獸用生物制品研發(fā)與申報(bào)培訓(xùn)

1、獸用生物制品研發(fā)與申報(bào)培訓(xùn)獸用生物制品研發(fā)與申報(bào)培訓(xùn)根據(jù)中監(jiān)所培訓(xùn)資料改編 培訓(xùn)目錄培訓(xùn)目錄v一、菌（毒）種種子批建立試驗(yàn)一、菌（毒）種種子批建立試驗(yàn)v二、實(shí)驗(yàn)室安全試驗(yàn)二、實(shí)驗(yàn)室安全試驗(yàn)v三、實(shí)驗(yàn)室效力試驗(yàn)三、實(shí)驗(yàn)室效力試驗(yàn)v四、診斷制品試驗(yàn)研究四、診斷制品試驗(yàn)研究v五、相關(guān)法律法規(guī)五、相關(guān)法律法規(guī)一、菌（毒）種種子批建立試驗(yàn) 原始種子 種子批分為三級(jí) 基礎(chǔ)種子 生產(chǎn)種子1 原始種子v比較難界定，沒(méi)有一個(gè)確切的模式。v滅活疫苗的原始種子應(yīng)該是從動(dòng)物體內(nèi)分離、純化、適應(yīng)、鑒定的培養(yǎng)物，或朋友饋贈(zèng)的經(jīng)過(guò)一定的工作確定用來(lái)制苗的最早培養(yǎng)物為原始種子。v如：AIV（H9亞型）滅活疫苗，從病死雞氣管黏

2、液用PBS制成懸液、離心取上清加雙抗、接種雞胚分離病毒，經(jīng)鑒定后即為原始種子。2 種子批定義原始種子定義 原始種子具有一定數(shù)量具有一定數(shù)量背景明確背景明確組成均一組成均一系統(tǒng)鑒定免疫原性良好系統(tǒng)鑒定免疫原性良好系統(tǒng)鑒定繁殖特性良好系統(tǒng)鑒定繁殖特性良好系統(tǒng)鑒定生物學(xué)特性明確系統(tǒng)鑒定生物學(xué)特性明確系統(tǒng)鑒定鑒別特征明確系統(tǒng)鑒定鑒別特征明確系統(tǒng)鑒定純凈的菌（毒）株系統(tǒng)鑒定純凈的菌（毒）株基礎(chǔ)種子批定義基礎(chǔ)種子由原始種子制備由原始種子制備處于規(guī)定代次水平處于規(guī)定代次水平一定數(shù)量一定數(shù)量組成均一組成均一系統(tǒng)鑒定符合有關(guān)規(guī)定系統(tǒng)鑒定符合有關(guān)規(guī)定活的培養(yǎng)物活的培養(yǎng)物生產(chǎn)種子批定義 生產(chǎn)種子由基礎(chǔ)種子制備由基礎(chǔ)

3、種子制備處于規(guī)定代次范圍內(nèi)處于規(guī)定代次范圍內(nèi)系統(tǒng)鑒定符合有關(guān)規(guī)定系統(tǒng)鑒定符合有關(guān)規(guī)定活的培養(yǎng)物活的培養(yǎng)物3 種子批的建立原始種子批的建立v種子批建立原則是對(duì)選定的菌（毒）株進(jìn)行純培養(yǎng)，并將培養(yǎng)物分成一定的數(shù)量、裝量和成分一致的小包裝，于液氮中或其他適宜條件下保存。v細(xì)菌類種子批應(yīng)對(duì)原始種子進(jìn)行形態(tài)和生化特性、培養(yǎng)特性、血清學(xué)鑒定、安全性（活疫苗）或毒力（滅活疫苗）、免疫原性、純粹等鑒定。v病毒類種子批應(yīng)對(duì)原始種子進(jìn)行病毒含量、安全性（活疫苗）或毒力（滅活疫苗）、免疫原性、特異性以及純凈（細(xì)菌、支原體或外源病毒）等鑒定。基礎(chǔ)種子批建立v基礎(chǔ)種子由原始種子經(jīng)適當(dāng)方式傳代擴(kuò)增而來(lái)，增殖到一定數(shù)量后，

4、將相同代次的所有培養(yǎng)物均勻混合成一批，定量分裝，保存于液氮中或其他適宜條件下備用。按照規(guī)定項(xiàng)目和方法進(jìn)行系統(tǒng)鑒定合格后，方可作為基礎(chǔ)種子使用?；A(chǔ)種子批應(yīng)達(dá)到足夠的規(guī)模，以便能夠保證相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)的需要。v基礎(chǔ)種子代次的確定：通常情況下，將基礎(chǔ)種子傳代至規(guī)定最高代次以上第3代，取不同代次水平的培養(yǎng)物進(jìn)行含量、免疫原性試驗(yàn)，考察其繁殖特性和免疫原性的穩(wěn)定性。必要時(shí)，還須考察基礎(chǔ)種子的遺傳穩(wěn)定性。生產(chǎn)種子批的建立v生產(chǎn)種子由基礎(chǔ)種子經(jīng)適當(dāng)方式傳代擴(kuò)增而來(lái)，達(dá)到一定數(shù)量后，均勻混合，定量分裝，保存于液氮中或其他適宜條件下備用。根據(jù)特定生產(chǎn)種子批的檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)逐項(xiàng)（一般應(yīng)包括純凈性檢驗(yàn)、特異性檢驗(yàn)和含量

