國(guó)家自然科學(xué)基金研究方案撰寫技巧

1、. 國(guó)家自然科學(xué)基金國(guó)家自然科學(xué)基金 研究方案撰寫技巧研究方案撰寫技巧 成都中醫(yī)藥大學(xué)：丁維俊成都中醫(yī)藥大學(xué)：丁維俊 2013. 11 2013. 11.NSFCNSFC項(xiàng)目申請(qǐng)書內(nèi)容項(xiàng)目申請(qǐng)書內(nèi)容簡(jiǎn)表、摘要立項(xiàng)依據(jù)研究方案研究方案研究條件與基礎(chǔ)經(jīng)費(fèi)預(yù)算.NSFC研究方案: 330分1. 研究?jī)?nèi)容和擬解決的關(guān)鍵問題（80分）范圍合適：3-5個(gè)內(nèi)容：n重點(diǎn)突出：1-2個(gè)重點(diǎn)：關(guān)鍵問題選擇準(zhǔn)確：2. 技術(shù)路線（90分）設(shè)計(jì)合理：方法可行：成熟可靠; 可重復(fù)性強(qiáng) 3. 研究方法及手段（90分）方法先進(jìn)：技術(shù)成熟可靠：有創(chuàng)新：4. 研究的預(yù)期目標(biāo)（70分）：可以達(dá)到，留有余地。發(fā)表論文：申請(qǐng)專利：可應(yīng)

2、用產(chǎn)品的開發(fā)：.摘要的主要內(nèi)容是研究方案摘要的主要內(nèi)容是研究方案 如：如：“用用方法進(jìn)行方法進(jìn)行研究，探索研究，探索/ /證明證明問問題，對(duì)闡明題，對(duì)闡明機(jī)制機(jī)制 揭示揭示規(guī)律有重要意義，規(guī)律有重要意義，為為奠定基礎(chǔ)提供奠定基礎(chǔ)提供思路思路 ”.立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系立論依據(jù)、研究方案與研究基礎(chǔ)的系 立論依據(jù)立論依據(jù)：闡述背景和理由，回答：闡述背景和理由，回答“為什么為什么” 研究方案研究方案：是申請(qǐng)書的核心，回答：是申請(qǐng)書的核心，回答“怎么做怎么做” 研究基礎(chǔ)研究基礎(chǔ)：展示積累和實(shí)力，建立：展示積累和實(shí)力，建立“信任感信任感”.研究方案研究方案研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題研究

3、目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容和擬解決關(guān)鍵問題研究方法、技術(shù)路線研究方法、技術(shù)路線年度研究計(jì)劃及預(yù)期進(jìn)展年度研究計(jì)劃及預(yù)期進(jìn)展.1. 1. 研究目標(biāo)研究目標(biāo)撰寫要求：撰寫要求： 有限目標(biāo)，與研究?jī)?nèi)容相呼應(yīng)有限目標(biāo)，與研究?jī)?nèi)容相呼應(yīng) .【研究目標(biāo)研究目標(biāo)】 篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確篩選出與老年性白內(nèi)障相關(guān)的基因，明確 部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀部分基因在白內(nèi)障形成中的作用，從晶狀體上體上 皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)皮變化的角度闡明白內(nèi)障的發(fā)生機(jī)理，為防治白內(nèi)障提供線索。理，為防治白內(nèi)障提供線索。 .研究目標(biāo)研究目標(biāo)1 1個(gè)目標(biāo)個(gè)目標(biāo): : 解決解決科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問題科學(xué)問題和學(xué)術(shù)性問

