實驗三齊墩果酸及提取

1、.實驗三 齊墩果酸的提取、分離及鑒定一、實驗目的 1、掌握三萜皂苷元的提取、分離和鑒定技術，熟悉三萜皂苷的性質(zhì)。 2、掌握兩相溶劑水解方法。 3、掌握堿溶鹽析法提取萜類化合物的方法。 齊墩果酸又名慶四素，屬五環(huán)三萜類化合物，廣泛分布于植物界，已報道其以游離態(tài)、酯、苷或兼有的形式存在于150多種植物中，而多數(shù)是以苷的形式存在。但含齊墩果酸的量超過10的甚少。從刺五加、龍牙楤木中提得率超過10，純度達95以上，是理想的藥用資源，是一種天然產(chǎn)物化學成分，并己證實其具有多種生物活性。 純齊墩果酸是白色簇狀結晶，無色、無味、無臭，熔點為308-31O，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和氯仿等有機溶

2、劑。據(jù)研究證實，齊墩果酸具有消炎抑菌、增強免疫功能、降轉(zhuǎn)氨酶、改善肝功能，糾正體內(nèi)異常蛋白代謝，防止肝硬化、降血糖、降血脂等多方面的臨床藥理作用，它對急性黃疸型肝炎和慢性病毒性肝炎療效顯著，是國內(nèi)研制的保肝、治療肝炎的有效藥物之一。此外，齊墩果酸還具有抗血栓形成、抗突變、抗艾滋病、抑制HIV-I的復制作用；以及強心、利尿和抑制S180瘤株生長等作用，其毒性小，副作用低，安全范圍大。齊墩果酸還因其有抗衰老、抗突變、清除自由基的作用，還可以作為化妝品成分被廣泛應用。女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidum Ait的干燥成熟果實，為常用的扶正固本中藥。藥理研究表明其促進免疫的主要有效

3、成分為齊墩果酸、熊果酸及乙酰齊墩果酸。齊墩果酸以游離態(tài)和結合成苷的形式同存于女貞子中。經(jīng)檢測發(fā)現(xiàn)其齊墩果酸含量以幼果期（8月）含量最高，可達8.04，隨著發(fā)育成熟下降到2.5左右。其在果實中的含量分布為外中果皮>全果實>內(nèi)果皮>種仁。女貞子還含橄欖苦苷、D-甘露醇、硬脂酸、植物蠟等。女貞子中主要有效成分：（1）齊墩果酸：C30H48O3，白色針狀結晶（95乙醇），mp 305-306。可溶于熱甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙酮等，不溶于水。（2）熊果酸：C30H48O3，白色針狀結晶（95乙醇），mp 286-287。易溶于二氧六環(huán)、吡啶?？扇苡跓嵋掖迹⑷苡诒?、氯仿、乙醚，不溶于

4、水。（3）乙酰齊墩果酸：C32H50O5，白色簇晶。Mp 258-260。溶于氯仿、乙醚、無水乙醇，不溶于水。 齊墩果酸 R=H 熊果酸 乙酰齊墩果酸 R=OCOCH3二、實驗原理根據(jù)女貞子中齊墩果酸以游離型和結合成苷的形式共存于果實中，采用酸水解，氯仿萃取同步法提取齊墩果酸。 根據(jù)女貞子齊墩果酸以游離型和結合成苷的形式共存于果實中，采用堿溶解，制備成鈉鹽形式，酸沉淀方法提取齊墩果酸。三、實驗材料： 1、器材：500ml圓底燒瓶、燒杯、水浴鍋、滴管、球形冷凝管、索氏提取器、250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽濾瓶、普通濾紙、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、硅膠G-CMG-Na板、層析缸等； 2、藥品及試劑：女貞子果皮

5、粗粉50g、5%氫氧化鈉溶液、濃硫酸、濃鹽酸、乙醇、丙酮、氯仿溶液、石油醚（沸程60-90）、冰醋酸、乙酸乙酯溶液、無水硫酸鈉、乙酸酐四、實驗操作步驟： 1、酸水解和氯仿同步提取法稱取女貞子果皮粗粉25g，置于圓底燒瓶內(nèi)，加15鹽酸溶液175 ml，氯仿125 ml，70水浴回流水解2h，過濾，分取氯仿提取液（在分液漏斗中進行，注意：氯仿在下，水在上，因為氯仿密度1.4916比水大，用水洗至中性，用無水硫酸鈉脫水干燥、過濾，用過濾液）另存。藥渣用水洗至中性，抽干，干燥藥渣至含水量小于10（攤平晾曬或低溫烘干）。將干燥藥渣置于圓底燒瓶內(nèi)，加氯仿250 ml回流1h，合并二次氯仿提取液，取出2 m

6、l留待薄層鑒識，其余減壓回收氯仿（用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或常溫揮干）至糖漿狀，趁熱轉(zhuǎn)移至燒杯中，冷后成半固狀物。 女貞子果皮粗粉 氯仿提取液 回流回收氯仿至糖漿狀2、分離與精制 方法1：取上述半固狀物，以少量石油醚洗滌除去脂溶性較大的成分，即有固體析出，抽干，得淺黃色析出物。用1:100倍量（WV）95乙醇90回流10 min，過濾，濾液濃縮至小體積，放置，析出粗晶，抽濾得齊墩果酸粗品。反復用90乙醇重結晶，可得較純的齊墩果酸。 即方法1： 半固狀物 淺黃色析出物 乙醇回流齊墩果酸粗品 齊墩果酸方法2：同方法1用石油醚處理得淺黃色析出物，加10倍量5%氫氧化鈉溶液煮沸10 min，放冷后抽濾，適量熱水洗

7、滌12次，抽干得類白色析出物，用95乙醇回流溶解，趁熱過濾，鹽酸調(diào)至pH l2，放置析晶。抽濾得齊墩果酸粗品，用正己烷-乙醇（1:1）重結晶，可得較純的齊墩果酸。 即方法2： 半固狀物 淺黃色析出物 氫氧化鈉溶液煮沸 乙醇回流 齊墩果酸粗品 齊墩果酸3、鑒定 a呈色反應 （1）取本品約50mg，加氯仿2ml溶解后，加硫酸2滴，振搖，靜止，氯仿液自無色(或淡黃色)漸變?yōu)榈t色。 （2）取本品少量，加乙酸酐lml，微熱使溶解，滴加硫酸1滴，即顯紫紅色，放置后色漸變深。 （3）取本品少量，加香草醛的冰乙酸溶液(香草醛0.5g，加冰乙酸10ml溶解，即得)0.2ml，加高氯酸0.8ml，置沸水浴中加熱數(shù)分鐘，顯紫紅色，加乙酸乙酯2ml，紫紅色溶入乙酸乙酯中，放置不變色。 b薄層色譜鑒別 薄層板：硅膠G-CMG-Na板點樣：女貞子氯仿提取液、自制齊墩果酸乙醇溶液、齊墩果酸對照品乙醇溶液（1 mg/ml）。展開劑：氯仿-丙酮（95:5）、環(huán)己烷-乙酸乙酯（8:2）任選一種。顯色：噴10% 硫酸甲醇溶液，105烘至顯色，日光和紫外光燈（365nm）下檢識。觀察記錄：記錄圖譜及斑點顏色。4、計算得率 得率=得到的齊墩果酸成品（g）/稱取得樣品量（g）*100%五、注意事項1、女貞子中齊墩果酸的含量因采收季節(jié)、產(chǎn)地不同有較大差異，可根據(jù)原料含量酌