5、測(cè)定等）進(jìn)行檢驗(yàn)，合格后方可用于生產(chǎn)。并須確定生產(chǎn)種子在特定保存條件下的保存期。v生產(chǎn)種子批應(yīng)達(dá)到一定規(guī)模，并含有足量活病毒（或細(xì)菌），以確保能滿足生產(chǎn)一批或一個(gè)亞批產(chǎn)品。4 基礎(chǔ)種子的鑒定 基礎(chǔ)種子鑒定生物學(xué)特性鑒定生物學(xué)特性鑒定含量鑒定含量鑒定安全或毒力試驗(yàn)安全或毒力試驗(yàn)免疫原性試驗(yàn)免疫原性試驗(yàn)免疫抑制試驗(yàn)免疫抑制試驗(yàn)毒力返強(qiáng)試驗(yàn)毒力返強(qiáng)試驗(yàn)鑒別檢驗(yàn)或特異性鑒定鑒別檢驗(yàn)或特異性鑒定純凈性檢驗(yàn)純凈性檢驗(yàn)穩(wěn)定性試驗(yàn)穩(wěn)定性試驗(yàn)（1）生物學(xué)特性鑒定v細(xì)菌、支原體類：形態(tài)和培養(yǎng)特性、生化特性、血清學(xué)特性。v病毒類：血清學(xué)特性。（2）含量測(cè)定v應(yīng)盡量采用通行方法，并應(yīng)確保在全部試驗(yàn)過(guò)程中采用相同應(yīng)盡量

6、采用通行方法，并應(yīng)確保在全部試驗(yàn)過(guò)程中采用相同的測(cè)定指標(biāo)：的測(cè)定指標(biāo)： 半數(shù)感染量半數(shù)感染量ID50 半數(shù)雞胚感染量半數(shù)雞胚感染量EID50 半數(shù)致死量半數(shù)致死量LD50 半數(shù)雞胚致死量半數(shù)雞胚致死量ELD50 半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量半數(shù)細(xì)胞培養(yǎng)物感染量TCID50 最小感染量最小感染量MID 最小致死量最小致死量MLD 病毒蝕斑形成單位病毒蝕斑形成單位PFU 熒光病灶單位熒光病灶單位FFU 菌落形成單位菌落形成單位CFU 支原體變色單位支原體變色單位CCU（3）安全或毒力試驗(yàn)v安全性或毒力試驗(yàn)：主要考察基礎(chǔ)種子對(duì)靶動(dòng)物的致病性（滅活疫苗）和安全性（活疫苗），為制定相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)并為今后的生產(chǎn)

7、和檢驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)采取的安全措施提供依據(jù)。v活疫苗安全性試驗(yàn)：包括用多大的劑量對(duì)敏感日齡的靶動(dòng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物是安全的。v滅活疫苗毒力試驗(yàn)：同樣包括用多大的劑量對(duì)敏感日齡的靶動(dòng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物能致死或發(fā)病或流產(chǎn)。v基因工程類活疫苗應(yīng)按照農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全管理?xiàng)l例和農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全評(píng)價(jià)管理辦法有關(guān)規(guī)定進(jìn)行安全性或穩(wěn)定性試驗(yàn)，基因工程類滅活疫苗可以同時(shí)申報(bào)。（4）免疫原性（或最小免疫劑量）試驗(yàn)v基礎(chǔ)種子免疫原性測(cè)定：應(yīng)分別用基礎(chǔ)種子的最低代次和最高代次進(jìn)行最小免疫劑量測(cè)定，以便決定基礎(chǔ)種子的使用代次。當(dāng)然也包括基礎(chǔ)種子的最低代次和最高代次的生物學(xué)特性、含量、純凈及特異性鑒定。v最小免疫劑量試驗(yàn)：用最高代次基

8、礎(chǔ)種子，用不同劑量的菌（毒）種分別接種不同組別的靶動(dòng)物；在接種后的適宜時(shí)間分別進(jìn)行攻毒，以最小的劑量獲得有效保護(hù)（90%）就是該菌（毒）株的最小免疫劑量。v也可不攻毒，在接種后適宜時(shí)間分別采血測(cè)定抗體效價(jià)來(lái)測(cè)定最小免疫劑量。但前提是該方法已經(jīng)證明與免疫攻毒方法具有平行關(guān)系。血清學(xué)效力檢驗(yàn)與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)相關(guān)性的研究v采用平行關(guān)系試驗(yàn)證明血清學(xué)方法的合理性，并為建立判定標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。常用于成品的效力檢驗(yàn)中。v具體試驗(yàn)方法：用不同劑量的疫苗免疫接種動(dòng)物，以便獲得不同抗體水平的動(dòng)物，根據(jù)抗體水平的高低，將動(dòng)物分成若干組，用已經(jīng)選定的強(qiáng)毒株按照預(yù)定劑量進(jìn)行攻毒，對(duì)抗體水平與攻毒保護(hù)率之間的關(guān)系進(jìn)行