4、題關(guān)鍵問題關(guān)鍵問題1 12 2個(gè)，并與目標(biāo)一致個(gè)，并與目標(biāo)一致問題：目標(biāo)問題：目標(biāo)“大、平、淺大、平、淺” 沒有做到?jīng)]有做到“專、精、深專、精、深” 應(yīng)提倡應(yīng)提倡“小題大做小題大做”. 2 2、研究?jī)?nèi)容、研究?jī)?nèi)容存在問題：內(nèi)容過多，一個(gè)研究周期難以完存在問題：內(nèi)容過多，一個(gè)研究周期難以完成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。成；內(nèi)容分散，不能集中闡明研究目標(biāo)。 撰寫要求：內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周撰寫要求：內(nèi)容要適當(dāng)，確保研究周期內(nèi)完成；期內(nèi)完成； 與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)與目標(biāo)相輔相成，為研究目標(biāo)服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。服務(wù)。篇幅要適度，注意與技術(shù)路線區(qū)別。 . 研究?jī)?nèi)容研究?jī)?nèi)容:

5、 : 相對(duì)集中的有限目標(biāo)相對(duì)集中的有限目標(biāo)和研究目的要一致，要有能支持新思路相應(yīng)的新內(nèi)容，體現(xiàn)出創(chuàng)新點(diǎn)和特色。深入的文獻(xiàn)調(diào)研：凝煉出的科學(xué)問題是什么？深入的文獻(xiàn)調(diào)研：凝煉出的科學(xué)問題是什么？采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個(gè)科學(xué)問題？采用什么創(chuàng)新的方法、途徑、思路解決這個(gè)科學(xué)問題？解決這個(gè)科學(xué)問題對(duì)學(xué)術(shù)界和臨床有什么意義？解決這個(gè)科學(xué)問題對(duì)學(xué)術(shù)界和臨床有什么意義？對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有何潛在的指導(dǎo)價(jià)值？對(duì)社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展有何潛在的指導(dǎo)價(jià)值？.3. 3. 研究方法研究方法 （1 1）病例納入與排除方法）病例納入與排除方法 （2 2）（臨床）檢測(cè)指標(biāo)與標(biāo)本采集）（臨床）檢測(cè)指標(biāo)與標(biāo)本采集 （2 2）

6、基本研究方法）基本研究方法 （3 3）特殊研究方法）特殊研究方法 （4 4）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理）統(tǒng)計(jì)學(xué)處理.材料或研究對(duì)象材料或研究對(duì)象 模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料模型與目標(biāo)及內(nèi)容相吻合；材料 可靠，對(duì)象可控制；自擬處方可靠，對(duì)象可控制；自擬處方 要論證。要論證。分分 組組( (方方 案案) ) 設(shè)計(jì)和樣本量要符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，設(shè)計(jì)和樣本量要符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求， 對(duì)照要嚴(yán)格。對(duì)照要嚴(yán)格。方方 法法 在保證準(zhǔn)確、可靠的前提下，盡在保證準(zhǔn)確、可靠的前提下，盡 可能要有創(chuàng)新。可能要有創(chuàng)新。指指 標(biāo)標(biāo) 針對(duì)性強(qiáng)是第一位。盡量采用最針對(duì)性強(qiáng)是第一位。盡量采用最 新的專一性強(qiáng)的指標(biāo)并要論證其新的專一性強(qiáng)的指標(biāo)并要論證

7、其 可行性和適用性。可行性和適用性。. 介紹技術(shù)方法的技巧介紹技術(shù)方法的技巧 成熟的方法要簡(jiǎn)要介紹，重點(diǎn)闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù)成熟的方法要簡(jiǎn)要介紹，重點(diǎn)闡明應(yīng)用于本研究的依據(jù) 新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究新方法要詳細(xì)介紹其原理，并闡明可以應(yīng)用于本研究 的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 注意：必須對(duì)所運(yùn)用的技術(shù)方法原理、流程及在實(shí)際注意：必須對(duì)所運(yùn)用的技術(shù)方法原理、流程及在實(shí)際應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚。應(yīng)用中可能出現(xiàn)的問題要十分清楚。. 研究方法常見問題研究方法常見問題 過于簡(jiǎn)單：在實(shí)驗(yàn)方案中只有方法名稱而無(wú)具體步驟。過于簡(jiǎn)單：在實(shí)驗(yàn)方案中只有方法名稱而無(wú)具體

