tài)鑒定法 3.DNA含量測定 4.核體積測量法 5.生化與分子標記鑒定，染色體加倍的方法有1.小苗處理法 2.莖尖處理法 3.培養(yǎng)基處理法 二十、幼胚培養(yǎng)的關鍵技術是什么? 答:幼胚剝離（關鍵） 必須把胚從周圍的組織中剝離出來。因為胚剝離的成功與否是幼胚能否成功的關鍵。 幼胚是一種半透明、高黏稠狀組織，剝離過程中極易失水干縮，因此在剝離時一定要注意保濕，無菌，且操作要迅速。 胚柄的存在對于幼胚培養(yǎng)能否成活及成苗率

20、有重要影響。所以幼胚剝離時應帶胚柄一同取出。 二十一、離體授粉與離體受精有何區(qū)別? 答:離體授粉是指在無菌條件下培養(yǎng)離體的未受精子房或胚珠和花粉，使花粉萌發(fā)產(chǎn)生的花粉管進入胚珠完成受精而結實的過程。由于從花粉萌發(fā)、到精卵細胞融合形成種子，直至種 子萌發(fā)產(chǎn)生幼苗都是在試管內(nèi)完成的，所以也稱其為試管受精。 離體受精是指離體及人工控制的環(huán)境下，精卵細胞融合形成合子的過程。它包括配子的分離、雌雄配子融合和合子培養(yǎng)三個階段。二十二：試述超低溫保存的基本原理，常用的超低溫保存方法有哪些？ 超低溫保存的基本原理：在超低溫（液氮）保存過程中，植物細胞內(nèi)自由水被固化或企劃，僅剩下不能被利用的束縛水，酶促反應停止

21、，幾乎所有的細胞代謝活動。生長都停止了，當解凍后，又能夠恢復再生能力。 超低溫保存的方法有：傳統(tǒng)的降溫冷凍方法、玻璃化保存法、包埋脫水超低溫保存、包埋玻璃化法超低溫保存。其中，降溫冷凍方法包含了快速冷凍法、慢速冷凍法、兩步冷凍法、逐級冷凍法。 二十三、簡述超低溫冷凍保存種質(zhì)資源的基本程序。 答：超低溫保存材料的選取材料的預處理降溫冷凍及超低溫保存解凍再培養(yǎng)超低溫保存后細胞或組織活力檢測 二十四、舉例說明動物細胞培養(yǎng)的目的與用途。 1. 生物制品的生產(chǎn)(如制備單克隆抗體） 2.轉基因動物細胞的培養(yǎng) 3.檢測有毒物質(zhì)并判斷其強弱 4.醫(yī)學研究（生理 病理 藥理）

22、60;5.器官移植培養(yǎng) 6.篩選抗癌藥物二十五、接觸抑制與密度抑制有什么異同。 答：接觸抑制:細胞從接種到長滿容器表面后，由于細胞繁殖數(shù)量增多相互接觸后，不再增加。（正常細胞）密度抑制: 細胞接觸匯合成片后，只要營養(yǎng)充分，細胞仍能進行增殖分裂，但當細胞密度達到一定程度后，營養(yǎng)相對缺乏，代謝產(chǎn)物增多，發(fā)生密度抑制現(xiàn)象。 （惡性細胞）二十六、試舉一例說明細胞建系的全過程（列出主要方法、步驟及所需的儀器設備）。答：p252二十七、試述動物細胞生物反應器的發(fā)展趨勢。P245二十八、細胞融合的原理與技術要點是什么? 原理：膜的流動性。技術要點：兩親本細胞的質(zhì)膜發(fā)生融合，形成同一的質(zhì)膜。二十九、

23、試述雜交瘤技術生產(chǎn)MCAb的原理？ 答：B淋巴細胞在抗原的刺激下，能夠分化、增殖形成具有針對這種抗原分泌特異性抗體的能力。B細胞的這種能力和量是有限的，不可能持續(xù)分化增殖下去，因此產(chǎn)生免疫球蛋白的能力也是極其微小的。將這種B細胞與非分泌型的骨髓瘤細胞融合形成雜交瘤細胞，再進一步克隆化，這種克隆化的雜交瘤細胞是既具有瘤的無限生長的能力，又具有產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細胞的能力，將這種克隆化的雜交瘤細胞進行培養(yǎng)或注入小鼠體內(nèi)即可獲得大量的高效價、單一的特異性抗體。這種技術即稱為單克隆抗體技術。 三十、試述雜交瘤技術生產(chǎn)MCAb的主要技術過程？ 淋巴細胞雜交瘤技術的主要步驟包括：動物免疫、細胞融合、雜

24、交瘤細胞的篩選與單抗檢測、雜交瘤細胞的克隆化、凍存、單抗的鑒定等 。三十一、簡述胚胎的質(zhì)量鑒定及分級方法。 質(zhì)量鑒定：1、形態(tài)學鑒定 評定的主要內(nèi)容：卵子是否受精；透明帶的規(guī)則性；胚胎的色調(diào)和透明度；卵裂球的致密程度；卵周隙是否有游離細胞或細胞碎片；胚胎體身的發(fā)育階段與胚胎日齡是不一致。 2、染色檢查 1）熒光染色檢查： 二乙酸熒光素染色（FDA）：活力越強的細胞顯示出淡綠色的熒光越強；死亡或活力降低的細胞不發(fā)熒光或僅有微弱熒光 2）臺盼藍染色檢查：有活力的細胞不著色，死亡細胞充滿著臺盼藍著色顆粒。 3、體外培養(yǎng)法 分為四個級別： A級：形態(tài)正常，卵裂球致密、整齊、清晰，發(fā)育階段與日齡一致，無游離的細胞和液泡或很少，變性細胞比例小于10%?？捎糜谂咛ヒ浦?。 B級：卵裂球稍微不勻，比較致密、整齊，可見一些游離的細胞和液泡，變性細胞比例占10%30%。可用于胚胎移植。 C級：卵裂球不勻，變形，發(fā)育較慢，游離的細胞和液泡較多，變性細胞達30%50%。 D級：卵裂球多數(shù)變形、異常，發(fā)育緩慢，變性細胞占胚胎大部分，約75%。 三十二：簡述胚胎移植的方法及操作步驟