9、分析。v針對(duì)多種動(dòng)物、多種接種途徑、各靶動(dòng)物、各使用日齡都應(yīng)進(jìn)行免疫原性（或最小免疫劑量）試驗(yàn)。v針對(duì)多個(gè)血清型的疫苗應(yīng)進(jìn)行交叉保護(hù)試驗(yàn)。v不同地區(qū)的流行毒株交叉保護(hù)試驗(yàn)（如AIV）。（5）免疫抑制試驗(yàn)（可能不適用）v有些病原（如PRRSV、IBDV、REV等）可使動(dòng)物的免疫系統(tǒng)造成損害，對(duì)該類病的生物制品還應(yīng)進(jìn)行免疫抑制試驗(yàn)，評(píng)估其制品是否存在免疫抑制現(xiàn)象。v禽用疫苗評(píng)估一般采用ND疫苗。v豬用疫苗評(píng)估一般采用CSF疫苗。v血清學(xué)檢測(cè)或攻擊強(qiáng)毒，觀察保護(hù)率，同時(shí)也要觀察組織學(xué)病理變化，分析是否有免疫抑制。（6）毒力返強(qiáng)試驗(yàn)（可能不適用）v先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，摸索出該種子接種后含毒最高的時(shí)間、組織等

10、。v應(yīng)用最低代次的基礎(chǔ)種子試驗(yàn)。v應(yīng)根據(jù)菌（毒）的特點(diǎn)制定試驗(yàn)方案，包括試驗(yàn)動(dòng)物的品種、日齡、數(shù)量、級(jí)別，接種時(shí)間、途徑和接種量（一般為使用劑量的100倍），傳代方法，觀察內(nèi)容和時(shí)間，微生物分離鑒定方法，以及傳代后毒力返強(qiáng)程度的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。v在傳代過(guò)程中，應(yīng)根據(jù)菌（毒）種在靶動(dòng)物體內(nèi)的增殖特點(diǎn)，在適宜時(shí)間采集含菌（毒）量最高的組織、血清（如：PRRSV接種后第5天病毒載量最高采血清）、分泌物或排泄物，經(jīng)適當(dāng)處理作為繼代接種物，以確保微生物的重分離率和傳代成功率。v禁止將重分離的微生物在體外增殖后再進(jìn)行傳代。v應(yīng)使用基礎(chǔ)種子的最低代次對(duì)第一組試驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行接種。v應(yīng)采用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法，鑒定分離物中是

11、否存在被檢微生物，并測(cè)定其含量。v繼代：由前次接種動(dòng)物分離到的材料，按照與第一次傳代相同的途徑接種繼代動(dòng)物。每一次繼代后的病原應(yīng)進(jìn)行重新分離與鑒定。v傳代次數(shù)：在靶動(dòng)物體內(nèi)連續(xù)傳代次數(shù)一般不少于5代（即首次接種后要進(jìn)行4次繼代）。v觀察：每一次繼代后應(yīng)在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間內(nèi)觀察接種動(dòng)物是否出現(xiàn)由于疫苗株毒力返強(qiáng)所導(dǎo)致的臨床癥狀指標(biāo)和病理變化。v最后一次傳代觀察時(shí)間應(yīng)在接種后至少觀察21天。v比較不同代次接種動(dòng)物的臨床變化及病理變化，特別應(yīng)對(duì)最后一代傳代動(dòng)物與第一代傳代動(dòng)物的臨床癥狀和病理變化進(jìn)行對(duì)比。v如：PRRSV應(yīng)觀察第一代與最后一代動(dòng)物的肺、實(shí)質(zhì)器官（心、肝、脾、胃、腎）、淋巴結(jié)等組織的組織病理

12、變化（要做切片對(duì)比）。v病原學(xué)鑒定：必要時(shí)，應(yīng)對(duì)最后一次傳代的分離物進(jìn)行表型和基因型鑒定，并與基礎(chǔ)種子進(jìn)行比較，以評(píng)估其遺傳穩(wěn)定性和毒力返強(qiáng)的可能性。（7）鑒別檢驗(yàn)或特異性鑒定v應(yīng)采用適宜方法鑒別疫苗株，并盡可能與相關(guān)毒株相區(qū)別。如熒光抗體試驗(yàn)、毒種的血清中和試驗(yàn)、菌種的試管凝集試驗(yàn)、菌種的玻片凝集試驗(yàn)或菌種的生長(zhǎng)特性檢驗(yàn)。v血清中和試驗(yàn)應(yīng)采用標(biāo)準(zhǔn)血清中和，不能用自分離的血清。（8）純粹性（純凈性）檢驗(yàn)v按照藥典進(jìn)行。（豬外源病毒增加PCV2）（9）保存期試驗(yàn)v穩(wěn)定性試驗(yàn)：確定基礎(chǔ)種子在特定保存條件下的保存期。v基礎(chǔ)種子保存期試驗(yàn)如何做？做多少項(xiàng)目？國(guó)內(nèi)外沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。最高標(biāo)準(zhǔn)按毒種標(biāo)準(zhǔn)

13、，每一項(xiàng)都要做；最低標(biāo)準(zhǔn)僅做含量測(cè)定。專家個(gè)人觀點(diǎn)，除做含量測(cè)定外，滅活疫苗應(yīng)增加毒力測(cè)定項(xiàng)，活疫苗應(yīng)增加免疫原性測(cè)定項(xiàng)。5 種子批管理原則v一般不能用基礎(chǔ)毒種傳代5代以上或基礎(chǔ)菌種傳代10代以上制備疫苗。如果將這種代次范圍之外的基礎(chǔ)種子用于生產(chǎn)，應(yīng)通過(guò)進(jìn)一步的試驗(yàn)加以證明。v從生產(chǎn)種子批中取出的種子，增殖一次后獲得的菌（毒）培養(yǎng)物，即應(yīng)用于制備疫苗，不得再回凍保存和再次用于生產(chǎn)。v應(yīng)闡述基礎(chǔ)種子和生產(chǎn)種子的保存與使用方法，包括在生產(chǎn)工程中如何確保所用種子不超過(guò)批準(zhǔn)的最高代次等詳細(xì)情況。應(yīng)保存有足夠量的基礎(chǔ)種子，供有關(guān)部門進(jìn)行檢驗(yàn)用。二、實(shí)驗(yàn)室安全試驗(yàn)v預(yù)防、治療用獸用生物制品，其質(zhì)量考察有3