8、步驟。 過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法。過于繁雜：大量羅列一些常規(guī)的實(shí)驗(yàn)方法。 撰寫要求：撰寫要求：以研究項(xiàng)目的需求為前提，盡量采用目前以研究項(xiàng)目的需求為前提，盡量采用目前 最先進(jìn)的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體最先進(jìn)的方法和手段，并將其操作步驟和關(guān)鍵環(huán)節(jié)體 現(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中?，F(xiàn)在技術(shù)路線當(dāng)中。. 4 4、擬解決的關(guān)鍵問題、擬解決的關(guān)鍵問題 什么是關(guān)鍵問題什么是關(guān)鍵問題 ？ -研究過程中對(duì)達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的研究過程中對(duì)達(dá)預(yù)期目標(biāo)有重要影響的 某些研究?jī)?nèi)容或因素。某些研究?jī)?nèi)容或因素。 -為達(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或?yàn)檫_(dá)預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或 研究手段。研究手段。

9、撰寫要求：撰寫要求：找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。找出關(guān)鍵問題，寫出解決辦法。.技術(shù)路線：路線圖，簡(jiǎn)單明了技術(shù)路線：路線圖，簡(jiǎn)單明了. 5 5、技術(shù)路線、技術(shù)路線 存在問題：存在問題： 不清楚，不詳細(xì)，不可行。不清楚，不詳細(xì)，不可行。 撰寫要求：撰寫要求： 清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。清晰、詳細(xì)、注意邏輯性。 撰寫方法：撰寫方法：以時(shí)間順序?yàn)橹骶€設(shè)計(jì)技術(shù)路線以時(shí)間順序?yàn)橹骶€設(shè)計(jì)技術(shù)路線以研究?jī)?nèi)容為主線設(shè)計(jì)技術(shù)路線以研究?jī)?nèi)容為主線設(shè)計(jì)技術(shù)路線分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。分大小標(biāo)題，突出邏輯關(guān)系。詳細(xì)地寫清楚每個(gè)具體步驟。詳細(xì)地寫清楚每個(gè)具體步驟。.研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容、研究方法、研究目標(biāo)、研究?jī)?nèi)容、研究方

10、法、 技術(shù)路線及其關(guān)系技術(shù)路線及其關(guān)系 1 1、首先要確定研究目標(biāo)：、首先要確定研究目標(biāo)：國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的國(guó)內(nèi)外現(xiàn)狀分析中提出的 具體科學(xué)問題就是項(xiàng)目的研究目標(biāo)具體科學(xué)問題就是項(xiàng)目的研究目標(biāo)2 2、依據(jù)依據(jù)目標(biāo)確定研究?jī)?nèi)容，根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法目標(biāo)確定研究?jī)?nèi)容，根據(jù)內(nèi)容選擇研究方法3 3、研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別：、研究?jī)?nèi)容與技術(shù)路線的區(qū)別： 研究?jī)?nèi)容：研究?jī)?nèi)容：重點(diǎn)回答觀察什么指標(biāo)、階段目標(biāo)。重點(diǎn)回答觀察什么指標(biāo)、階段目標(biāo)。 技術(shù)路線：技術(shù)路線：重點(diǎn)回答怎么做的操作流程。重點(diǎn)回答怎么做的操作流程。. 6 6、可行性分析、可行性分析 理論分析：學(xué)術(shù)可行性理論分析：學(xué)術(shù)可行性 研究手段、方

11、法分析：技術(shù)可行性研究手段、方法分析：技術(shù)可行性 預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：前期基礎(chǔ)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：前期基礎(chǔ) 對(duì)所具備的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析對(duì)所具備的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行分析 對(duì)項(xiàng)目組成員搭配及其運(yùn)用技術(shù)方法的能力分析對(duì)項(xiàng)目組成員搭配及其運(yùn)用技術(shù)方法的能力分析. 7 7、創(chuàng)新性、創(chuàng)新性 對(duì)創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。對(duì)創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。 原始創(chuàng)新：原始創(chuàng)新： 填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論；填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論； 新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。 跟蹤創(chuàng)新：跟蹤創(chuàng)新： 在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論；在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論； 對(duì)原有技術(shù)方法修改

