細胞培養(yǎng)基種類

1、細胞培養(yǎng)基的選擇及常用數(shù)據(jù)庫日期：2012-04-13 來源：未知 作者：網友 點擊：次 細胞實驗技術經典的培養(yǎng)基有很多種，Invitrogen(G IB CO) 、Thermo Fisher(HyClone) 、Sigma 等公司都可以提供。其中 DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應用最廣泛的培養(yǎng)基。其他 如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細胞的培養(yǎng)。 MEM是由Eagle ' s基礎培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的，其中增加了組分的范圍及 濃度。 Dulbecco改良的BEM(DMEM)培養(yǎng)基是為小鼠成纖維細胞設計的， 現(xiàn)在常用于貼壁細胞的培養(yǎng)。 DM

2、EM的氨基酸濃度是 MEM的兩倍，維生素濃度是 MEM的4倍， 采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。 最初的配方中葡萄糖含量為 1000 mg/L，后來為了某些細胞的生長需要，將葡萄糖含量又調整為4500 mg/L ,這就是大家常說的低糖和高糖了。 aMEM含有附加的氨基酸、維生素以及核昔和脂肪酸，它可廣泛應用于各種細 胞類型，包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細胞。 Ham ' s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的，現(xiàn)在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產物，這種培養(yǎng)基已應用于許多原代培

3、養(yǎng)及更難養(yǎng)的細胞系的培養(yǎng)。 RPMI 1640培養(yǎng)基是專為淋巴細胞培養(yǎng)而設計的，現(xiàn)在已廣泛應用于懸浮細胞 的培養(yǎng)。以前經常聽到有人問， 這種細胞該用哪一種培養(yǎng)基呢？其實這個問題的答案可以很簡單，也可以好復雜。此話怎講 ？如果這種細胞是購自 ATCC或其他的細胞庫，那很簡 單，問供應商就行了。或者找到相關的文獻，作為參考。Invitrogen網站上有一個 CellLine Database的工具，也很好用。選擇你感興趣的細胞類型，它就會彈出推薦的培養(yǎng) 基、血清和轉染試劑等，有時還有優(yōu)化好的轉染步驟，很方便。Sigma網站上也有一個Media Expert ,包括了培養(yǎng)基所有成分的功能描述、使用推

4、介和參考文獻等，它還是一個解決問題能手，對于細胞培養(yǎng)中的常見問題，如細胞貼壁不好、培養(yǎng)基變色等， 它都會列出可能的原因，并提供補救辦法。這個Expert果然不簡單！但如果你是著手建立一種全新細胞的培養(yǎng)體系，根本找不到任何參考，那你就得 花點時間自己試驗了。 萬事開頭難嘛。因為沒有一個標準答案。 在MEM中培養(yǎng)的細胞， 很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長?？傊?，首選MEM做貼壁細胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細胞培養(yǎng)會是一個好的開始。你也可以購買幾種培養(yǎng)基來，然后花大約兩 周的時間做一個簡單的細胞生長實驗，來選擇其中最適合的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn) 你的最佳培養(yǎng)條件與文獻報道的不同，就算

5、是同一種培養(yǎng)條件，細胞的生長狀態(tài)也時 好時壞，這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高 培養(yǎng)基的穩(wěn)定性，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。以前大部分實驗室都是用干粉培養(yǎng)基，但配制過程就較為繁瑣， 要溶解、調pH值,過濾，過程中可能會產生一些濃度誤差，而且有些實驗室的水質并不理想，所以培養(yǎng) 的效果會有差異。如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會減少，因為畢竟是大批量 工業(yè)化生產的，批間差會很小。大家是不是感覺液體培養(yǎng)基會貴很多，以前是這樣， 但現(xiàn)在非也。HyClone和Invitrogen都在國內建立了液體培養(yǎng)基的生產基地，生產和 運輸成本大幅降低，所以現(xiàn)在的價格也只是 50

6、-60元/500ml，比干粉培養(yǎng)基貴不了多少， 而且還幫你省了過濾器和時間。血清含有生長因子可促進細胞的繁殖，含有附著因子可促進細胞的貼壁，同時還 具有抗胰酶活性。血清同時也是礦物質、脂類及激素的來源。最常用的血清有小牛血 清、新生牛血清、胎牛血清和馬血清等。牛血清是按照采血時間的早晚來分類的。采 血時間越早，營養(yǎng)物質越豐富，所含抗體也越少，因而胎牛血清適合要求高的細胞系 和克隆化培養(yǎng)。由于瘋牛病的原因，到目前為止，我國政府仍然禁止從北美洲、歐洲 和日本等地區(qū)進口牛血清，因此市面上的牛血清大多來自澳洲、南美洲，或是國產的。而血清批次間的差別就是不可避免的，這種差異來源于不同的制備方法和除菌方