14、個(gè)重要指標(biāo)。即：安全性、有效性和質(zhì)量可控性。診斷制品3個(gè)重要指標(biāo)是敏感性、特異性和質(zhì)量可控性。v可見(jiàn)預(yù)防、治療用獸用生物制品的安全性是第一位的。v實(shí)驗(yàn)室的基本要求是符合國(guó)家規(guī)定的生物安全標(biāo)準(zhǔn)。1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基本要求v實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)符合獸藥典中生產(chǎn)、檢驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)豬篩選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物應(yīng)符合獸藥典中生產(chǎn)、檢驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)豬篩選一般應(yīng)檢測(cè)一般應(yīng)檢測(cè)CSFV、PRRSV、PRV、PPV、PCV2以及疫苗以及疫苗對(duì)應(yīng)抗原抗體。對(duì)應(yīng)抗原抗體。v安全試驗(yàn)多使用靶動(dòng)物進(jìn)行。安全試驗(yàn)多使用靶動(dòng)物進(jìn)行。v有的制品還須用敏感的小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如嚙齒類）進(jìn)行試驗(yàn)。有的制品還須用敏感的小型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如嚙齒類）進(jìn)行試驗(yàn)。檢驗(yàn)細(xì)胞

15、培養(yǎng)代謝產(chǎn)物的安全性。檢驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)代謝產(chǎn)物的安全性。v應(yīng)使用敏感性最高的品系動(dòng)物進(jìn)行安全試驗(yàn)。應(yīng)使用敏感性最高的品系動(dòng)物進(jìn)行安全試驗(yàn)。v應(yīng)使用最小日齡的動(dòng)物進(jìn)行安全試驗(yàn)。應(yīng)使用最小日齡的動(dòng)物進(jìn)行安全試驗(yàn)。v與繁育有關(guān)的制品，應(yīng)使用懷孕動(dòng)物進(jìn)行安全試驗(yàn)。與繁育有關(guān)的制品，應(yīng)使用懷孕動(dòng)物進(jìn)行安全試驗(yàn)。v每批制品的實(shí)驗(yàn)室安全試驗(yàn)中所用的動(dòng)物數(shù)量應(yīng)不少于每批制品的實(shí)驗(yàn)室安全試驗(yàn)中所用的動(dòng)物數(shù)量應(yīng)不少于10只只（頭），來(lái)源困難或經(jīng)濟(jì)價(jià)值高的不少于（頭），來(lái)源困難或經(jīng)濟(jì)價(jià)值高的不少于5只（頭）。只（頭）。v分組應(yīng)隨機(jī)。分組應(yīng)隨機(jī)。v每只動(dòng)物均應(yīng)編號(hào)。每只動(dòng)物均應(yīng)編號(hào)。2 實(shí)驗(yàn)室制品基本要求v實(shí)驗(yàn)室安全試驗(yàn)

16、中所用實(shí)驗(yàn)室制品的生產(chǎn)用菌（毒）種、制品組成和配方等，應(yīng)與規(guī)?；a(chǎn)的產(chǎn)品相同。v實(shí)驗(yàn)室制品應(yīng)編制批號(hào)，并經(jīng)過(guò)必要的檢驗(yàn)，且結(jié)果符合要求。v實(shí)驗(yàn)室制品中主要成分的含量應(yīng)不低于規(guī)?；a(chǎn)時(shí)的出產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)。3 制定安全試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案v內(nèi)容包括受試制品的批號(hào)，劑量，試驗(yàn)開(kāi)始和結(jié)束日期，試驗(yàn)動(dòng)物的年齡、品種、性別等特征，對(duì)照組的設(shè)置，每組動(dòng)物的數(shù)量，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源、圈舍、試驗(yàn)管理和觀察方式，結(jié)果的判定方法及標(biāo)準(zhǔn)等。v還應(yīng)根據(jù)制品的特點(diǎn)增加安全試驗(yàn)。v安全試驗(yàn)要求的實(shí)驗(yàn)室基本條件、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基本要求、實(shí)驗(yàn)室制品基本要求和試驗(yàn)方案等適用于效力試驗(yàn)等其他試驗(yàn)。4 一次單劑量接種安全試驗(yàn)v按照推薦的接種途徑，用適宜日齡

17、的靶動(dòng)物，接種1個(gè)使用劑量，至少觀察2周。評(píng)估指標(biāo)包括臨床癥狀、體溫、局部炎癥、組織病變等。v對(duì)于可用于多種動(dòng)物的生物制品，應(yīng)該用各種靶動(dòng)物進(jìn)行一次單劑量接種安全試驗(yàn)。對(duì)于多種接種途徑，應(yīng)進(jìn)行多種接種途徑的一次單劑量接種安全試驗(yàn)。v所有的安全試驗(yàn)研究者均應(yīng)簽名。5 單劑量重復(fù)接種安全試驗(yàn)（可能不適用）v對(duì)可能進(jìn)行多次接種的生物制品，均須進(jìn)行該試驗(yàn)。按照推薦的接種途徑，用適宜日齡的靶動(dòng)物，接種1個(gè)使用劑量后2周，以相同方法再接種一次，再次接種后應(yīng)繼續(xù)觀察至少2周。評(píng)估指標(biāo)包括臨床癥狀、體溫、局部炎癥、組織病變等。v對(duì)于可用于多種靶動(dòng)物和多種接種途徑的生物制品，應(yīng)進(jìn)行多種靶動(dòng)物和多種接種途徑的單劑