12、后產(chǎn)生對(duì)原有技術(shù)方法修改后產(chǎn)生1 11 12 2的效果。的效果。. 8 8、年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果、年度研究計(jì)劃及預(yù)期研究結(jié)果 年度研究計(jì)劃：年度研究計(jì)劃： 按年度列出：研究?jī)?nèi)容及其階段目標(biāo)；按年度列出：研究?jī)?nèi)容及其階段目標(biāo)；擬組織擬組織 的重要學(xué)術(shù)交流活動(dòng)、國(guó)際合作與交流計(jì)劃等。的重要學(xué)術(shù)交流活動(dòng)、國(guó)際合作與交流計(jì)劃等。 預(yù)期研究結(jié)果：預(yù)期研究結(jié)果： 理論成果：建立理論成果：建立/豐富豐富/補(bǔ)充補(bǔ)充/填補(bǔ)填補(bǔ) . 技術(shù)方法：建立技術(shù)方法：建立/完善完善 . 專專 利：可望獲得利：可望獲得 論論 文：國(guó)際、國(guó)內(nèi)文：國(guó)際、國(guó)內(nèi) 人才培養(yǎng)：青年科技骨干、博碩研究生人才培養(yǎng)：青年科技骨干、博碩研

13、究生 .研究方案寫作要點(diǎn)研究方案寫作要點(diǎn)條理清楚條理清楚 邏輯邏輯性性目標(biāo)明確目標(biāo)明確 重要重要性性論據(jù)充分論據(jù)充分 科學(xué)性科學(xué)性方法可行方法可行 可行可行性性基礎(chǔ)良好基礎(chǔ)良好 優(yōu)越性優(yōu)越性.案例分享題目：題目：溫腎健脾針法對(duì)脾腎兩虛型肥胖腸道脂代溫腎健脾針法對(duì)脾腎兩虛型肥胖腸道脂代謝核心菌群的調(diào)控機(jī)理謝核心菌群的調(diào)控機(jī)理.【摘摘 要要】腸道菌群不僅轉(zhuǎn)化膽汁酸影響脂肪吸收，而且與體重及肥胖關(guān)系密切。中醫(yī)將單純性肥胖分為脾虛濕阻、脾腎兩虛等型，針?biāo)幘锌隙ǒ熜В狈χT如調(diào)節(jié)腸道菌群等微觀機(jī)理研究。本課題擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50例，比較其腸道菌群構(gòu)成與脂代謝特征、大便膽酸

14、鹽譜及短鏈脂肪酸譜、大便能量與膳食纖維殘存量、血液脂代謝關(guān)鍵激素(Leptin,insulin, Cholecystokinin)及FIAF酶含量，以期揭示脾腎兩虛型肥胖證之能量收獲及脂代謝核心菌群，及其導(dǎo)致機(jī)體脂質(zhì)異常和肥胖的關(guān)聯(lián)機(jī)制。以溫腎健脾針法治療至肥胖癥狀及BMI指標(biāo)明顯改善；采用前述方法檢測(cè)療效前30名每2周收集的血清與大便樣本，獲得溫針法對(duì)腸道菌群及其脂代謝的動(dòng)態(tài)調(diào)控模式。本項(xiàng)目可望揭示脾腎兩虛型肥胖與腸道菌群之能量與脂代謝異常亢進(jìn)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)溫腎健脾針法的全新治療機(jī)理，拓展中醫(yī)藥肥胖治療理論，并為多學(xué)科攻克肥胖作出奠基性貢獻(xiàn)。.研究意義腸道菌群與機(jī)體能量及脂質(zhì)代謝關(guān)系密切，肥