7、法、動物的年齡差別及血清的儲存條件等，而且與取血動物的來源關系密切。不同的 牧場、不同的氣候天氣及其他環(huán)境因素都可能影響血清的質量。因此選好了一種血清 就要盡可能長期使用它。在需要更換時，也要盡量保持與原有的一批血清相似?，F(xiàn)在 很多公司都提供血清預留，你一旦選定了某個批次的血清，最好備足一年的量，這樣可以避免很多麻煩。血清固然是細胞培養(yǎng)中不可或缺的成分，但正如上文所說，血清的批間差異大， 更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應也是必 須要考慮的因素。由于氣候或瘋牛病的影響，說不定哪天血清就突然沒得賣了，那對 實驗的影響可非同小可。另外，血清的價格也很昂貴，雖說現(xiàn)在

8、也有便宜的國產血清， 但是高品質的澳洲血清價格仍舊高企。因此，也有一些實驗室開始換用無血清培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基(Serum-Free Media)，通常以SFM表示，顧名思義，就是在細胞培 養(yǎng)中不需要添加血清，但是在某些應用中可能要添加生長因子或細胞因子。無血清培 養(yǎng)基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生長因子、必需的營養(yǎng)物質和激素等，能 減少上述血清帶來的不利因素，使細胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。但它也不是完美的，從有 血清培養(yǎng)過渡到無血清培養(yǎng)的條件并不像想象中那么直截了當。處于發(fā)育的不同分化 階段的細胞(例如干細胞與定向前體細胞相比)需要不同的配方，對生長因子和細胞因子 的選擇尤為重要。而且在去除

9、血清的同時，也去除了一些血清蛋白具有的保護、解毒 作用，因此對試劑、水的純度和儀器清潔度的要求更高。另外，它的價格也比普通的 培養(yǎng)基貴很多?，F(xiàn)在有很多廠家生產無血清培養(yǎng)基。GIB CO這個細胞培養(yǎng)的金字招牌當然少不了， 它也是最早研制無血清培養(yǎng)基的。目前已經開發(fā)了ES細胞、雜交瘤、CHO、293、昆蟲細胞、神經細胞、淋巴細胞、角質細胞、內皮細胞等多種細胞的無血清培養(yǎng)基。上個月還推出了首個間充質干細胞的無血清培養(yǎng)基，能使MSC維持未分化狀態(tài)超過9代。HyClone公司也有 CHO、293、雜交瘤細胞、昆蟲細胞、病毒疫苗細胞的多種無血清 培養(yǎng)基。Sigma則剛剛收購了澳大利亞 JRH公司，有了 J

10、RH的EX-CELL系列，無血 清培養(yǎng)基的選擇也更多了。這么多種，要選擇起來也是個頭疼的事情。除了部分培養(yǎng)基是公開配方的，如用 于培養(yǎng)內皮細胞的 MCDB 131(Sigma),大部分液體培養(yǎng)基都是專利配方的，也就是說 其中的成分是保密的。那么你只能是檢索文獻、讓供應商推薦，然后用自己的細胞做 幾次傳代培養(yǎng)來選出最合適的培養(yǎng)基。畢竟實踐出真知嘛。P.S.附上一些細胞培養(yǎng)中的小 Tip,可能會對您有所啟發(fā)。(部分摘自Invitrogen的中文Focus）?切記，細胞培養(yǎng)基的儲存條件是2-8攝氏度。如果細胞培養(yǎng)基不小心被凍，您應該融化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產生。如果沒有沉淀產生，培養(yǎng)基可以正常使用

11、，如 果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。?貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基，可能在放置幾天后顏色變紫。這主要是由 于在暴露到周圍的 CO2水平時，碳酸氫納導致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口，在 CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘，來校正溶液的 pH值（確定松開瓶口以保 證氣體交換）。?當在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的 50%。血清蛋白會結合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活， 可能對于細胞達到毒性水平。? 一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。 因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。?總之，

12、大部分添加物和試劑最多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會影響它的性能。?血清的熱滅活在免疫分析時可以滅活補體系統(tǒng)。在免疫學研究，培養(yǎng) ES細胞, 昆蟲細胞和平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。熱滅活是以往公認的操作步驟，并 沒有確鑿的證據(jù)說明這樣做是有益的。相反，對大部分細胞而言，GIBCO和HyClone都不推薦熱滅活血清。因為加熱可能使血清中的沉淀增加，使您誤以為污染。?如何避免血清中沉淀物的產生？1. 解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法 （-20 C至4C至室溫），若血清解凍時 改變的溫度太大（如-20 C至37 C）,實驗顯示非常容易產生沉淀物

13、。并隨時將之搖晃均 勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。2. 請勿將血清置于37 C太久。若在37C放置太久，血清會變得混濁，同時血清中 許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害，而影響血清的質量。3. 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。4. 若必須做血清的熱滅活，請遵守 56 C, 30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫 度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。?在進行傳代培養(yǎng)時，我們強烈推薦進行臺盼蘭活性記數(shù)。研究者常常通過一個簡單的稀釋（1 : 4或1 ： 2）進行傳代，不進行活性檢測，您可能接種比你認為的低的多的 濃度的細胞，這常?？赡軐е律L緩慢或培養(yǎng)物根本