18、量重復(fù)接種的安全試驗(yàn)。6 超劑量接種安全試驗(yàn)v用至少3批實(shí)驗(yàn)室制品對(duì)靶動(dòng)物進(jìn)行一次超劑量接種的安全試驗(yàn)。v用適宜日齡的靶動(dòng)物，接種劑量為免疫劑量的數(shù)倍至一百倍不等。通常情況下，滅活疫苗為2倍，活疫苗為10100倍，至少觀察2周。評(píng)估指標(biāo)包括臨床癥狀、體溫、局部炎癥、組織病變等。v對(duì)于可用于多種靶動(dòng)物和多種接種途徑的生物制品，應(yīng)進(jìn)行多種靶動(dòng)物和多種接種途徑的超劑量接種的安全試驗(yàn)。7 對(duì)懷孕動(dòng)物的安全試驗(yàn)（可能不適用）v對(duì)用于妊娠動(dòng)物的制品，應(yīng)使用妊娠期動(dòng)物進(jìn)行安全試驗(yàn)，考察制品對(duì)妊娠、胎兒健康的影響。另外，有些病原可能導(dǎo)致生殖系統(tǒng)的不可逆損傷，這類制品的安全試驗(yàn)中，應(yīng)對(duì)幼齡動(dòng)物接種后，一直觀察到

19、產(chǎn)仔，以考察其對(duì)生殖功能的影響。8 對(duì)靶動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響試驗(yàn)v對(duì)用于肉用商品代經(jīng)濟(jì)動(dòng)物及產(chǎn)蛋雞的生物制品應(yīng)進(jìn)行本試驗(yàn)；使用這類制品后，應(yīng)觀察記錄動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、增重、飼料報(bào)酬、出欄率、產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋率等，評(píng)估生物制品對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響。9 對(duì)非靶動(dòng)物、非使用日齡動(dòng)物的安全試驗(yàn)v有些病原可感染多種動(dòng)物或多個(gè)日齡段的動(dòng)物，這類制品的安全試驗(yàn)中，還應(yīng)對(duì)非使用對(duì)象動(dòng)物和非使用日齡動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室安全試驗(yàn)，以考察對(duì)靶動(dòng)物群使用該制品后對(duì)非靶動(dòng)物群可能引起的安全風(fēng)險(xiǎn)。v應(yīng)進(jìn)行細(xì)胞系對(duì)靶動(dòng)物潛在致瘤性和致癌性試驗(yàn)。10 其他安全試驗(yàn)v非生物源性物質(zhì)，如礦物油佐劑、鋁膠佐劑等，對(duì)靶動(dòng)物的殘留試驗(yàn)。v免疫抑制試

20、驗(yàn)。v水平傳播試驗(yàn)。v基因工程產(chǎn)品的安全性評(píng)價(jià)。三、實(shí)驗(yàn)室效力試驗(yàn)1 基本要求v對(duì)實(shí)驗(yàn)室基本條件、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基本要求、對(duì)實(shí)驗(yàn)室制品的基本要求等同安全試驗(yàn)。有點(diǎn)不同的是效力試驗(yàn)產(chǎn)品中主要成分的含量應(yīng)接近或稍低于產(chǎn)品規(guī)程中規(guī)定的最低標(biāo)準(zhǔn)（高于的應(yīng)做適當(dāng)稀釋，特別是免疫期試驗(yàn)）。v為了同時(shí)證明制品“試行規(guī)程”中所規(guī)定的基礎(chǔ)種子使用代次范圍的合理性，通常用處于最高代次水平的菌（毒）株懸液制備疫苗后，進(jìn)行效力試驗(yàn)。一旦試驗(yàn)結(jié)果證明最高代次水平的疫苗具有令人滿意的免疫效果，則可認(rèn)為規(guī)定范圍內(nèi)的基礎(chǔ)種子均具有令人滿意的免疫原性。v如果制訂產(chǎn)品出廠時(shí)的“效力檢驗(yàn)”采用與參考疫苗對(duì)比的方法，則應(yīng)在實(shí)驗(yàn)室效力試驗(yàn)中

21、，除應(yīng)使用實(shí)驗(yàn)室制品進(jìn)行效力試驗(yàn)外，還應(yīng)用參考疫苗進(jìn)行系統(tǒng)的效力試驗(yàn)，或提供有關(guān)參考疫苗效力試驗(yàn)的詳細(xì)資料。v如果制訂產(chǎn)品出廠時(shí)的“效力檢驗(yàn)”采用血清學(xué)檢驗(yàn)替代方法，應(yīng)進(jìn)行血清抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)平行關(guān)系研究，可結(jié)合最小免疫劑量試驗(yàn)一起做。v如果制訂產(chǎn)品出廠時(shí)的“效力檢驗(yàn)”采用疫苗抗原含量測(cè)定來(lái)替代，應(yīng)進(jìn)行抗原含量與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)平行關(guān)系的研究。v原理是疫苗內(nèi)抗原含量與免疫攻毒保護(hù)率之間，通常存在明顯平行關(guān)系，不存在平行關(guān)系的不能采用此方法。v此效力試驗(yàn)應(yīng)結(jié)合最小免疫劑量試驗(yàn)一起做。v多數(shù)實(shí)驗(yàn)室效力試驗(yàn)中可能會(huì)使用攻毒用強(qiáng)毒。對(duì)已經(jīng)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株的，應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株，必要時(shí)增加使用當(dāng)時(shí)的流