15、胖患者腸道含有促進(jìn)能量收獲與脂肪貯存的核心菌群。但不同證型肥胖患者是否有特定的核心菌群？脾腎兩虛型肥胖相關(guān)核心菌群有何特征？針刺減肥作用機(jī)理之中，是否包括并如何調(diào)整腸道菌群？本課題擬完成這些十分重要的探索性研究。具體研究意義有三：（1）揭示脾腎兩虛型肥胖證能量及脂代謝核心菌群，開啟針刺減肥研究新領(lǐng)域；（2）建立溫腎健脾針法經(jīng)由調(diào)整腸道脂代謝相關(guān)的核心菌群而減肥的新學(xué)說；（3）構(gòu)建針?biāo)帨p肥與腸道菌群研究新平臺(tái)，促進(jìn)肥胖機(jī)理研究與藥物研發(fā)。.研究目標(biāo)研究目標(biāo) 揭示脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進(jìn)能量收獲與脂代謝的腸道核心菌群，闡明溫腎健脾針法通過調(diào)整脂代謝菌群而治療肥胖的新機(jī)制，建立證候與腸道菌群研究

16、平臺(tái)。.2.1 2.1 研究?jī)?nèi)容研究?jī)?nèi)容基于上述目標(biāo)，本項(xiàng)目擬納入脾腎兩虛型單純性肥胖患者及健康志愿者各50名，以及療效評(píng)分前30名患者治療中采集樣本，完成下述研究：2.2.1篩查促進(jìn)脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查促進(jìn)脂肪代謝的腸道核心菌群。篩查對(duì)脂肪代謝起促進(jìn)、抑制或雙向作用的代表性菌屬，然后采用自動(dòng)菌種鑒定儀進(jìn)一步鑒定到種。這三方面代表性細(xì)菌，組成與脂代謝直接相關(guān)的腸道核心菌群。2.2.2分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類與含量。分析膽汁酸譜、短鏈脂肪酸譜等大便脂代謝相關(guān)分子種類與含量。2.2.3 檢測(cè)單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量。檢測(cè)單位大便卡路里殘存率、膳食纖維含量

17、。2.2.4測(cè)試肥胖相關(guān)激素測(cè)試肥胖相關(guān)激素(leptin,insulin, Cholecystokinin)(leptin,insulin, Cholecystokinin)與與FIAFFIAF酶含量。酶含量。2.2.5體外試驗(yàn)該核心菌群的能量收獲效率。體外試驗(yàn)該核心菌群的能量收獲效率。2.2.6整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥整合研究，揭示患者能量與脂代謝核心菌群特征，以及針刺減肥新機(jī)理新機(jī)理。.2.3 2.3 擬解決的關(guān)鍵問題擬解決的關(guān)鍵問題宿主的生存環(huán)境、生活方式、遺傳背景、生理病理狀態(tài)、免疫功能、疾病史與用藥史等多種因素，都可影響特定個(gè)體的腸道菌群。如何排除眾

18、多干擾因素，獲得脾腎兩虛型單純性肥胖患者促進(jìn)能量收獲與脂肪代謝的腸道核心菌群，是本項(xiàng)目擬解決的關(guān)鍵問題。本項(xiàng)目擬采取下述四種方法，針對(duì)性地排除干擾因素，解決此關(guān)鍵問題（1 1）嚴(yán)格病例納入。）嚴(yán)格病例納入。采用中西醫(yī)肥胖診斷權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)，病證結(jié)合納入病例。（2 2）巧妙設(shè)計(jì)對(duì)照。）巧妙設(shè)計(jì)對(duì)照。（3 3）強(qiáng)化檢測(cè)指標(biāo)的互補(bǔ)性、相互驗(yàn)證性。）強(qiáng)化檢測(cè)指標(biāo)的互補(bǔ)性、相互驗(yàn)證性。（4 4）設(shè)計(jì)體外驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。）設(shè)計(jì)體外驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。.采用國(guó)內(nèi)常用脾腎兩虛型單純性肥胖標(biāo)準(zhǔn)患者與健康對(duì)照各50例驗(yàn)證研究：確認(rèn)并優(yōu)化研究結(jié)果驗(yàn)證研究：確認(rèn)并優(yōu)化研究結(jié)果采用微量培養(yǎng)法檢測(cè)上述腸道菌群能量收獲與脂代謝效率整合研究，獲得

19、如下成果整合研究，獲得如下成果：1脾腎兩虛型單純性肥胖負(fù)責(zé)能量和脂代謝的腸道核心菌群；2溫腎健脾針法對(duì)該核心菌群的調(diào)控機(jī)理；3該核心菌群與患者脂代謝調(diào)控因子(激素、酶)的密切關(guān)系。收集病證結(jié)合納入的典型患者與對(duì)照組之血液與大便標(biāo)本；溫腎健脾針法治療3月；收集顯效者前30名隔2周納入的標(biāo)本； 上述兩類標(biāo)本完成如下四方面的檢測(cè)：上述兩類標(biāo)本完成如下四方面的檢測(cè)：篩查能量收獲與脂代謝之核心菌群：促進(jìn)、抑制及雙向作用代表菌株。UPLCMS法分析大便膽汁酸譜；GCFID法分析大便短鏈脂肪酸譜。Western法測(cè)定血清FIAF酶含量；ELISA法測(cè)定血漿Leptin等激素含量。氧彈法測(cè)定單位大便殘余能量；

20、酶-重量法測(cè)定膳食纖維殘留量。 圖2. 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線流程簡(jiǎn)圖.3.2 3.2 研究方法和技術(shù)要點(diǎn)簡(jiǎn)述研究方法和技術(shù)要點(diǎn)簡(jiǎn)述3.2.1 3.2.1 典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、典型脾腎兩虛型肥胖證患者的納入、治療與療效判斷標(biāo)準(zhǔn)治療與療效判斷標(biāo)準(zhǔn)為保障試驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)意義，同時(shí)考慮不超過20%的退出率，確定樣本量為50例。由經(jīng)過培訓(xùn)的中醫(yī)與西醫(yī)診斷學(xué)專家，納入符合脾腎兩虛型肥胖證患者，以及年齡、性別、生活狀況等相匹配的健康對(duì)照。.3.2.1.23.2.1.2治療方法治療方法脾腎兩虛型肥胖針灸治療上，以溫腎健脾為主。故多選用脾經(jīng)、腎經(jīng)、任脈和背部膀胱經(jīng)的腧穴。因?yàn)榕R床顯著的個(gè)體差異，本項(xiàng)目?jī)H在此

21、提出治則，具體的治療方案隨臨臨床癥狀體征而靈活應(yīng)用（胡玲香等，2007）。但一般遵循如下基本原則：腧穴選擇：腧穴選擇：主穴之體穴主要取天樞、神闕、中極、關(guān)元、足三里、太溪、豐隆、三陰交、脾俞、腎俞等，均取雙側(cè)；耳穴：內(nèi)分泌、大腸、三焦、腦點(diǎn)等。脾腎兩虛型配穴常取脾俞、腎俞、太白，等。針法選擇：選用溫針或溫補(bǔ)法為主。操作方法：在本校附屬醫(yī)院針灸科診斷室以常規(guī)方法，完成操作。隔日針灸1次，10次為一療程，20天后觀察療效。休息3日，繼續(xù)第2療程治療。針刺治療時(shí)間選擇在飯后1小時(shí)后進(jìn)行。.3.2.2 3.2.2 實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)介實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)介3.2.2.1 3.2.2.1 核心菌群的篩查核心菌群的篩查采用

22、選擇性培養(yǎng)基，從待測(cè)大便樣品中篩選出與脂代謝密切相關(guān)的菌屬。擬采用下述培養(yǎng)基（丁維俊等,2007）：雙歧桿菌屬：BS培養(yǎng)基(但用申請(qǐng)者改進(jìn)的以新鮮番茄汁代替多種維生素)。乳桿菌屬：LBS培養(yǎng)基;按標(biāo)準(zhǔn)配方自制。類桿菌屬：KV培養(yǎng)基;將購(gòu)自上海生物制品所的厭氧菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基(NO：98404)滅菌后冷卻至55，加入兔血(5)、卡那霉素(100g/m1)、硫酸鏈霉素(5g/m1)及Vk1(0.1)，傾注平皿。柔嫩梭菌屬：MRS培養(yǎng)基; M. Smithii菌:MBC培養(yǎng)基（補(bǔ)充3g/L formate,3g/L acetate, 0.006% Na2S)；B.thetaiotaomicron菌：Sh