22、行毒株。對(duì)沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)毒株的，可使用自行分離的強(qiáng)毒株，無(wú)論是流行毒株還是自己分離的強(qiáng)毒毒種均應(yīng)報(bào)告來(lái)源、歷史，并進(jìn)行鑒定（毒力、外源病毒）。2 靶動(dòng)物免疫攻毒試驗(yàn)v靶動(dòng)物免疫攻毒試驗(yàn)是考察所有獸用疫苗的效力和評(píng)價(jià)治療用生物制品療效的一種最基本方法。v用實(shí)驗(yàn)室制品接種一定數(shù)量的動(dòng)物，經(jīng)一定時(shí)間后，采用強(qiáng)毒株攻擊免疫動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物。在攻毒后一定時(shí)間內(nèi)，一般都觀察動(dòng)物的發(fā)病及死亡情況，統(tǒng)計(jì)免疫及對(duì)照動(dòng)物的發(fā)病率或/和死亡率，來(lái)評(píng)估制品的效力。v有的制品發(fā)病、死亡不明顯，需在觀察期結(jié)束時(shí)，將所有動(dòng)物撲殺，進(jìn)行大體病理和/或顯微病理組織學(xué)檢查，如PCV2，根據(jù)免疫動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物的病理剖檢變化、病理組織

23、學(xué)病變?cè)u(píng)價(jià)疫苗的效力。v有的制品還應(yīng)進(jìn)行病原分離，根據(jù)免疫動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物的病原分離情況評(píng)估制品的免疫力。v攻毒試驗(yàn)定量免疫、定量強(qiáng)毒攻擊法定量免疫、定量強(qiáng)毒攻擊法定量免疫、變量強(qiáng)毒攻擊法定量免疫、變量強(qiáng)毒攻擊法變量免疫、定量強(qiáng)毒攻擊法變量免疫、定量強(qiáng)毒攻擊法抗血清被動(dòng)免疫攻毒法抗血清被動(dòng)免疫攻毒法（可以根據(jù)實(shí)際情況任選一種）（可以根據(jù)實(shí)際情況任選一種）3 最小免疫劑量v活疫苗，用不同劑量的菌（毒）種分別接種動(dòng)物；滅活疫苗，用最高代次基礎(chǔ)種子制備疫苗菌（毒）液，取不同含量的細(xì)菌（病毒）液，按成品生產(chǎn)工藝制備抗原含量不同的疫苗，或用固定含量的細(xì)菌（病毒）液制備疫苗后，取不同劑量的疫苗，分別接種不同

24、組的動(dòng)物；在接種后的適宜時(shí)間分別進(jìn)行攻毒，以最小的劑量獲得有效保護(hù)就是該制品的最小免疫劑量。v最小免疫劑量的有效保護(hù)不能一概而論，病毒免疫原性好一些，有效保護(hù)能達(dá)到90100%，能達(dá)到90%以上用的最小劑量，就是該病毒的最小免疫劑量。細(xì)菌免疫原性相對(duì)差一些，一般保護(hù)80%就不錯(cuò)，差的只能保護(hù)60%，象這種細(xì)菌，能達(dá)到保護(hù)60%用的最小劑量，就是該細(xì)菌的最小免疫劑量。4 免疫產(chǎn)生期及免疫持續(xù)期試驗(yàn)v用實(shí)驗(yàn)室制品接種一定數(shù)量的動(dòng)物，同時(shí)用足夠數(shù)量的未接種動(dòng)物作為對(duì)照。接種后，每隔一定時(shí)間，用攻毒用強(qiáng)毒對(duì)一定數(shù)量的免疫動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物同時(shí)進(jìn)行攻毒或采用已經(jīng)確認(rèn)與攻毒保護(hù)率有平行關(guān)系的血清學(xué)方法測(cè)定抗體

25、水平，觀察其產(chǎn)生免疫力的時(shí)間、免疫力達(dá)到高峰期的時(shí)間及高峰期持續(xù)時(shí)間，一直測(cè)到免疫力下降至保護(hù)力水平以下。以接種后最早出現(xiàn)良好免疫力的時(shí)間為該制品的免疫產(chǎn)生期，以接種后保持良好免疫力的最長(zhǎng)時(shí)間為免疫持續(xù)期。v有的微生物接種后可以獲得終生保護(hù)，有的微生物僅對(duì)動(dòng)物的某一特定的生命期致病，而且時(shí)間很短的，可不進(jìn)行免疫期試驗(yàn)，但應(yīng)詳細(xì)陳述相關(guān)資料。v通常情況下，不接受用非靶動(dòng)物試驗(yàn)獲得的免疫期試驗(yàn)數(shù)據(jù)。v免疫期分主動(dòng)免疫的免疫期和被動(dòng)免疫的免疫期。免疫持續(xù)期試驗(yàn)v免疫期試驗(yàn)的成本高，費(fèi)時(shí)長(zhǎng)，還牽涉到動(dòng)物保護(hù)問(wèn)題。因此，為了限制在免疫期試驗(yàn)中進(jìn)行頻繁的動(dòng)物攻毒，可以考慮用最低數(shù)量的免疫動(dòng)物進(jìn)行攻毒；采用