23、aedler培養(yǎng)基；均按Martin等（2007）介紹的腸道菌選擇培養(yǎng)基配方自制。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用無(wú)菌稱量紙取糞便0.1g放入0.9ml稀釋液，使之稀釋10倍。然后用一系列無(wú)菌稀釋管作對(duì)數(shù)稀釋至10-8。依據(jù)申請(qǐng)者前期研究經(jīng)驗(yàn)及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，選擇不同培養(yǎng)基的接種稀釋度。用微量移液器取20l滴于培養(yǎng)基表面。每個(gè)稀釋度滴三滴，同一培養(yǎng)皿上滴種三個(gè)稀釋度。然后迅速置于DY-II型厭氧培養(yǎng)箱中，37培養(yǎng)48h。計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿表面的菌落形成單位數(shù)量，乘以稀釋倍數(shù)，即得到每克糞便標(biāo)本的菌落形成單位數(shù)（CFU）。采用PEMS 3.0統(tǒng)計(jì)軟件包，用t檢驗(yàn)分析不同組別的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性。.3.2.2.2 UPLCMS3.

24、2.2.2 UPLCMS法分析大便膽法分析大便膽汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜汁酸及其代謝中產(chǎn)物譜擬使用由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)研究中心開放實(shí)驗(yàn)室提供的Waters公司ACQUITY UPLC檢測(cè)系統(tǒng)，參照Martin等(2007)建立的方法，完成大便檢測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)品由Sigma公司購(gòu)買。質(zhì)譜檢測(cè)在Waters公司產(chǎn)品TOF LCT-Premier (Waters MS Technologies, Manchester, UK)完成。其操作過程如下。取低溫保存的大便浸出液，用1:1甲基氰:水混合液調(diào)整濃度至1mg/ml，上ACQUITY BEH C18 1.7m柱，以500 ul/min流速洗脫12min，洗脫液

25、組成由甲基氰：水40:60比例逐漸調(diào)整為60:40(pH4.0)。將分批收集的洗脫樣品上Q-TOF質(zhì)譜分析系統(tǒng)，以亮氨酸腦啡肽為參照，采用W-optic通路、毛細(xì)管電壓2.6 kV、錐體電壓50 V、噴霧氣流600ul/h等條件，完成檢測(cè)。每個(gè)樣品重復(fù)掃描10次，得其平均值。.3.2.2.83.2.2.8核心菌群能量收獲與脂代核心菌群能量收獲與脂代謝效率的體外試驗(yàn)謝效率的體外試驗(yàn)采用Kihara等(2002)建立的微量培養(yǎng)法，檢測(cè)待測(cè)樣本對(duì)大豆寡聚糖(soybean oligosacchride),乳果糖(lactulose),棉子糖(raffinose), 蔗果三糖(kestose)等四種代表性膳食纖維成分的分解與利用效率。其基本操作程序如下。將上述四種膳食纖維分別加到牛心腦浸出液（BHI）培養(yǎng)基中（終濃度為20g/L），按0.5ml/孔接種于24孔培養(yǎng)板。將待測(cè)大便樣本作10-2,10-3,10-4,10-5稀釋，然后接種于培養(yǎng)板(每個(gè)濃度梯度設(shè)置3個(gè)重復(fù)樣)。放入細(xì)菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6h后，應(yīng)用前述“酶-重量法” 測(cè)定培養(yǎng)液中膳食纖維殘留量、GCFID 法分析新合成短鏈脂肪酸（SCFA）種類與數(shù)量（樣本中原先含有的SCFA，但經(jīng)102至105倍稀釋后，可忽略不計(jì)），從而確認(rèn)腸道菌群樣本的能量收獲