26、適當(dāng)?shù)呐卸ㄖ笜?biāo)或參數(shù)（如抗體水平），而不采用攻毒試驗(yàn)來(lái)衡量疫苗接種后的免疫效力。為了使這種替代指標(biāo)或參數(shù)被認(rèn)可，應(yīng)提供充分的試驗(yàn)依據(jù)，證明這種指標(biāo)或參數(shù)在靶動(dòng)物保護(hù)作用中起著相當(dāng)大的作用，且該指標(biāo)或參數(shù)與靶動(dòng)物對(duì)該病的免疫保護(hù)力間存在良好的定性和定量關(guān)系。5 抗體效價(jià)與攻毒保護(hù)平行關(guān)系試驗(yàn)v血清學(xué)效力檢驗(yàn)與靶動(dòng)物免疫攻毒保護(hù)相關(guān)性的研究 當(dāng)成品的效力檢驗(yàn)中采用血清學(xué)方法測(cè)定免疫動(dòng)物抗體反應(yīng)，而不采用免疫攻毒試驗(yàn)時(shí)，就應(yīng)該事先進(jìn)行這樣的平行關(guān)系試驗(yàn)，以證明選用該血清學(xué)方法的合理性，并為建立判定標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。6 抗體消長(zhǎng)規(guī)律的研究v疫苗接種動(dòng)物后會(huì)在體內(nèi)產(chǎn)生抗體，為制定合理的免疫程序，應(yīng)進(jìn)行抗體消

27、長(zhǎng)規(guī)律的研究。此項(xiàng)研究屬于免疫產(chǎn)生期及持續(xù)期的內(nèi)容。采用生物制品免疫動(dòng)物后，定期采血測(cè)定免疫動(dòng)物最早產(chǎn)生抗體的時(shí)間，抗體高峰期、抗體持續(xù)期。7 保存期試驗(yàn)的研究v制品的效力是穩(wěn)定性試驗(yàn)中考察的最重要的指標(biāo)。保存期效力檢驗(yàn)的方法應(yīng)與成品效力檢驗(yàn)方法一致（如：ND滅活疫苗效力檢驗(yàn)為注射20ul，使用劑量為0.3ml，保存期試驗(yàn)應(yīng)用20ul 來(lái)做，用0.3ml 進(jìn)行效力保存期試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效）。v通常情況下，對(duì)于活疫苗，多采用病毒或細(xì)菌含量測(cè)定方法，也有許多研究者采用免疫攻毒法進(jìn)行；對(duì)滅活疫苗，多采用免疫攻毒方法或經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的血清學(xué)等方法。v對(duì)預(yù)期的保存期不到12個(gè)月的獸用生物制品，在前3個(gè)月內(nèi)每個(gè)月進(jìn)行

28、一次檢測(cè)，以后每3個(gè)月檢測(cè)一次；對(duì)預(yù)期的保存期超過(guò)12個(gè)月的，在保存期的前12個(gè)月內(nèi)應(yīng)以后每3個(gè)月進(jìn)行一次檢測(cè)，在第二年中每6個(gè)月進(jìn)行一次檢測(cè)，以后每年進(jìn)行一次檢測(cè)。8 治療制品療效試驗(yàn)研究療效試驗(yàn)療效試驗(yàn)療效預(yù)試驗(yàn)療效預(yù)試驗(yàn)正式試驗(yàn)正式試驗(yàn)人工造病試驗(yàn)人工造病試驗(yàn)治療試驗(yàn)治療試驗(yàn)強(qiáng)毒株的選擇強(qiáng)毒株的選擇治療時(shí)間選擇治療時(shí)間選擇致病劑量選擇致病劑量選擇致病途徑選擇致病途徑選擇劑量選擇劑量選擇次數(shù)選擇次數(shù)選擇用至少用至少3批實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品，已確定批實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品，已確定的治療時(shí)間、劑量和治療次數(shù)的治療時(shí)間、劑量和治療次數(shù)對(duì)每種靶動(dòng)物進(jìn)行療效試驗(yàn)。對(duì)每種靶動(dòng)物進(jìn)行療效試驗(yàn)。四、診斷制品試驗(yàn)研究診斷制品主要

29、指標(biāo)診斷制品主要指標(biāo)敏感性：陽(yáng)性樣品的檢出率，檢測(cè)限敏感性：陽(yáng)性樣品的檢出率，檢測(cè)限特異性：陰性樣品的檢出率特異性：陰性樣品的檢出率重復(fù)性：批內(nèi)和批間重復(fù)性：批內(nèi)和批間適應(yīng)性：不同環(huán)境、地理位置適應(yīng)性：不同環(huán)境、地理位置穩(wěn)定性：保存期（與國(guó)外的主要差距）穩(wěn)定性：保存期（與國(guó)外的主要差距）符合率：與確診方法對(duì)比符合率：與確診方法對(duì)比v對(duì)采用病原體制備抗原或血清的制品，應(yīng)對(duì)病原體的基礎(chǔ)種子進(jìn)行鑒定，鑒定可以比制苗的基礎(chǔ)種子簡(jiǎn)化一些，但應(yīng)鑒定其抗原性、特異性、純凈性并測(cè)定保存期。v應(yīng)測(cè)定基礎(chǔ)種子批、生產(chǎn)種子批不同代次的抗原性，包括測(cè)定產(chǎn)品規(guī)程中規(guī)定的最高代次種子的抗原性。并列出測(cè)定方法和標(biāo)準(zhǔn)。v應(yīng)測(cè)

30、定基礎(chǔ)種子的特異性（血清特異性、免疫特異性），并列出測(cè)定方法和標(biāo)準(zhǔn)。v對(duì)采用活的病原體制備抗原的制品，應(yīng)對(duì)種子批進(jìn)行細(xì)菌、支原體、外源病毒的檢驗(yàn)。已有國(guó)家法定方法的，應(yīng)采用法定方法。沒(méi)有法定方法的，可采用自行建立的方法，但須進(jìn)行方法驗(yàn)證。v應(yīng)確定種子批的適宜保存條件，以保證生產(chǎn)的需要。v對(duì)采用人工合成或基因重組技術(shù)制備的抗原或分子生物學(xué)試劑（如引物或基因片斷），應(yīng)進(jìn)行不同合成方法或不同序列抗原的抗原性、不同序列引物的比較試驗(yàn)。提供的試驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)能證明所采用的方法或抗原、引物序列是最佳選擇。v必要時(shí)，應(yīng)提供與采用常規(guī)方法（由微生物體提?。┲苽涞目乖谋容^試驗(yàn)數(shù)據(jù)，以證明合成或重組抗原與診斷目標(biāo)抗原

31、的同源性。對(duì)于引物或基因片斷等分子生物學(xué)試劑應(yīng)進(jìn)行序列測(cè)定，以證明該序列與診斷目標(biāo)相關(guān)基因序列的同源性。v對(duì)采用雜交瘤細(xì)胞制備的制品，應(yīng)對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行鑒定。v鑒定雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)特性、染色體數(shù)、分泌抗體的活性、單克隆抗體亞類和雜交瘤細(xì)胞的純凈性并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定雜交瘤細(xì)胞的使用代次和保存期。工藝研究工藝研究抗原的制備工藝抗原的制備工藝抗體的制備工藝抗體的制備工藝引物或基因片段引物或基因片段制備工藝制備工藝通過(guò)比較試驗(yàn)確定最佳的生產(chǎn)工藝，通過(guò)比較試驗(yàn)確定最佳的生產(chǎn)工藝，提供培養(yǎng)方法、接種量、收獲時(shí)間、提供培養(yǎng)方法、接種量、收獲時(shí)間、滅活、濃縮純化方法滅活、濃縮純化方法效價(jià)及特異性測(cè)定效價(jià)及特異

32、性測(cè)定標(biāo)化方法及標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)化方法及標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類、免疫劑量、免疫途實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類、免疫劑量、免疫途徑、免疫次數(shù)、采血時(shí)間徑、免疫次數(shù)、采血時(shí)間抗體純化方法、標(biāo)記方法抗體純化方法、標(biāo)記方法效價(jià)和特異性測(cè)定方法及標(biāo)準(zhǔn)效價(jià)和特異性測(cè)定方法及標(biāo)準(zhǔn)引物或基因片段的合成方法引物或基因片段的合成方法鑒定方法和鑒定標(biāo)準(zhǔn)鑒定方法和鑒定標(biāo)準(zhǔn)診斷試驗(yàn)診斷試驗(yàn)條件篩選條件篩選【包括載體、配套試劑（稀釋液、底物、終止液等） 、反應(yīng)時(shí)間】免疫學(xué)診斷制品免疫學(xué)診斷制品分子生物學(xué)診斷分子生物學(xué)診斷制品制品試驗(yàn)條件篩選可結(jié)合抗原、抗體試驗(yàn)條件篩選可結(jié)合抗原、抗體的效價(jià)和特異性測(cè)定方法進(jìn)行的效價(jià)和特異性測(cè)定方法進(jìn)行必須通過(guò)不同試驗(yàn)條

33、件下的比較必須通過(guò)不同試驗(yàn)條件下的比較試驗(yàn)確定最佳的試驗(yàn)參數(shù)試驗(yàn)確定最佳的試驗(yàn)參數(shù)試驗(yàn)條件的篩選可結(jié)合基因擴(kuò)增、試驗(yàn)條件的篩選可結(jié)合基因擴(kuò)增、雜交及敏感性和特異性測(cè)定方法雜交及敏感性和特異性測(cè)定方法進(jìn)行進(jìn)行通過(guò)不同試驗(yàn)條件下的比較試驗(yàn)通過(guò)不同試驗(yàn)條件下的比較試驗(yàn)確定最佳的試驗(yàn)參數(shù)確定最佳的試驗(yàn)參數(shù)1試劑盒的組裝及成品檢驗(yàn)v在制備所有試劑盒組份并經(jīng)過(guò)半成品檢驗(yàn)合格后，可進(jìn)行試劑盒的組裝。組裝試劑盒時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際應(yīng)用情況來(lái)確定每個(gè)試劑盒的試劑用量，采用最方便使用的包裝。并對(duì)組裝后的完整試劑盒進(jìn)行成品檢驗(yàn)。2試劑盒的試驗(yàn)以及成品檢驗(yàn)項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)的確定v在試劑盒組裝成功的基礎(chǔ)上通過(guò)性狀、無(wú)菌檢驗(yàn)、敏感性、特異性、可重復(fù)性、消長(zhǎng)規(guī)律研究和保存期等試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證試劑盒的質(zhì)量，并確定試劑盒的成品檢驗(yàn)項(xiàng)目和標(biāo)準(zhǔn)。（1）敏感性v應(yīng)使用至少3批制品對(duì)已知